母德錦，吳美珍，余瓊芬，胡小龍

（西南地區(qū)生物多樣性保育國(guó)家林業(yè)和草原局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室·西南林業(yè)大學(xué) 昆明 650224）

蠶豆（Vicia fabaL.）屬于豆科（Leguminosae）野豌豆屬（ViciaL.），是一種糧、飼、菜兼用的經(jīng)濟(jì)作物，在中國(guó)已有2000 多年栽培歷史，是中國(guó)傳統(tǒng)作物之一[1]。目前蠶豆種植過(guò)程中存在種植分散、生產(chǎn)規(guī)模小、現(xiàn)代種業(yè)體系不成熟等問(wèn)題，導(dǎo)致蠶豆的生產(chǎn)能力普遍下降[2]。目前對(duì)于蠶豆增產(chǎn)方面的研究主要集中在兩個(gè)方面：一方面是篩選和培育優(yōu)良的蠶豆種質(zhì)資源[3]；另一方面是從蠶豆生長(zhǎng)發(fā)育著手，通過(guò)施肥、間作、品種選育等手段達(dá)到提質(zhì)增產(chǎn)的目的[4]。

光質(zhì)是影響植物生長(zhǎng)發(fā)育的重要環(huán)境因子[5]。在現(xiàn)代設(shè)施農(nóng)業(yè)領(lǐng)域內(nèi)，人工補(bǔ)光技術(shù)已經(jīng)成為提高設(shè)施內(nèi)作物產(chǎn)量的有效手段，但其在蠶豆培育方面的作用鮮有研究報(bào)道。已有的研究結(jié)果表明，不同植物對(duì)不同光質(zhì)的響應(yīng)不同[6]，其中，不同光質(zhì)對(duì)植物苗期的形態(tài)發(fā)育[7]、根系建成[8]、生理代謝[9]、光化學(xué)和光合特性[10]、品質(zhì)產(chǎn)量[11]等均有重要影響。而LED 補(bǔ)光作為常用的光質(zhì)調(diào)節(jié)手段，在蔬菜作物培育中有較為廣泛的應(yīng)用[12]。利用LED 光源對(duì)植物進(jìn)行補(bǔ)光可提高育苗品質(zhì)、促進(jìn)早熟高產(chǎn)、提高抗性[13]。特別是在生長(zhǎng)前期補(bǔ)光比生長(zhǎng)后期補(bǔ)光對(duì)作物生長(zhǎng)的影響更大，并且不同時(shí)段、光質(zhì)對(duì)作物的生長(zhǎng)發(fā)育和生理代謝起到不同的調(diào)控作用[11]。植物的光合作用主要吸收紅光和藍(lán)紫光[14]，紅光有利于根系形態(tài)建成、莖伸長(zhǎng)和葉片生長(zhǎng)，促進(jìn)植物生長(zhǎng)，還能夠調(diào)節(jié)植物體內(nèi)代謝來(lái)增加光合產(chǎn)物的積累[15-16]；另一方面，紅光抑制植物節(jié)間伸長(zhǎng)，增加側(cè)枝和分蘗，阻止黑暗引起的葉片脫落，延遲開花，促進(jìn)葉綠素、類胡蘿卜素和花色素苷形成[17]。但是不同植物對(duì)紅光的響應(yīng)規(guī)律不同，例如，在植物的形態(tài)發(fā)育方面，紅光能夠顯著促進(jìn)黃瓜幼苗的干物質(zhì)累積[18]，但單側(cè)紅光處理大豆幼苗后干質(zhì)量沒(méi)有顯著增加[19]。在植物生理生化研究中也同樣表現(xiàn)出不同植物對(duì)紅光的響應(yīng)規(guī)律不同。如紅光能夠降低草珊瑚幼苗中葉綠素、可溶性糖、可溶性蛋白含量[20]，促進(jìn)喜樹幼苗葉片中葉綠素、脯氨酸和可溶性蛋白含量的積累[21]，促進(jìn)先鋒橙和紅橘幼苗中可溶性糖含量的積累，但對(duì)可溶性蛋白含量的影響并不顯著[22]。

綜上所述，紅光對(duì)于不同的植物幼苗影響各不相同。紅光對(duì)蠶豆幼苗的研究表明，紅光降低了蠶豆葉片蒸騰速率，減小了氣孔開度，增加了葉綠素含量，促進(jìn)了光合速率和干物質(zhì)積累[23-24]。但紅光處理后，蠶豆幼苗的生長(zhǎng)和生理指標(biāo)如何響應(yīng)卻未見研究報(bào)道。因此，筆者利用LED 光源添加紅光補(bǔ)充光源，與白光光源對(duì)比，研究水培條件下紅光補(bǔ)光對(duì)蠶豆幼苗生長(zhǎng)、葉綠素、生理生化等指標(biāo)的影響，以期為工業(yè)化種植補(bǔ)光措施和蠶豆生產(chǎn)的提質(zhì)增效提供理論支持。

1 材料和方法

1.1 材料

試驗(yàn)材料為鳳豆6 號(hào)蠶豆，商品名：滇蒼源，大理州農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所雜交選育而成的優(yōu)質(zhì)糧菜兼用型蠶豆新品種，產(chǎn)于云南省大理州鄧川縣，該品種具有抗倒、耐寒、耐漬、適應(yīng)范圍廣等特性。

1.2 方法

試驗(yàn)于2021 年1 月5 日至2 月10 日在西南林業(yè)大學(xué)植物生理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。蠶豆種子經(jīng)蒸餾水浸泡清洗，0.3%的高錳酸鉀消毒15 min 后，置于表面消毒過(guò)的沙盤上，將沙盤放置于PQX-430C 型多段可編程人工氣候箱（光照12 h，溫度25°C，濕度80%；黑暗12 h，溫度15°C，濕度80%）中進(jìn)行催芽；3 d 后將長(zhǎng)勢(shì)基本一致的蠶豆幼苗置于裝有200 mL Hoagland 營(yíng)養(yǎng)液（pH 值為5.8）的育苗瓶（容積為250 mL）中進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)育苗瓶中種植3株蠶豆苗。

將培養(yǎng)瓶中的蠶豆置于PQX-430C 多段可編程人工氣候箱中培養(yǎng)，采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，設(shè)置白光處理（對(duì)照組）和紅光處理（處理組）。對(duì)照組人工氣候箱的左右兩側(cè)各6 只30 W 的白光LED 燈管。處理組人工氣候箱中左右兩側(cè)分別設(shè)置2 支18 W 的紅光LED 燈管和4 支30 W 的白光LED燈管。設(shè)置培養(yǎng)溫度為25°C，濕度為80%，光照處理從08：00 開始，分別設(shè)置10、11、12、13、14 h 5 個(gè)光照時(shí)段處理，每個(gè)處理設(shè)置10 個(gè)培養(yǎng)瓶，每個(gè)培養(yǎng)瓶3 株幼苗為1 個(gè)重復(fù)，共計(jì)10 個(gè)重復(fù)，30 株苗。幼苗采用Hoagland 溶液培養(yǎng)，每5 d 更換一次營(yíng)養(yǎng)液，共培養(yǎng)25 d。

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.3.1 營(yíng)養(yǎng)液pH 值和苗高的測(cè)定 蠶豆幼苗每間隔5 d 測(cè)定1 次pH 值和苗高，每個(gè)處理測(cè)定30株。使用精度為1 mm 的直尺測(cè)定苗高。將換下的培養(yǎng)液添加蒸餾水到200 mL 后，使用pHS-2F 型pH 計(jì)測(cè)定營(yíng)養(yǎng)液的pH 值。

1.3.2 生理指標(biāo)的測(cè)定 待培養(yǎng)25 d 后，每個(gè)處理隨機(jī)選取3 株蠶豆幼苗的第3 對(duì)、第4 對(duì)葉片，剪碎混合后使用7230 G 型可見分光光度計(jì)通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線法C（mg?L-1）=Ax+b，R2=0.999，其中A、b 為常數(shù)，x為吸光度，進(jìn)行測(cè)定換算，每個(gè)處理測(cè)定3 個(gè)生物學(xué)重復(fù)。采用可見光分光光度計(jì)法測(cè)定[25]葉綠素a、葉綠素b 和類胡蘿卜素含量，采用考馬斯亮藍(lán)G-250 染色法[26]測(cè)定可溶性蛋白含量，采用蒽酮比色法[27]測(cè)定可溶性糖含量，采用茚三酮溶液顯色法[25]測(cè)定游離氨基酸含量，采用水楊酸法[25]測(cè)定游離脯氨酸含量。

1.3.3 總生物量和N、P、K的測(cè)定 待培養(yǎng)25 d 后，將每個(gè)處理下的全部植株置于烘箱內(nèi)，于105°C 下殺青30 min，然后在80°C 下烘干至恒質(zhì)量，測(cè)定不同處理樣品的總生物量。分別用MM440 型球磨儀研磨過(guò)篩，稱取0.2 g 樣品，用H2SO4-H2O2法消煮樣品制備待測(cè)液用于N、P、K 的測(cè)定。使用Smartchem-200 全自動(dòng)間斷分析儀通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線法[28]，基于Bertfelot 反應(yīng)和磷鉬藍(lán)反應(yīng)分別測(cè)定各處理的根、莖、葉樣品中N、P 含量。同時(shí)按照《LY/T 1270—1999》標(biāo)準(zhǔn)[29]，使用火焰分光光度計(jì)，用鉀濾色片，以試劑空白溶液為對(duì)照調(diào)零檢流計(jì)讀數(shù)，然后直接用消煮待測(cè)液在火焰分光光度計(jì)上測(cè)得鉀檢流計(jì)讀數(shù)，即為速效鉀含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理

利用Microsoft Excel 2019 進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和圖表繪制，使用SPSS 20.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，其中運(yùn)用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)對(duì)不同處理苗高、營(yíng)養(yǎng)液pH 值以及相關(guān)生理指標(biāo)進(jìn)行顯著性分析，分析紅光補(bǔ)光和白光在蠶豆生長(zhǎng)過(guò)程中對(duì)苗高和營(yíng)養(yǎng)液pH 值的影響，同時(shí)分析不同光源和不同光照時(shí)間對(duì)蠶豆幼苗葉生理指標(biāo)的影響。另外使用配對(duì)t檢驗(yàn)對(duì)根、莖、葉中的N、P、K 含量和總生物量進(jìn)行分析，不同光照時(shí)段為配對(duì)因子，分析紅光補(bǔ)光和白光照射下對(duì)蠶豆?fàn)I養(yǎng)元素分配和總生物量的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 紅光處理對(duì)蠶豆苗高、營(yíng)養(yǎng)液pH值的影響

由圖1-A 可知，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，紅光處理和白光處理的蠶豆幼苗苗高的增長(zhǎng)表現(xiàn)出先快后慢趨勢(shì)，15 d 之后，蠶豆幼苗苗高的增速變緩。在5 個(gè)光處理時(shí)段下，紅光補(bǔ)光的蠶豆幼苗苗高極顯著高于白光處理。此外，紅光補(bǔ)光處理影響營(yíng)養(yǎng)液pH 值變化，其中在第5、15、20 天時(shí)，紅光補(bǔ)光處理下的營(yíng)養(yǎng)液pH 值顯著或極顯著低于白光處理（圖1-B）。

圖1 紅光處理后蠶豆苗高和營(yíng)養(yǎng)液pH 值的變化

2.2 紅光處理對(duì)蠶豆根、莖、葉中N、P、K 含量的影響

由表1 可知，N 的積累在蠶豆幼苗的不同組織中不同，總體上表現(xiàn)出w（葉-RN）＞w（莖-RN）＞w（根-RN）的趨勢(shì)。在紅光補(bǔ)光處理下，蠶豆根、莖、葉中N 的積累大體呈現(xiàn)出隨著光照時(shí)長(zhǎng)的增加呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)。在光處理10～12 h 下，與白光處理相比，紅光處理對(duì)蠶豆幼苗根、莖、葉中N 的積累有一定的促進(jìn)作用，但整體上在相同處理時(shí)間下紅光處理與白光處理相比無(wú)顯著差異。

表1 紅光照射對(duì)蠶豆根、莖、葉中N 含量的影響 （g·kg-1）

由表2 所示，在同一處理時(shí)間下，紅光處理極顯著促進(jìn)了蠶豆幼苗莖中P 的積累，但是根和葉中P 的含量與白光處理相比沒(méi)有顯著差異。當(dāng)紅光照射時(shí)間為11、12、10 h 時(shí)，分別在根、莖和葉中累積的P 最高，為5.990、5.402、3.411 g·kg-1。

表2 紅光照射對(duì)蠶豆根、莖、葉中P 含量的影響 （g·kg-1）

由表3 可知，在白光處理和紅光處理組中，K在蠶豆幼苗不同器官中分布各不相同，其中在葉片中積累的最少。不同時(shí)段紅光照射下，除11 h 外，蠶豆幼苗莖中K 的積累相比白光處理均有降低。配對(duì)t檢驗(yàn)結(jié)果顯示，整體上莖中的K 的積累相比白光處理顯著降低，而根和葉中的K 累積與白光處理無(wú)顯著差異。

表3 紅光照射對(duì)蠶豆根、莖、葉中K 含量的影響 （g·kg-1）

2.3 紅光處理對(duì)蠶豆葉片葉綠素含量的影響

由圖2 可知，在紅光處理組中，隨著光照時(shí)間的增加，蠶豆幼苗葉片中葉綠素a、葉綠素b 和總?cè)~綠素的積累呈先上升后下降的趨勢(shì)；在白光處理組中，葉綠素a、葉綠素b 和總?cè)~綠素含量呈持續(xù)上升的趨勢(shì)。在紅光補(bǔ)光處理下，12 h 的光處理中葉綠素a、葉綠素b、總?cè)~綠素含量最高，分別為1.614、0.595、2.209 g·kg-1。但是在同一光照時(shí)間的紅光和白光處理蠶豆幼苗葉綠素a、葉綠素b、總?cè)~綠素和類胡蘿卜素的積累均無(wú)顯著差異。由圖2-D 可知，隨著紅光光照時(shí)間的增加，類胡蘿卜素的積累呈先下降后上升的趨勢(shì)。其中紅光補(bǔ)光12 h 時(shí)，類胡蘿卜素含量最低，為0.161 g·kg-1，而長(zhǎng)時(shí)間（14 h）的白光處理不利于類胡蘿卜素的積累。

圖2 紅光照射后蠶豆葉綠素含量的變化

2.4 紅光照射對(duì)蠶豆幼苗葉片抗性生理指標(biāo)的影響

在不同的紅光照射時(shí)長(zhǎng)下，蠶豆葉片中可溶性糖、可溶性蛋白、游離氨基酸、游離脯氨酸含量的變化趨勢(shì)各不相同。由圖3-A 可知，隨著光照時(shí)間的增加，紅光和白光照射下的蠶豆幼苗葉片中可溶性糖含量呈上升趨勢(shì)，但與白光處理相比，在光照時(shí)長(zhǎng)為10、11、12 h 時(shí)，紅光處理極顯著降低了葉片中可溶性糖含量。由圖3-B 可知，在紅光處理下，蠶豆幼苗葉片中可溶性蛋白含量隨著光照時(shí)間的增加逐漸增加，白光處理下蠶豆葉片可溶性蛋白含量呈先增加后降低的趨勢(shì)。與白光處理相比，在紅光光照時(shí)長(zhǎng)為10、11、12、13 h 時(shí)，可溶性蛋白含量分別顯著或極顯著下降了14.359、25.965、12.019、9.997 g·kg-1。由圖3-C 所示白光照射后蠶豆幼苗游離氨基酸含量呈先降低后升高趨勢(shì)。在光照時(shí)長(zhǎng)為10、11、13 h 時(shí)，紅光處理顯著或極顯著降低了蠶豆幼苗葉片中游離氨基酸含量，在12、14 h 時(shí)二者并無(wú)顯著差異。由圖3-D 可知，在紅光處理下，隨著光照時(shí)間的增加，游離脯氨酸含量呈先增加后下降的趨勢(shì)，與白光處理相比，在光照時(shí)長(zhǎng)為10、11、12、14 h 時(shí)，紅光補(bǔ)光處理游離脯氨酸含量顯著或極顯著降低。

圖3 紅光照射后蠶豆生理指標(biāo)的變化

2.5 紅光照射對(duì)蠶豆幼苗生物量的影響

由圖4 可知，紅光補(bǔ)光處理11 h 和14 h 后，蠶豆幼苗總生物量較高，其他光照時(shí)長(zhǎng)的蠶豆生物量相對(duì)較低。隨著白光照射時(shí)間增長(zhǎng)，蠶豆幼苗的總生物量呈先逐漸下降后上升趨勢(shì)。短時(shí)段紅光照射和白光照射后蠶豆總生物量差異不顯著，但長(zhǎng)時(shí)段（12～14 h）光照后，紅光補(bǔ)光處理的蠶豆幼苗總生物量積累顯著高于白光處理。

圖4 紅光照射后蠶豆總生物量的變化

3 討論與結(jié)論

3.1 紅光補(bǔ)光對(duì)蠶豆生長(zhǎng)的影響

光對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育具有重要的作用，它不僅為植物光合作用提供基本能源，還是其生長(zhǎng)發(fā)育的重要調(diào)節(jié)因子[17]。其中光質(zhì)在調(diào)節(jié)植物的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中起到重要的作用[30]。在前期的研究中發(fā)現(xiàn)，單色的紅光能夠促進(jìn)植物幼苗苗高的生長(zhǎng)，黃文靜等[31]研究表明，LED 紅光有利于火龍果幼苗的增高，秦健等[32]發(fā)現(xiàn)，紅光能促進(jìn)青錢柳幼苗的苗高增加，并且與白光相比有顯著差異。筆者的研究結(jié)果表明，紅光補(bǔ)充能夠顯著促進(jìn)蠶豆幼苗的苗高增加。同時(shí)，培養(yǎng)液pH 值在培養(yǎng)5～10 d 過(guò)程中持續(xù)降低可能與蠶豆幼苗快速生長(zhǎng)過(guò)程中對(duì)營(yíng)養(yǎng)元素的吸收有關(guān)[33]。

前人研究表明，紅光光源能夠在一定程度上促進(jìn)植物幼苗生物量增加。例如，與白光相比，單色紅光能提高11.46%的火龍果幼苗生物量[31]，但在筆者的研究中，10～11 h 的紅光補(bǔ)光與白光相比，蠶豆的生物量沒(méi)有顯著差異。在光照周期較長(zhǎng)時(shí)（≥12 h），白光處理下蠶豆幼苗的總生物量顯著低于紅光處理。

3.2 紅光補(bǔ)光對(duì)蠶豆生理生化的影響

筆者的研究結(jié)果表明，紅光補(bǔ)光對(duì)蠶豆幼苗的葉綠素a、葉綠素b、總?cè)~綠素和類胡蘿卜素影響不大，紅光處理11 h 對(duì)葉綠素b 稍有促進(jìn)，12 h 對(duì)葉綠素a、葉綠素b 和總?cè)~綠素稍有促進(jìn)外，其余紅光處理葉綠素a、葉綠素b 和總?cè)~綠素稍有下降。類胡蘿卜素對(duì)不同光周期呈現(xiàn)出不同規(guī)律，在12 h 紅光光照時(shí)含量最低。但紅光補(bǔ)光處理后，葉綠素a、葉綠素b、總?cè)~綠素和類胡蘿卜素的含量與白光相比差異不顯著。這與黃碧陽(yáng)[34]的研究結(jié)果類似，紅光處理菠菜后降低了葉片葉綠素含量，但對(duì)類胡蘿卜素含量影響較小。

另外，N、P、K 在植物器官中的分配，反映了植物生物量的積累以及植株的品質(zhì)。前人研究表明，紅光能夠調(diào)節(jié)植物體內(nèi)的代謝來(lái)增加光合產(chǎn)物的積累[35-36]。筆者的研究表明，適當(dāng)?shù)募t光補(bǔ)光能夠增加蠶豆根、莖、葉中N 的積累，但與白光處理相比差異不顯著。同時(shí)紅光補(bǔ)光也促進(jìn)了莖中P 的吸收，除11 h 外，其余光照時(shí)段紅光處理降低了莖中K 的積累。紅光補(bǔ)光部分時(shí)間對(duì)蠶豆幼苗莖中P、K 以及葉片中的可溶性糖、可溶性蛋白、游離氨基酸和游離脯氨酸含量有顯著影響，紅光補(bǔ)光在各個(gè)光周期中均降低了可溶性糖、可溶性蛋白和游離脯氨酸的含量。

綜上所述，筆者探討了紅光和光照時(shí)長(zhǎng)對(duì)蠶豆幼苗的影響，適當(dāng)紅光補(bǔ)光能夠促進(jìn)蠶豆幼苗苗高的生長(zhǎng)，促進(jìn)根、莖、葉中N 含量的積累，促進(jìn)了莖中P 的吸收，部分光照時(shí)段降低了莖中K 的積累量，減緩總生物量隨光周期的延長(zhǎng)而降低的趨勢(shì)。同時(shí)，適當(dāng)?shù)募t光補(bǔ)光有助于提高蠶豆幼苗的產(chǎn)量。筆者的研究結(jié)果，可為蠶豆育苗過(guò)程中光質(zhì)和光周期的選擇提供一定的數(shù)據(jù)支撐和理論支持。