姚逸萍，趙德義，陳杉彬*，曹建全，張曉蒙，孫偉，趙文梅，劉建波，楊海存，郝飛克

1(中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院有限公司，北京， 100015)2(山東景芝白酒有限公司，山東 安丘， 262119)3(酒類品質(zhì)與安全國際聯(lián)合研究中心, 北京， 100015)

酒精進入人體后首先經(jīng)過血液進入肝臟，通過肝臟功能代謝分解，主要對肝臟造成嚴重壓力。短期飲酒會造成嘔吐、記憶力減退、情緒不穩(wěn)定等神經(jīng)問題。長期過量飲酒可能會造成脂肪肝、酒精性肝炎及肝硬化等疾病。酒精中毒和酒精造成的損傷已成為普遍問題。飲酒后可能主要對體內(nèi)產(chǎn)生氧化應激刺激，在體內(nèi)產(chǎn)生過多的自由基。自由基過多及清除自由基時可能會發(fā)生自由基防御體系障礙，會引起過氧化反應而對機體產(chǎn)生傷害。自由基積累增多會引起細胞、組織的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變，進而造成氧化損傷，同時還能引起機體炎癥的發(fā)生。細胞自噬是細胞內(nèi)依賴溶酶體介導的長壽命蛋白質(zhì)或受損細胞器降解的主要機制。自噬在真核生物中普遍存在，在胚胎發(fā)育、細胞自我保護以及生存等生理、病理過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[1]。細胞通過響應應激信號，如營養(yǎng)缺乏，會迅速啟動自噬信號通路，形成閉合的雙層膜結(jié)構(gòu)，包裹細胞內(nèi)錯誤折疊的/長壽命蛋白、受損細胞器或侵入的病原體，與溶酶體融合，形成自噬溶酶體進行降解并回收利用降解產(chǎn)物以應對不利環(huán)境[2]。炎癥是微生物病原體感染或組織損傷所激活的機體保護性反應。細胞自噬與炎癥反應密切相關(guān)，模式受體Toll樣受體的激活能夠誘導細胞自噬的發(fā)生，而細胞自噬又對炎癥反應有調(diào)控作用[3-5]。

中國白酒含有復雜的成分。其中包含多種小分子活性肽，小分子活性肽具有清除體內(nèi)過量氧自由基活性氧自由基(reactive oxygen species，ROS)，保護線粒體結(jié)構(gòu)，減少脂質(zhì)過氧化，提高機體免疫力，抗疲勞，調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、促進酒精代謝等功能?；艏畏f等[6]采用直接濃縮并結(jié)合液液萃取法從芝麻香型白酒中分離純化出一種三肽，并通過高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用儀確定其氨基酸序列為 Arg-Asn-His(RNH)，含量為(18.78±0.34) μg/L。進一步研究發(fā)現(xiàn)，RNH通過增加細胞內(nèi)抗氧化酶包括過氧化氫酶(catalase, CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、谷胱甘肽過氧化物(glutathione peroxidase, GSH-PX)酶的活性來清除氧化損傷產(chǎn)生的ROS，同時可以抑制過氧化產(chǎn)物丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量的上升，從而提高細胞抗氧化能力[7]。WU[8]等在一種芝香型白酒中檢測出短肽Ala-Lys-Arg-Ala(AKRA)，并發(fā)現(xiàn)其在HepG2細胞中可以減少ROS的生成，增加SOD活性，并減少MDA的含量，有具有一定的抗氧化作用，但未進一步深入探討其作用機理。除RNH、AKRA外，還有2條抗氧化肽曾被報道過，其氨基酸序列分別為Pro-His-Pro(PHP)[9]和Asp-Arg-Ala-Arg(DRAR)[10]。

目前關(guān)于短肽AKRA的相關(guān)功能研究較少，僅初步通過體外實驗判斷其具有一定的抗氧化能力，但這種抗氧化能力的具體作用機理還未進行深入研究。本研究通過人正常肝細胞，對短肽AKRA的抗氧化作用，調(diào)控細胞自噬和抑制炎癥反應的具體機理進行了進一步研究，并通過酒精性肝損傷模型觀察了AKRA對酒精性肝損傷在體內(nèi)的保護效應。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

Ala-Lys-Arg-Ala(AKRA)，純度≥98%，由超純水配制為150 g/L，吉爾生化有限公司；人正常肝細胞LO2購買于國家實驗細胞資源共享服務平臺；實驗動物由斯貝福生物技術(shù)有限公司提供，為49～56日齡雄性C57BL/6 J小鼠，體重18～22 g，動物的飼養(yǎng)溫度為(23±2) ℃，相對濕度為(50±5) %，光照時間12 h/d，自由飲食，5 只/籠，合籠飼養(yǎng)，實驗動物的相關(guān)處理均嚴格遵守實驗動物福利倫理與保護相關(guān)規(guī)定，并隨時接受實驗動物倫理委員會的監(jiān)督與檢查，許可證號為 (JK)2021-W-003；RPMI-1640培養(yǎng)基、雙抗HyClone青鏈霉素、0.25 %胰蛋白酶，美國Gibco公司；CCK-8，日本Dojindo公司；胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)、AAPH，美國Sigma-Aldrich公司；Lysis Buffer細胞裂解液，北京康為世紀生物科技有限公司；核蛋白分步提取試劑盒BB-3104，貝博生物；CAT、GSH、SOD、MDA、總膽固醇(total cholesterol，T-cho/ TC)、血清中甘油三酯(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase，AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase，ALT)，南京建成生物技術(shù)研究所；脫脂牛奶、BCA試劑盒，北京索萊寶科技有限公司；5×蛋白質(zhì)上樣緩沖液(P1040)，索萊寶公司；Marker(1610374)，BIO-RAD公司；一抗：核因子E-2-相關(guān)因子(nuclear factor erythroid-2-related factor 2，Nrf2) (16396-1-AP)、Kelch樣ECH關(guān)聯(lián)蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1, Keap1) (10503-2-AP)、炎性因子核因子κB (nuclear factor kappa-B, NF-κB) (10745-1-AP)、一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,INOS) (18985-1-AP)、環(huán)氧化酶(cyclooxygenase,COX2) (12375-1-AP)，英國Proteintech公司；LC3(PM036)，P62(PM045)，日本MBL公司；3-磷酸甘油醛脫氫酶(5174S) (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)，CST公司；二抗：Rabbit(7074S)，CST公司；ECL曝光液，聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride，PVDF), 美國Merck millipore公司。

1.2 儀器與設備

Milli-Q超純水儀，美國Millipore公司；細胞培養(yǎng)箱，美國賽默飛科技有限公司；SpectraMax iD3多功能酶標儀，美國Molecular Devices公司；高速冷凍離心機，美國賽默飛科技有限公司；標準電泳裝置， 美國Bio-Rad公司；標準濕式轉(zhuǎn)膜裝置，北京百晶生物技術(shù)有限公司；ChemiScope 6200 Touch科學發(fā)光成像系統(tǒng)，上海勤翔科學儀器有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 細胞培養(yǎng)

用含10%(體積分數(shù))FBS與1%(體積分數(shù))雙抗的RPMI-1640培養(yǎng)液于5% CO2、37 ℃的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)LO2細胞，該細胞屬于單層貼壁生長細胞，待細胞貼壁達到80%～90%時，使用體積分數(shù)為0.25%的胰蛋白酶消化傳代，每2～3 d進行1次傳代。

1.3.2 細胞存活率測定

取處于指數(shù)生長期的LO2細胞，加入適量0.25%胰蛋白酶消化約3 min。用含10%FBS與1%雙抗的RPMI-1640的培養(yǎng)液,接種于96孔板，每孔100 μL，接種細胞量為1.6×104每孔。分為空白組、正常對照組和不同劑量AKRA組(AKRA濃度為0～6.4 mg/mL)，每組3個平行。置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，取出培養(yǎng)板，每孔加入100 μL CCK8預混液[V(完全培養(yǎng)液)∶V(CCK8)=9∶1],置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2 h, 采用SpectraMax iD3酶標儀于450 nm 波長處測定每孔的吸光度值，測定完成后按照公式(1)計算細胞存活率：

(1)

式中：OD實驗組為測定孔讀數(shù)數(shù)值;OD空白孔為無添加讀數(shù)數(shù)值;OD正常對照組為只加1640培養(yǎng)基處理細胞讀數(shù)數(shù)值。

1.3.3 AKRA對氧化損傷細胞內(nèi)MDA含量和抗氧化酶活性的影響

取處于指數(shù)生長期的LO2細胞，加入1 mL 0.25%胰蛋白酶消化約3 min。用含10%FBS與1%雙抗的RPMI-1640的培養(yǎng)液，接種于6孔板，每孔2 mL, 接種細胞量為2×105每孔。分為空白對照組、AAPH處理組(400 μmol/L)、低劑量AKRA組(AKRA質(zhì)量濃度為1 mg/mL)、中劑量AKRA組(AKRA質(zhì)量濃度為3 mg/mL)和高劑量AKRA組(AKRA質(zhì)量濃度為6 mg/mL)，首先用AKRA對細胞進行預處理21 h, 然后再用AKRA+AAPH同時處理3 h，經(jīng)由冷PBS清洗2次后，用Lysis Buffer裂解細胞，取上清液嚴格按照BCA試劑盒說明書進行蛋白濃度的測定，同時，測定脂質(zhì)氧化產(chǎn)物MDA、抗氧化酶(CAT、SOD)活力和GSH含量。

1.3.4 蛋白免疫印跡

在收集的蛋白樣品中加入5×蛋白上樣緩沖液, 98 ℃金屬浴加熱5 min。將蛋白樣品上樣到SDS-PAGE膠加樣孔，通過Bio-Rad的標準電泳裝置，每塊膠以電流為20 mA的電流強度進行恒流電泳。在目的蛋白泳動至距膠下緣1 cm以上時結(jié)束或在溴酚藍到達膠的底端處附近即可停止電泳，關(guān)閉電源，進行轉(zhuǎn)膜。使用標準濕式轉(zhuǎn)膜裝置，將目的蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜，轉(zhuǎn)膜電壓為120 V，轉(zhuǎn)膜時間為60 min。轉(zhuǎn)膜完畢后，把PVDF膜放置到含5%(體積分數(shù))脫脂牛奶的TBS/T溶液 (tris-HCl tween)中，室溫封閉60 min。封閉結(jié)束，用封閉緩沖液稀釋一抗，室溫下孵育2 h，使用TBS/T緩沖液，重復洗滌3次，每次5 min。用封閉緩沖液稀釋二抗，室溫下孵育40 min。使用TBS/T緩沖液，重復洗滌3次，每次5 min。利用ChemiScope 6200 Touch科學發(fā)光成像系統(tǒng)進行顯影。使用Image J對蛋白進行半定量分析。

1.3.5 實驗動物分組與造模

實驗小鼠適應性喂養(yǎng)一周后，將50只小鼠隨機分成5組，分別為空白對照、食用酒精組、低劑量AKRA組、中劑量AKRA組、高劑量AKRA組。其中食用酒精組、AKRA低劑量組、AKRA中劑量組、AKRA高劑量組分別灌胃120 μL的 52%vol食用酒精，空白組灌胃等劑量生理鹽水。其中AKRA低劑量組、AKRA中劑量組、AKRA高劑量組分別每天注射0.1 g/kg bw AKRA、0.2 g/kg bw AKRA和0.4 g/kg bw AKRA，30 d，最后一次注射后禁食不禁水，8 h后，眼球取血，頸椎脫臼處死小鼠，取肝臟組織和血液進行后續(xù)實驗，其中，將右半部肝臟組織通過10%(體積分數(shù))中性多聚甲醛固定制備石蠟切片，肝臟組織病理學變化采用蘇木精-伊紅染色法(hematoxylin-eosin staining, HE)染色后觀察；其余肝臟組織存于-80 ℃冰箱低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.6 小鼠肝臟組織病理學檢查

肝臟組織用10%中性多聚甲醛固定24 h后轉(zhuǎn)入70%(體積分數(shù))酒精溶液中脫水處理24 h，常規(guī)石蠟包埋后制作厚度約4 μm的切片，使用C8H10進行脫蠟處理，酒精梯度(95%、90%、80%、75%，體積分數(shù))脫水；蘇木精染色；鹽酸醇分化；0.5%伊紅染色后常規(guī)梯度酒精(75%、80%、90%、95%，體積分數(shù))脫水后經(jīng)100%乙醇Ⅰ(10 min)，100%酒精Ⅱ(10 min)；最后經(jīng)二甲苯透明后中性樹膠封片，在Nikon光學顯微鏡Eclipse Ci-L下，選取不同的視野拍照并分析肝臟組織病理學變化。

1.3.7 小鼠肝功能和血脂水平的檢測

小鼠眼球取血，靜置時間30 min，經(jīng)3 000 r/min離心10 min，得到血清，并將其轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱進行低溫保存。按照試劑盒使用說明書，通過賴氏法檢測血清轉(zhuǎn)氨酶AST和ALT水平。小鼠體內(nèi)血清中TC水平、血清中TG水平、HDL和LDL的水平分別通過膽固醇氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法(cholesterol oxidase-peroxidase，COD-PAP)、磷酸甘油氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法(glycerophosphate oxidase-peroxidase，GPO-PAP)、直接檢測法進行測定。

1.4 數(shù)據(jù)分析

用Prism 9.0分析處理數(shù)據(jù)，組間檢驗采用t檢驗，所有實驗數(shù)據(jù)均為3個平行試驗的平均值，用平均值±標準誤差(standard error, SE)表示；圖表由Prism 9.0繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度AKRA對細胞存活率及相關(guān)氧化指標的影響

由圖1可知，與空白組相比較，通過用不同質(zhì)量濃度(0～6.4 mg/mL)的AKRA處理人肝源細胞LO2 24 h，細胞存活率無顯著性差異(P>0.05)，均在80%以上，表明AKRA在此質(zhì)量濃度下對LO2細胞增殖無明顯影響和毒性作用，細胞活力正常。因此后續(xù)選用0～6 mg/mL進行后續(xù)實驗。由圖2可知，與空白組相比較，AAPH處理后，LO2細胞SOD、CAT、GSH水平均呈現(xiàn)不同程度的降低，MDA含量升高。與模型組比較，AKRA處理細胞后，SOD(P>0.05)、CAT(P>0.05)和GSH(P>0.05)活性在6 mg/mL條件下顯著升高，而MDA活性在6 mg/mL條件下則顯著降低(P>0.05)。通過用AAPH對人源肝細胞進行氧化性損傷，多肽AKRA能夠緩解這種損傷，表明AKRA對AAPH造成的LO2細胞氧化應激損傷具有保護作用。

圖1 細胞存活率

a-SOD活力;b-CAT活力;c-GSH活力;d-MDA活力

2.2 不同濃度AKRA對細胞氧化通路的影響

Nrf2屬于核轉(zhuǎn)錄因子家族，主要參與調(diào)節(jié)細胞氧化應激反應[11-12]。在生理條件下，Nrf2與Keap1結(jié)合，形成蛋白復合物，定位于細胞質(zhì)。當細胞面臨氧化壓力時，Nrf2與Keap1解離，進入細胞核，并激活抗氧化反應元件 (anti-oxidative response element, ARE) 的基因表達，以保護細胞免受氧化應激所引起的損傷[13-14]。如圖3所示，AKRA處理LO2細胞后，細胞核中Nrf2蛋白水平升高，Keap1蛋白降低，說明Keap1蛋白與Nrf2解離后，經(jīng)蛋白酶體或自噬降解。提示AKRA是通過調(diào)控Nrf2-Keap1蛋白復合物，實現(xiàn)其抗氧化作用。

a-氧化通路關(guān)鍵蛋白表達;b-半定量分析

2.3 不同濃度AKRA對細胞自噬通路的影響

自噬是細胞為維持自身代謝發(fā)生的胞質(zhì)組分降解的動態(tài)過程， LC3與P62蛋白是自噬標記蛋白[15-17]。P62蛋白可通過競爭性結(jié)合Keap1蛋白，促使其自噬性降解，以增加Nrf2的入核數(shù)量并促進其轉(zhuǎn)錄抗氧化基因[18]。因此，進一步觀察了AKRA是否通過Nrf2影響自噬活性。如圖4所示，LO2細胞經(jīng)AKRA處理后，LC3蛋白隨AKRA濃度增高而增加，而P62蛋白隨AKRA濃度增高則呈現(xiàn)下降的趨勢。提示AKRA對細胞自噬有促進作用，這一作用可能與作用于氧化通路的關(guān)鍵蛋白Nrf2有關(guān)。

a-自噬通路關(guān)鍵蛋白表達;b-半定量分析

2.4 不同濃度AKRA對細胞炎癥通路的影響

炎癥與氧化應激相輔相成，為進一步探索AKRA在LO2細胞中的抗炎作用，觀察了NF-κB、INOS蛋白及COX2蛋白水平的變化。如圖5所示，與對照組相比，AAPH處理LO2細胞后，NF-κB、INOS及COX2等炎性因子表達增多。經(jīng)過不同濃度的AKRA處理后，炎癥相關(guān)蛋白NF-κB、INOS、COX2呈現(xiàn)不同趨勢下降。且NF-κB隨AKRA濃度升高，下降趨勢更為顯著。該結(jié)果提示AKRA具有一定的抑制炎癥的作用。

a-炎癥通路關(guān)鍵蛋白表達;b-半定量分析

2.5 不同濃度AKRA對小鼠氧化應激的影響

進一步觀察AKRA在小鼠體內(nèi)的生理作用。如圖6所示，與食用酒精組比較，不同劑量AKRA處理組小鼠肝組織SOD(P>0.05)、GSH(P>0.05)、CAT(P>0.05)活性呈濃度依賴性升高，MDA(P>0.05)含量剛呈濃度依賴性下降。上述結(jié)果提示，AKRA在體內(nèi)同樣具有抗氧化作用。酒精在肝臟內(nèi)的代謝過程是氧化還原過程，因此，進一步觀察AKRA是否能夠通過提高小鼠肝臟的抗氧化能力，達到在一定程度上保護酒精造成的肝損傷。

a-SOD活力;b-GSH活力;c-CAT活力;d-MDA活力

2.6 不同濃度AKRA對小鼠肝組織病理形態(tài)學的影響

如圖7所示，通過HE染色，空白對照組小鼠肝組織基本無明顯病理變化，肝組織排列緊密，肝細胞正常生長，無變性情況；食用酒精組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)、肝細胞出現(xiàn)排列紊亂、纖維化、脂肪滴空泡，其中炎性細胞較多(圖7-b)。低濃度AKRA組出現(xiàn)肝細胞排列緊密，肝細胞胞漿疏松淡染，小葉出現(xiàn)炎性細胞小灶性浸潤(圖7-c)；中濃度AKRA組：門管區(qū)肝細胞胞漿輕度疏松淡染小葉偶見炎性細胞小灶性浸潤(圖7-d)。高濃度AKRA組出現(xiàn)較少的炎性細胞小灶性浸潤(圖7-e)。長期飲酒后，已經(jīng)對肝細胞出現(xiàn)一定影響，主要包括肝細胞變性，炎性侵染等，但不同處理均有一定差別，通過施加AKRA處理后，肝細胞狀態(tài)明顯優(yōu)于食用酒精，AKRA對由食用酒精造成的肝損傷起到了一定的保護作用，從而減少酒精帶來的肝損傷危害。

a-空白對照組;b-食用酒精組;c-0.1 g/kg bw AKRA;d-0.2 g/kg bw AKRA;e-0.4 g/kg bw AKRA

2.7 不同濃度AKRA對小鼠肝臟功能和血脂水平的影響

如圖8所示，與食用酒精組相比較，AKRA處理組小鼠在血清中AST、ALT水平均有一定程度降低。在AST(P<0.05)水平上，不同濃度AKRA處理組分別是食用酒精組的0.900、0.877和0.854倍，但三者之間無顯著性差異。而在ALT(P<0.05)水平上，不同濃度AKRA處理組不同程度的低于食用酒精組，分別是食用酒精的0.739、0.699和0.682倍，但三者之間無顯著性差異。在ALP(P<0.05)水平上，不同濃度AKRA處理組分別是食用酒精組的0.899、0.878 和0.849倍，但三者之間無顯著性差異。與食用酒精組相比較，AKRA不同劑量組小鼠血清中TC(P<0.05)、TG(P>0.05)、LDL(P>0.05)水平相較食用酒精組出現(xiàn)下降的現(xiàn)象(P<0.05)，同時HDL(P>0.05)水平上升；表明AKRA能在一定程度上緩解食用酒精造成的肝損傷，但無法使這種損傷恢復至初始狀態(tài)。

a-AST活性;b-ALT活性;c-ALP活性;d-T-cho活性;e-TG活性;f-LDL活性;g-HDL活性

3 結(jié)論與討論

為探究一品景芝酒中一種四肽AKRA (Ala-Lys-Arg-Ala)的生理功能及其緩解酒精性肝損傷的可能作用機理，本研究用不同濃度的AKRA對人源肝細胞LO2及C57小鼠進行處理，觀察在氧化應激條件下的LO2細胞及酒精性肝損傷模型小鼠的影響作用。AKRA處理細胞后，可以提高其抗氧化酶活力，不同程度減少由AAPH帶來的氧化損傷。Nrf2-Keap1是抗氧化信號通路中的一條關(guān)鍵蛋白復合物，在各種組織、器官中均能夠表達。Nrf2的缺失能夠增加小鼠急性酒精暴露導致的死亡率[19-21]。AKRA處理細胞后，可以加速Nrf2與Keap1解離，能夠促進Nrf2進入細胞核中發(fā)揮其轉(zhuǎn)錄功能。Nrf2蛋白解離的Keap1蛋白，可能與P62蛋白結(jié)合，通過自噬途徑進行降解，而Nrf2蛋白入核后，可以通過調(diào)控下游抗氧化蛋白進而提高下游抗氧化相關(guān)酶的活力[21]。本研究中使用AKRA處理細胞后發(fā)現(xiàn)，LC3蛋白含量升高，同時P62降解，提高了LO2細胞的自噬活性。AKRA處理LO2細胞后，炎性因子NF-κB、INOS、COX2表達均下降，提示AKRA具有一定的抑制炎癥反應的作用。

肝組織病理形態(tài)學提示，食用酒精組小鼠肝組織呈炎性改變；AKRA各濃度處理組肝細胞變性數(shù)量及情況均要優(yōu)于食用酒精組小鼠。同時在對不同組小鼠肝臟健康相關(guān)指標進行比較，結(jié)果表明用AKRA處理誘導的酒精性肝損傷小鼠，能夠在一定程度上緩解的酒精性肝損傷的發(fā)生。目前研究表明酒精能夠產(chǎn)生氧化應激引起機體產(chǎn)生相應反應。乙醇代謝產(chǎn)物乙醛可直接與組織SOD、GSH-PX等抗氧化酶和抗氧化蛋白GSH結(jié)合而導致抗氧化酶活性下降, 造成系統(tǒng)抗氧化功能降低[22-24]。能夠發(fā)現(xiàn)AKRA處理組中的氧化相關(guān)指標CAT、GSH、SOD活力均比食用酒精組中不同程度升高，MDA水平降低，表明AKRA對小鼠的酒精性肝損傷有一定的保護作用，而這種能力是通過調(diào)控體內(nèi)抗氧化通路達到的。

目前研究結(jié)果表明，體內(nèi)體外實驗均能夠一定程度表明AKRA是通過調(diào)控抗氧化物酶的活力來達到緩解氧化應激損傷，保持氧化水平，這與目前針對AKRA的作用的相關(guān)研究是相符合的。本研究深入探究了AKRA的調(diào)控機理，發(fā)現(xiàn)其主要是通過調(diào)控抗氧化關(guān)鍵通路Nrf2-Keap1進而影響下游相關(guān)抗氧化酶的合成。同時還通過影響細胞自噬通路關(guān)鍵蛋白及炎癥通路關(guān)鍵蛋白的表達，進而改善酒精性肝損傷。但這種緩解能力是有一定限度的，可能是AKRA直接作用與抗氧化通路的某些關(guān)鍵蛋白帶來的影響。AKRA能夠通過作用于抗氧化通路關(guān)鍵蛋白、細胞自噬通路關(guān)鍵蛋白和炎癥通路關(guān)鍵蛋白，提高抗氧化酶活力，減少氧化應激損傷，同時緩解炎癥損傷，進而減緩酒精帶來的肝臟損害。