楊燕妮，勾偉穎，段辛威，李西海，陳友琴，馬德尊，葉錦霞，付長(zhǎng)龍，鄭春松*

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350122；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究院，福建 福州 350122；3.福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，福建 福州 350122；4.美國(guó)凱斯西儲(chǔ)大學(xué)醫(yī)學(xué)院，美國(guó) 俄亥俄州 44106；5.福建省中西醫(yī)結(jié)合老年性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350122）

骨肉瘤（osteosarcoma，OS）是一種高發(fā)于青少年的常見(jiàn)原發(fā)性惡性骨腫瘤，具有發(fā)病率高、惡性度大、轉(zhuǎn)移較早的特點(diǎn)［1］。目前西醫(yī)治療多采用手術(shù)治療，輔以化療等，但即使采用較強(qiáng)殺傷力的術(shù)前化療方案，仍有20%～30%的患者療效欠佳，表現(xiàn)為復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和最終死亡。而且，在治療過(guò)程中發(fā)現(xiàn)化療藥物對(duì)血液系統(tǒng)、胃腸道、肝臟、心臟、神經(jīng)系統(tǒng)及泌尿系統(tǒng)等方面具有毒副作用［2］。因此，尋找安全、高效的藥物來(lái)治療OS 是急需解決的問(wèn)題。

近年來(lái)，中醫(yī)藥在治療OS 上發(fā)揮越來(lái)越重要的作用，有學(xué)者查閱了1979 年1 月—2014 年12 月中醫(yī)診療OS 的文獻(xiàn)，總結(jié)其用藥規(guī)律，發(fā)現(xiàn)沒(méi)藥是OS 臨床中使用頻次高的活血化瘀中藥［3］?，F(xiàn)代藥理研究表明，沒(méi)藥中天竺葵素（pelargonidin）、鞣花酸（ellagic acid）和槲皮素（quercetin）等化合物具有抑制OS 細(xì)胞增殖的作用，提示沒(méi)藥及其活性成分在治療OS 方面有一定的開(kāi)發(fā)價(jià)值［4-6］。但是，沒(méi)藥治療OS 的具體作用機(jī)制未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。因此，本研究基于化學(xué)空間、相似度分析、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接的計(jì)算機(jī)模擬策略［7-8］，探討沒(méi)藥治療OS 多成分、多靶點(diǎn)、多途徑的整體調(diào)節(jié)作用機(jī)制，并將篩選出來(lái)的核心靶基因與對(duì)應(yīng)的沒(méi)藥活性成分進(jìn)行對(duì)接，以初步驗(yàn)證沒(méi)藥治療OS 的主要成分和靶點(diǎn)，進(jìn)而為其治療OS 的后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供方向，有助于沒(méi)藥的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和應(yīng)用。

1 方 法

1.1 沒(méi)藥潛在及已報(bào)道活性成分?jǐn)?shù)據(jù)集建立 利用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)及分析平臺(tái)（TCMSP，https：//tcmsp-e.com/）檢索沒(méi)藥的化學(xué)成分［9］，以口服生物利用度（oral bioavailability，OB）≥30%、類藥性（drug likeness，DL）≥0.18 為閾值［7］，篩選出其潛在活性成分。從中國(guó)知網(wǎng)數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索具有抗OS作用的化合物，在Discovery Studio 2.0（簡(jiǎn)稱DS 2.0）模擬平臺(tái)［10］，轉(zhuǎn)化成三維分子結(jié)構(gòu)，用MMFF 力場(chǎng)優(yōu)化，分別建立沒(méi)藥潛在活性成分及已報(bào)道活性化合物的數(shù)據(jù)集sd 文件。

1.2 沒(méi)藥潛在及已報(bào)道活性成分?jǐn)?shù)據(jù)集化學(xué)空間構(gòu)建與分析 在DS QSAR 模塊下，選擇分子量、氫鍵受體數(shù)目、氫鍵給體數(shù)目、脂水分配系數(shù)和可旋轉(zhuǎn)鍵數(shù)目等84 個(gè)分子描述符參數(shù)，分別構(gòu)建沒(méi)藥和已報(bào)道活性成分?jǐn)?shù)據(jù)集化合物的多維化學(xué)空間［11-12］；利用主成分分析技術(shù)［13］，降維到三維化學(xué)空間上。若兩數(shù)據(jù)集中的化合物在化學(xué)空間上距離越近，代表具有相似作用的可能性越大［14］，由此揭示沒(méi)藥治療OS 的可能性。

1.3 沒(méi)藥潛在及已報(bào)道活性成分?jǐn)?shù)據(jù)集的相似分子搜索 在DS Library Analysis 模塊下，選擇“Find Similar Molecular by Fingerprints”，以已報(bào)道活性成分?jǐn)?shù)據(jù)集為Reference Ligands，以沒(méi)藥潛在活性成分?jǐn)?shù)據(jù)集為Input Ligands，其余參數(shù)為缺省值。運(yùn)行此Protocol，獲得沒(méi)藥中與已報(bào)道活性成分結(jié)構(gòu)特征相似的分子，以進(jìn)一步確定沒(méi)藥治療OS 的作用。

1.4 沒(méi)藥活性成分相關(guān)靶點(diǎn)與OS 疾病靶點(diǎn)收集 通過(guò)TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)獲取沒(méi)藥活性成分對(duì)應(yīng)的潛在靶點(diǎn)，利用DAVID 數(shù)據(jù)庫(kù)的基因名稱轉(zhuǎn)換工具，將蛋白靶點(diǎn)轉(zhuǎn)換為基因名，得到?jīng)]藥活性成分相關(guān)靶點(diǎn)基因。在GEO DataSets（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/）數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選出同時(shí)含有OS 與正常骨組織樣本的基因芯片為GSE36004、GSE36001、GSE33383、GSE33382 和GSE14359，利用Log2 算法對(duì)基因表達(dá)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，篩選出每個(gè)芯片中差異表達(dá)基因，同時(shí)在OMIM（https：//www.omim.org/）、PharmGkb（https：//www.pharmgkb.org/）、DrugBank（https：//go.drugbank.com/）和GeneCards（https：//www.genecards.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取OS 疾病相關(guān)靶點(diǎn)，將上述數(shù)據(jù)庫(kù)中的差異基因取并集，刪除重復(fù)基因［15］，作為OS 疾病基因集。

1.5 沒(méi)藥活性成分-OS 靶點(diǎn)作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將沒(méi)藥活性成分的潛在靶基因與OS 疾病基因取交集，獲得共同靶點(diǎn)，將共同靶點(diǎn)及其對(duì)應(yīng)的沒(méi)藥活性成分導(dǎo)入Cytoscape 3.8.1 軟件［16］，構(gòu)建沒(méi)藥活性成分-OS 靶點(diǎn)作用的網(wǎng)絡(luò)。

1.6 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及核心靶點(diǎn)篩選 將“1.5”項(xiàng)下得到的交集基因?qū)隨TRING 11.5 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//cn.string-db.org/cgi/input）中，物種設(shè)置為“Homo sapiens”，選打分值高于0.9 的蛋白并除去網(wǎng)絡(luò)中與其他靶點(diǎn)斷開(kāi)連接的節(jié)點(diǎn)，建立蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)，在Cytoscape 3.8.1 軟件中對(duì)PPI 網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)鋵W(xué)分析［17］，獲得各節(jié)點(diǎn)介數(shù)中心性（betweenness centrality，BC）、接近中心性（closenness centrality，CC）、度中心（degree centrality，DC）、特征向量中心（eigenvector centrality，EC）、局部邊聯(lián)通性（local average centrality，LAC）和網(wǎng)絡(luò)中心性（network centrality，NC）數(shù)值，以各拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)值均大于對(duì)應(yīng)中位數(shù)值作為篩選條件［18］，得到核心靶基因。

1.7 GO 和KEGG 富集分析 利用基于R 語(yǔ)言、面向基因組信息分析的Bioconductor 軟件合集［19］，對(duì)交集基因進(jìn)行基因本體論（gene ontology，GO）和京都基因和基因組百科全書(shū)（Kyoto encyclopedia of genes genomes，KEGG）富集分析，設(shè)定閾值P＜0.05，探索沒(méi)藥中各化合物作用潛在靶點(diǎn)的生物學(xué)功能及可能參與的代謝通路。

1.8 核心靶點(diǎn)的分子對(duì)接驗(yàn)證 選擇“1.6”項(xiàng)下核心靶基因及其對(duì)應(yīng)的活性成分進(jìn)行分子對(duì)接［20］，即在PubChem 數(shù)據(jù)庫(kù)中查找沒(méi)藥活性成分的2D 化學(xué)結(jié)構(gòu)，用ChemOffice 軟件轉(zhuǎn)化為3D 結(jié)構(gòu)并進(jìn)行能量最小化優(yōu)化，保存為MOL2 格式。使用PBD 網(wǎng)站（https：//www.rcsb.org/）下載靶蛋白的3D 結(jié)構(gòu)，保存為pbd 格式，導(dǎo)入PyMol 2.4.1 軟件中，刪除水分子以及原配體，然后導(dǎo)入AutoDockTools 1.5.6 軟件，對(duì)靶蛋白與藥物小分子進(jìn)行處理并轉(zhuǎn)換為pdbqt 格式，并設(shè)置活性口袋（Grid Box）大小，運(yùn)用Vina 進(jìn)行分子對(duì)接，獲取沒(méi)藥活性成分與靶蛋白的對(duì)接結(jié)果，用PyMol 軟件打開(kāi)查看對(duì)接圖片結(jié)果，繪制結(jié)合模式圖。

2 結(jié) 果

2.1 沒(méi)藥潛在活性成分篩選 根據(jù)篩選條件OB≥30%和DL≥0.18，從TCMSP 平臺(tái)中篩選出沒(méi)藥有45 個(gè)潛在活性成分，其中有槲皮素、豆甾醇、鞣花酸等，見(jiàn)表1。

表 1 沒(méi)藥活性成分及其參數(shù)值

2.2 沒(méi)藥潛在及已報(bào)道活性成分?jǐn)?shù)據(jù)集的化學(xué)空間和相似度分析 沒(méi)藥潛在活性成分?jǐn)?shù)據(jù)集在化學(xué)空間上具有較好的分散性，與已報(bào)道活性成分?jǐn)?shù)據(jù)集有相同或相近的化學(xué)空間，見(jiàn)圖1。兩者在分子量、氫鍵受體、氫鍵給體、脂水分配系數(shù)、環(huán)數(shù)目和可旋轉(zhuǎn)鍵數(shù)方面，具有很大部分的重疊，見(jiàn)表2。

2.3 沒(méi)藥潛在及已報(bào)道活性成分?jǐn)?shù)據(jù)集的相似分子搜索 以已報(bào)道活性成分?jǐn)?shù)據(jù)集為參照配體，以Tanimoto相似系數(shù)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，從沒(méi)藥潛在活性成分?jǐn)?shù)據(jù)集篩選出相似的分子MOL000098、MOL001001、MOL001126、MOL000358和MOL000449，相似度值分別為1、0.733、0.544、0.472 和0.466。

2.4 沒(méi)藥活性成分-靶點(diǎn)作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中收集到?jīng)]藥潛在活性成分對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)基因共393 個(gè)；在OMIM、PharmGkb、DrugBank、GEO 和GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)中共得到5 114 個(gè)OS 疾病差異表達(dá)基因。取交集，得到共同靶點(diǎn)129個(gè)，在TCMSP中對(duì)應(yīng)的沒(méi)藥潛在活性成分32 個(gè)，在Cyotoscape 3.8.1軟件中構(gòu)建沒(méi)藥活性成分-靶點(diǎn)作用網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果顯示，網(wǎng)絡(luò)中有161 個(gè)節(jié)點(diǎn)，283 條邊；且有3 個(gè)化合物只作用1 個(gè)靶點(diǎn)，有8 個(gè)作用2 個(gè)靶點(diǎn)，有21 個(gè)作用3 個(gè)及以上靶點(diǎn)，見(jiàn)圖2。

圖1 沒(méi)藥潛在及已報(bào)道活性成分?jǐn)?shù)據(jù)集的化學(xué)空間圖

表2 沒(méi)藥潛在及已報(bào)道活性成分?jǐn)?shù)據(jù)集的描述符值

圖2 沒(méi)藥活性成分-交集靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

2.5 沒(méi)藥治療OS 的PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及其核心靶點(diǎn)篩選 把129 個(gè)交集基因?qū)隨TRING 數(shù)據(jù)庫(kù)中，得到?jīng)]藥治療OS 的PPI 網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果顯示，網(wǎng)絡(luò)中有116 個(gè)節(jié)點(diǎn)，449 條邊，見(jiàn)圖3。在Cyotoscape 3.8.1軟件中對(duì)119 個(gè)基因進(jìn)行2 次網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)篩選，得到?jīng)]藥治療OS 的8 個(gè)潛在核心基因，分別為Akt 絲氨酸/蘇氨酸激酶（Akt serine/threonine kinase 1，Akt1）、絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase 1，MAPK1）、FOS 原癌基因（fos proto-oncogene，F(xiàn)OS）、熱 休 克蛋 白90 α 家 族A 類 成員1（heat shock protein 90 alpha family class A member 1，HSP90AA1）、JUN 原 癌 基 因（Jun proto-oncogene，JUN）、雌激素受體相關(guān)受體1（estrogen receptor 1，ESR1）、RELA 原癌基因（RELA proto-oncogene，RELA）和MYC 原癌基因（MYC proto-oncogene，MYC），結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖3 沒(méi)藥治療骨肉瘤的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖

2.6 GO 和KEGG 富集分析

2.6.1 GO 功能富集分析 對(duì)129 個(gè)交集基因進(jìn)行GO 富集分析，共有2 174 條結(jié)果，其中BP 共有1 987 條結(jié)果，主要集中在對(duì)藥物的應(yīng)答（response to drug）、輻射的應(yīng)答（response to radiation）、化學(xué)應(yīng)激（cellular response to chemical stress）、脂多糖的應(yīng)答（response to lipopolysaccharide）、細(xì)菌來(lái)源分子的應(yīng)答（response to molecule of bacterial origin）、金屬離子的應(yīng)答（response to metalion）、氧水平的應(yīng)答（response to oxygen levels）、類固醇激素的應(yīng)答（response to steroid hormone）、活性氧代謝過(guò)程（reactive oxygen species metabolic process）等；CC 共 有40 條結(jié)果，主要集中在膜筏（membrane raft）、膜微區(qū)（membrane microdomain）、細(xì)胞器外膜（organelle outer membrane）、外膜（outer membrane）、線粒體外膜（mitochondrial outer membrane）、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶復(fù)合物（serine/threonine protein kinase complex）、蛋白激酶復(fù)合物（protein kinase complex）、髓鞘（myelin sheath）等；MF 富集共有147 條結(jié)果，主要有DNA-轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合（DNA-binding transcription factor binding）、RNA 聚合酶Ⅱ-特異性DNA-轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合（RNA polymerase Ⅱ-specific dna-binding transcription factor binding）、泛素樣蛋白連接酶結(jié)合（ubiquitin-like protein ligase binding）、泛素蛋白連接酶結(jié)合（ubiquitin protein ligase binding）、核受體活性配體激活（ligand-actived nuclear receptor activity）、轉(zhuǎn)錄因子活性（transcription factor activity）、絲氨酸水解酶活性（serine hydrolase activity）、類固醇激素受體活性（steroid hormone receptor activity）、轉(zhuǎn)錄共調(diào)節(jié)結(jié)合（transcription coregulator binding）、轉(zhuǎn)錄共激活劑結(jié)合（transcription coactivator binding）等。取各類富集分析前10 個(gè)結(jié)果作氣泡圖，見(jiàn)圖5。

圖4 沒(méi)藥治療骨肉瘤的核心靶基因網(wǎng)絡(luò)圖

圖5 沒(méi)藥GO 功能富集分析圖

2.6.2 KEGG 富集分析 KEGG 富集分析有172 條信號(hào)通路，主要有脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化（lipid and atherosclerosis）、卡波西肉瘤相關(guān)化學(xué)致癌-受體活化（Kaposi sarcoma-associated chemical carcinogenesis-receptor activation）、皰疹病毒感染（herpesvirus infection）、人類巨細(xì)胞病毒感染（human cytomegalovirus infection）、乙型肝炎（hepatitis B）、前列腺癌（prostate cancer）、流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化（fluid shear stress and atherosclerosis）、丙 型 肝 炎（hepatitis C）、愛(ài)潑斯坦-巴爾病毒感染（Epstein-Barr virus infection）、糖尿病并發(fā)癥中AGE-RAGE信號(hào)通路作用（AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications）、人T 細(xì) 胞 白 血 病 病 毒1 感 染（human T-cell leukemia virus 1 infection）、腫瘤壞死因子信號(hào)通路（TNF signaling pathway）、癌癥中蛋白聚糖（proteoglycans in cancer）、IL-17 信號(hào)通路（IL-17 signaling pathway）、內(nèi)分泌抵抗（endocrine resistance）、細(xì)胞衰老（cellular senescence）、雌激素信號(hào)通路（estrogen signaling pathway）細(xì)胞凋亡（apoptosis）、C-型凝集素受體信號(hào)通路（C-type lectin receptor signaling pathway）、p53 信 號(hào)（p53 signaling pathway）通路、慢性骨髓性白血?。╟hronic myeloid leukemia）以及肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma）、小細(xì)胞肺癌（small cell lung cancer）、乳腺癌（breast cancer）等癌癥相關(guān)通路等，前30 條富集結(jié)果見(jiàn)圖6。

圖6 沒(méi)藥KEGG 富集分析結(jié)果圖

2.7 分子對(duì)接 對(duì)8 個(gè)沒(méi)藥治療OS 的核心靶點(diǎn)及其對(duì)應(yīng)的活性成分進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)果顯示沒(méi)藥的化學(xué)成分與上述8 個(gè)核心靶點(diǎn)的結(jié)合能均＜-4 kcal/mol，表現(xiàn)出良好的結(jié)合能力，見(jiàn)表3。

3 討 論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，血瘀日久致毒，瘀毒相互膠著，合而為害，蘊(yùn)而生變，終成肉瘤，提示瘀血內(nèi)阻為OS 的重要病機(jī)之一，治療上可從活血化瘀論治［3］。而且，現(xiàn)代藥理學(xué)研究也表明活血化瘀法可通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體的HIF-1α、CD4+T 細(xì)胞發(fā)揮對(duì)荷骨肉瘤裸鼠的治療作用［21］。因此，本文選擇臨床上治療OS常用的活血化瘀藥沒(méi)藥為研究對(duì)象，進(jìn)一步探究其治療OS 的機(jī)制。

本文先通過(guò)化學(xué)空間和相似度搜索技術(shù)，預(yù)測(cè)沒(méi)藥治療OS 的可能性，根據(jù)化學(xué)空間理論，相似化學(xué)空間的化合物往往具有相似的藥理活性［22］，提示沒(méi)藥與已報(bào)道活性成分?jǐn)?shù)據(jù)集有相同或相近的化學(xué)空間，即沒(méi)藥具有潛在抗OS 的作用。另外，相似度搜索發(fā)現(xiàn)沒(méi)藥中quercetin（MOL000098）、quercetin-3-O-β-D-glucuronide（MOL001001）等與已報(bào)道活性成分?jǐn)?shù)據(jù)集具有相似的結(jié)構(gòu)特征，根據(jù)“結(jié)構(gòu)類似的化合物具有類似的生物活性”［23］，揭示沒(méi)藥中存在抗OS 的活性化合物，為進(jìn)一步研究沒(méi)藥治療OS 的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)機(jī)制提供新依據(jù)。

表3 沒(méi)藥活性成分與核心靶點(diǎn)分子對(duì)接結(jié)果

從沒(méi)藥治療OS的活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)得到32個(gè)活性成分，包括槲皮素（quercetin）、鞣花酸（ellagic acid）、β-谷甾醇（β-sitosterol）、天竺葵素（pelargonidin）等。文獻(xiàn)報(bào)道，槲皮素能夠影響骨肉瘤細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲和化療耐藥的能力，起到抗OS 的作用［6］；鞣花酸能抑制骨肉瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移和侵襲，并通過(guò)抑制c-Jun 的轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)G1 細(xì)胞周期阻滯［5］；天竺葵素能通過(guò)誘導(dǎo)自噬、線粒體膜電位喪失、G2/M 細(xì)胞周期和下調(diào)PI3K/Akt 信號(hào)通路誘導(dǎo)人骨肉瘤細(xì)胞的抗腫瘤作用［4］。因此，沒(méi)藥可通過(guò)槲皮素、鞣花酸、天竺葵素等多成分治療OS。

從沒(méi)藥治療OS 的PPI 網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治龅玫胶诵幕駻kt1、MAPK1、FOS、HSP90AA1、JUN、ESR1、RELA、MYC。研究發(fā)現(xiàn)，上調(diào)Akt1的表達(dá)可促進(jìn)OS的肺轉(zhuǎn)移，下調(diào)AKT1 的表達(dá)可明顯抑制MAT1 介導(dǎo)的骨肉瘤細(xì)胞遷移和侵襲的促進(jìn)作用，抑制裸鼠移植瘤生長(zhǎng)，減少轉(zhuǎn)移性肺腫瘤的數(shù)量［24］；HSP90AA1作為一種重要的自噬調(diào)節(jié)劑，抑制HSP90AA1 可減弱骨肉瘤細(xì)胞對(duì)化療的自噬保護(hù)作用［25］；MYC 高表達(dá)與OS轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后顯著相關(guān)，降低MYC蛋白的表達(dá)，導(dǎo)致骨肉瘤細(xì)胞增殖、遷移等能力下降［26］。因此，沒(méi)藥可通過(guò)多個(gè)靶點(diǎn)影響骨肉瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲等。

通過(guò)KEGG 富集分析發(fā)現(xiàn)，沒(méi)藥活性成分治療OS 的基因主要集中在TNF、IL-17、p53 和凋亡等信號(hào)通路。研究表明，TNF 通路參與調(diào)節(jié)細(xì)胞炎癥反應(yīng)、細(xì)胞生存、凋亡等重要生物過(guò)程，TNF 可以和其受體TNFR 結(jié)合，作用于下游信號(hào)NF-κB，TNF/NF-κB 信號(hào)通路被激活后，可以增加CRL4BDACF11的活性，提高P21Cip蛋白的表達(dá)水平，從而阻滯骨肉瘤細(xì)胞生長(zhǎng)周期，發(fā)揮抑制OS 的作用［27-28］；IL-17 信號(hào)通路與OS 呈負(fù)相關(guān)，與轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)［29］；激活p53 信號(hào)通路可抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞凋亡［30-31］。因此，沒(méi)藥可通過(guò)多通路影響骨肉瘤細(xì)胞的增殖、凋亡等方面，發(fā)揮抗OS 的作用。

綜上所述，本研究通過(guò)計(jì)算機(jī)模擬方法，初步預(yù)測(cè)沒(méi)藥治療OS 的作用及其機(jī)制，從結(jié)果可知，沒(méi)藥可通過(guò)槲皮素、鞣花酸和天竺葵素等成分，作用于Akt1、JUN 和MYC 等靶點(diǎn)，在TNF 信號(hào)通路、IL-17 信號(hào)通路、p53 信號(hào)通路等參與下，抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲等，發(fā)揮治療OS 的作用，為后期實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究提供方向。