王 琳，馬 黎，張 博，鄧 俊，張 浩，歐陽(yáng)曉芳，嚴(yán)達(dá)偉*，董新星*

(1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，昆明 650201； 2.云南農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，昆明 650212；3.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京 100193； 4.云南省畜牧總站，昆明 650224)

脂肪組織是機(jī)體重要的能量?jī)?chǔ)存場(chǎng)所和內(nèi)分泌器官，對(duì)維持機(jī)體代謝平衡及能量穩(wěn)態(tài)起重要作用[1-2]。在畜禽生產(chǎn)中，機(jī)體每沉積1 g脂肪所需要的能量是肌肉的4倍，脂肪大量沉積會(huì)降低飼料轉(zhuǎn)化效率[3]。另外，肌內(nèi)脂肪含量直接影響肉的嫩度、風(fēng)味和口感，因此，解析畜禽脂肪沉積的調(diào)控機(jī)制，對(duì)畜禽生產(chǎn)中脂肪的靶向調(diào)控以促進(jìn)畜禽養(yǎng)殖的高質(zhì)量發(fā)展具有重要意義。

脂肪在機(jī)體的不同部位以不同的速度在不同時(shí)期沉積，導(dǎo)致全身脂肪分布隨年齡增長(zhǎng)有明顯的變化[4]，一系列基因、轉(zhuǎn)錄因子及信號(hào)通路介導(dǎo)脂肪沉積[5]，涉及多基因表達(dá)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、網(wǎng)絡(luò)精細(xì)調(diào)控等復(fù)雜過(guò)程[6]。對(duì)沙子嶺豬和大約克豬的肌肉組織轉(zhuǎn)錄組分析發(fā)現(xiàn)，糖脂代謝基因(ENO1、ENO3和ATP5B)在不同品種豬中差異表達(dá)[7]。不同部位脂肪的基因表達(dá)模式、增殖分化潛力也不盡相同，皮下脂肪高表達(dá)的基因主要是參與脂質(zhì)代謝和碳水化合物代謝的基因[8]，內(nèi)臟脂肪高表達(dá)的基因不僅參與脂質(zhì)代謝過(guò)程[9]，還參與免疫應(yīng)答相關(guān)過(guò)程[10]。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，C/EBPs[11]、SREBP-1c[12]、CREB[13]、FOXOs[14]、KLFs[15]、PPAR[16-17]等脂肪沉積的候選基因及轉(zhuǎn)錄因子相繼被發(fā)現(xiàn)。迪慶藏豬是高原型豬種之一，具有沉脂力強(qiáng)、肉質(zhì)好的特點(diǎn)[18]，是解析脂質(zhì)代謝的理想豬種，目前對(duì)迪慶藏豬的報(bào)道主要是肌肉生長(zhǎng)[19]、胴體性能[20]、低氧適應(yīng)[21]，尚未見迪慶藏豬不同生長(zhǎng)階段腹膜與皮下脂質(zhì)代謝差異的功能基因及其調(diào)控機(jī)制的報(bào)道。本研究以大型迪慶藏豬為對(duì)象，篩選不同階段背脂和腹脂脂質(zhì)代謝差異的關(guān)鍵基因并分析其調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，為差異化靶向調(diào)控豬脂肪沉積奠定基礎(chǔ)，為迪慶藏豬的選育利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

選擇胎次相同，出生日期相近、體重10 kg左右、去勢(shì)后的大型迪慶藏豬36頭，隨機(jī)分為3組(S1組：10～40 kg；S2組：10～80 kg；S3組：10～120 kg)，在云南省香格里拉市綠源生態(tài)種養(yǎng)專業(yè)合作社藏豬養(yǎng)殖基地進(jìn)行育肥試驗(yàn)，S1組、S2組、S3組分別在體重達(dá)40、80、120 kg左右時(shí)屠宰，測(cè)定胴體性能，每組采集3頭豬的背部皮下脂肪和腹膜脂肪，液氮速凍運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 方法

1.2.1 表型數(shù)據(jù)處理 背膘厚等胴體數(shù)據(jù)用SAS軟件(Version 9.2)的GLM過(guò)程進(jìn)行最小二乘分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，所用數(shù)學(xué)模型為：

Yij=μ+ai+eij

式中，Yij為性狀觀測(cè)值，μ為群體均數(shù)，ai為不同階段(組合)效應(yīng)，eij為隨機(jī)殘差。

1.2.2 總RNA提取和質(zhì)量檢測(cè) 用TRIzol法提取總RNA，10 g·L-1瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA質(zhì)量，NanoDropND-2000紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA濃度和純度。

1.2.3 cDNA文庫(kù)構(gòu)建與RNA測(cè)序 取3 μg檢測(cè)合格的RNA樣品，按Illumina TruSeq RNA Library Preparation Kit說(shuō)明書的方法構(gòu)建cDNA文庫(kù)，用Agilent 2100 Bioanalyzer對(duì)構(gòu)建好的cDNA文庫(kù)進(jìn)行質(zhì)檢，檢測(cè)合格的文庫(kù)在Illumina HiseqTM2000上機(jī)測(cè)序。

1.2.4 測(cè)序數(shù)據(jù)處理 對(duì)下機(jī)的原始測(cè)序數(shù)據(jù)(Raw data)進(jìn)行質(zhì)控，去除污染和低質(zhì)量片段，獲得Clean reads，用HISAT2軟件將Clean reads與豬參考基因組(Susscrofa11.1)比對(duì)，用StringTie軟件對(duì)轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行組裝和定量，利用DEGseq2軟件以|log2fold change|>1且P<0.05為標(biāo)準(zhǔn)篩選差異表達(dá)基因。

1.2.5 差異基因?qū)蛹?jí)聚類分析 依據(jù)差異基因表達(dá)量，利用R語(yǔ)言的Pheatmap軟件包對(duì)差異基因進(jìn)行聚類分析。

1.2.6 差異基因GO和KEGG富集分析 用在線軟件DAVID對(duì)篩選的差異基因進(jìn)行GO和KEGG分析，篩選與脂肪代謝相關(guān)的差異基因，以富集度count≥2且矯正P<0.05為差異基因顯著富集的閾值。

1.2.7 差異基因互作網(wǎng)絡(luò)分析 以GO和KEGG分析篩選出的與脂肪代謝相關(guān)的差異基因的表達(dá)量為基礎(chǔ)，用R語(yǔ)言的stats程序包計(jì)算差異基因間的相關(guān)性，用Cytoscape 3.7.1軟件構(gòu)建基因互作網(wǎng)絡(luò)圖。

1.2.8 qPCR 用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)qPCR引物(引物信息見表1)，利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，以豬GAPDH基因作為內(nèi)參，對(duì)篩選到的差異基因進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)。

表1 差異表達(dá)基因擴(kuò)增引物

2 結(jié) 果

2.1 不同體重大型迪慶藏豬的背膘厚和腹脂率比較

由表2可知，平均背膘厚S3組顯著高于S2組(P<0.05)、極顯著高于S1組(P<0.01)，S2組極顯著高于S1組(P<0.01)；6-7肋間膘厚S3組顯著高于S2組(P<0.05)、極顯著高于S1組(P<0.01)，S2組極顯著高于S1組(P<0.01)；板油率S3組極顯著高于S2組和S1組(P<0.01)，S2組極顯著高于S1組(P<0.01)。可以看出，隨著大型迪慶藏豬階段性生長(zhǎng)，平均背膘厚、6-7肋間膘厚和板油率均隨體重增加而顯著增加。

表2 不同體重大型迪慶藏豬背膘厚和腹脂率

2.2 大型迪慶藏豬背脂和腹脂轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

RNA-Seq測(cè)序結(jié)果顯示(表3)，每個(gè)樣品Raw reads數(shù)均在46 M以上，clean reads比率均在90%以上，clean Q30比例均在94%以上，mapping率均在87%以上，符合生物信息學(xué)分析要求。

表3 RNA-Seq數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

2.3 大型迪慶藏豬背脂和腹脂差異基因聚類結(jié)果

差異基因?qū)蛹?jí)聚類顯示(圖1)，3個(gè)組背脂和腹脂差異基因聚成兩個(gè)大類，與生物學(xué)分組一致，可進(jìn)行后續(xù)分析。

A.S1組背脂和腹脂差異基因聚類熱圖；B.S2組背脂和腹脂差異基因聚類熱圖；C.S3組背脂和腹脂差異基因聚類熱圖

2.4 大型迪慶藏豬背脂和腹脂差異表達(dá)顯著基因篩選

以|log2fold change|>1且P<0.05為篩選差異表達(dá)顯著基因的標(biāo)準(zhǔn)，與背脂相比，S1組腹脂差異表達(dá)顯著基因486個(gè)(顯著上調(diào)基因255個(gè)、顯著下調(diào)基因231個(gè)，圖2A)，S2組腹脂差異表達(dá)顯著基因765個(gè)(顯著上調(diào)基因367個(gè)、顯著下調(diào)基因398個(gè)，圖2B)，S3組腹脂差異表達(dá)顯著基因339個(gè)(顯著上調(diào)基因173個(gè)、顯著下調(diào)基因166個(gè)，圖2C)。

A.S1_BF vs. S1_AF差異表達(dá)顯著基因火山圖；B.S2_BF vs. S2_AF差異表達(dá)顯著基因火山圖；C.S3_BF vs. S3_AF差異表達(dá)顯著基因火山圖

2.5 背脂和腹脂差異表達(dá)顯著基因定量驗(yàn)證

隨機(jī)挑選EGR2、PPARA、LPL、STC2、SOD3共5個(gè)差異表達(dá)顯著基因進(jìn)行qPCR驗(yàn)證，5個(gè)基因的定量驗(yàn)證結(jié)果與RNA-Seq結(jié)果一致(圖3)。

圖3 大型迪慶藏豬背脂和腹脂差異表達(dá)顯著基因qPCR驗(yàn)證

2.6 不同體重大型迪慶藏豬背脂與腹脂差異表達(dá)顯著基因功能富集分析

40 kg組，差異基因主要富集于肌肉收縮、調(diào)節(jié)骨骼肌收縮等GO條目(圖4A)，心肌收縮、心肌細(xì)胞腎上腺素能信號(hào)傳導(dǎo)等KEGG通路(圖4B)，EGR2、RARRES2、TMOD4、SFRP2基因在以上通路中富集。

A.S1組差異表達(dá)顯著基因GO分析氣泡圖；B.S1組差異表達(dá)顯著基因KEGG分析氣泡圖

80 kg組，差異基因主要富集于細(xì)胞黏附、葡萄糖反應(yīng)等GO條目(圖5A)，PI3K-Akt信號(hào)通路、破骨細(xì)胞分化等KEGG通路(圖5B)，THBS1、PPARA、NRIP1、LPL基因在以上通路中富集。

120 kg組，差異基因主要富集于間充質(zhì)細(xì)胞增殖正調(diào)節(jié)、饑餓的細(xì)胞反應(yīng)等GO條目(圖6A)，Hippo信號(hào)通路、TGF-beta信號(hào)通路等KEGG通路(圖6B)，HTRA1、TSHR、LRRK2、STC2、SHOX2、SOD3基因在以上通路富集。

A.S3組差異表達(dá)顯著基因GO分析氣泡圖；B.S3組差異表達(dá)顯著基因KEGG分析氣泡圖

2.7 不同體重大型迪慶藏豬背脂與腹脂差異表達(dá)顯著基因互作網(wǎng)絡(luò)分析

2.7.1 S1組差異表達(dá)顯著基因互作網(wǎng)絡(luò) S1組脂肪代謝相關(guān)通路差異表達(dá)顯著基因互作網(wǎng)絡(luò)圖(圖7)顯示：EGR2、RARRES2、TMOD4、SFRP2基因位于網(wǎng)絡(luò)核心，EGR2、RARRES2、SFRP2在腹脂表達(dá)上調(diào)，TMOD4表達(dá)下調(diào)。

紅色節(jié)點(diǎn)表示位于網(wǎng)絡(luò)核心的基因，藍(lán)色節(jié)點(diǎn)表示位于網(wǎng)絡(luò)外周的基因，下同

2.7.2 S2組差異表達(dá)顯著基因互作網(wǎng)絡(luò) S2組脂肪代謝相關(guān)通路差異表達(dá)顯著基因互作網(wǎng)絡(luò)圖(圖8)顯示，THBS1、PPARA、NRIP1、LPL基因位于網(wǎng)絡(luò)核心，THBS1、PPARA、NRIP1、LPL在腹脂表達(dá)上調(diào)。

圖8 大型迪慶藏豬S2組背脂和腹脂差異表達(dá)顯著基因互作網(wǎng)絡(luò)

2.7.3 S3組差異表達(dá)顯著基因互作網(wǎng)絡(luò) S3組脂肪代謝相關(guān)通路差異表達(dá)顯著基因互作網(wǎng)絡(luò)圖(圖9)顯示，HTRA1、TSHR、LRRK2、STC2、SHOX2、SOD3基因位于網(wǎng)絡(luò)核心，LRRK2、TSHR在腹脂表達(dá)上調(diào)，SHOX2、SOD3、STC2、HTRA1表達(dá)下調(diào)。

圖9 迪慶藏豬S3組背脂和腹脂差異表達(dá)顯著基因互作網(wǎng)絡(luò)

3 討 論

3.1 大型迪慶藏豬S1階段背脂、腹脂差異的核心基因與脂質(zhì)代謝

S1階段，EGR2、RARRES2、SFRP2在腹脂顯著上調(diào)，TMOD4顯著下調(diào)。EGR2編碼鋅指轉(zhuǎn)錄因子，是脂肪形成的早期誘導(dǎo)因子，通過(guò)誘導(dǎo)成脂轉(zhuǎn)錄因子C/EBPβ表達(dá)而促進(jìn)脂肪細(xì)胞早期分化[22]；在3T3-L1脂肪細(xì)胞分化早期，EGR2通過(guò)C/EBPβ-PPARγ途徑促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化[23]；過(guò)表達(dá)EGR2的細(xì)胞系，脂肪開始積累時(shí)間更早，形成的脂滴更大，脂肪形成標(biāo)記基因aP2、PPARγ表達(dá)量更高[24]。RARRES2編碼的趨化素蛋白是一種脂肪因子，與G蛋白偶聯(lián)受體CMKLR1結(jié)合，促進(jìn)Akt/mTOR和ERK1/2磷酸化，進(jìn)一步激活A(yù)kt/mTOR和ERK1/2信號(hào)通路而促進(jìn)前脂肪細(xì)胞分化、增殖[25]，參與脂肪代謝和能量穩(wěn)態(tài)[26]。RARRES2缺失小鼠，皮下脂肪顯著增加而內(nèi)臟脂肪顯著降低，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，RARRES2對(duì)皮下和內(nèi)臟脂肪的作用不同是由TIMP1表達(dá)差異引起，TIMP1是脂肪形成的負(fù)調(diào)控因子，主要在巨噬細(xì)胞中表達(dá)，抑制3T3-L1脂肪細(xì)胞分化，RARRES2缺失小鼠通過(guò)減少皮下脂肪巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，降低TIMP1表達(dá)，促進(jìn)皮下脂肪形成，而RARRES2缺失小鼠內(nèi)臟脂肪中TIMP1表達(dá)增加，抑制脂肪生成[27]。SFRP2編碼包含一個(gè)富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域循環(huán)的可溶性蛋白，與Wnts結(jié)合位點(diǎn)同源，Wnts家族分泌蛋白通過(guò)降低成脂轉(zhuǎn)錄因子PPARγ和C/EBPs表達(dá)而抑制脂肪細(xì)胞增殖、分化，SFRP2通過(guò)結(jié)構(gòu)上有同源的結(jié)構(gòu)域與Wnts的特異性受體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合而抑制Wnts活性從而減少對(duì)成脂轉(zhuǎn)錄因子的抑制，促進(jìn)脂肪細(xì)胞增殖、分化[28-29]；Crowley等[30]研究表明，內(nèi)臟脂肪SFRP2的mRNA和蛋白表達(dá)量高于皮下脂肪。TMOD4是TMOD家族成員，TMOD4啟動(dòng)子區(qū)有脂肪轉(zhuǎn)錄因子C/EBPδ和肌細(xì)胞分化調(diào)控因子MEF2A的結(jié)合位點(diǎn)，這2 個(gè)位點(diǎn)的靶基因分別與肌纖維生長(zhǎng)和脂肪分子生成有關(guān)，過(guò)表達(dá)TMOD4可促進(jìn)PPARγ、aP2、C/EBPα、C/EBPβ等成脂因子表達(dá)，促進(jìn)3T3-L1脂肪細(xì)胞脂滴積累，但TMOD4過(guò)表達(dá)抑制C2C12肌細(xì)胞的增殖和分化，表明TMOD4在脂肪合成和骨骼肌發(fā)生之間起著開關(guān)作用[31]。

本研究中，EGR2、RARRES2、SFRP2在腹脂上調(diào)，可能促進(jìn)腹膜脂肪細(xì)胞早期分化、增殖；TMOD4下調(diào)，提示S1階段腹膜脂肪沉積的開關(guān)尚未開啟、脂肪沉積以背部皮下脂肪為主，與S1組板油率最低的結(jié)果一致。

3.2 大型迪慶藏豬S2階段背脂、腹脂差異的核心基因與脂質(zhì)代謝

S2階段，THBS1、PPARA、NRIP1、LPL在腹脂顯著上調(diào)。THBS1編碼一種脂肪來(lái)源的基質(zhì)細(xì)胞蛋白，是肥胖、胰島素抵抗和脂肪組織炎癥反應(yīng)的標(biāo)志物[32]，在人和小鼠內(nèi)臟脂肪中的表達(dá)量顯著高于皮下脂肪[33]。THBS1缺失小鼠，糖耐受量增加，胰島素敏感性增加[34]。PPARA是脂肪酸氧化關(guān)鍵基因，通過(guò)促進(jìn)脂肪酸β氧化第一限速酶ACOX1和長(zhǎng)鏈脂肪酸β氧化限速酶CPT1表達(dá)而促進(jìn)脂肪酸氧化和脂肪分解[35]。據(jù)研究，PPARA激活導(dǎo)致血脂水平降低，并從血漿中去除甘油三酯，導(dǎo)致高密度脂蛋白膽固醇水平升高[36]。NRIP1編碼核受體相互作用蛋白1通過(guò)與核受體、轉(zhuǎn)錄因子和其他輔調(diào)控因子等相互作用而調(diào)控體內(nèi)代謝、衰老等生理過(guò)程[37]，在脂肪組織、肝和骨骼肌等代謝旺盛的組織中高表達(dá)[38]。NRIP1最早被確定為哺乳動(dòng)物細(xì)胞雌激素受體的共抑制因子[39]，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)其可結(jié)合并調(diào)節(jié)過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體、甲狀腺激素受體和類維生素A受體活性[40]，作為共激活因子參與甘油三酯的合成[41]。在間充質(zhì)干細(xì)胞中敲除NRIP1，能延緩間充質(zhì)干細(xì)胞衰老、抑制細(xì)胞凋亡、降低FABP4和PPARγ基因表達(dá)、抑制間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化[42]。與野生型小鼠相比，敲除NRIP1基因小鼠，脂肪酸氧化和能量消耗相關(guān)基因(CPT1B、UCP1)表達(dá)上調(diào)，脂肪酸合成相關(guān)基因(ACC1、FAS、SCD1)和糖異生相關(guān)基因(PPARγ、C/EBPα、SREBP1C)表達(dá)下調(diào)，NRIP1基因敲除小鼠更消瘦，體內(nèi)脂肪含量更低[43]。LPL編碼甘油三酯水解的限速酶[44]。在實(shí)質(zhì)細(xì)胞中首先合成的是非活性單體，在脂肪酶成熟因子LMF1作用下形成LPL活性二聚體，內(nèi)皮膜蛋白GPIHBP1與LPL二聚體結(jié)合并將其運(yùn)輸至血漿中富含甘油三酯的脂蛋白上，在APCO-Ⅱ和APOA-Ⅴ作用下LPL水解活性被激活，將甘油三酯水解為游離脂肪酸和單酰甘油[45]，水解產(chǎn)生的游離脂肪酸在脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白CD36的作用下被脂肪細(xì)胞吸收、重新酯化，促進(jìn)脂肪細(xì)胞甘油三酯積累[46]。

本研究中，THBS1、PPARA、NRIP1和LPL在S2階段腹脂顯著上調(diào)，協(xié)同作用，可能導(dǎo)致胰島素抵抗、甘油三酯合成、腹膜脂肪組織膽固醇和脂質(zhì)積累，與S2階段板油率的增幅大于平均背膘厚和6-7肋間膘厚增幅的結(jié)果一致，表明大型迪慶藏豬的脂肪沉積在S2階段已轉(zhuǎn)入腹脂沉積為主，此階段是腹脂大量沉積的階段。

3.3 大型迪慶藏豬S3階段背脂、腹脂差異的核心基因與脂質(zhì)代謝

S3階段，LRRK2、TSHR基因在腹脂顯著上調(diào)，SHOX2、SOD3、STC2、HTRA1基因顯著下調(diào)。LRRK2編碼蛋白是一種具有激酶、GTP酶和蛋白質(zhì)相互作用域的多功能蛋白[47]，在HepG2細(xì)胞中過(guò)表達(dá)LRRK2，LRRK2通過(guò)上調(diào)CPT1A加速游離脂肪酸的β氧化而促進(jìn)脂肪分解[48]。本研究中，LRRK2在腹脂上調(diào)，可能促進(jìn)腹膜脂肪組織脂肪酸氧化分解、脂肪沉積減少，與Khan等[49]的研究結(jié)果一致。TSHR是前脂肪細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞的關(guān)鍵基因，通過(guò)cAMP/PKA/PPARA通路激活成脂關(guān)鍵基因SREBP1c，促進(jìn)甘油三酯積累[50]。在3T3-L1前脂肪細(xì)胞中敲除TSHR，成脂關(guān)鍵基因PPARγ表達(dá)降低，前脂肪細(xì)胞分化受阻[51]。過(guò)表達(dá)TSHR的小鼠更胖，肝和血清中甘油三酯積累更多[52]。TSHR缺失小鼠體溫升高，耗氧量增加，能量消耗增加，表明TSHR可能通過(guò)減少能量消耗增加脂肪沉積。SHOX2是同源盒基因家族成員，通過(guò)與C/EBPα結(jié)合抑制C/EBPα與ADRB3啟動(dòng)子結(jié)合，抑制ADRB3表達(dá)從而抑制脂肪分解[53]。SOD3編碼超氧化物歧化酶3。在人脂肪細(xì)胞中沉默SOD3，PPARγ、SREBP1c等成脂基因在脂肪細(xì)胞中的表達(dá)增加，甘油三酯積累增加，敲除SOD3的小鼠脂肪細(xì)胞增大[54]。在高脂飲食(HFD)的C57BL/6小鼠中過(guò)表達(dá)SOD3，動(dòng)物體內(nèi)高水平的SOD3活性上調(diào)了肝中CPT1α、CPT1β、PGC1α、PGC1β和UCP2等負(fù)責(zé)能量消耗的基因表達(dá)[55]。STC2編碼分泌型糖蛋白，在人間充質(zhì)干細(xì)胞中過(guò)表達(dá)STC2，顯著下調(diào)PPARγ和FABP4表達(dá)進(jìn)而抑制間充質(zhì)干細(xì)胞的成脂分化，相反，敲除STC2可上調(diào)PPARγ和FABP4表達(dá)，細(xì)胞脂滴增大[56]。小鼠肝細(xì)胞過(guò)表達(dá)STC2，可促進(jìn)STAT3磷酸化而激活STAT3信號(hào)通路，抑制SREBP1c表達(dá)，抑制脂肪合成，減少肝中甘油三酯積累[57]。HTRA1編碼蛋白為胰蛋白酶家族成員，是間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化和成脂分化的調(diào)節(jié)因子。在間充質(zhì)干細(xì)胞中沉默HTRA1，促進(jìn)成脂標(biāo)記基因FABP4、PPARγ表達(dá)增加，誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞[58]。HTRA1還可通過(guò)上調(diào)MAP激酶信號(hào)通路，誘導(dǎo)脂肪形成的負(fù)調(diào)控因子MMP3表達(dá)從而抑制脂肪細(xì)胞脂滴形成[59]。

本研究中，TSHR在腹脂上調(diào)而SOD3、STC2和HTRA1下調(diào)，這4個(gè)基因協(xié)同，可能共同促進(jìn)腹脂脂肪細(xì)胞分化、脂肪合成、甘油三酯積累和脂滴變大，LRRK2上調(diào)和SHOX2下調(diào)可能導(dǎo)致腹膜脂肪組織脂肪酸氧化分解、脂肪沉積減少；TSHR、SOD3、STC2和HTRA1可能協(xié)同調(diào)增腹膜脂質(zhì)積累，而LRRK2和SHOX2基因協(xié)同調(diào)減腹脂沉積，最終減緩腹脂增速、防止機(jī)體腹脂過(guò)度增加而發(fā)生代謝功能障礙、降低炎癥風(fēng)險(xiǎn)，與S2到S3板油率增幅(52.67%)比S1到S2增幅(133.55%)低的結(jié)果一致。

4 結(jié) 論

EGR2、THBS1、HTRA1等14個(gè)基因作為核心基因精細(xì)調(diào)控大型迪慶藏豬背脂與腹脂脂質(zhì)代謝，10～40 kg：EGR2、RARRES2、SFRP2和TMOD4基因位于網(wǎng)絡(luò)核心，促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化、增殖的基因在腹脂上調(diào)，脂肪合成的開關(guān)基因下調(diào)；40～80 kg：THBS1、PPARA、NRIP1和LPL基因位于網(wǎng)絡(luò)核心，促進(jìn)甘油三酯合成、膽固醇形成、脂質(zhì)積累的基因在腹脂上調(diào)；80～120 kg：LRRK2、TSHR、SHOX2、SOD3、STC2和HTRA1基因位于網(wǎng)絡(luò)核心，促進(jìn)甘油三酯積累、脂肪酸氧化的基因在腹脂上調(diào)，抑制脂肪分解、脂肪合成、脂滴形成的基因下調(diào)。