邱永杰何松林張翔宇胡緩史來琨于嘉倫賈文慶

(河南科技學(xué)院園藝園林學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453003)

牡丹(Paeonia suffruticosa)是芍藥科(Paeoniaceae)芍藥屬(Paeonia)落葉灌木，因其華麗的姿態(tài)和美好的寓意，千百年來深受人們喜愛。近年來，隨著人們對(duì)牡丹觀賞價(jià)值的深入開發(fā)，其作為鮮切花的潛在價(jià)值被逐漸挖掘。然而，與月季、菊花、香石竹等其它暢銷切花相比，牡丹花期短、花瓣脆弱及不易運(yùn)輸、難以持續(xù)保存的特點(diǎn)導(dǎo)致其在鮮切花市場上的流通受到限制，從而制約牡丹鮮切花產(chǎn)業(yè)發(fā)展[1，2]。大量研究表明有多種因素參與牡丹開花和衰老過程的調(diào)控，包括內(nèi)源激素、膜質(zhì)過氧化、大分子物質(zhì)、水分代謝、呼吸代謝等[3]。近年來，通過施加外源保鮮劑延緩切花的衰老進(jìn)程已經(jīng)成為普遍的切花保鮮方式[4]，國內(nèi)關(guān)于此類化學(xué)保鮮的研究多集中于保鮮液的成分。研究表明，以蔗糖為主要保鮮劑的配方對(duì)香石竹切花有良好的保鮮效果[5]；赤霉素能有效延長蝴蝶蘭、百合切花的保鮮時(shí)間[6，7]；多胺、多效唑、比久可以明顯延緩牡丹切花的壽命[8，9]。

植物花器官的開放和衰老包括花朵吸水?dāng)U展生長到失水萎蔫的過程，此過程中植物體內(nèi)發(fā)生一系列生理學(xué)和細(xì)胞學(xué)上的變化。這些變化反映到表型特征上則表現(xiàn)為花朵直徑大小、花色暗淡程度、花瓣褶皺程度、莖稈彎曲程度的變化等。在細(xì)胞和亞細(xì)胞水平上，研究發(fā)現(xiàn)，衰老的花瓣表皮細(xì)胞表現(xiàn)出液泡膜內(nèi)陷、細(xì)胞壁變形且核糖體減少、DNA斷裂，包括蛋白質(zhì)、核酸、白色體、溶酶體等在內(nèi)的細(xì)胞內(nèi)組分發(fā)生自溶等，而關(guān)于細(xì)胞核形態(tài)變化的研究尚未見報(bào)道。植物的生命活動(dòng)廣泛存在細(xì)胞程序性死亡(PCD)?；ㄆ鞴俚乃ダ献鳛橹参锼ダ系囊徊糠?，是植物生長發(fā)育的一個(gè)階段，也是一個(gè)細(xì)胞程序性死亡的過程。在這個(gè)過程中，植物體大量積累各種生理代謝的副產(chǎn)物，其中活性氧(reactive oxygen species，ROS)是主要的代謝產(chǎn)物，主要包括過氧化氫(H2O2)、超氧陰離子()、羥自由基(·OH)、單線態(tài)氧(1O2)等，這些部分被還原或活化氧的衍生物，具有高活性和毒性，可以氧化破壞細(xì)胞，導(dǎo)致可溶性蛋白降解、膜脂過氧化程度升高、游離氨基酸積累以及多種酶活性變化等[10，11]。過量的ROS會(huì)觸發(fā)植物體內(nèi)抗氧化清除機(jī)制，引起酶清除系統(tǒng)中的SOD、POD、CAT等保護(hù)酶活性發(fā)生變化[12]，因此可以作為判斷細(xì)胞PCD程度的關(guān)鍵性指標(biāo)。

抗壞血酸(ASA)是植物體內(nèi)重要的非酶類小分子抗氧化劑，能與谷胱甘肽(GSH)形成循環(huán)系統(tǒng)，在清除植物體內(nèi)抗氧化酶不能清除的O2·-和·OH等自由基、阻止或減輕氧化傷害方面發(fā)揮重大作用[13，14]。陳嬌等[15]研究指出，香蕉表面噴灑外源ASA推遲果實(shí)成熟衰老時(shí)間；楊慶賀等[13]指出施加外源ASA能提高菊花對(duì)低溫弱光的耐性。H2O2是一類ROS，會(huì)對(duì)植物細(xì)胞造成毒害作用，此外研究表明，H2O2還能作為一種信號(hào)分子參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而調(diào)節(jié)植物代謝、提高植物的抗逆性[16]。朱利君等[17]研究表明，高鹽脅迫下外源H2O2介導(dǎo)抗氧化酶、ABA和GA可促進(jìn)黃瓜種子的萌發(fā)；蔣景龍等[18]研究指出，施加適宜濃度的外源H2O2可緩解低溫脅迫下大紅柑葉片的卷曲萎蔫，降低低溫對(duì)柑橘葉片細(xì)胞膜的傷害。目前，關(guān)于施加外源ASA和H2O2對(duì)牡丹切花保鮮影響的研究尚未見報(bào)道。因此，本研究參考史國安等[19]的牡丹花自然開放進(jìn)程分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，以‘鳳丹’牡丹為試材，選擇切花保鮮處理最適宜時(shí)期——破綻期牡丹花苞作為研究對(duì)象，研究不同濃度ASA、H2O2溶液對(duì)瓶插切花衰老和不同瓶插時(shí)期花瓣相關(guān)生理指標(biāo)的影響，以進(jìn)一步探究牡丹切花衰老過程中抗氧化系統(tǒng)的運(yùn)作機(jī)制、衰老生理及細(xì)胞學(xué)特性，以期為牡丹切花的保存及開發(fā)利用提供理論和技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與地點(diǎn)

供試牡丹品種‘鳳丹’(Paeonia ostii)取自河南科技學(xué)院牡丹資源圃。試驗(yàn)于2020年4月在河南省園藝植物資源利用與種質(zhì)創(chuàng)新工程研究中心進(jìn)行。

1.2 材料培養(yǎng)與處理

于基地剪取破綻期生長態(tài)勢良好、大小一致的‘鳳丹’切花，共分為7組(T1～T7)，每組6枝，分別置于盛有蒸餾水的切花瓶中培養(yǎng)，其中每組預(yù)留一枝用作外表形態(tài)觀察和花徑測量，不用作生理指標(biāo)測定。處理組分別滴加提前配置好的H2O2與ASA溶液，使瓶插液濃度分別為2.5 mg/L ASA(T1)、5 mg/L ASA(T2)、10 mg/L ASA(T3)和0.003 mg/L H2O2(T4)、0.03 mg/L H2O2(T5)、0.3 mg/L H2O2(T6)，共6個(gè)處理組，對(duì)照組(T7)瓶插液為蒸餾水。將切花置于(22±1)℃室溫下培養(yǎng)觀察，全程保持自然光照，避免陽光直射。瓶插當(dāng)日起，每日對(duì)切花的花徑和生理指標(biāo)進(jìn)行測定:于每日上午8時(shí)用游標(biāo)卡尺測量每瓶預(yù)留切花兩個(gè)垂直方向的直徑大小，取其平均值作為該支切花的花徑；分別取切花內(nèi)、中、外輪花瓣的中間部位共0.5 g，切碎混勻，測定生理生化指標(biāo)，每處理重復(fù)3次。

1.3 生理生化指標(biāo)測定

采用考馬斯亮藍(lán)G-250法測定可溶性蛋白質(zhì)含量(參考Bradford[20]的方法并加以修改)。氮藍(lán)四唑(NBT)法測定SOD活性，愈創(chuàng)木酚法測定POD活性，紫外吸收法測定CAT活性[21]。根據(jù)硫代巴比妥酸(TBA)的三氯乙酸溶液與MDA的顯色反應(yīng)測定MDA含量[22]。

1.4 DAPI染色觀察細(xì)胞核形態(tài)學(xué)特征

瓶插期間于每日上午8時(shí)分別取每個(gè)處理切花的中間層花瓣觀察細(xì)胞核變化，即從距離花瓣基部三分之一處切取長2～3 mm、寬1～2 mm的小塊，置于70%乙醇中固定2 h，之后用PBS緩沖液反復(fù)沖洗3次。將沖洗干凈的切片材料置于載玻片上，吸干表面水分，滴加10μg/mL DAPI染液20μL，于黑暗處染色15 min，然后置于尼康OLYMBUS熒光倒置顯微鏡下觀察拍照(熒光激發(fā)波長為UV330-380 nm)。判斷細(xì)胞核完整性的標(biāo)準(zhǔn):細(xì)胞核完整時(shí)位于細(xì)胞正中央、形態(tài)完整、邊緣清晰圓滑，為標(biāo)準(zhǔn)的圓形，排列整齊。

1.5 數(shù)據(jù)整理與分析

采用Microsoft Execl制圖，SPSS軟件分析數(shù)據(jù)，Photoshop軟件進(jìn)行圖片整合。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度ASA和H2O2對(duì)牡丹切花花徑的影響

由圖1(a)可以看出，外源不同濃度ASA處理牡丹切花直徑變化顯著，第4天時(shí)‘鳳丹’切花花徑達(dá)到最大值，為完全盛開狀態(tài)；第5天時(shí)濃度2.5、10 mg/L ASA處理切花的花徑仍然保持在最大值，其它處理切花花徑都存在一定程度縮減。這說明適宜濃度的ASA具有維持切花保鮮的作用。圖1(b)表明，外源H2O2處理下，切花花徑第2天時(shí)綻放程度明顯低于對(duì)照，并且在接下來幾天里始終低于對(duì)照。

圖1 不同濃度ASA和H2O2處理‘鳳丹’切花花徑的變化

2.2 不同濃度ASA和H2 O2對(duì)牡丹切花SOD活性的影響

由圖2(a)可知，第2天時(shí)各ASA處理花瓣內(nèi)SOD活性均比對(duì)照低，第3天時(shí)10 mg/L ASA處理(T3)切花SOD活性顯著升高且高于對(duì)照，到第5天處理組SOD活性整體高于對(duì)照。由圖2(b)可知，第2天時(shí)H2O2處理組切花SOD活性低于對(duì)照，之后開始逐漸升高，第4天達(dá)到峰值，之后開始下降，而0.3 mg/L H2O2處理(T6)SOD活性峰值提前1天，第5天T4處理切花SOD活性明顯低于對(duì)照，達(dá)到最低。

圖2 不同濃度ASA和H2O2瓶插處理‘鳳丹’切花SOD活性變化

2.3 不同濃度ASA和H2 O2對(duì)牡丹切花POD活性的影響

由圖3(a)可以看出，瓶插前4天各處理切花POD活性變化并不明顯，維持在較低狀態(tài)，第5天顯著升高，以2.5、5 mg/L ASA處理組(T1、T2)最為明顯。圖3(b)顯示，0.3 mg/L H2O2處理(T6)切花POD活性第2天時(shí)顯著升高并達(dá)峰值，而后逐漸降低，而對(duì)照在第5天時(shí)升到最高，高于處理組。

圖3 不同濃度ASA和H2 O2瓶插處理‘鳳丹’切花POD活性變化

2.4 不同濃度ASA和H2 O2對(duì)牡丹切花CAT活性的影響

圖4表明ASA和H2O2處理均對(duì)切花CAT活性變化有顯著影響。由圖4(a)可知，處理組切花CAT活性變化均較對(duì)照平穩(wěn)，其中5 mg/L ASA處理(T2)切花CAT活性第2天升至最高，之后開始下降，第4天降至最低但仍高于對(duì)照。由圖4(b)可知，對(duì)照切花CAT活性先升高再降低，0.003 mg/L H2O2處理(T4)CAT活性峰值延后，其余濃度H2O2處理下CAT活性變化趨勢較穩(wěn)定，基本呈現(xiàn)先升高再降低趨勢，且在第5天均低于對(duì)照。

圖4 不同濃度ASA和H2O2瓶插處理‘鳳丹’切花CAT活性變化

2.5 不同濃度ASA和H2 O2對(duì)牡丹切花MDA含量的影響

由圖5(a)可知，ASA處理切花花瓣內(nèi)MDA含量第2天時(shí)明顯降低，之后開始緩慢上升，第4天花朵完全盛開時(shí)MDA含量均低于對(duì)照。這說明ASA能有效緩解‘鳳丹’花瓣細(xì)胞的膜質(zhì)過氧化程度，且T3處理MDA含量最低，即10 mg/L ASA對(duì)切花保鮮效果最好。圖5(b)顯示，第4天時(shí)切花花瓣細(xì)胞膜受到嚴(yán)重傷害，0.003、0.03 mg/L H2O2處理(T4、T5)下MDA含量的升高得到抑制，可有效緩解這種傷害；但T6處理MDA含量高于對(duì)照，這可能是由于過高濃度的H2O2對(duì)花瓣細(xì)胞膜造成損傷所致。

圖5 不同濃度ASA和H2O2瓶插處理‘鳳丹’切花MDA含量變化

2.6 不同濃度ASA和H2O2對(duì)牡丹切花細(xì)胞核變化的影響

細(xì)胞核內(nèi)部的DNA和染色體與DAPI結(jié)合后會(huì)在紫外光下發(fā)出強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光，正常的植物細(xì)胞核形態(tài)表現(xiàn)為規(guī)整的圓形或者橢圓形(圖6-T7-1)。逆境脅迫下，為了滿足生理代謝所需的營養(yǎng)物質(zhì)，細(xì)胞核會(huì)放大甚至變形來加強(qiáng)細(xì)胞吸收物質(zhì)的能力[23]。因此細(xì)胞核的形態(tài)變化可以作為檢驗(yàn)植物細(xì)胞衰老的指標(biāo)之一。

由圖6可知，瓶插第2天，對(duì)照切花有少數(shù)細(xì)胞核出現(xiàn)變形，細(xì)胞核向兩極拉伸，逐漸變?yōu)榧忓N狀或新月狀(圖6-T7-2)，這是由核內(nèi)染色質(zhì)凝縮向核邊緣聚集所致。第2天、第3天，變形的細(xì)胞核數(shù)目逐漸增多。從第4天開始，顯微鏡視野下細(xì)胞核發(fā)出的熒光強(qiáng)度開始減弱、細(xì)胞核變小、大面積的細(xì)胞核發(fā)生固縮現(xiàn)象而緊貼在細(xì)胞邊緣，推測這是由染色質(zhì)凝縮聚集、液泡膜破裂擠壓細(xì)胞核所致。第5天，顯微鏡下的熒光信號(hào)進(jìn)一步減弱，細(xì)胞核凝縮至最小，染色質(zhì)分散在細(xì)胞核邊緣發(fā)出微弱熒光。

T1～T3處理(圖6)為‘鳳丹’切花瓶插于不同濃度ASA中的細(xì)胞核變化情況:瓶插初期，與對(duì)照相比其細(xì)胞核的變形數(shù)目差異并不明顯，僅有部分細(xì)胞核發(fā)生拉長彌散現(xiàn)象；瓶插后期，2.5、5 mg/L ASA處理下細(xì)胞核維持高正常率且持續(xù)發(fā)出熒光的時(shí)間較對(duì)照久，直到第5天才出現(xiàn)部分細(xì)胞核濃縮現(xiàn)象，且5 mg/L ASA處理細(xì)胞核第5天依然保持高亮狀態(tài)，但10 mg/L ASA處理細(xì)胞核第5天已經(jīng)完全彌散變形。

T4～T6處理(圖6)顯示:0.3、0.03 mg/L H2O2處理能較好維持‘鳳丹’切花細(xì)胞和熒光信號(hào)，瓶插第5天時(shí)大部分細(xì)胞核仍然保持規(guī)則明亮，以0.03 mg/L H2O2處理的效果最好。

圖6 不同瓶插處理‘鳳丹’切花花瓣細(xì)胞核(×10)變化情況

3 討論

花朵在脫離植物主體之后，光合作用和呼吸作用會(huì)繼續(xù)進(jìn)行，若無法從瓶插液中吸收水分、礦質(zhì)營養(yǎng)、激素等植物生長必需的營養(yǎng)物質(zhì)，切花花瓣和花梗就會(huì)發(fā)生一系列生理生化響應(yīng)，最終導(dǎo)致細(xì)胞衰老和死亡。乙烯和超氧陰離子含量的迅速增加，會(huì)加速花瓣的衰老。因此，調(diào)節(jié)植物生理平衡是延長切花花期的重要因素。牡丹切花衰敗期的典型特征是花瓣枯萎、鮮重下降、花徑變小。本研究結(jié)果表明，ASA處理對(duì)切花的盛花期時(shí)長有影響，2.5 mg/L ASA促進(jìn)切花綻放，使其花徑迅速達(dá)到最大，并在之后保持一段時(shí)間。這表明適宜濃度的ASA刺激切花的營養(yǎng)生長。H2O2處理下切花花徑增加緩慢，盛花期花朵直徑均低于對(duì)照，說明H2O2抑制切花的正常生理機(jī)制，減緩切花的代謝過程，從而達(dá)到長時(shí)間保鮮的效果。

正常植物細(xì)胞中活性氧的濃度并不高，但當(dāng)受到逆境脅迫時(shí)，植物會(huì)加快細(xì)胞內(nèi)的生理活動(dòng)及代謝過程，產(chǎn)生過量的ROS，這些過量的ROS又對(duì)植物本身造成氧化傷害，導(dǎo)致植物逐漸衰老[24，25]。因此，植物的衰老也是一種氧化過程[26]。為了控制活性氧的含量，植物進(jìn)化出一套與之對(duì)抗的抗氧化清除系統(tǒng)，它通過調(diào)節(jié)相關(guān)保護(hù)酶的活性和非酶類抗氧化劑含量，來維持生理機(jī)制的正常運(yùn)行。本研究通過對(duì)‘鳳丹’切花施加外源ASA、H2O2，測定其在瓶插期間的花徑大小、MDA含量，觀察其細(xì)胞核形態(tài)變化，以此來判斷‘鳳丹’衰老程度，再通過檢測衰老過程中花瓣保護(hù)酶活性的變化，來推測‘鳳丹’切花衰老過程中抗氧化清除機(jī)制的運(yùn)作規(guī)律。超氧化物歧化酶(SOD)能夠催化細(xì)胞內(nèi)歧化生成O2和H2O2，而過量的會(huì)造成生物體內(nèi)的組織損傷，因此SOD是植物細(xì)胞重要保護(hù)酶，在機(jī)體氧化與抗氧化平衡中起到至關(guān)重要的作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，施加一定濃度的外源ASA和H2O2后，SOD活性在瓶插第2天顯著降低，說明植物細(xì)胞內(nèi)超氧陰離子沒有過量增長而刺激SOD產(chǎn)生反應(yīng)，這可能是由于外源ASA提高ASA和GSH(谷胱甘肽)組成的ASA-GSH循環(huán)系統(tǒng)的代謝活動(dòng)，清除大部分瓶插初期植物細(xì)胞產(chǎn)生的活性氧，因此沒有觸發(fā)SOD活性升高；外源H2O2的刺激作為一種逆境信號(hào)分子，激活植物細(xì)胞內(nèi)其它抗氧化酶的活性，例如過氧化物酶和過氧化氫酶，短暫維持細(xì)胞正常生理代謝，延遲SOD活性的增強(qiáng)。這與楊慶賀[13]、蔣景龍[18]等的研究結(jié)果一致。過高濃度的ASA和H2O2促使SOD活性高于對(duì)照或者峰值提前，推測是由于高濃度的外源處理對(duì)切花產(chǎn)生脅迫作用，ROS水平急劇增加，繼而細(xì)胞產(chǎn)生過氧化應(yīng)激反應(yīng)，致使SOD活性迅速升高。

過氧化物酶(POD)是氧化還原酶的一種，在植物體中大量存在，且活性在植物生長發(fā)育過程中不斷發(fā)生變化。有研究表明，POD在生物體老化組織中活性較高，因此這種酶可以作為植物組織老化的標(biāo)志性酶。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，外源ASA處理前期，POD活性變化不顯著；切花瓶插后期2.5、5 mg/L ASA處理下，POD活性升高，且都較對(duì)照高。這說明瓶插后期切花花瓣細(xì)胞開始受到活性氧的脅迫，為了抵御這種脅迫，植物自身激發(fā)POD活性上升，來清除過多的自由基，而適宜濃度的ASA可以維持這種平衡。外源H2O2處理下，細(xì)胞內(nèi)POD活性整體出現(xiàn)類似的變化趨勢，但在0.3 mg/L H2O2處理下，POD活性在第2天出現(xiàn)急劇上升，之后下降并持續(xù)保持在較低水平。這是因?yàn)檫^高濃度的H2O2從一開始就對(duì)切花產(chǎn)生逆境脅迫，短暫觸發(fā)抗氧化酶活性，POD活性急劇升高。在植物抗氧化系統(tǒng)感知高濃度的H2O2影響超出植物自身的修復(fù)能力之后，POD隨即逐漸失去活性。

過氧化氫酶(CAT)能夠清除植物細(xì)胞內(nèi)的過氧化氫，把其分解成H2O和O2，使植物免受H2O2的傷害，通常與SOD協(xié)同作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，瓶插期間‘鳳丹’切花CAT活性出現(xiàn)明顯變化，瓶插前期出現(xiàn)較大增幅，而適宜濃度的外源ASA、H2O2處理下，相較于對(duì)照，這種增長趨勢被減緩或者推遲。這可能是外源ASA和H2O2協(xié)同影響‘鳳丹’切花細(xì)胞內(nèi)的ROS含量，從而導(dǎo)致花瓣細(xì)胞內(nèi)CAT活性趨于穩(wěn)定。這與蘇軍等[27]關(guān)于小蒼蘭的研究結(jié)果一致。但如何緩解氧自由基引起的傷害以及延長牡丹切花瓶插時(shí)間的最合適濃度，還有待進(jìn)一步研究。

正常狀態(tài)下完整細(xì)胞核數(shù)量與花朵的生長狀態(tài)呈正相關(guān)，細(xì)胞核完整性越高，花瓣細(xì)胞排列越整齊一致。正常細(xì)胞核邊緣清晰，呈現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)的圓形，當(dāng)受到外界環(huán)境脅迫時(shí)，細(xì)胞核產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)變形延伸，導(dǎo)致液泡膜破裂、細(xì)胞液將細(xì)胞核擠壓至邊緣，此時(shí)細(xì)胞核呈現(xiàn)向兩極拉伸狀、緊貼細(xì)胞壁[32]。本試驗(yàn)采用形態(tài)學(xué)觀察法，利用DAPI與細(xì)胞核中DNA特異性結(jié)合發(fā)出的藍(lán)色熒光來觀測細(xì)胞核形態(tài)，結(jié)果顯示:對(duì)照‘鳳丹’切花細(xì)胞核形態(tài)呈規(guī)律性變化，瓶插后期逐漸固縮變形直至核膜破裂、核質(zhì)流失；而適宜濃度的ASA、H2O2處理下‘鳳丹’切花瓶插期間細(xì)胞核發(fā)生變形的時(shí)間被延遲，細(xì)胞核更加持久地維持規(guī)則明亮狀態(tài)，其中濃度5 mg/L ASA和0.03 mg/L H2O2效果最為顯著，而ASA、H2O2濃度過大或過小都有可能使花瓣受到脅迫導(dǎo)致細(xì)胞核濃縮或者出現(xiàn)彌散情況。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)關(guān)于牡丹切花瓶插壽命的研究發(fā)現(xiàn):輔以外源化學(xué)物質(zhì)調(diào)控，切花花瓣在衰老過程中其生理指標(biāo)與細(xì)胞核形態(tài)指標(biāo)雖然都存在變化，但是發(fā)生的重要程度、發(fā)生時(shí)期與時(shí)間順序不完全吻合。外源ASA處理下CAT活性峰值出現(xiàn)最早，其次為SOD、POD。在其它作物研究中，保護(hù)酶活性的變化規(guī)律分別有不同的報(bào)道[33，34]，這可能是因?yàn)椴煌参锲鋺?yīng)對(duì)逆境脅迫的響應(yīng)機(jī)制和發(fā)揮作用的途徑不同，也可能是內(nèi)部調(diào)控基因的差異所造成。通過對(duì)切花生理學(xué)及細(xì)胞學(xué)的研究觀察，結(jié)合‘鳳丹’花徑的變化規(guī)律，得出初步結(jié)論:5 mg/L ASA和0.03 mg/L H2O2處理能有效維持切花細(xì)胞抗氧化酶清除系統(tǒng)的平衡，減輕活性氧對(duì)細(xì)胞膜的破壞作用；外源ASA、H2O2對(duì)‘鳳丹’切花具有保鮮作用的細(xì)胞學(xué)機(jī)制在于緩解花瓣細(xì)胞核彌散程度，維持細(xì)胞核形態(tài)。本研究結(jié)果可為進(jìn)一步揭示外源ASA、H2O2對(duì)牡丹切花保鮮時(shí)間的延長提供試驗(yàn)依據(jù)，為未來研究牡丹切花衰老機(jī)制提供理論參考。

另外，關(guān)于外源ASA、H2O2對(duì)牡丹切花生理生化活性及細(xì)胞學(xué)特性的具體影響機(jī)制還待進(jìn)一步研究；牡丹切花細(xì)胞程序性死亡相關(guān)各類事件的重要程度、發(fā)生的順序和互相作用機(jī)制也許能為牡丹切花保鮮研究提供新的思路；細(xì)胞核變形彌散情況或?qū)⒊蔀橐环N新的判斷植物衰老的可行性指標(biāo)。

作者貢獻(xiàn):邱永杰是本研究的試驗(yàn)設(shè)計(jì)者和試驗(yàn)執(zhí)行人，完成論文初稿寫作；何松林是項(xiàng)目的構(gòu)思者及負(fù)責(zé)人；胡緩參與協(xié)助了實(shí)驗(yàn)操作過程；張翔宇、于嘉倫和史來琨完成數(shù)據(jù)整理與分析；賈文慶指導(dǎo)試驗(yàn)設(shè)計(jì)、數(shù)據(jù)分析、論文寫作與修改。