孫楷航 巴特 王婧 郝婷 王琦 桑博默 趙曉峰

(1天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津 300381；2國(guó)家中醫(yī)針灸臨床醫(yī)學(xué)研究中心)

缺血性腦卒中(IS)是指因腦部血液循環(huán)障礙，缺血、缺氧所致的局限性腦組織缺血性壞死或軟化。由于其高發(fā)病率、患病率、死亡率和致殘率而成為造成全世界疾病負(fù)擔(dān)的重要原因之一。臨床治療主要采用急性期溶栓及腦神經(jīng)保護(hù)等措施減少腦組織功能損傷，針對(duì)組織損傷后的功能恢復(fù)缺乏理想手段。近年來(lái)，干細(xì)胞移植療法被認(rèn)為在IS治療領(lǐng)域有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。干細(xì)胞具有自我更新、分化的能力，可分化為各類型組成神經(jīng)系統(tǒng)所需的細(xì)胞，在損傷腦組織局部通過(guò)替代等作用恢復(fù)受損神經(jīng)功能，發(fā)揮治療作用。干細(xì)胞種類多樣，其中間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)因其具有便于獲取的廣泛來(lái)源、低免疫原性及較好的安全性備受關(guān)注。

目前，多項(xiàng)臨床試驗(yàn)已逐步開(kāi)展。然而，一些多中心大樣本臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示干細(xì)胞移植未能達(dá)到理想臨床療效〔1,2〕，可能與移植策略的選擇有關(guān)。干細(xì)胞移植過(guò)程復(fù)雜，選擇不同干細(xì)胞來(lái)源、移植途徑、移植時(shí)間、移植劑量參數(shù)均會(huì)影響移植效果，本文由臨床回歸基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，探討MSCs移植的療效、機(jī)制、操作參數(shù)、增效策略等方面，對(duì)近年來(lái)研究成果進(jìn)行綜述，以期推動(dòng)干細(xì)胞療法的臨床轉(zhuǎn)化。

1 MSCs移植的療效與機(jī)制

大量研究表明，MSCs移植在IS動(dòng)物模型中療效明顯，主要依據(jù)行為學(xué)、組織學(xué)方面的改善情況進(jìn)行評(píng)價(jià)〔3～6〕。在行為學(xué)方面，常采用移除黏附物能力測(cè)試評(píng)價(jià)自體感覺(jué)缺失情況、轉(zhuǎn)軸測(cè)試評(píng)價(jià)運(yùn)動(dòng)功能、肢體放置測(cè)試評(píng)價(jià)運(yùn)動(dòng)感覺(jué)完整性、平衡木行走測(cè)試評(píng)價(jià)大鼠的運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)功能及神經(jīng)功能損傷評(píng)分評(píng)價(jià)神經(jīng)功能缺損程度等，相關(guān)實(shí)驗(yàn)顯示MSCs移植后可見(jiàn)神經(jīng)功能改善明顯〔3,5,6〕；在組織學(xué)方面，通過(guò)磁共振成像或TTC染色觀察腦梗死體積，各項(xiàng)研究中MSCs治療組與模型組對(duì)比常可見(jiàn)梗死體積明顯縮小〔3,4〕。

MSCs移植通過(guò)多種機(jī)制改善神經(jīng)功能，減少腦神經(jīng)損傷。研究表明MSCs治療機(jī)制主要涉及幾個(gè)方面：(1)免疫調(diào)節(jié)：移植的MSCs可介導(dǎo)免疫抑制作用〔7〕，通過(guò)缺氧環(huán)境下干細(xì)胞高表達(dá)的一種抗炎因子CD200調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞因子和小膠質(zhì)細(xì)胞活化水平〔8〕，另通過(guò)減少小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的數(shù)量〔9〕，或誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞向抑制炎癥反應(yīng)的M2型極化〔10〕，從而減輕腦卒中大鼠的神經(jīng)損傷。(2)細(xì)胞凋亡：鈣調(diào)磷酸酶是一種蘇氨酸/磷酸酶，在神經(jīng)穩(wěn)態(tài)中起重要作用，IS誘導(dǎo)鈣調(diào)磷酸酶的過(guò)度激活進(jìn)而觸發(fā)凋亡信號(hào)，MSCs移植可通過(guò)降低神經(jīng)元鈣調(diào)磷酸酶表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡〔11〕。干細(xì)胞移植也可通過(guò)抑制炎癥減少繼發(fā)性細(xì)胞死亡〔12〕。(3)神經(jīng)元損傷：神經(jīng)元損傷可由多種機(jī)制引起，鈣超載、氧化應(yīng)激等機(jī)制在IS引起的神經(jīng)元損傷中起重要作用。移植的MSCs可通過(guò)上調(diào)主要定位于高爾基體的鈣泵SPCA1的表達(dá)減輕鈣超載〔13〕，通過(guò)上調(diào)一種抗氧化酶UBIAD1來(lái)減少線粒體功能障礙和增強(qiáng)抗氧化作用〔14〕，另外，MSCs通過(guò)影響損傷后蛋白清除途徑，抑制泛素-蛋白酶體途徑向自噬途徑轉(zhuǎn)化〔15〕，起到限制神經(jīng)元損傷的作用。(4)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)：MSCs可誘導(dǎo)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子〔16〕、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子〔17〕等細(xì)胞因子的表達(dá)，營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)，提高梗死區(qū)神經(jīng)元存活率，促進(jìn)神經(jīng)保護(hù)作用發(fā)揮。(5)內(nèi)源性神經(jīng)發(fā)生：移植的MSCs可通過(guò)增加趨化因子、多聚唾液酸酶的表達(dá)，增加內(nèi)源性神經(jīng)祖細(xì)胞遷移〔18〕，可促進(jìn)內(nèi)源性少突膠質(zhì)祖細(xì)胞增殖，促進(jìn)髓鞘形成〔19〕，可觸發(fā)神經(jīng)細(xì)胞形成、增強(qiáng)神經(jīng)元功能〔20〕，可下調(diào)抑制軸突生長(zhǎng)、神經(jīng)元再生的抑制因子Nogo-A等〔21〕促進(jìn)神經(jīng)發(fā)生。(6)分化替代：移植的MSCs可向神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化〔16〕，可能替代、補(bǔ)充受損的神經(jīng)細(xì)胞恢復(fù)神經(jīng)功能。(7)促進(jìn)血管再生：移植的MSCs可通過(guò)向微血管宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)移功能完整的線粒體，改善大腦微血管線粒體功能，促進(jìn)血管生成〔22〕，通過(guò)誘導(dǎo)血管生成〔23〕，改善腦血流循環(huán)，促進(jìn)神經(jīng)組織修復(fù)。(8)血腦屏障：移植的MSCs可通過(guò)腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路下調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞間黏附分子-1，減少中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，抑制基質(zhì)金屬蛋白酶-9的上升，減少血腦屏障破壞〔24〕。(9)功能連接：移植的MSCs可通過(guò)增強(qiáng)胼胝體在兩側(cè)大腦運(yùn)動(dòng)皮層間解剖學(xué)連接，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)〔25〕。

2 MSCs移植相關(guān)參數(shù)

2.1干細(xì)胞來(lái)源 MSCs來(lái)源廣泛，主要存在于結(jié)締組織和器官間質(zhì)中，可從多種組織中提取培養(yǎng)，根據(jù)其組織來(lái)源不同，分為骨髓源MSCs(BM-MSCs)、脂肪源MSCs(AD-MSCs)、臍帶源MSCs(UC-MSCs)、臍血源MSCs、牙髓源MSCs、牙周膜源MSCs、嗅黏膜源MSCs等，根據(jù)供體不同，又可分為自體移植MSCs、同種異體MSCs、異種MSCs。是否自體移植、干細(xì)胞來(lái)源于供體的部位及供體生理病理狀態(tài)，均可對(duì)MSCs療效產(chǎn)生影響。對(duì)于同為異體來(lái)源的干細(xì)胞，供體的種屬不論同種、異種對(duì)療效影響不大，Gutiérrez-Fernández等〔26〕研究顯示同種異體(大鼠)與異種(人)來(lái)源AD-MSCs在促進(jìn)功能恢復(fù)和減少缺血性腦損傷方面表現(xiàn)出相同的效果。然而是否為自體移植則會(huì)對(duì)療效產(chǎn)生明顯影響，Yu等〔27〕研究表明，自體來(lái)源AD-MSCs與同種異體AD-MSCs相比，在體內(nèi)有更好的生存能力、遷移能力和分化潛能及有更低的凋亡率，更能促進(jìn)大鼠功能恢復(fù)，減少梗死體積。干細(xì)胞來(lái)源于供體的部位也會(huì)影響其療效，Ikegame等〔28〕比較AD-MSCs與BM-MSCs，發(fā)現(xiàn)AD-MSCs除獲取更簡(jiǎn)單安全外，在分泌VEGF等細(xì)胞因子，減少腦梗死、水腫面積，減少神經(jīng)損害等方面也有明顯優(yōu)勢(shì)。Abiko等〔29〕則認(rèn)為顱骨源BM-MSCs比髂骨源BM-MSCs表達(dá)更多BDNF和神經(jīng)生長(zhǎng)因子，并引起更好的功能恢復(fù)作用。比較成人甚至老年人牙齒中最常見(jiàn)的牙髓源與牙周膜源干細(xì)胞，Wu等〔30〕認(rèn)為牙周膜源MSCs更能促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)，可作為臨床應(yīng)用的理想候選細(xì)胞。關(guān)于供體生理、病理狀態(tài)對(duì)移植療效的影響，供體年齡是一個(gè)影響因素，Yamaguchi等〔31〕對(duì)人MSCs的研究表明，來(lái)源于年輕供體的MSCs移植組有更好的神經(jīng)恢復(fù)和腦萎縮預(yù)防作用。然而，供體是否存在腦缺血可能不會(huì)對(duì)干細(xì)胞療效產(chǎn)生影響，Tsai等〔32〕比較來(lái)自腦缺血大鼠與正常大鼠BM-MSCs的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種來(lái)源干細(xì)胞治療效果無(wú)明顯差別。

2.2移植途徑 MSCs可經(jīng)多種途徑移植進(jìn)入體內(nèi)，其中較為常見(jiàn)的有顱內(nèi)〔10〕、動(dòng)脈〔11〕、靜脈〔25〕、鞘內(nèi)移植〔33〕，也有實(shí)驗(yàn)通過(guò)鼻內(nèi)注射〔4〕給藥。由于注射方式不同，產(chǎn)生的治療效果存在差異。大部分研究表明，動(dòng)脈注射方式相較于其他方式，可見(jiàn)更為明顯的療效，Zhang等〔34〕將BM-MSCs通過(guò)動(dòng)脈內(nèi)、靜脈內(nèi)、腦內(nèi)(3×106、3×106、5×105)三種方式給藥，三種方式均明顯改善神經(jīng)功能，其中動(dòng)脈注射組改善最迅速且最明顯，并明顯增強(qiáng)梗死側(cè)胼胝體區(qū)髓鞘的重建。Shim等〔35〕通過(guò)鼠頸動(dòng)脈、尾靜脈注射(各2×105)經(jīng)超順磁氧化鐵標(biāo)記的MSCs，磁共振成像活體示蹤MSCs分布，結(jié)果顯示兩組干細(xì)胞均可見(jiàn)于梗死灶周圍，而動(dòng)脈移植組在注射后早期有更多聚集。Du等〔36〕同樣以頸動(dòng)脈、尾靜脈為注射途徑(各2×106)注射人BM-MSCs(hBM-MSCs)，發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈注射安全且具有更好的治療效果，可繞過(guò)肺系統(tǒng)更有效地將細(xì)胞導(dǎo)向大腦的缺血部位。治療后大鼠大腦的功能、灌注和代謝得到改善，提示經(jīng)動(dòng)脈注射hBM-MSCs治療可能是治療腦卒中的合適方法。然而也有研究表明動(dòng)脈注射與靜脈注射相比有可能增加腦損傷的風(fēng)險(xiǎn)，且未能明顯改善神經(jīng)功能〔37〕。比較顱內(nèi)注射與靜脈注射方式，Noh等〔38〕研究結(jié)果表明，卒中亞急性階段或慢性階段靜脈注射人VC-MSCs(hUC-MSCs)療效甚微，顱內(nèi)注射方式則可表現(xiàn)出明顯療效。關(guān)于鞘內(nèi)注射，Lim等〔33〕對(duì)比鞘內(nèi)注射與尾靜脈注射hUC-MSCs，較高注射劑量(1×106)時(shí)兩組均顯著改善運(yùn)動(dòng)功能并減少了缺血性損傷，兩組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而在較低劑量注射時(shí)(5×105)鞘內(nèi)注射組細(xì)胞存活并更廣泛地遷移到缺血區(qū)域，分化為神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞，顯著減少了缺血性損傷，而靜脈注射組沒(méi)有，所以可見(jiàn)相較于靜脈注射，鞘內(nèi)注射產(chǎn)生療效對(duì)劑量的需求更低。目前，何種途徑為既安全又有效的最適移植途徑，還需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)探索。

2.3移植時(shí)間 造模后干細(xì)胞移植時(shí)間點(diǎn)不同會(huì)影響干細(xì)胞分布、腦組織修復(fù)和神經(jīng)功能恢復(fù)情況。Wang等〔39〕認(rèn)為BM-MSCs在3 h、24 h移植而不是7 d時(shí)移植可顯著減少病變體積，改善運(yùn)動(dòng)功能。Toyoshima等〔40〕研究表明與1、6、48 h組相比，24 h組改善改良大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分與梗死體積效果最明顯，伴隨有干細(xì)胞存活率高、遷移能力強(qiáng)的特點(diǎn)。Nam等〔41〕實(shí)驗(yàn)則表明，比較hBM-MSCs(2×106)于造模后1 h、1 d、3 d移植，超早期移植(1 h)能產(chǎn)生更明顯的神經(jīng)恢復(fù)和減少梗死體積作用。Lee等〔42〕比較1 d、4 d、7 d移植，結(jié)果表明早期MSCs移植(1 d)與更好的功能恢復(fù)相關(guān)，這可能與早期移植組MSCs優(yōu)先向皮質(zhì)遷移有關(guān)。Kawabori等〔43〕研究在1 w或4 w進(jìn)行BM-MSCs顱內(nèi)立體定位移植，1 w時(shí)低劑量移植與高劑量移植均引起顯著功能恢復(fù)，而4 w時(shí)只有高劑量移植引起明顯的治療效果，表明早期移植只需要較少的干細(xì)胞即可產(chǎn)生有益的效果。Ishizaka等〔44〕于1 d、4 d、7 d頸動(dòng)脈移植人MSCs，觀察干細(xì)胞分布，結(jié)果1 d組干細(xì)胞分布于梗死核心及周圍，4 d組分布于梗死灶周圍，7 d組則觀察到很少的細(xì)胞，表現(xiàn)出依賴于移植時(shí)間的細(xì)胞分布和卒中后功能恢復(fù)差異。由此可見(jiàn)，早期移植療效較優(yōu)，多數(shù)研究表明造模后24 h移植療效最佳，然而也存在實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明相對(duì)于24 h移植，更早移植(1 h)〔41〕或更晚移植(7 d)〔45〕可產(chǎn)生更好效果，實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異可能由于選用的干細(xì)胞來(lái)源、移植劑量等其他因素不同所致，確定最適移植時(shí)間點(diǎn)還需細(xì)化影響因素設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步研究。另外，Komatsu等〔46〕于7 d、14 d、28 d靜脈注射MSCs，雖然顯示早期(7 d)治療可更明顯的限制腦損傷體積，然而腦缺血1個(gè)月(28 d)后給予MSCs仍可發(fā)揮有益作用，可能與其促進(jìn)血管生成有關(guān)，表明MSCs應(yīng)用于永久性大腦中動(dòng)脈阻塞模型改善功能預(yù)后的治療時(shí)間窗至少為1個(gè)月。

2.4注射劑量及注射安全性 在一定范圍內(nèi)提高M(jìn)SCs注射劑量有助于提高治療效果，但超過(guò)一定劑量則會(huì)引起相關(guān)不良反應(yīng)，影響MSCs移植安全性。以動(dòng)脈注射為例，大劑量注射有可能引起細(xì)胞造成栓塞的危險(xiǎn)。Fukuda等〔47〕比較低劑量(1×104)、高劑量(1×106)動(dòng)脈注射人MSCs的有效性及安全性，結(jié)果雖然高劑量組MSCs在大鼠皮層和紋狀體中分布較廣，但血管內(nèi)細(xì)胞聚集程度和大鼠死亡率明顯較高，相比之下低劑量減少了栓塞并發(fā)癥的副作用，且足以產(chǎn)生抗炎作用并使腦卒中后功能恢復(fù)。Yavagal等〔48〕比較5×104、1×105、2×105、5×105、1×106的動(dòng)脈注射劑量，通過(guò)測(cè)量與造模、注射同側(cè)的大腦中動(dòng)脈上平均激光多普勒血流信號(hào)變化百分比確定最大耐受劑量，結(jié)果表明1×105時(shí)不影響大腦中動(dòng)脈流量，被認(rèn)為是最大耐受劑量，且24 h而不是1 h時(shí)注射可顯著提高神經(jīng)缺損評(píng)分，降低平均梗死體積。對(duì)于靜脈注射途徑的研究，He等〔49〕分低(5×104)、中(5×105)、高(2×106)劑量組注射BM-MSCs，中、高劑量均明顯縮小了梗死體積，增大了軟腦膜血管和基底動(dòng)脈的直徑，增加了大腦皮層梗死周圍區(qū)毛細(xì)血管面積，提高了梗死周圍區(qū)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的表達(dá)及血清VEGF水平，所以結(jié)合安全性考慮可選擇其中療效相似的較小劑量5×105作為干細(xì)胞移植的適當(dāng)劑量。關(guān)于血管內(nèi)注射引起的血管阻塞，除受注射劑量影響外，注射細(xì)胞大小也是導(dǎo)致血管阻塞和中風(fēng)的重要原因。Ge等〔50〕認(rèn)為使用較小直徑的MSCs可能增加血管內(nèi)移植的安全性。另外注射速度也是影響移植安全性的因素，Janowski等〔51〕實(shí)驗(yàn)顯示，注射速度超過(guò)1 ml/min?？梢l(fā)腦卒中。

3 MSCs移植其他策略

干細(xì)胞在臨床應(yīng)用中顯示有很好的應(yīng)用前景，但沒(méi)有表現(xiàn)出穩(wěn)定的臨床療效，為增強(qiáng)療效提高臨床應(yīng)用價(jià)值，大量基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)對(duì)移植策略進(jìn)行改良。干細(xì)胞靶向遷移能力差、植入率低制約了其治療效果。通過(guò)各種方式，增強(qiáng)細(xì)胞存活、遷移、增殖、分化，促進(jìn)歸巢，誘導(dǎo)營(yíng)養(yǎng)因子釋放，可進(jìn)一步改善缺血局部神經(jīng)損傷，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)。

3.1細(xì)胞預(yù)處理 部分實(shí)驗(yàn)在制備干細(xì)胞制劑時(shí)對(duì)干細(xì)胞進(jìn)行注射前預(yù)處理，改變細(xì)胞部分特性，從而提高干細(xì)胞移植療效。Hu等〔52〕研究表明，缺氧預(yù)處理增加BM-MSCs的趨化因子受體(CXCR)4表達(dá)，促進(jìn)移植后細(xì)胞向梗死區(qū)周圍歸巢，抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)神經(jīng)元的再生和功能恢復(fù)。Li等〔53〕以川芎提取物四甲基吡嗪預(yù)處理方式增強(qiáng)了BM-MSCs遷移和歸巢能力，促進(jìn)血管生成，改善神經(jīng)功能。Sun等〔54〕使用一種揮發(fā)性麻醉劑異氟醚預(yù)處理干細(xì)胞，通過(guò)誘導(dǎo)缺氧誘導(dǎo)因子-1、CXCR4表達(dá)，增加BM-MSCs存活率和功能，提高向缺血腦組織內(nèi)歸巢能力，促進(jìn)腦卒中小鼠的功能恢復(fù)。Yamauchi等〔55〕以血小板裂解液、粒細(xì)胞集落刺激因子進(jìn)行干細(xì)胞預(yù)處理，處理后干細(xì)胞表現(xiàn)出更強(qiáng)的增殖能力。Hou等〔56〕實(shí)驗(yàn)表明在大鼠腦卒中模型中，與單純使用hBM-MSCs相比，白細(xì)胞介素-8刺激hBM-MSCs中VEGF的生成，使用白細(xì)胞介素-8預(yù)處理的hBM-MSCs可降低缺血邊界區(qū)梗死體積，增加血管新生。

3.2細(xì)胞改造 通過(guò)基因轉(zhuǎn)導(dǎo)等手段，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行改造，可促進(jìn)干細(xì)胞發(fā)揮治療作用。Huang等〔57〕將趨化因子受體CCR2基因轉(zhuǎn)導(dǎo)至MSCs，使CCR2在MSCs過(guò)表達(dá)，增強(qiáng)了干細(xì)胞向缺血半球的定向遷移，提高治療效果。Zong等〔58〕通過(guò)腺病毒介導(dǎo)VEGF基因轉(zhuǎn)染BM-MSCs，將干細(xì)胞移植到大鼠缺血大腦局灶區(qū)后，VEGF和BDNF的表達(dá)和分泌增加，微管相關(guān)蛋白2水平升高，微血管密度增加，大鼠行為功能改善，BM-MSCs存活率提高。Zhang等〔59〕移植BDNF轉(zhuǎn)染的BM-MSCs后，與未轉(zhuǎn)染組相比表現(xiàn)出更好的神經(jīng)功能改善。

3.3聯(lián)合干預(yù) 在干細(xì)胞移植治療的同時(shí)，選擇聯(lián)合其他干預(yù)措施協(xié)同治療，可通過(guò)輔助干細(xì)胞起效機(jī)制發(fā)揮作用，或同時(shí)整合干預(yù)措施本身的治療效果，是一種綜合提高療效的策略。Morimoto等〔60〕在干細(xì)胞移植后使用電刺激器刺激右側(cè)額葉硬膜外間隙，結(jié)果顯示大鼠移植BM-MSCs的遷移能力增強(qiáng)，腦梗死體積減少，行為改善明顯。Kim等〔61〕通過(guò)MSCs移植聯(lián)合百會(huì)、大椎穴電針，兩種干預(yù)都是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的刺激因子，可促進(jìn)BDNF、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4等因子的表達(dá)，這些神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子與缺血腦的神經(jīng)發(fā)生有關(guān)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果聯(lián)合療法比單一治療更好地調(diào)節(jié)神經(jīng)發(fā)生引起更明顯的神經(jīng)功能改善。Kim等〔62〕實(shí)驗(yàn)表明當(dāng)歸提取物協(xié)同MSCs可通過(guò)增強(qiáng)血管新生提高治療作用，這種混合應(yīng)用方式為治療包括腦卒中、創(chuàng)傷和脊髓損傷在內(nèi)的多種疾病提供了新的方案。Choi等〔63〕認(rèn)為血腦屏障是限制干細(xì)胞療效的重要結(jié)構(gòu)，體外實(shí)驗(yàn)表明替莫唑胺、甘露醇聯(lián)合使用可增加血腦屏障通透性，因此在腦卒中模型造模28 d后使用替莫唑胺、甘露醇聯(lián)合hUC-MSCs移植，結(jié)果證實(shí)對(duì)慢性腦卒中大鼠模型聯(lián)合應(yīng)用比hUC-MSCs單獨(dú)應(yīng)用治療更有效，可改善大鼠行為缺陷。雖然在兩組大鼠腦內(nèi)均未檢測(cè)到hUC-MSCs，但與單純使用干細(xì)胞治療相比，聯(lián)合使用干細(xì)胞、甘露醇、替莫唑胺可增加干細(xì)胞產(chǎn)生微囊泡的腦內(nèi)遞送，以此促進(jìn)神經(jīng)再生和血管生成來(lái)減少行為缺陷。

綜上，大量基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)證明MSCs移植療法在IS應(yīng)用中的可行性、有效性，并從多種機(jī)制闡述了其作用機(jī)制。然而，由于干細(xì)胞移植過(guò)程較為復(fù)雜，可供選擇的移植參數(shù)眾多，何種方式移植可以在保證安全性的前提下使干細(xì)胞移植達(dá)到最佳療效，且消耗較少的干細(xì)胞資源，是當(dāng)前仍需解決的重要問(wèn)題。這個(gè)問(wèn)題影響著臨床試驗(yàn)的設(shè)計(jì)，掌握高效的干細(xì)胞移植策略成為臨床應(yīng)用推廣的一個(gè)重要前提。由于移植參數(shù)多樣復(fù)雜，干細(xì)胞來(lái)源、移植劑量、移植途徑、移植時(shí)間等各方面的選擇均會(huì)影響治療的有效性及安全性，為確定最佳移植方式，未來(lái)還需大量系統(tǒng)、巧妙、合理設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)和后期大樣本重復(fù)的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。另外機(jī)制的探討、挖掘有助于在常規(guī)干細(xì)胞移植方法基礎(chǔ)上改良策略。聯(lián)合療法、預(yù)處理、細(xì)胞改造等方式可通過(guò)干預(yù)干細(xì)胞治療機(jī)制，提高治療有效性，降低不良事件發(fā)生，為IS治療提供新的有效方案?？傊?，MSCs移植療法在IS臨床應(yīng)用中前景廣闊，相信不久的將來(lái)會(huì)在臨床中體現(xiàn)出不可替代的作用。