尚麗娟

（遼寧省阜新蒙古族自治縣現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，遼寧阜新 123100）

遼寧黑豬是由東北民豬與巴克夏豬雜交后經(jīng)過40余年馴化而形成的地方品種，其分布廣、數(shù)量多，是遼寧省雜交豬的主要母本。該品種具有適應(yīng)性強、繁殖力高、肉質(zhì)好等優(yōu)良特性[1]。

胰島素樣生長因子2（insulin-like growth factor 2，IGF2），也被稱為生長調(diào)節(jié)素A，是胰島素—胰島素樣生長因子—釋放生長因子家族的成員之一，與胰島素結(jié)構(gòu)上同源，是嚙齒類動物中促進(jìn)有絲分裂的主要生長因子[2,3]。

本文采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-單鏈構(gòu)像多態(tài)性分析法（Polymerase Chain Reaction-Single Strand Conformation Polymorphism，PCR-SSCP）分析方法對豬IGF2 基因進(jìn)行多態(tài)性的檢測[4]。

1 試驗設(shè)計

1.1 試驗材料

2011 年8 月采用沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)豬場將純種遼寧黑豬和杜洛克豬作為試驗材料進(jìn)行耳靜脈采血，每頭試驗豬均采2mL 左右的血，采后的血液放在10%的EDTA 抗凝管中保存。每管血液對應(yīng)每頭豬的耳號進(jìn)行編號。最后盡快將采集好的血液帶回實驗室在-20℃的條件下進(jìn)行保存?zhèn)溆谩＠萌蚪MDNA提取試劑盒提取基因組DNA。

生產(chǎn)性能試驗在檢測出不同基因型的豬群中選擇體重在60kg 左右的地方豬種遼寧黑豬和引進(jìn)豬種杜洛克豬共36 頭。按照基因型將其均分為3 組，每組6頭，公母各半。1～3 組為黑豬組，4～5 組為杜洛克豬組。分別記錄各組平均日增重、平均日采食量，并計算料重比。

1.2 主要試劑

全血基因組DNA 提取試劑盒（購自沈陽寶泰克生物有限公司），Taq DAN 聚合酶，DNA Ladder2000（分子量為2000、1000、750、500、250、100bp，DNA Maker（Ⅰ,Ⅱ），以上試劑均購自大連生物有限公司。本次試驗引物是利用Oligo（6.0）分析軟件，根據(jù)豬基因組序列（AY044828）對IGF2 基因exon7，exon8 和exon9 區(qū)域進(jìn)行引物設(shè)計，引物由沈陽寶泰克生物工程有限公司提供，引物信息見表1。

表1 引物信息

1.3 PCR 擴充

PCR 反應(yīng)的條件：首先93℃預(yù)變性3min，變性然后進(jìn)入循環(huán)條件，共進(jìn)行34 個循環(huán)，最后72℃延伸10min，4℃保存。

PCR 產(chǎn)物的檢測：取PCR 擴增產(chǎn)物（表2）和加樣緩沖液（1μL）混合好后加入點樣孔中。130V 電泳30min。最后在凝膠成像系統(tǒng)中觀察結(jié)果，并在成像分析系統(tǒng)上掃描，拍照保存圖片。

表2 IGF2 基因的50μL PCR 組分

1.4 擴增產(chǎn)物PCR-SSCP 分析方法

取PCR 產(chǎn)物（1μL）放在PCR 管中與5μL 變性Buffer 混勻，93℃變性10min，迅速冰浴1min 然后用加樣器加樣。開始在220V 電壓下電泳10min，然后在140V（電壓不能高于120V，否則有可能使條帶跑彎）電泳12h，取下凝膠進(jìn)行銀染。

1.5 數(shù)據(jù)處理

豬群各基因的基因型頻率及基因頻率的計算豬群各基因的基因型頻率及基因頻率的計算方法參見文獻(xiàn)[5]。

生產(chǎn)性能測定結(jié)果（平均日增重、平均日采食量、料重比）根據(jù)固定效應(yīng)模型，用SAS v6.12 軟件進(jìn)行單因素的協(xié)方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 PCR 擴增結(jié)果

用所設(shè)計的引物對不同豬種的基因組進(jìn)行擴增，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測后，結(jié)果表明，擴增片段與目的片段大小一致，且特異性好，可進(jìn)行SSCP 分析。

2.2 SSPC 檢測結(jié)果

PCR 擴增產(chǎn)物進(jìn)行SSCP 檢測，結(jié)果在擴增的片段上發(fā)現(xiàn)了3 個基因型，分別是AA、AB、BB，結(jié)果見圖1。

圖1 PCR 擴增結(jié)果

2.3 IGF2 基因頻率和基因型頻率分析

由表3 可知，IGF2 基因雜合子基因AB 在遼寧黑豬中出現(xiàn)的頻率最高，而在引進(jìn)豬種杜洛克豬中純合子AA 基因頻率最高。BB 基因型均是兩個豬種中出現(xiàn)頻率最低的基因型。由此可以看出，等位基因A 均為遼寧黑豬和杜洛克豬的優(yōu)勢等位基因。

表3 IGF2 基因頻率和基因型頻率分析

2.4 IGF2 基因的多態(tài)性對豬生產(chǎn)性能的影響

由表4 可知，IGF2 基因的不同基因型對遼寧黑豬日增重的影響沒有達(dá)到顯著水平（P＞0.05）。對采食量的影響達(dá)到了顯著水平（P＜0.05）。AA 型的遼寧黑豬采食量最小，且直接影響到料重比的結(jié)果，IGF2 基因的不同基因型對遼寧黑豬料重比的影響也達(dá)到了顯著水平（P＜0.05）。因此，AA 型遼寧黑豬的料重比的值最小，AB 型遼寧黑豬的料重比最大。

表4 豬IGF2 基因的不同基因型對豬生產(chǎn)性能指標(biāo)的影響

IGF2 基因的不同基因型對杜洛克豬日增重、平均日采食量、料重比的影響均達(dá)到了顯著的水平（P＜0.05）。AA 型杜洛克豬的日增重最大，料重比最小，BB 型杜洛克豬的日增重最小，料重比最大。

遼寧黑豬的日增重明顯低于引進(jìn)豬杜洛克豬的日增重，且料重比明顯高于杜洛克豬。

3 結(jié)論與討論

3.1 IGF2 基因的多態(tài)性

本次試驗利用SSCP 方法對遼寧地方豬種遼寧黑豬和引進(jìn)豬種杜洛克豬IGF2 基因的多態(tài)性進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)了豬的IGF2 基因的多態(tài)性，即AA 型、AB 型和BB 型。雜合子AB 基因在遼寧黑豬中出現(xiàn)的頻率最高，而在引進(jìn)豬種杜洛克豬中純合子AA 基因出現(xiàn)的頻率最高。BB 基因型均是兩個豬種中出現(xiàn)頻率最低的基因型。由此可以看出，等位基因A 均為遼寧黑豬和杜洛克豬的優(yōu)勢等位基因。

3.2 豬IGF2 基因?qū)ιa(chǎn)性能指標(biāo)的影響

本次試驗結(jié)果表明，IGF2 基因的不同基因型對杜洛克豬日增重、平均日采食量、料重比的影響均達(dá)到了顯著水平。日增重、料重比直接影響了經(jīng)濟效應(yīng)，所以測量生產(chǎn)性能指標(biāo)對其有重要意義。AA 型的遼寧黑豬日增重最高，采食量最低，直接影響其料重比。所以3 種基因型相比經(jīng)濟效應(yīng)較好的為AA 型。但和引進(jìn)豬種杜洛克豬相比，AA 型的日增重明顯低于引進(jìn)豬種。從經(jīng)濟效應(yīng)方面看，地方豬種的經(jīng)濟效應(yīng)不如引進(jìn)豬種的經(jīng)濟效應(yīng)。