宋永奇，陳陽(yáng)飛，王 妍，范麗哲，屈小浩

（1.汝州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南汝州 467500；2.福潤(rùn)德寵物醫(yī)院，河南鄭州 450000；3.河南華大創(chuàng)新生命科技有限公司，河南新鄉(xiāng) 453000；4.河南泰慶質(zhì)量檢測(cè)有限公司，河南鄭州 450000）

犬瘟熱（Canine distemper，CD）是由犬瘟熱病毒（Canine distemper virus，CDV）引起的一種高度接觸性、致死性犬科動(dòng)物傳染病。患犬感染前期主要表現(xiàn)為精神沉郁、嗜睡、食欲不振或廢絕、咳嗽、打噴嚏、眼鼻分泌水樣或膿樣分泌物等，后期可見神經(jīng)癥狀及死亡[1]?；既腥厩捌谒憩F(xiàn)出的癥狀與感冒有極高的相似性，臨床上若不注意鑒別診斷，極容易誤診感冒。筆者近期接診一例犬瘟熱誤診為感冒的病例，現(xiàn)報(bào)告如下，以供臨床獸醫(yī)工作者們參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病例樣本

10 月齡薩摩耶，公，體重20kg，免疫過(guò)兩針“犬五聯(lián)” 疫苗。洗澡后第2 天開始出現(xiàn)癥狀，主要表現(xiàn)為食欲降低、精神沉郁、打噴嚏、咳嗽、流膿鼻涕等癥狀，遂被帶到某動(dòng)物醫(yī)院就診。首次接診醫(yī)生未做化驗(yàn)，按照犬感冒進(jìn)行治療后，精神與食欲略有好轉(zhuǎn)，依舊可見打噴嚏，少量流鼻涕癥狀。3 周后患犬開始出現(xiàn)四肢抽搐并伴隨吠叫表現(xiàn)，遂轉(zhuǎn)至福潤(rùn)德寵物醫(yī)院治療。

1.1.2 主要試劑

血常規(guī)檢查試劑購(gòu)自美國(guó)IDEXX 公司；犬瘟熱病毒/犬細(xì)小病毒/犬腺病毒I 型抗體三聯(lián)定量檢測(cè)試劑購(gòu)自海衛(wèi)特（廣州）醫(yī)療科技有限公司；犬瘟熱抗原檢測(cè)卡（膠體金法）購(gòu)自韓國(guó)Bionote 公司；病毒DNA/RNA 提取試劑盒購(gòu)自南京諾唯贊生物科技股份有限公司；犬瘟熱病毒熒光RT-PCR 試劑盒購(gòu)自深圳市剛竹醫(yī)療科技有限公司。

1.1.3 主要儀器

ProCyte Dx 全自動(dòng)動(dòng)物血液分析儀購(gòu)自美國(guó)IDEXX 公司；干式熒光免疫分析儀購(gòu)自海衛(wèi)特（廣州）醫(yī)療科技有限公司；高速離心機(jī)購(gòu)自湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司；熒光定量PCR 儀購(gòu)自杭州博日科技股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1 體格檢查

患犬精神略顯沉郁，鼻流清亮水樣液體，靜臥時(shí)可見四肢抽搐，活動(dòng)時(shí)抽搐表現(xiàn)不明顯。體溫、心率、呼吸頻率、眼結(jié)膜顏色等未見明顯異常。

1.2.2 血常規(guī)檢查

對(duì)患犬進(jìn)行后肢隱靜脈采血，將血液置于含有EDTA-K2 的抗凝管中，充分混勻后，嚴(yán)格按照機(jī)器操作規(guī)程于ProCyte Dx 全自動(dòng)動(dòng)物血液分析儀中進(jìn)行紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板等指標(biāo)檢測(cè)。

1.2.3 抗體檢測(cè)

對(duì)患犬進(jìn)行后肢隱靜脈采血，將血液置于促凝管中靜置，待血液完全凝固后，4000r/min 離心10min，取上層清亮的血清，嚴(yán)格按照檢測(cè)試劑與干式熒光免疫分析儀的操作說(shuō)明，進(jìn)行犬瘟熱病毒、犬細(xì)小病毒、犬腺病毒I 型抗體檢測(cè)。

1.2.4 病原檢測(cè)

用無(wú)菌棉簽采集患犬眼結(jié)膜、口腔和鼻腔分必物，置于犬瘟熱抗原檢測(cè)樣本稀釋液中充分?jǐn)嚢枞芙夂笕颖疽喊凑杖翢峥乖瓩z測(cè)卡操作說(shuō)明進(jìn)行犬瘟熱抗原檢測(cè)；分別吸取EDTA 抗凝血和犬瘟熱抗原檢測(cè)用樣本液各150μL 于無(wú)DNA/RNA 酶的1.5mL 離心中混勻，按照病毒DNA/RNA 提取試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行病毒核酸提取后，吸取20μL 核酸加至預(yù)分裝好且凍干的犬瘟熱病毒熒光PCR 檢測(cè)管內(nèi)，同時(shí)設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照反應(yīng)管，按照以下程序進(jìn)行犬瘟熱病毒核酸檢測(cè)。反轉(zhuǎn)錄：48℃、10min，1 個(gè)循環(huán)；預(yù)變性：95℃、10s，一個(gè)循環(huán)；變性：95℃、10s，退火延伸：60℃、30s，40 個(gè)循環(huán)并采集熒光信號(hào)。

2 結(jié)果

2.1 血常規(guī)檢查

由表可知，患犬紅細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞比容、血紅蛋白含量、淋巴細(xì)胞數(shù)降低，嗜堿性粒細(xì)胞、平均血小板體積升高，其他指標(biāo)未見明顯異常。

表1 血常規(guī)檢查結(jié)果（異常部分）

2.2 抗體檢測(cè)

由表2 可知，瘟熱病毒抗體、犬細(xì)小病毒抗體、犬腺病毒I 型抗體均為陽(yáng)性。

表2 3 種病毒抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 病原檢測(cè)

用棉拭子采集患犬眼結(jié)膜、口腔、鼻腔分泌液，使用Bionote 公司生產(chǎn)的犬瘟熱抗原檢測(cè)試紙條進(jìn)行犬瘟熱抗原檢測(cè)，結(jié)果為陰性；用犬瘟熱病毒熒光定量PCR 檢測(cè)試劑盒進(jìn)行犬瘟熱病毒核酸檢測(cè)，患犬樣本Ct 值為25.14，具有典型的 “S” 型擴(kuò)增曲線（圖1），判為犬瘟熱病毒核酸檢測(cè)陽(yáng)性。

圖1 犬瘟熱病毒核酸熒光定量RT-PCR 擴(kuò)增結(jié)果

3 討論

犬瘟熱是寵物犬高發(fā)的傳染病之一，各年齡段犬均可發(fā)病，尤以小于12 月齡的未成年犬高發(fā)[2-4]，且未免疫犬瘟熱疫苗犬只較免疫或未完全免疫者更易發(fā)病[2,3]。本病例中的患犬為10 月齡，處于犬瘟熱的高發(fā)期，然而這并未引起首位接診獸醫(yī)的重視。近些年來(lái)，隨著犬瘟熱疫苗接種的普及，該病的發(fā)病率顯著降低，根據(jù)溫慧明[5]對(duì)大連市犬瘟熱疑似病例調(diào)查結(jié)果看，該市寵物犬犬瘟熱年均發(fā)病率為5.2%，而孟璞巖[6]對(duì)南昌市的調(diào)查報(bào)告則顯示，犬瘟熱的發(fā)病率僅為2.83%。事實(shí)上，大城市尤其是一二線城市的寵物診療機(jī)構(gòu)常年接診的犬瘟熱病例也是屈指可數(shù)，這種情況很容易導(dǎo)致臨床獸醫(yī)和寵物主們對(duì)犬瘟熱的麻痹大意。此外，主訴對(duì)患犬已經(jīng)做過(guò)兩次犬瘟熱疫苗免疫且發(fā)病前有洗澡受涼史，加之臨床癥狀與感冒極為相似，寵物主和接診獸醫(yī)均放棄對(duì)犬瘟熱的排查，這都是導(dǎo)致本次誤診發(fā)生的原因。

一個(gè)值得思考的現(xiàn)象是，我們?cè)诮釉\后，當(dāng)即采集了患犬的眼結(jié)膜、口鼻拭子，嚴(yán)格按照犬瘟熱膠體金檢測(cè)卡的操作說(shuō)明對(duì)樣本進(jìn)行了犬瘟熱病毒檢測(cè)，但結(jié)果顯示卻為陰性。如果檢測(cè)至此結(jié)束，那么該病例依舊會(huì)被判為犬瘟熱陰性?；跈z測(cè)費(fèi)用和方便快捷因素的考量，膠體金檢測(cè)卡會(huì)成為寵物主和獸醫(yī)首選的檢測(cè)方法。然而研究顯示，與RT-PCR 比較，犬瘟熱膠體金檢測(cè)卡的誤診率可以高達(dá)7.32%[3]，這應(yīng)當(dāng)引起寵物臨床獸醫(yī)們的注意。遺憾的是，為了提高檢出率，在處理樣本時(shí)，實(shí)驗(yàn)室將眼結(jié)膜、口鼻拭子與血液樣本混合后提取了核酸。所以，我們無(wú)法進(jìn)一步確認(rèn)眼結(jié)膜、口鼻拭子中含有犬瘟熱病毒與否，也就無(wú)法直接判斷是樣本本身不含犬瘟熱病毒或含毒量低導(dǎo)致膠體金檢測(cè)卡結(jié)果陰性，還是檢測(cè)卡本身敏感性太低所致的陰性。

就本報(bào)告而言，除了犬瘟熱后期典型的神經(jīng)癥狀外，我們主要依賴于目前主流的熒光PCR 技術(shù)，在專業(yè)的PCR 實(shí)驗(yàn)室，通過(guò)嚴(yán)格、精細(xì)的核酸提取和熒光定量RT-PCR 檢測(cè)，最終得到了可信的陽(yáng)性結(jié)果。現(xiàn)如今，隨著分子生物學(xué)診斷技術(shù)的發(fā)展和普及應(yīng)用，國(guó)內(nèi)絕大多數(shù)的寵物治療機(jī)構(gòu)都具備了分子診斷能力，而配套的設(shè)備多卻為快速診斷設(shè)備，這些設(shè)備具有操作簡(jiǎn)單、省時(shí)、快捷等優(yōu)點(diǎn)，但因此種檢測(cè)均不是在專業(yè)的PCR 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)完成，且操作人員水平參差不齊，結(jié)果準(zhǔn)確性或許難以保證，由此導(dǎo)致的醫(yī)療糾紛屢見不鮮，這也應(yīng)引起廣大寵物診療從業(yè)人員的注意。

無(wú)論是犬瘟熱還是感冒，患犬前期均可以表現(xiàn)出發(fā)熱、咳嗽、打噴嚏、流鼻涕等上呼吸道感染癥狀，單從癥狀上去診斷，臨床獸醫(yī)很容易將犬瘟熱誤診為感冒[7]。另外，犬瘟熱還容易被誤診為犬細(xì)小病毒感染、犬傳染性肝炎、犬傳染性氣管支氣管炎、支氣管肺炎、犬弓形蟲等[8-10]，臨床應(yīng)當(dāng)注意鑒別診斷。

4 結(jié)論

綜合患犬臨床癥狀及實(shí)驗(yàn)室檢查，本案例確診為犬瘟熱病毒感染。臨床上若僅從發(fā)病早期癥狀去主觀判斷，極易將犬瘟熱誤診為感冒，應(yīng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)室診斷進(jìn)行確診，這應(yīng)當(dāng)引起廣大獸醫(yī)工作者的注意，以免錯(cuò)失最佳治療時(shí)間。