王文萍　張呈球　程艷梅

【摘要】 目的：分析血清學(xué)指標(biāo)及IgG型抗A/B抗體效價(jià)與新生兒溶血?。℉DN）嚴(yán)重程度的關(guān)系。方法：選取2020年1月—2022年12月上饒市人民醫(yī)院收治的82例HDN患兒為研究對(duì)象，分析游離試驗(yàn)與放散試驗(yàn)結(jié)果，并進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查、測(cè)定血型抗體效價(jià)及檢測(cè)血清學(xué)指標(biāo)[血清總膽紅素（STB）、非結(jié)合膽紅素（UCB）、紅細(xì)胞（RBC）計(jì)數(shù)、血紅蛋白（Hb）、白蛋白（ALB）]；比較不同IgG抗A/B抗體效價(jià)之間的STB、UCB、RBC、Hb、ALB水平及臨床指標(biāo)；采用Pearson相關(guān)性分析RBC、Hb、ALB與STB、UCB的關(guān)系；采用Spearman相關(guān)性分析IgG抗A/B抗體效價(jià)與STB、UCB的關(guān)系。結(jié)果：游離試驗(yàn)檢測(cè)HDN的陽性率為71.95%、放散試驗(yàn)檢測(cè)HDN的陽性率為85.37%，兩種方式比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。IgG抗A/B血型放散試驗(yàn)抗體效價(jià)為1︰1～1︰32，最高為1︰32；游離試驗(yàn)的抗體效價(jià)為1︰1～1︰2，最高為1︰2。不同IgG抗A/B抗體效價(jià)的STB、UCB、RBC、Hb、ALB水平及新生兒日齡、住院時(shí)間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清RBC、Hb、ALB與STB、UCB呈負(fù)相關(guān)。Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，IgG抗A/B抗體效價(jià)與STB、UCB呈正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論：IgG抗A/B抗體效價(jià)能夠測(cè)定HDN患兒體內(nèi)抗A/B抗體水平，血清RBC、Hb、ALB及IgG抗A/B抗體效價(jià)能夠輔助判斷HDN的嚴(yán)重程度。

【關(guān)鍵詞】 新生兒溶血病 血清學(xué)指標(biāo) 抗體效價(jià) IgG型

Analysis of the Relationship between Serological Indexes， IgG Anti-A/B Antibody Titer and the Severity of Neonatal Hemolytic Disease/WANG Wenping， ZHANG Chengqiu， CHENG Yanmei. //Medical Innovation of China， 2023， 20（36）： -134

[Abstract] Objective： To analyze the relationship between serological indexes， IgG anti-A/B antibody titer and the severity of hemolytic disease of newborn （HDN）. Method： A total of eighty-two children with HDN admitted to Shangrao People's Hospital from January 2020 to December 2022 were selected as the study objects， and the results of ionization test and release test were analyzed. Irregular antibody screening， blood group antibody titers and serological indicators [serum total bilirubin （STB）， unconjugated bilirubin （UCB）， red blood cell （RBC） count， hemoglobin （Hb）， albumin （ALB）] were detected. The STB， UCB， RBC， Hb， ALB levels and clinical indexes of different IgG anti-A/B antibody titers were compared; Pearson correlation was used to analyze the relationship between RBC， Hb， ALB and STB and UCB. Spearman correlation was used to analyze the relationship between IgG anti-A/B titer and STB and UCB. Result： The positive rate of HDN detected by ionization test was 71.95%， and that by release test was 85.37%， there was statistical significance between the two methods （P<0.05）. The titers of IgG anti-A/B blood group release test ranged from 1︰1 to 1︰32， with the highest being 1︰32. The titer of antibody in ionization test was 1︰1 to 1︰2， the highest was 1︰2. The levels of STB， UCB， RBC， Hb， ALB， neonatal age and hospital stay of different IgG anti-A/B antibody titers were statistically significant （P<0.05）. Pearson correlation analysis showed that serum RBC， Hb and ALB were negatively correlated with STB and UCB. Spearman correlation analysis showed that the titer of IgG anti-A/B antibody was positively correlated with STB and UCB （P<0.05）. Conclusion： IgG anti-A/B antibody titer can determine the level of anti-A/B antibody in children with HDN， and serum RBC， Hb， ALB and IgG anti-A/B antibody titer can assist in judging the severity of HDN.

[Key words] Hemolytic disease of newborn Serological indicators Antibody titer IgG type

First-author's address： Shangrao People's Hospital， Jiangxi Province， Shangrao 334000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2023.36.030

新生兒溶血?。╤emolytic disease of newborn，HDN）是由于孕母與新生兒體內(nèi)的紅細(xì)胞血型不吻合，導(dǎo)致新生兒出現(xiàn)免疫性溶血性疾病[1-2]。HDN的發(fā)病機(jī)制是胎兒代表父母雙方的紅細(xì)胞抗原表型不一致，當(dāng)胎兒代表父體紅細(xì)胞抗原的紅細(xì)胞進(jìn)入母體時(shí)，母體的免疫系統(tǒng)會(huì)產(chǎn)生破壞新生兒紅細(xì)胞的IgG型抗體，并且通過胎盤屏障進(jìn)入胎兒的血液循環(huán)，破壞胎兒體內(nèi)的紅細(xì)胞[3]。目前臨床上對(duì)HDN的診斷主要依據(jù)游離試驗(yàn)及放散試驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行判定，當(dāng)出現(xiàn)多個(gè)試驗(yàn)陽性結(jié)果時(shí)，以放散試驗(yàn)的結(jié)果為HDN的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。HDN具有發(fā)病急，癥狀重及病情進(jìn)展迅速等特點(diǎn)，患兒多伴隨有不同程度的黃疸、溶血性貧血、呼吸窘迫等癥狀，嚴(yán)重的情況下甚至?xí)鸹純核劳鯷5]。有研究表明，母體的抗A/B抗體通過結(jié)合患兒紅細(xì)胞表面相應(yīng)抗原引起溶血，孕母體內(nèi)的IgG型抗A/B抗體效價(jià)對(duì)新生兒HDN具有較好的預(yù)測(cè)作用，新生兒HDN嚴(yán)重程度與孕母體內(nèi)抗體效價(jià)水平相關(guān)[6]。目前對(duì)HDN患兒體內(nèi)IgG型血型抗體效價(jià)與病情嚴(yán)重程度的關(guān)系尚不明確，相關(guān)研究報(bào)道較少。本研究通過分析血清學(xué)指標(biāo)及IgG型抗A/B抗體效價(jià)與HDN嚴(yán)重程度的關(guān)系，為臨床診治提供參考意見。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月—2022年12月上饒市人民醫(yī)院收治的82例HDN患兒為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）均符合HDN的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；（2）在出生后存在黃疸、血紅蛋白降低、呼吸窘迫、高膽紅素血癥等相關(guān)癥狀；（3）均為單胎，且足月分娩；（4）均為ABO血型。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并存在其他先天性發(fā)育畸形疾?。唬?）合并存在先天性心血管病變；（3）合并存在新生兒感染性疾??；（4）合并存在凝血功能障礙；（5）其他血型系統(tǒng)或其他原因引起的HDN。研究對(duì)象中男43例，女39例；新生兒日齡1～7 d，平均（3.47±0.89）d；體重2.6～3.9 kg，平均（3.16±0.58）kg；血型分型為A型41例、B型38例、AB型3例。本研究已獲得本院醫(yī)學(xué)倫理委員批準(zhǔn)同意，患兒的監(jiān)護(hù)人均簽署相關(guān)的知情同意書。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 儀器與試劑 ABO血型檢測(cè)卡，抗人球蛋白檢測(cè)卡及離心機(jī)和微柱孵育器；抗A、B血清試劑，標(biāo)準(zhǔn)ABO紅細(xì)胞及ABO正反定型試劑卡；微柱凝膠檢測(cè)卡；血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀；西門子全自動(dòng)生化分析儀。

1.2.2 檢測(cè)內(nèi)容 （1）血型鑒定與抗體篩查：采集HDN患兒入院時(shí)的靜脈血3 mL，在離心機(jī)以3 000 r/min離心5 min（離心半徑6 cm），分離紅細(xì)胞與血漿，采用微柱凝膠檢測(cè)卡檢測(cè)ABO血型與不規(guī)則抗體。（2）游離試驗(yàn)及放散試驗(yàn)檢測(cè)：選取HDN患兒的紅細(xì)胞，以生理鹽水進(jìn)行3次洗滌后，分別進(jìn)行游離試驗(yàn)及放散試驗(yàn)檢測(cè)。（3）IgG型抗A/B抗體效價(jià)：采用等比例梯度濃度稀釋法對(duì)放散試驗(yàn)與游離試驗(yàn)的陽性樣本檢測(cè)液進(jìn)行稀釋，并置于微柱凝膠檢測(cè)卡進(jìn)行抗體效價(jià)測(cè)定。（4）血細(xì)胞計(jì)數(shù)：采集HDN患兒靜脈血2 mL，檢測(cè)血液標(biāo)本的紅細(xì)胞（red blood cell，RBC）計(jì)數(shù)、血紅蛋白（hemoglobin，Hb）、白蛋白（albumin，ALB）水平。（5）生化檢測(cè)：采集HDN患兒靜脈血2 mL，

在離心機(jī)以3 000 r/min離心5 min（離心半徑10 cm），

檢測(cè)血液標(biāo)本中的血清總膽紅素（serum total bilirubin，STB）、非結(jié)合膽紅素（unconjugated bilirubin，UCB）水平。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）分析HDN患兒游離試驗(yàn)及放散試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果；（2）分析HDN患兒IgG型抗A/B抗體效價(jià)的分布情況；（3）收集所有患兒的日齡、性別、血型、體重、血液指標(biāo)等一般資料，并比較不同IgG抗A/B抗體效價(jià)之間的STB、UCB、RBC、Hb、ALB水平；（4）采用Pearson相關(guān)性分析RBC、Hb、ALB與STB、UCB的關(guān)系；采用Spearman相關(guān)性分析IgG抗A/B抗體效價(jià)與STB、UCB的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析所有數(shù)據(jù)。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（x±s）表示，進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多樣本或多組間比較采用F檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，進(jìn)行字2檢驗(yàn)；采用Pearson相關(guān)性分析及Spearman相關(guān)性分析兩變量之間的相關(guān)性。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HDN患兒游離試驗(yàn)及放散試驗(yàn)結(jié)果分析

在82例HDN患兒中，游離試驗(yàn)檢測(cè)HDN的陽性率為71.95%、放散試驗(yàn)檢測(cè)HDN的陽性率為85.37%，兩種方式比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=4.395，P=0.036），見表1。

2.2 HDN患兒IgG抗A/B抗體效價(jià)的分布情況分析

分析放散試驗(yàn)與游離試驗(yàn)陽性樣本的IgG抗A/B抗體效價(jià)，其中放散試驗(yàn)的抗體效價(jià)為1︰1～1︰32，最高為1︰32；游離試驗(yàn)的抗體效價(jià)為1︰1～1︰2，最高為1︰2，見表2。

2.3 不同IgG抗A/B抗體效價(jià)之間的一般資料比較

不同IgG抗A/B抗體效價(jià)的STB、UCB、RBC、Hb、ALB水平及新生兒日齡、住院時(shí)間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表3。

2.4 RBC、Hb、ALB與STB、UCB的相關(guān)性

Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清RBC、Hb、ALB與STB、UCB均呈負(fù)相關(guān)（P<0.001），見表4。

2.5 IgG抗A/B抗體效價(jià)與STB、UCB的相關(guān)性

Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，IgG抗A/B抗體效價(jià)與STB、UCB均呈正相關(guān)（rs=0.586，P<0.001；rs=0.574，P<0.001）。

3 討論

HDN是一種新生兒血型與母體不符合引起新生兒紅細(xì)胞破壞的疾病，以ABO血型最為常見，ABO-HDN占比達(dá)到80%～95%，其主要發(fā)生在O型孕產(chǎn)婦與A型、B型新生兒之間，也可能發(fā)生在A型、B型孕產(chǎn)婦生育的非O型新生兒身上[8-9]。O型孕產(chǎn)婦產(chǎn)生的IgG型抗體通過結(jié)合胎兒胎盤上的Fc受體進(jìn)入胎兒的血液循環(huán)，IgG型抗體與胎兒紅細(xì)胞抗原結(jié)合使紅細(xì)胞損害，進(jìn)而導(dǎo)致出現(xiàn)溶血，而且IgG型抗體的效價(jià)和亞型均會(huì)影響HDN的發(fā)生發(fā)展[10]。李丹等[11]研究指出，由于ABO-HDN是母嬰血型不合導(dǎo)致母體的IgG型抗A/B抗體進(jìn)入胎兒血液循環(huán)損害胎兒紅細(xì)胞，對(duì)孕產(chǎn)婦進(jìn)行血清IgG型抗A/B抗體效價(jià)測(cè)定與凝集強(qiáng)度檢測(cè)是預(yù)防新生兒發(fā)生HDN的重要措施，母體IgG型抗A/B抗體效價(jià)水平與HDN患兒的溶血癥狀及病死率呈正相關(guān)。因此，分析HDN患兒體內(nèi)的IgG型抗體效價(jià)水平對(duì)臨床診治可能具有積極意義。

游離試驗(yàn)及放散試驗(yàn)是診斷新生兒HDN的主要方式，本研究分析了游離試驗(yàn)及放散試驗(yàn)對(duì)HDN診斷的敏感度，放散試驗(yàn)檢測(cè)的敏感度優(yōu)于游離試驗(yàn)。這是因?yàn)樾律鷥后w內(nèi)的游離抗體與致敏紅細(xì)胞會(huì)隨著出生時(shí)間的延長而逐漸消失及被破壞，導(dǎo)致游離試驗(yàn)診斷的敏感度下降[12]。母體內(nèi)的IgG型抗體效價(jià)與抗體數(shù)量會(huì)隨著孕期的增加而增加，抗體數(shù)量超過母體自身抵抗范圍時(shí)，容易引發(fā)新生兒發(fā)生HDN，而且IgG型抗體會(huì)通過胎盤進(jìn)入胎兒的血液循環(huán)，對(duì)新生兒體內(nèi)的IgG型抗體效價(jià)水平產(chǎn)生重要影響[13-14]。宋建等[15]研究指出，IgG型抗體在進(jìn)入HDN患兒體內(nèi)后會(huì)立即與紅細(xì)胞進(jìn)行結(jié)合，使大部分IgG型抗體以結(jié)合的形式在HDN患兒體內(nèi)存在，導(dǎo)致放散試驗(yàn)的抗體效價(jià)高于游離試驗(yàn)。本研究對(duì)HDN患兒IgG型抗A/B抗體效價(jià)檢測(cè)結(jié)果顯示，放散試驗(yàn)的抗體效價(jià)為1︰1～1︰32，最高為1︰32；游離試驗(yàn)的抗體效價(jià)為1︰1～1︰2，最高為1︰2，與上述研究一致。

IgG是血清主要的抗體成分，以單體形式存在，屬于人體免疫球蛋白之一，其合成與分泌主要通過脾、淋巴結(jié)中的漿細(xì)胞進(jìn)行，在HDN的發(fā)病過程中發(fā)揮了關(guān)鍵作用，HDN的發(fā)生發(fā)展及嚴(yán)重程度與IgG血型抗體效價(jià)的高低相關(guān)[16-17]。RBC、Hb、ALB、STB及UCB等血清學(xué)指標(biāo)同樣與HDN的疾病進(jìn)程密切相關(guān)，而且STB與UCB水平能夠用于評(píng)估HDN患兒的病情，其水平與病情嚴(yán)重程度成正比[18]。劉寅寅等[19]研究指出，新生兒發(fā)生HDN會(huì)導(dǎo)致體內(nèi)的紅細(xì)胞被大量破壞，造成紅細(xì)胞數(shù)量急劇減少，導(dǎo)致體內(nèi)的RBC、Hb水平降低。薛松等[20]研究表明，HDN患兒體內(nèi)大量紅細(xì)胞破壞會(huì)導(dǎo)致Hb含量下降，血清STB水平與體內(nèi)衰老紅細(xì)胞裂解相關(guān)，衰老紅細(xì)胞裂解后能夠促進(jìn)大量的Hb釋放，引起HDN患兒體內(nèi)STB水平升高，并且STB包括直接膽紅素與UCB，同樣會(huì)影響HDN患兒體內(nèi)的UCB水平。段靈等[21]研究認(rèn)為，ALB不僅能夠提高膽紅素的水溶性以及增加血漿對(duì)膽紅素的處理能力，而且可以減少膽紅素對(duì)組織細(xì)胞毒性的影響，血清ALB水平降低容易導(dǎo)致機(jī)體對(duì)膽紅素代謝能力下降，進(jìn)而導(dǎo)致膽紅素水平升高。本研究結(jié)果顯示，HDN患兒的血清STB、UCB水平隨著IgG抗A/B抗體效價(jià)升高而上升，RBC、Hb、ALB水平隨著IgG抗A/B抗體效價(jià)升高而下降。這可能是因?yàn)镮gG抗A/B抗體效價(jià)越高，攜帶的抗體數(shù)量會(huì)越多，進(jìn)而增加HDN患兒體內(nèi)的紅細(xì)胞破壞情況，導(dǎo)致血清RBC、Hb、ALB水平下降及STB、UCB水平增加。本研究進(jìn)一步分析了RBC、Hb、ALB及IgG抗A/B抗體效價(jià)與STB、UCB的關(guān)聯(lián)性，Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清RBC、Hb、ALB與STB、UCB呈負(fù)相關(guān)，Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，IgG抗A/B抗體效價(jià)與STB、UCB呈正相關(guān)。提示對(duì)RBC、Hb、ALB水平及IgG抗A/B抗體效價(jià)與HDN患兒病情的嚴(yán)重程度相關(guān)，在HDN的相關(guān)診治過程中需要密切監(jiān)測(cè)RBC、Hb、ALB及IgG抗A/B抗體效價(jià)水平。

綜上所述，IgG抗A/B抗體效價(jià)能夠測(cè)定HDN患兒體內(nèi)抗A/B抗體水平，血清RBC、Hb、ALB及IgG抗A/B抗體效價(jià)能夠輔助判斷HDN的嚴(yán)重程度。本研究僅分析了ABO血型HDN患兒的IgG抗A/B抗體效價(jià)，未對(duì)Rh等其他血型HDN患兒的IgG抗A/B抗體效價(jià)進(jìn)行分析，未來仍需進(jìn)一步研究。

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[21]段靈，陳萍，胡紅兵.直接抗球蛋白試驗(yàn)和總膽紅素與白蛋白比值聯(lián)合檢測(cè)在ABO新生兒溶血病導(dǎo)致的嚴(yán)重高膽紅素血癥中的臨床意義[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2022，24（5）：600-604.

（收稿日期：2023-09-14） （本文編輯：白雅茹）