嚴(yán)維強(qiáng)，李雪平，帥 楊，劉天艷，付甫海，王佳平，楊定英，鄭 植

（1. 遵義市婦幼保健院a.檢驗(yàn)科 b. 產(chǎn)科，貴州 遵義 563000 ；2. 正安縣婦幼保健院檢驗(yàn)科，貴州 遵義563000 ；3. 湄潭縣婦幼保健院檢驗(yàn)科，貴州 遵義 563000）

無乳鏈球菌也叫B 群鏈球菌（GBS），是一種兼性厭氧的β 溶血的革蘭陽性球菌。GBS 是健康人下消化道和泌尿生殖道內(nèi)的正常菌群，同時(shí)也是引起孕產(chǎn)婦泌尿生殖道感染及新生兒感染的重要條件致病菌。圍產(chǎn)期女性生殖道內(nèi)微生態(tài)系統(tǒng)的平衡被打破后，GBS 可經(jīng)產(chǎn)道上行而感染子宮及胎膜，導(dǎo)致孕婦早產(chǎn)、流產(chǎn)及新生兒腦膜炎、肺炎、敗血癥等，嚴(yán)重時(shí)甚至可導(dǎo)致新生兒死亡。母嬰傳播是新生兒GBS 感染的重要途徑，因此加強(qiáng)對孕產(chǎn)婦進(jìn)行泌尿生殖道GBS 攜帶情況及耐藥性監(jiān)測，對保障孕產(chǎn)婦和新生兒的健康具有重要意義[1]。本研究分析了在遵義地區(qū)三家醫(yī)院就診的961 例孕晚期女性生殖道GBS 的攜帶情況，并對培養(yǎng)分離出的菌株進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)（藥敏試驗(yàn)），以期為臨床預(yù)防和治療孕期GBS 感染提供合理的用藥依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 樣本來源 收集2021 年1 月至2022 年4 月就診于遵義市婦幼保健院、正安縣婦幼保健院和湄潭縣婦幼保健院產(chǎn)科門診的孕35 ～37 周孕婦的陰道及肛周分泌物961 份。孕婦年齡為16 ～42 歲，平均（27.30±4.50）歲，平均孕周（36.00±0.83）周。

1.1.2 儀器及試劑 VITEK 2 全自動(dòng)細(xì)菌鑒定系統(tǒng)及配套的革蘭陽性鑒定卡（購自法國生物梅里埃公司），B 群鏈球菌運(yùn)送培養(yǎng)基（Ⅶ型，購自重慶龐通醫(yī)療器械有限公司），吡咯烷酮（PYR）釋放劑和過氧化氫試劑（購自杭州濱和微生物試劑有限公司），藥敏紙片（購自英國Oxoid 公司）。

1.1.3 質(zhì)控菌株 CAMP 試驗(yàn)質(zhì)控菌株為金黃色葡萄球菌ATCC 25923，藥敏試驗(yàn)質(zhì)控菌株為肺炎鏈球菌ATCC 49619。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 在孕婦知情同意后，由產(chǎn)科醫(yī)生負(fù)責(zé)采集標(biāo)本。按照美國疾病控制與預(yù)防中心（CDC）《圍產(chǎn)期B 群鏈球菌感染及預(yù)防指南》（2010 修訂版）推薦的采集方法對所有孕婦進(jìn)行標(biāo)本采集。長拭子用于采集陰道分泌物，短拭子用于采集肛周分泌物，采集完成后將拭子及時(shí)放入轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基中，并立即送檢驗(yàn)科培養(yǎng)。

1.2.2 細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定 將送檢的含有陰道及肛周分泌物拭子的轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基直接放入培養(yǎng)箱（37℃、5%CO2）中培養(yǎng)。若72h 內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基變色，則提示GBS 生長陽性，記錄變色部位，并接種于哥倫比亞血平板上，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18 ～24h。觀察菌落特點(diǎn)，挑取可疑菌落進(jìn)行分離培養(yǎng)純化，于第2 天進(jìn)行鑒定，觸酶及PYR 試驗(yàn)應(yīng)均為陰性，CAMP 試驗(yàn)應(yīng)為陽性，同時(shí)用VITEK 2 全自動(dòng)細(xì)菌鑒定系統(tǒng)做最終鑒定。對于72 h 后培養(yǎng)基未變色的樣本，同樣將拭子轉(zhuǎn)至哥倫比亞血平板上，培養(yǎng)18 ～24h，觀察菌落形態(tài)，若有可疑菌落，則采用上述方法進(jìn)行鑒定，若無可疑菌落，則報(bào)告未檢出GBS。

1.2.3 藥敏試驗(yàn) 采用紙片擴(kuò)散法（K-B 法）對檢出的GBS 進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。藥敏試驗(yàn)操作方法和結(jié)果判定參照美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）2022 年制定的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。對紅霉素耐藥而對克林霉素敏感或中介的菌株補(bǔ)需行D- 試驗(yàn)（即誘導(dǎo)克林霉素耐藥試驗(yàn)），操作方法及結(jié)果判讀同樣參考上述標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析 采用WHONET 5.6 軟件分析藥敏試驗(yàn)結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 三所醫(yī)院孕婦陰道及肛周分泌物中GBS 的檢出情況

三所醫(yī)院961 例孕晚期孕婦中共檢出58 例GBS攜帶者（共有GBS58 株），檢出率為6.0%。三所醫(yī)院收集標(biāo)本數(shù)及GBS 檢出率見表1。從表1 中可以看出，不同醫(yī)院的GBS 檢出率不同。

表1 三所醫(yī)院孕婦陰道及肛周分泌物中GBS 的檢出情況

2.2 不同年齡段孕婦GBS 的攜帶情況

不同年齡段孕婦GBS 的攜帶率呈現(xiàn)隨年齡增長而上升的趨勢，其中21 ～29 歲孕婦數(shù)量最多，30 歲以上孕婦GBS 的攜帶率最高。詳見表2。

表2 不同年齡段孕婦GBS 的攜帶情況

2.3 58 株GBS 對抗菌藥物的敏感及耐藥情況

藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，58 株GBS 對青霉素、氨芐西林、頭孢曲松、利奈唑胺及萬古霉素100% 敏感，對四環(huán)素的耐藥率最高，達(dá)77.6%，其次是克林霉素，耐藥率為67.2% ；GBS 對紅霉素和左氧氟沙星的耐藥率分別為56.9%和58.6%。詳見表3。在58 株GBS 中，共檢出紅霉素耐藥而克林霉素敏感或中介的GBS33株，其中D-試驗(yàn)陽性菌株13 株，陽性率為39.4%。

表3 58 株GBS 對抗菌藥物的敏感及耐藥情況[株（%）]

3 討論

GBS 是導(dǎo)致孕婦圍產(chǎn)期感染的重要病原體。GBS可通過產(chǎn)道上行感染或母嬰垂直傳播導(dǎo)致胎兒早產(chǎn)、死產(chǎn)以及新生兒肺炎、敗血癥等。孕婦感染GBS 后，其妊娠不良結(jié)局和新生兒不良事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)會(huì)有所增加。據(jù)報(bào)道，因GBS 感染所導(dǎo)致的菌血癥，在美國所有菌血癥產(chǎn)婦中約占20%。北京兒童醫(yī)院的學(xué)者對200 例死亡新生兒的肺組織石蠟標(biāo)本進(jìn)行GBS 檢測，發(fā)現(xiàn)其檢出率為65%。近年來，GBS 引起的孕產(chǎn)婦及新生兒感染逐步引起圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)界的重視[2]。美國CDC 建議妊娠35 ～37 周的孕婦進(jìn)行GBS 常規(guī)篩查，我國發(fā)行的《孕前和孕期保健指南（2018）》也推薦妊娠35 ～37 周的孕婦進(jìn)行GBS 常規(guī)篩查[3]。

本研究對就診于遵義地區(qū)三所醫(yī)院產(chǎn)科門診的孕35 ～37 周孕婦的陰道和肛周分泌物開展GBS 篩查，發(fā)現(xiàn)檢出率為6.0%，這與福州地區(qū)孕產(chǎn)婦GBS的檢出率約5.6%[1]相近，而與研究報(bào)道的我國北京地區(qū)孕產(chǎn)婦GBS 感染率約為14.6% 及蘇州地區(qū)孕產(chǎn)婦GBS 感染率約為4.1% 差異較大。本研究中不同醫(yī)院（5.3% ～11.6%）以及不同年齡段孕婦（4.3% ～6.5%）GBS 的檢出率存在一定差異，提示GBS 的檢出率可能與地域及孕婦年齡具有一定的相關(guān)性[4]。本研究中的GBS 帶菌率有隨著孕婦年齡的增長而增加的趨勢，因此有必要加強(qiáng)對圍產(chǎn)期孕婦尤其是高齡孕婦開展GBS 常規(guī)篩查和有效治療，以降低其不良妊娠的發(fā)生率及新生兒感染率。

對感染GBS 的圍產(chǎn)期孕婦進(jìn)行藥物干預(yù)是預(yù)防孕婦、胎兒及新生兒出現(xiàn)不良結(jié)局的重要手段。對于GBS 感染者，青霉素常作為治療的首選藥物，氨芐西林通常作為備選藥物，其中青霉素過敏者還可改用克林霉素或紅霉素。本研究結(jié)果顯示，所檢出的GBS 對青霉素、氨芐西林、頭孢曲松、利奈唑胺和萬古霉素均未見耐藥，表明青霉素仍可作為遵義地區(qū)治療和預(yù)防GBS 感染的首選藥物。盡管CLSI 推薦對高危青霉素過敏者使用克林霉素和紅霉素，但是，近年來對克林霉素和紅霉素耐藥的GBS 呈增多趨勢。本研究中GBS 對克林霉素和紅霉素的耐藥率均超過50%，D-試驗(yàn)陽性率也高達(dá)39.4%。提示采用紅霉素和克林霉素治療GBS 感染時(shí)需要參考藥敏試驗(yàn)結(jié)果[2]。本研究中GBS 對四環(huán)素的耐藥率最高，達(dá)77.6%，對左氧氟沙星的耐藥率為58.6%。同時(shí)，四環(huán)素和左氧氟沙星會(huì)對新生兒的骨骼發(fā)育產(chǎn)生不良影響，因此針對孕婦GBS 感染不推薦使用四環(huán)素和喹諾酮類藥物治療[5]。

綜上所述，遵義地區(qū)孕晚期女性GBS 的攜帶率較高，本地區(qū)應(yīng)對圍產(chǎn)期女性開展GBS 常規(guī)篩查，對該菌攜帶者進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，并有針對性地選擇敏感抗生素進(jìn)行治療（青霉素可作為本地區(qū)治療孕晚期女性GBS 感染的首選藥物），從而改善母嬰結(jié)局。