陳傳斌，瞿明仁，梁 歡，鄒必成，龍 凡，陳發(fā)根，熊智輝，林德發(fā)， 鄭友昌，翟洪軍，許蘭嬌*

(1.江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 江西省動(dòng)物營養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌330045；2.共青城艾麗曼動(dòng)物營養(yǎng)有限公司，江西 共青 332020)

微量元素是機(jī)體內(nèi)各種生理生化代謝正常運(yùn)行所必需的，它不僅是許多酶反應(yīng)的輔助因子，也是某些酶的必要因子[1-3]。微量元素的缺乏可導(dǎo)致動(dòng)物生長遲緩、免疫力紊亂、貧血等[4-6]。一般情況下，正常肉雞中豆粕含量在30%左右，可以滿足肉雞對(duì)銅的需要量。當(dāng)在日糧中添加超過動(dòng)物營養(yǎng)需要的微量元素時(shí)，會(huì)促進(jìn)動(dòng)物的生長，提高飼料利用率[7-8]。目前，飼糧中所使用的微量元素添加劑普遍是無機(jī)鹽氧化物形式的無機(jī)微量元素，如硫酸銅、硫酸亞鐵、氧化鋅等，因其價(jià)格低廉，工藝流程簡單，經(jīng)濟(jì)效益好而受到養(yǎng)殖者的青睞。WANG 等[9]研究發(fā)現(xiàn)，在基礎(chǔ)日糧中添加50 mg/kg的銅(硫酸銅)可提高肉雞的生長性能和免疫系統(tǒng)。此外，SUN 等[10]研究發(fā)現(xiàn)，在日糧添加160 mg/kg 硫酸亞鐵時(shí)，對(duì)肉雞促生長效果最佳，可改善肉雞氧化狀態(tài)和免疫功能。但無機(jī)微量元素在生產(chǎn)應(yīng)用過程會(huì)出現(xiàn)諸多問題，如劑量大、易氧化、適口性差、利用率低、對(duì)一些營養(yǎng)成份(如維生素)有破壞性，且污染環(huán)境。為了克服無機(jī)微量元素的不足，提高其他營養(yǎng)素的利用率，研制使用包被復(fù)合微量元素是今后發(fā)展的趨勢(shì)。包被復(fù)合微量元素具有顆粒均勻、流散性好、混合均勻度高、粉塵少等特點(diǎn)。SHEN等[11]研究發(fā)現(xiàn)，包被氧化鋅(380或570 mg Zn/kg)可以通過促進(jìn)腸道發(fā)育、保護(hù)腸黏膜屏障免受損傷、刺激黏膜免疫系統(tǒng)和調(diào)節(jié)微生物群組成來緩解仔豬腹瀉的發(fā)生率。因此，本研究旨在探討不同添加水平包被復(fù)合微量元素對(duì)黃羽肉雞血液生化指標(biāo)、抗氧化能力和免疫功能的影響，確定包被復(fù)合微量元素適宜添加水平，為包被微量元素在肉雞生產(chǎn)上的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料復(fù)合微量元素產(chǎn)品購自共青城艾麗曼動(dòng)物營養(yǎng)有限公司，具體產(chǎn)品成分見表1。快速型黃羽肉雞購自廣東溫氏家禽有限公司。

表1 產(chǎn)品成分值 mg/kg

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)選取1日齡體質(zhì)量為(32.61±0.60) g、健康狀況良好的雄性黃羽肉雞300只，隨機(jī)分為5個(gè)處理組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只雞。處理A、B、C、D、E組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加200，400，600，800，1 000 mg/kg包被復(fù)合微量元素。各處理組微量元素添加量(計(jì)算值)見表2。

表2 各處理組日糧微量元素添加量 mg/kg

1.3 試驗(yàn)日糧基礎(chǔ)飼糧為玉米-豆粕型飼糧，試驗(yàn)日糧按照我國NY/T 33-2004 《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》中推薦的肉雞營養(yǎng)需要，按前期(1～28日齡)和后期(29～56日齡)兩個(gè)階段進(jìn)行配制，具體配方組成及營養(yǎng)水平見表3。

表3 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ)) %

1.4 飼養(yǎng)管理試驗(yàn)前對(duì)雞舍進(jìn)行全面清掃、沖洗和熏蒸消毒(高錳酸鉀∶甲醛 = 1∶2),24 h，通風(fēng)3 d。試驗(yàn)肉雞采用4層籠養(yǎng)，每籠10只雞。進(jìn)雛前1周舍內(nèi)溫度控制在(34±1)℃，此后每天降低1℃，直至(24±1)℃。整個(gè)試驗(yàn)過程保證肉雞自由采食和飲水，全天24 h光照，自然通風(fēng)，按照常規(guī)免疫接種程序?qū)θ怆u進(jìn)行免疫接種。

1.5 樣品采集與處理試驗(yàn)第28和56天時(shí)，經(jīng)翅靜脈采集血樣，4℃、3 500 r/min離心10 min，分離血清，-20℃保存待測。試驗(yàn)第55天晚上19:00斷料，禁食12 h，試驗(yàn)第56天早上7:00，期間自由飲水。每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選擇1只體質(zhì)量接近該組平均體質(zhì)量的健康肉雞，通過斷頸處死試驗(yàn)雞，切除胸腺、脾臟、法氏囊和肝臟并測質(zhì)量。在冰盒上用PBS和DEPC溶液將肝臟沖洗干凈，并用吸水紙吸取殘余液體后分裝于凍存管中，迅速放入液氮中，-80℃保存待測。

1.6 測定指標(biāo)與方法

1.6.1血清生化指標(biāo) 采用cobas 8000全自動(dòng)生化儀測定血清中總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、葡萄糖(GLU)、甘油三酯(TG)、膽固醇(CHO)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)濃度和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)活性，試劑盒購自羅氏公司。

1.6.2血清抗氧化指標(biāo) 按照試劑盒說明書方法檢測血清總抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.6.3肝臟抗氧化能力 準(zhǔn)確稱取肝臟，按質(zhì)量(g)∶體積(mL)的比例，加入9倍體積的生理鹽水，在低溫高速組織研磨機(jī)下進(jìn)行機(jī)械勻漿制成10%的肝臟組織勻漿液，離心取上清液待測。按照試劑盒說明書方法進(jìn)行BCA蛋白定量，同時(shí)檢測肝臟勻漿液的T-AOC、MDA含量和SOD、GSH-Px活性，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.6.4血清免疫指標(biāo) 按照試劑盒說明書方法檢測血清免疫球蛋白(IgA、IgM和IgG)水平，試劑盒購自北京華英生物技術(shù)研究所。

1.6.5免疫器官指數(shù) 取胸腺、脾臟、法氏囊和肝臟用吸水紙吸取其殘留的血液后測質(zhì)量，根據(jù)以下公式測定免疫器官指數(shù)。免疫器官指數(shù)(g/kg)= 免疫器官鮮質(zhì)量(g)/宰前活體質(zhì)量(kg)×100%。

2 結(jié)果

2.1 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對(duì)黃羽肉雞血清生化指標(biāo)的影響由表4可知，28日齡時(shí)，各組間血清TP、ALB、Glu、CHO、TG、HDL-C、LDL-C 濃度和AST、ALP活性差異不顯著(P>0.05)。56日齡時(shí)，D、E組血清Glu濃度顯著高于A、B、C組(P<0.05)，A組血清CHO濃度顯著高于C、D、E組(P<0.05)，各組間血清TP、ALB、TG、HDL-C、LDL-C濃度和AST、ALP活性差異不顯著(P>0.05)。

表4 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對(duì)黃羽肉雞血清生化指標(biāo)的影響

2.2 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對(duì)黃羽肉雞血清抗氧化指標(biāo)的影響由表5可知，28日齡時(shí)，B、C、D、E組的血清GSH-Px活性顯著高于A組(P<0.05)，各組間血清T-AOC、SOD活性和MDA含量差異不顯著(P>0.05)。56日齡時(shí)，B、C、D、E組的血清T-AOC能力和SOD活性顯著高于A組(P<0.05)，D、E組的血清GSH-Px活性顯著高于A、B、C組(P<0.05)，各組間血清MDA含量差異不顯著(P>0.05)。

表5 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對(duì)黃羽肉雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

2.3 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對(duì)黃羽肉雞肝臟抗氧化功能的影響由表6可知，B、C、D、E組的肝臟T-AOC能力和GSH-Px活性顯著高于A組(P<0.05)，各組間肝臟MDA含量和SOD活性差異不顯著(P>0.05)。

表6 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對(duì)56日齡黃羽肉雞肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

2.4 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對(duì)黃羽肉雞血清免疫指標(biāo)的影響由表7可知，28日齡時(shí)，C、D、E組的血清IgA水平顯著高于A組(P<0.05)，各組間血清IgM和IgG水平差異不顯著(P>0.05)。56日齡時(shí)，D、E組的血清IgM水平顯著高于A組(P<0.05)，C、D、E組的血清IgG水平顯著高于A組(P<0.05)，各組間血清IgA水平差異不顯著(P>0.05)。

表7 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對(duì)黃羽肉雞血清免疫指標(biāo)的影響 g/L

2.5 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對(duì)黃羽肉雞免疫器官指數(shù)的影響由表8可知，各組間胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊和肝臟指數(shù)差異不顯著(P>0.05)。

表8 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對(duì)56日齡黃羽肉雞免疫器官指數(shù)的影響 %

3 討論

3.1 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對(duì)黃羽肉雞血清生化指標(biāo)的影響LEESON[12]研究表明，在日糧中添加微量元素可能會(huì)降低家禽中的CHO水平。在本試驗(yàn)中，日糧補(bǔ)充包被復(fù)合微量元素降低了56日齡肉雞血清CHO濃度，這與WU等[13]在肉雞中的研究結(jié)果相似。動(dòng)物機(jī)體內(nèi)的CHO來源于飼料或生物合成，生物合成主要發(fā)生在非反芻動(dòng)物的肝臟中[14]。在大鼠體內(nèi)的一項(xiàng)研究表明，日糧中微量元素缺乏可以通過增加谷胱甘肽的含量間接上調(diào)CHO的生物合成速率限制酶3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶的活性[15]。也有研究表明，日糧中添加微量元素可降低肉雞[16]和大鼠[17]的CHO濃度。此外，在本研究中，日糧補(bǔ)充包被復(fù)合微量元素提高了56日齡肉雞血清Glu濃度，這可能由于包被材料是多糖、淀粉引起的。

3.2 包被復(fù)合微量元素對(duì)黃羽肉雞抗氧化功能的影響根據(jù)家禽體內(nèi)脂質(zhì)含量較容易發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的特點(diǎn)[18]，選取T-AOC、SOD、GSH-Px、MDA作為衡量動(dòng)物機(jī)體抗氧化能力的綜合指標(biāo)。T-AOC是衡量機(jī)體抗氧化功能的綜合指標(biāo)，缺乏微量元素(銅、鐵、鋅等)會(huì)對(duì)動(dòng)物機(jī)體抗氧化系統(tǒng)和脂質(zhì)代謝產(chǎn)生影響。MDA含量可以反映動(dòng)物機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的強(qiáng)度，也可以間接反映氧化損傷的程度[19]。相反，酶清除劑，如GSH-Px和SOD作為抗氧化防御的第一道防御，具有清除體內(nèi)氧化自由的作用[20]。機(jī)體缺銅可降低動(dòng)物機(jī)體內(nèi)SOD和GSH-Px的活性。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧添加包被復(fù)合微量元素提高了28日齡肉雞血清GSH-Px活性和56日齡肉雞血清T-AOC能力、SOD和GSH-Px活性。我們也發(fā)現(xiàn)，日糧添加包被復(fù)合微量元素也提高了56日齡肉雞肝臟中T-AOC能力和GSH-Px活性。研究發(fā)現(xiàn)，日糧添加銅可提高血清SOD和GSH-Px活性[21]。SUTTLE[22]研究表明，添加微量元素可以提高血清抗氧化酶的活性，從而消除身體產(chǎn)生的氧化自由基。ZHANG等[23]研究發(fā)現(xiàn)，通過增加微量元素的補(bǔ)充量，無論其形式如何，肝臟的抗氧化狀態(tài)都得到了改善。這可能由于包被復(fù)合微量元素的相互作用，提高其他微量元素的消化吸收，如硒與銅、鐵和鋅有協(xié)同作用，硒能夠促進(jìn)銅、鐵和鋅的吸收與利用[24]。故補(bǔ)充包被復(fù)合微量元素對(duì)肉雞抗氧化具有一定程度的影響，SOD和GSH-Px活性隨著微量元素的增加而提高。

3.3 不同添加水平包被復(fù)合微量元素對(duì)黃羽肉雞免疫能力的影響微量元素能增強(qiáng)非特異性免疫功能，提高機(jī)體免疫力。WU等[21]研究發(fā)現(xiàn)，日糧中補(bǔ)充微量元素可以避免中性粒細(xì)胞功能受損，增強(qiáng)身體免疫系統(tǒng)。有報(bào)道在日糧中補(bǔ)充微量元素增加了血清IgA、IgM和IgG水平[25-26]。在本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，日糧添加包被復(fù)合微量元素會(huì)提高28日齡肉雞血清IgA水平，56日齡血清IgM和IgG水平，與上述結(jié)果相似。此外，也有研究表明，在日糧中添加納米銅不會(huì)影響肉雞血清中的免疫球蛋白水平[27]。血清免疫球蛋白水平的提高可能由于吞噬細(xì)胞受到某些因素的刺激，但包被復(fù)合微量元素對(duì)雞免疫指標(biāo)的影響機(jī)制尚不清楚，有待進(jìn)一步研究。

家禽免疫器官主要有胸腺、脾臟、法氏囊和肝臟。免疫器官的狀況是評(píng)價(jià)家禽免疫機(jī)能的重要指標(biāo)，且家禽免疫機(jī)能的強(qiáng)弱與免疫器官指數(shù)成正比[28]。M’SADEQ等[29]研究發(fā)現(xiàn)，日糧添加不同來源的微量元素對(duì)肉雞胸腺、脾臟、法氏囊相對(duì)質(zhì)量沒有顯著影響。也有研究表明，日糧添加硫酸鋅和氨基酸鋅對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)有提高趨勢(shì)，但無顯著性差異[30]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，日糧添加包被復(fù)合微量元素對(duì)胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊和肝臟指數(shù)無顯著性影響。這可能由于包被復(fù)合微量元素在肉雞機(jī)體內(nèi)具有更高的吸收利用率，其中微量元素鋅與機(jī)體免疫關(guān)系密切，較低水平的包被微量元素水平也能滿足肉雞對(duì)鋅的需要。

綜上所述：日糧添加400 mg/kg包被復(fù)合微量元素可以提高黃羽肉雞血清和肝臟中T-AOC和GSH-Px活性，添加600 mg/kg可以降低血清膽固醇濃度，提高血清IgA、IgG水平，因此適宜添加劑量為400～600 mg/kg。