韋 鳳，王 勛，蘇榮榮，廖幫海，馬麗凱，周佳佳*

（1.黔西南州農(nóng)業(yè)林業(yè)科學(xué)研究院，貴州 興義 562400；2.冊亨縣產(chǎn)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，貴州 冊亨 552200）

云芝，多孔菌科栓菌屬，外形似彩云，又稱云芝。具有健脾利濕，清熱解毒等作用[1，4]。具有較強(qiáng)的保肝功效，能加強(qiáng)肝組織的修復(fù)，提高機(jī)體免疫力[5，8]。同時(shí)研究表明，云芝提取物能抑制某些腫瘤細(xì)胞的生長，降低對免疫細(xì)胞的抑制作用[9，11]。目前云芝提取物—云芝肝泰已被廣泛用于臨床，具有極為重要的藥用價(jià)值[12，14]。因此本文將通過研究對不同培養(yǎng)基、栽培配方對云芝生長狀態(tài)和產(chǎn)量的影響，來確定最佳的栽培配方，提高云芝的產(chǎn)量。

1 ?儀器和實(shí)驗(yàn)材料

SPX-350BSH-Ⅱ生化培養(yǎng)箱（上海新苗）；DLCJ-1NDⅡ超凈工作臺（東聯(lián)哈爾）；QYC-211全溫大容量培養(yǎng)搖床（上海新苗）；SQ510C高壓滅菌鍋（雅馬拓）；AKHL-Ⅲ-10超純水機(jī)（艾柯）；BX5200HP超聲波清洗器（上海新苗）；GE0505十萬分之一天平（上海佑科）。

蛋白胨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、瓊脂、葡萄糖、果糖、淀粉、甘露醇、麥芽糖、乳糖、紅糖、蔗糖、硫酸鎂、氯化鈉、硝酸鉀、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、氯化鈣、碳酸鈉、硫酸錳、碳酸鈣、硫酸鐵、硫酸鈣、磷酸二氫鈣、脲、硫酸銨、牛肉粉、麥芽浸粉、氯化銨、酵母膏、酵母浸出物（天津致遠(yuǎn)）；食用菌雜木屑、棉籽殼、麥麩、生石灰（武漢周玉麟食用菌研究所）。

2 ?實(shí)驗(yàn)方法

2.1 ?野生云芝的分離純化

在無菌條件下，用接種針挑取一小塊野生云芝子實(shí)體在超凈工作臺接種于固體馬鈴薯培養(yǎng)基中，在恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)5~7d，挑出長勢無污染的菌絲體作為初級菌種，活化后作為次級菌種保存于4℃冰箱中[15，18]。

2.2 ?培養(yǎng)基篩選

2.2.1 碳源篩選

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：蛋白胨2g、磷酸二氫鉀1.5g、硫酸鎂0.5g、瓊脂10g、蒸餾水1000ml，pH自然。分別加入20g供試碳源，葡萄糖，果糖，淀粉，甘露醇，麥芽糖，乳糖，紅糖，蔗糖。

2.2.2 氮源篩選

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：葡萄糖20g、磷酸二氫鉀1.5g、硫酸鎂0.5g、瓊脂10g、蒸餾水1000ml，pH 自然。分別加入2g供試氮源，蛋白胨，脲，硫酸銨，牛肉粉，麥芽浸粉，氯化銨，酵母膏，酵母浸出物。

2.2.3 無機(jī)鹽篩選

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：葡萄糖20g、蛋白胨2g、瓊脂10g、蒸餾水1000ml，pH 自然。分別加入0.5g供試無機(jī)鹽，硫酸鎂，氯化鈉，硝酸鉀，磷酸二氫鉀，磷酸氫二鉀，氯化鈣，碳酸鈉，硫酸錳，碳酸鈣，硫酸鐵，硫酸鈣，磷酸二氫鈣。

制備好固體培養(yǎng)基，然后用打孔法把菌絲打到培養(yǎng)皿上，放置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)，兩天測一次長生的直徑，觀察和測定生長。

2.3 ?栽培配方優(yōu)化

配方試驗(yàn)如下：

A：雜木屑78%，棉籽殼10%，麥麩10%，石灰1%，石膏1%。

B：雜木屑78%，棉籽殼5%，麥麩15%，石灰1%，石膏1%。

C：雜木屑70%，廢菌棒8%，棉籽殼5%，麥麩15%，石灰1%，石膏1%。

D：雜木屑88%，麥麩10%，石灰1%，石膏1%。

液體培養(yǎng)基：在超凈工作臺內(nèi)即無菌環(huán)境下，用接種鉤從云芝母種斜面試管中挑取5~6片0.7cm大小的菌塊接于液體培養(yǎng)基中，用封口膜封口后，將搖瓶放入恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱中無光培養(yǎng) 7~9d，轉(zhuǎn)速140r/min，溫度設(shè)定為 25℃[19，23]。

2.4 ?菌棒制備

將已經(jīng)發(fā)酵好的雜木屑、棉籽殼、麥麩、石膏等按配方比例來混合均勻，加適量的水，讓濕度保持在60%左右。按1.25kg裝袋，蓋上蓋子，121℃高壓滅菌鍋滅菌4h，置于無菌操作臺冷卻，將20ml的菌液接種到菌棒上，擰好蓋子，于25℃的黑暗環(huán)境中等待菌絲長滿。并記錄好菌絲長滿的天數(shù)[24，25]。

2.5 ?出菇

將菌絲長滿的菌棒置于菌棒架和吊袋，螺旋式劃袋等待出菇，出菇期間每天早晚澆水兩次，每次30min。待子實(shí)體長大，白圈已經(jīng)退卻，表示云芝長好，可以進(jìn)行采摘。采摘之后進(jìn)行晾曬，稱重，對產(chǎn)量進(jìn)行評估，最后進(jìn)行測量記錄子實(shí)體大小、厚度[26]。

3 ?結(jié)果和分析

3.1 ?碳氮源、無機(jī)鹽的影響

在相同的培養(yǎng)條件下，云芝在不同碳、氮源營養(yǎng)培養(yǎng)基中，生長速度是有差異的。如圖1所示，云芝在果糖、乳糖、可溶性淀粉、葡萄糖、蔗糖、紅糖、麥芽糖和甘露醇不同碳源中，菌絲生長速度較快，第十天菌絲全部長滿培養(yǎng)基，幾種碳源生長速度差距不大，其中生長速度最快的是果糖。

圖1

圖2

如2圖所示，云芝在氯化銨、牛肉膏、蛋白胨、酵母浸粉、脲、酵母膏、硫酸銨、麥芽浸粉不同氮源中，菌絲生長速度較快，第十天菌絲基本長滿培養(yǎng)基，幾種碳源生長速度差距不大，其中生長速度最快的是牛肉膏、酵母浸粉、酵母膏，菌絲生長速度最慢的是脲。

圖3

如3圖所示，云芝在硫酸鎂、硫酸錳、硫酸鉀、氯化鈉、磷酸二氫鉀、硫酸鈣、碳酸鈣、氯化鈣、硫酸氫二鉀不同氮源中，菌絲生長速度較快，第十天菌絲基本長滿培養(yǎng)基，幾種無機(jī)鹽生長速度差距不大，其中生長速度最快的是硫酸鈣、硫酸鎂，菌絲生長速度最慢的是硫酸錳。

3.2 ?不同栽培配方的影響

不同栽培配方對子實(shí)體產(chǎn)量的影響，由圖4、5、6可以看出，不同配方長出來的子實(shí)體重量和半徑有差距較大。其中四種配方子實(shí)體重量比較：配方四＜配方三＜配方二＜配方一；擺棒的四個(gè)配方干重與吊棒基本持平。四種配方子實(shí)體半徑比較：配方四＜配方二＜配方一＜配方三，擺棒子實(shí)體半徑遠(yuǎn)大于吊棒。四種配方子實(shí)體厚度比較：配方四＜配方三＜配方二＜配方一，擺棒子實(shí)體半徑遠(yuǎn)大于吊棒。

圖4

4 ? 討論

碳氮源、無機(jī)鹽培養(yǎng)基對食用菌菌絲的生長至關(guān)重要，本文通過對比不同的碳氮源、無機(jī)鹽對菌絲生長的影響，結(jié)果表明對比不同碳源中果糖生長速度最快；對比不同氮源中生長速度最快的是牛肉膏、酵母浸粉、酵母膏；對比不同無機(jī)鹽中生長速度最快的是硫酸鈣、硫酸鎂。四種配方中，配方一云芝子實(shí)體最重，配方三的子實(shí)體半徑最大，配方三的子實(shí)體厚度最厚。四種配方中，配方一子實(shí)體整體產(chǎn)量最好，半徑較大，厚度較厚；且擺棒的生長狀況優(yōu)于吊棒。

圖5

圖6