宋永奇，陳陽飛，王 妍，范麗哲，屈小浩

（1.汝州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南汝州 467500；2.福潤德寵物醫(yī)院，河南鄭州 450000；3.河南華大創(chuàng)新生命科技有限公司，河南新鄉(xiāng) 453000；4.河南泰慶質(zhì)量檢測有限公司，河南鄭州 450000）

犬瘟熱（Canine distemper，CD）是由犬瘟熱病毒（Canine distemper virus，CDV）引起的一種高度接觸性、致死性犬科動物傳染病。患犬感染前期主要表現(xiàn)為精神沉郁、嗜睡、食欲不振或廢絕、咳嗽、打噴嚏、眼鼻分泌水樣或膿樣分泌物等，后期可見神經(jīng)癥狀及死亡[1]?；既腥厩捌谒憩F(xiàn)出的癥狀與感冒有極高的相似性，臨床上若不注意鑒別診斷，極容易誤診感冒。筆者近期接診一例犬瘟熱誤診為感冒的病例，現(xiàn)報告如下，以供臨床獸醫(yī)工作者們參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病例樣本

10 月齡薩摩耶，公，體重20kg，免疫過兩針“犬五聯(lián)” 疫苗。洗澡后第2 天開始出現(xiàn)癥狀，主要表現(xiàn)為食欲降低、精神沉郁、打噴嚏、咳嗽、流膿鼻涕等癥狀，遂被帶到某動物醫(yī)院就診。首次接診醫(yī)生未做化驗，按照犬感冒進行治療后，精神與食欲略有好轉(zhuǎn)，依舊可見打噴嚏，少量流鼻涕癥狀。3 周后患犬開始出現(xiàn)四肢抽搐并伴隨吠叫表現(xiàn)，遂轉(zhuǎn)至福潤德寵物醫(yī)院治療。

1.1.2 主要試劑

血常規(guī)檢查試劑購自美國IDEXX 公司；犬瘟熱病毒/犬細小病毒/犬腺病毒I 型抗體三聯(lián)定量檢測試劑購自海衛(wèi)特（廣州）醫(yī)療科技有限公司；犬瘟熱抗原檢測卡（膠體金法）購自韓國Bionote 公司；病毒DNA/RNA 提取試劑盒購自南京諾唯贊生物科技股份有限公司；犬瘟熱病毒熒光RT-PCR 試劑盒購自深圳市剛竹醫(yī)療科技有限公司。

1.1.3 主要儀器

ProCyte Dx 全自動動物血液分析儀購自美國IDEXX 公司；干式熒光免疫分析儀購自海衛(wèi)特（廣州）醫(yī)療科技有限公司；高速離心機購自湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司；熒光定量PCR 儀購自杭州博日科技股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1 體格檢查

患犬精神略顯沉郁，鼻流清亮水樣液體，靜臥時可見四肢抽搐，活動時抽搐表現(xiàn)不明顯。體溫、心率、呼吸頻率、眼結(jié)膜顏色等未見明顯異常。

1.2.2 血常規(guī)檢查

對患犬進行后肢隱靜脈采血，將血液置于含有EDTA-K2 的抗凝管中，充分混勻后，嚴(yán)格按照機器操作規(guī)程于ProCyte Dx 全自動動物血液分析儀中進行紅細胞、白細胞、血小板等指標(biāo)檢測。

1.2.3 抗體檢測

對患犬進行后肢隱靜脈采血，將血液置于促凝管中靜置，待血液完全凝固后，4000r/min 離心10min，取上層清亮的血清，嚴(yán)格按照檢測試劑與干式熒光免疫分析儀的操作說明，進行犬瘟熱病毒、犬細小病毒、犬腺病毒I 型抗體檢測。

1.2.4 病原檢測

用無菌棉簽采集患犬眼結(jié)膜、口腔和鼻腔分必物，置于犬瘟熱抗原檢測樣本稀釋液中充分攪拌溶解后取樣本液按照犬瘟熱抗原檢測卡操作說明進行犬瘟熱抗原檢測；分別吸取EDTA 抗凝血和犬瘟熱抗原檢測用樣本液各150μL 于無DNA/RNA 酶的1.5mL 離心中混勻，按照病毒DNA/RNA 提取試劑盒操作說明進行病毒核酸提取后，吸取20μL 核酸加至預(yù)分裝好且凍干的犬瘟熱病毒熒光PCR 檢測管內(nèi)，同時設(shè)立陰陽性對照反應(yīng)管，按照以下程序進行犬瘟熱病毒核酸檢測。反轉(zhuǎn)錄：48℃、10min，1 個循環(huán)；預(yù)變性：95℃、10s，一個循環(huán)；變性：95℃、10s，退火延伸：60℃、30s，40 個循環(huán)并采集熒光信號。

2 結(jié)果

2.1 血常規(guī)檢查

由表可知，患犬紅細胞數(shù)、紅細胞比容、血紅蛋白含量、淋巴細胞數(shù)降低，嗜堿性粒細胞、平均血小板體積升高，其他指標(biāo)未見明顯異常。

表1 血常規(guī)檢查結(jié)果（異常部分）

2.2 抗體檢測

由表2 可知，瘟熱病毒抗體、犬細小病毒抗體、犬腺病毒I 型抗體均為陽性。

表2 3 種病毒抗體檢測結(jié)果

2.3 病原檢測

用棉拭子采集患犬眼結(jié)膜、口腔、鼻腔分泌液，使用Bionote 公司生產(chǎn)的犬瘟熱抗原檢測試紙條進行犬瘟熱抗原檢測，結(jié)果為陰性；用犬瘟熱病毒熒光定量PCR 檢測試劑盒進行犬瘟熱病毒核酸檢測，患犬樣本Ct 值為25.14，具有典型的 “S” 型擴增曲線（圖1），判為犬瘟熱病毒核酸檢測陽性。

圖1 犬瘟熱病毒核酸熒光定量RT-PCR 擴增結(jié)果

3 討論

犬瘟熱是寵物犬高發(fā)的傳染病之一，各年齡段犬均可發(fā)病，尤以小于12 月齡的未成年犬高發(fā)[2-4]，且未免疫犬瘟熱疫苗犬只較免疫或未完全免疫者更易發(fā)病[2,3]。本病例中的患犬為10 月齡，處于犬瘟熱的高發(fā)期，然而這并未引起首位接診獸醫(yī)的重視。近些年來，隨著犬瘟熱疫苗接種的普及，該病的發(fā)病率顯著降低，根據(jù)溫慧明[5]對大連市犬瘟熱疑似病例調(diào)查結(jié)果看，該市寵物犬犬瘟熱年均發(fā)病率為5.2%，而孟璞巖[6]對南昌市的調(diào)查報告則顯示，犬瘟熱的發(fā)病率僅為2.83%。事實上，大城市尤其是一二線城市的寵物診療機構(gòu)常年接診的犬瘟熱病例也是屈指可數(shù)，這種情況很容易導(dǎo)致臨床獸醫(yī)和寵物主們對犬瘟熱的麻痹大意。此外，主訴對患犬已經(jīng)做過兩次犬瘟熱疫苗免疫且發(fā)病前有洗澡受涼史，加之臨床癥狀與感冒極為相似，寵物主和接診獸醫(yī)均放棄對犬瘟熱的排查，這都是導(dǎo)致本次誤診發(fā)生的原因。

一個值得思考的現(xiàn)象是，我們在接診后，當(dāng)即采集了患犬的眼結(jié)膜、口鼻拭子，嚴(yán)格按照犬瘟熱膠體金檢測卡的操作說明對樣本進行了犬瘟熱病毒檢測，但結(jié)果顯示卻為陰性。如果檢測至此結(jié)束，那么該病例依舊會被判為犬瘟熱陰性?；跈z測費用和方便快捷因素的考量，膠體金檢測卡會成為寵物主和獸醫(yī)首選的檢測方法。然而研究顯示，與RT-PCR 比較，犬瘟熱膠體金檢測卡的誤診率可以高達7.32%[3]，這應(yīng)當(dāng)引起寵物臨床獸醫(yī)們的注意。遺憾的是，為了提高檢出率，在處理樣本時，實驗室將眼結(jié)膜、口鼻拭子與血液樣本混合后提取了核酸。所以，我們無法進一步確認眼結(jié)膜、口鼻拭子中含有犬瘟熱病毒與否，也就無法直接判斷是樣本本身不含犬瘟熱病毒或含毒量低導(dǎo)致膠體金檢測卡結(jié)果陰性，還是檢測卡本身敏感性太低所致的陰性。

就本報告而言，除了犬瘟熱后期典型的神經(jīng)癥狀外，我們主要依賴于目前主流的熒光PCR 技術(shù)，在專業(yè)的PCR 實驗室，通過嚴(yán)格、精細的核酸提取和熒光定量RT-PCR 檢測，最終得到了可信的陽性結(jié)果?，F(xiàn)如今，隨著分子生物學(xué)診斷技術(shù)的發(fā)展和普及應(yīng)用，國內(nèi)絕大多數(shù)的寵物治療機構(gòu)都具備了分子診斷能力，而配套的設(shè)備多卻為快速診斷設(shè)備，這些設(shè)備具有操作簡單、省時、快捷等優(yōu)點，但因此種檢測均不是在專業(yè)的PCR 實驗室內(nèi)完成，且操作人員水平參差不齊，結(jié)果準(zhǔn)確性或許難以保證，由此導(dǎo)致的醫(yī)療糾紛屢見不鮮，這也應(yīng)引起廣大寵物診療從業(yè)人員的注意。

無論是犬瘟熱還是感冒，患犬前期均可以表現(xiàn)出發(fā)熱、咳嗽、打噴嚏、流鼻涕等上呼吸道感染癥狀，單從癥狀上去診斷，臨床獸醫(yī)很容易將犬瘟熱誤診為感冒[7]。另外，犬瘟熱還容易被誤診為犬細小病毒感染、犬傳染性肝炎、犬傳染性氣管支氣管炎、支氣管肺炎、犬弓形蟲等[8-10]，臨床應(yīng)當(dāng)注意鑒別診斷。

4 結(jié)論

綜合患犬臨床癥狀及實驗室檢查，本案例確診為犬瘟熱病毒感染。臨床上若僅從發(fā)病早期癥狀去主觀判斷，極易將犬瘟熱誤診為感冒，應(yīng)結(jié)合實驗室診斷進行確診，這應(yīng)當(dāng)引起廣大獸醫(yī)工作者的注意，以免錯失最佳治療時間。