張頌函，陳 秀，李玉博，黃蘭淇，高永東，趙 莉*

（1.上海市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，上海 201103；2.上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，上海 201106）

桃樹(shù)褐腐病是一種由鏈核盤菌屬（Monilinia）真菌引起的病害，其分布廣、傳播快、潛在危害重[1]。該病可危害桃樹(shù)的花器、葉片和枝梢，并導(dǎo)致嚴(yán)重落果和爛果[2-3]。近年來(lái)，桃樹(shù)褐腐病在上海發(fā)生程度越來(lái)越重，嚴(yán)重降低桃的產(chǎn)量和品質(zhì)，給本地桃產(chǎn)業(yè)的安全生產(chǎn)構(gòu)成了嚴(yán)重威脅[3]。當(dāng)前我國(guó)登記用于防治桃樹(shù)褐腐病的農(nóng)藥品種非常少，僅有9個(gè)產(chǎn)品，涉及10個(gè)有效成分[4]。

異菌脲（Iprodione）作為一種廣譜觸殺型二甲酰亞胺類殺菌劑，對(duì)葡萄孢屬（Botrytis）、鏈孢霉屬（Neurospora）、核盤菌屬（Sclerotinia）、小菌核屬（Sclerotium）等真菌有較好的殺菌效果[5]，對(duì)病菌的孢子、菌絲體、菌核同時(shí)起作用，抑制病菌孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)。異菌脲在植物體內(nèi)幾乎不能滲透，以觸殺和保護(hù)作用為主，也具有一定的治療作用[6]。目前已經(jīng)登記在甜瓜（Cucumiu melo）、葡萄（Vitis vinifera）、蘋果樹(shù)（Malus pumila）等作物上防治灰霉病、菌核病等病害[4]。

為拓寬桃樹(shù)褐腐病防治藥劑種類，延緩病原菌抗藥性的發(fā)生發(fā)展，本研究通過(guò)開(kāi)展田間藥效和農(nóng)藥殘留試驗(yàn)，評(píng)價(jià)了異菌脲對(duì)桃樹(shù)褐腐病防治效果及膳食風(fēng)險(xiǎn)，為50%異菌脲WP在桃樹(shù)上的合理使用和膳食安全提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

50%異菌脲WP，興農(nóng)藥業(yè)（中國(guó)）有限公司；24%腈苯唑SC，科迪華農(nóng)業(yè)科技有限責(zé)任公司；1 001.1μg/mL異菌脲標(biāo)準(zhǔn)品，北京振翔科技有限公司。

乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純），德國(guó)Merck公司；甲酸（色譜純），美國(guó)安捷倫公司；氯化鈉（分析純），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。LC MS-8045三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀（統(tǒng)計(jì)分析軟件：LabSolution Version 5.91），島津（中國(guó)）有限公司；Talboys數(shù)顯多管渦旋混合器，Talboys公司；離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠。

各省開(kāi)展試驗(yàn)的桃樹(shù)品種由每個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)提供，具體品種信息如下：‘錦繡黃桃’（上海）、‘胭脂脆桃’（四川）、‘倉(cāng)方早生’（山東）；‘水蜜桃’（上海）、‘北京14號(hào)’（北京）、‘北京7號(hào)’（寧夏）、‘森泰四號(hào)’（河南）、‘黃桃’（湖南）、‘白花桃’（貴州）、‘春雪’（山東）、‘鷹嘴桃’（廣東）。

1.2 異菌脲防治桃樹(shù)褐腐病田間藥效試驗(yàn)

在上海、四川、山東3地進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)共設(shè)置5個(gè)處理，處理1、2、3為試驗(yàn)藥劑組，處理4為對(duì)照藥劑，處理5為空白對(duì)照（表1）。每個(gè)處理4次重復(fù)，小區(qū)隨機(jī)區(qū)組排列，每小區(qū)2株桃樹(shù)。于桃樹(shù)謝花后開(kāi)始施藥，間隔7～14 d施藥1次，連續(xù)施藥3次。空白對(duì)照區(qū)使用清水處理。于桃收獲期每小區(qū)調(diào)查2株樹(shù)，每株樹(shù)分東、西、南、北、中5個(gè)方向各隨機(jī)抽取10個(gè)果實(shí)，調(diào)查病果數(shù)。按式（1）和（2）分別計(jì)算病果率和防效。

表1 異菌脲防治桃樹(shù)褐腐病田間藥效試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3 異菌脲在桃樹(shù)上殘留試驗(yàn)

1.3.1 田間試驗(yàn)

在上海、北京、山東、寧夏、湖南、貴州、河南和廣東8地開(kāi)展試驗(yàn)，使用劑量為500 mg/kg（1 000倍），設(shè)3次施藥，施藥間隔7 d，小區(qū)為4株樹(shù)，另設(shè)清水空白對(duì)照處理（4株樹(shù)），施藥后第7、14 d和21 d分別采集樣品。從4株樹(shù)上的各部位（上、下、內(nèi)、外、向陽(yáng)和背陰面）隨機(jī)采集12個(gè)生長(zhǎng)正常、無(wú)病害的桃果實(shí)，至少2 kg。

1.3.2 樣品制備和前處理

將田間桃樣品去除果柄和果核后，記錄果核比，切塊，采用四分法分取不少于400 g，3份，裝入樣品容器中，貼好標(biāo)簽，于（-20±2）℃條件下保存。準(zhǔn)確稱取均勻制樣的桃樣品5.00 g于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈渦旋提取20 min，再加入3 g氯化鈉，渦旋30 s，5 000 r/min離心5 min。取上清液過(guò)0.22μm的PTFE濾膜后，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定殘留量。

1.3.3 檢測(cè)條件

色譜條件。Waters Acquity色譜柱（2.1 mm×50 mm，1.7μm）；柱溫：40℃；流速：0.50 mL/min；進(jìn)樣量：5μL；梯度洗脫條件如表2。

表2 液相色譜梯度洗脫條件

質(zhì)譜條件。離子源：電噴霧離子源ESI；掃描方式：正離子模式；霧化器流量：3 L/min；加熱器流量：10 L/min；接口溫度：300℃；脫溶劑溫度：250℃；加熱塊溫度：400℃；干燥氣流量：10 L/min；檢測(cè)方式：多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）如表3。

表3 多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)參數(shù)

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

將1 001.1μg/mL的異菌脲標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用乙腈配制成10 mg/L異菌脲工作液。分別用乙腈和空白桃基質(zhì)稀釋配制成0.01、0.05、0.1、0.5 mg/L和1 mg/L系列溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，在1.3.3所述的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜條件下進(jìn)行測(cè)定，以異菌脲質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，分別作溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線。

1.3.5 添加回收試驗(yàn)

在空白桃基質(zhì)中添加0.02、1 mg/kg和10 mg/kg的異菌脲標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)添加量重復(fù)5次，按1.3.2節(jié)分析方法提取并檢測(cè)，測(cè)定回收率。

1.4 基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)（ME）的計(jì)算公式為式（3）。

1.5 異菌脲在桃全果中殘留量

按式（4）計(jì)算異菌脲在桃全果中殘留量。

式中：X為桃全果中異菌脲殘留量，mg/kg；α為為桃核重量與桃全果重量的比值，%；C為異菌脲溶液質(zhì)量濃度，mg/L；n為前處理過(guò)程中的稀釋倍數(shù)；V為定容體積，mL；m為樣品稱樣質(zhì)量，g。

按照果肉中的殘留量和核果比折算成全果中的殘留量，即全果殘留量=果肉中殘留量×（1-α），若殘留量低于定量限，則無(wú)需折算，直接以定量限計(jì)。

1.6 異菌脲在桃中膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

在毒理學(xué)和化學(xué)殘留量基礎(chǔ)上，根據(jù)我國(guó)居民膳食消費(fèi)量，估算農(nóng)藥膳食攝入量，包括長(zhǎng)期/短期攝入，評(píng)估膳食風(fēng)險(xiǎn)[7]，按式（5）～（6）計(jì)算。

式中：NEDI為國(guó)家估算每日攝入量，mg；STMRi為異菌脲在某一食品中的規(guī)范殘留試驗(yàn)中值，mg/kg；Fi為一般人群某一食品的消費(fèi)量，kg。ADI為農(nóng)藥每日允許攝入量，mg/kg bw；bw為我國(guó)普通人群人均體重，按63 kg計(jì)[7]。計(jì)算NEDI時(shí)，如果沒(méi)有合適的STMR，可以使用相應(yīng)的MRL值代替[7]。RQ為風(fēng)險(xiǎn)概率，%。當(dāng)RQ≤100%時(shí)，認(rèn)為該農(nóng)藥殘留對(duì)一般人群健康的影響在可接受的風(fēng)險(xiǎn)水平，值越小，風(fēng)險(xiǎn)越低。

2 結(jié)果與分析

2.1 異菌脲對(duì)桃樹(shù)褐腐病的防效

為明確異菌脲對(duì)桃樹(shù)褐腐病作用效果及防效穩(wěn)定性，根據(jù)農(nóng)藥登記田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則，2021在四川、山東、上海3地開(kāi)展了異菌脲防治桃樹(shù)褐腐病田間藥效試驗(yàn)，田間藥效試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。供試藥劑50%異菌脲WP不同施藥劑量對(duì)桃樹(shù)褐腐病均表現(xiàn)出顯著的防效，且隨著施藥濃度的提高，防效也逐步提高。在四川地區(qū)，50%異菌脲WP 3個(gè)施藥濃度的防效為68.00%～78.00%，對(duì)照藥劑24%腈苯唑SC防效為72.00%；50%異菌脲WP 1 500倍液與1 000、2 000倍液防效相當(dāng)，1 000倍液防效在0.05水平上顯著高于對(duì)照藥劑防效，而1 500、2 000倍液防效與對(duì)照藥劑防效相當(dāng)。在山東地區(qū)，50%異菌脲WP防效為76.32%～85.53%，其1 500、1 000倍液防效在0.05水平上顯著高于2 000倍液防效，1 000倍液防效與對(duì)照藥劑防效86.84%相當(dāng)。在上海地區(qū)，50%異菌脲WP防效為58.44%～76.62%，對(duì)照藥劑防效為63.64%，供試藥劑1 500倍液防效與1 000、2 000倍液防效差異不顯著，其3個(gè)劑量防效與對(duì)照藥劑防效相當(dāng)。試驗(yàn)結(jié)果表明，10%異菌脲WP在3個(gè)地區(qū)對(duì)桃樹(shù)褐腐病均表現(xiàn)出較好的防效，總體防效與對(duì)照藥劑24%腈苯唑SC相當(dāng)，在生產(chǎn)上可有效控制桃樹(shù)褐腐病的危害。此外，試驗(yàn)過(guò)程中3地桃樹(shù)生長(zhǎng)正常，未觀察到藥害癥狀。

表4 50%異菌脲WP防治桃樹(shù)褐腐病藥效試驗(yàn)結(jié)果

2.2 異菌脲在桃中的殘留

2.2.1 方法驗(yàn)證

異菌脲在桃中的基質(zhì)效應(yīng)為-26.6%，超過(guò)±20%要求。因此，本文采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行定量分析。在0.01～1 mg/L范圍內(nèi)，異菌脲標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度與其響應(yīng)值間的線性關(guān)系良好。溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液線性回歸方程為y=196 200x-464.4，R2=1；基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液線性回歸方程為y=114 700x+199.8，R2=0.999 9。添加水平為0.02、1 mg/kg和10 mg/kg時(shí)，異菌脲在桃中的平均回收率為89%～101%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3%～7%。異菌脲在桃中的定量限為0.02 mg/kg。本研究建立的殘留檢測(cè)方法可滿足《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[8]的要求，適用于異菌脲在桃中的殘留分析。

2.2.2 異菌脲在桃中的最終殘留量

2021年在8個(gè)試驗(yàn)省份開(kāi)展了異菌脲在桃樹(shù)上殘留試驗(yàn)。結(jié)果表明，在50%異菌脲WP施藥劑量500 mg/kg（1 000倍液）于發(fā)病初期施藥，施藥間隔期為7 d，在共施藥3次的條件下，末次施藥后7、14、21 d，其在桃果肉中殘留量分別為0.287～3.920、0.089～2.230 mg/kg和0.046～1.420 mg/kg，在桃全果中殘留量分別為0.271～3.560、0.085～2.110 mg/kg和0.044～1.340 mg/kg（表5）。

表5 異菌脲在桃中的殘留量

2.3 膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

異菌脲在我國(guó)已在黃瓜、番茄、草莓和葡萄等30種作物上取得登記。GB 2763—2021《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[9]中規(guī)定了異菌脲的ADI值為0.06 mg/kg bw。根據(jù)異菌脲在中國(guó)登記使用情況，以及居民人均膳食結(jié)構(gòu)調(diào)查數(shù)據(jù)，結(jié)合本研究得到的殘留試驗(yàn)中值進(jìn)行膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。為遵循風(fēng)險(xiǎn)最大化原則，選用末次施藥后7 d桃果肉中的異菌脲殘留中值1.140 mg/kg進(jìn)行膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。根據(jù)表6中的評(píng)估數(shù)據(jù)可知，普通人群異菌脲的國(guó)家估算每日攝入量為1.003 1 mg，RQ為26.5%，結(jié)果表明異菌脲對(duì)一般人群健康風(fēng)險(xiǎn)可接受。

表6 異菌脲膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型

3 討論與結(jié)論

桃樹(shù)是我國(guó)重要的果樹(shù)之一，在我國(guó)種植范圍廣，品種多，產(chǎn)值高，經(jīng)濟(jì)價(jià)值可觀。陳笑瑜等[10]于2006年發(fā)表的文章中報(bào)道了北京地區(qū)桃褐腐病菌對(duì)異菌脲比較敏感，未產(chǎn)生明顯抗性群體，表明異菌脲對(duì)桃褐腐病具有較好的防治效果。李正[11-12]研究報(bào)道了50%撲海因可濕性粉劑和50%速克靈可濕性粉劑（有效成分均為異菌脲）對(duì)上海地區(qū)桃褐腐病的防效在70%左右，另外李正[13]也報(bào)道了50%撲海因可濕性粉劑對(duì)山東地區(qū)桃褐腐病的防效在75%左右。這些研究結(jié)論與本研究中在上海、四川、山東3地的田間藥效試驗(yàn)結(jié)果是基本一致的，且因桃褐腐病對(duì)果實(shí)的商品性影響極大，相較于李正等[11-13]采用的葉片發(fā)病情況計(jì)算防效，本研究中采用調(diào)查病果率來(lái)計(jì)算防效可能更加符合生產(chǎn)實(shí)際。

關(guān)于異菌脲在作物中的殘留研究，在蘋果[14]、番茄[15]、大白菜[16]和蔥[17]等作物上已有相關(guān)報(bào)道，但未有在桃樹(shù)上相關(guān)試驗(yàn)報(bào)道。宋國(guó)春等[14]報(bào)道了50%異菌脲懸浮劑稀釋500～1 000倍防治蘋果病害在蘋果中的最終殘留量在4.16～0.16 mg/kg之間，異菌脲在蘋果上的MRL值5 mg/kg。張正輝等[15]報(bào)道了異菌脲施藥劑量為157.5 g a.i/hm2，在設(shè)施番茄和露地番茄上藥后7 d的最終殘留量分別為0.10～0.73 mg/kg和＜0.01～0.25 mg/kg，均小于異菌脲在番茄上的MRL值5 mg/kg。邵燕等[16]報(bào)道了50%異菌脲可濕性粉劑施用500 g a.i/hm2，在大白菜中的最終殘留量為0.00337～0.351 mg/kg之間。本研究中異菌脲在桃果肉中的最終殘留量在0.046～3.920 mg/kg之間，小于異菌脲在桃中的最大殘留限量10 mg/kg。相關(guān)殘留研究表明，異菌脲在不同作物中的最終殘留量不一樣，這跟不同的施藥劑量和次數(shù)以及不同的作物種類的降解特性有關(guān)，但最終殘留量均可被接受。此外，上述研究?jī)H開(kāi)展了異菌脲在作物中的殘留狀況研究，并未開(kāi)展相應(yīng)的膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。韓永濤等[17]開(kāi)展了異菌脲在蔥中的殘留狀況研究和膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。結(jié)果表明，255 g/L異菌脲懸浮劑按推薦劑量和推薦安全間隔期在蔥上施用不會(huì)對(duì)一般人群造成膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)。這與本研究獲得的“通過(guò)桃攝入異菌脲殘留對(duì)人體產(chǎn)生的長(zhǎng)期膳食風(fēng)險(xiǎn)較低，對(duì)一般人群健康風(fēng)險(xiǎn)可接受”結(jié)論一致。

綜合田間藥效試驗(yàn)和殘留試驗(yàn)結(jié)果，建議異菌脲可登記用于生產(chǎn)中防治桃樹(shù)褐腐病，推薦制劑稀釋1 000～1 500倍（有效成分333.3～500 mg/kg），于桃樹(shù)謝花后開(kāi)始施藥，施藥間隔7～14 d，連續(xù)施藥3次，安全間隔期為7 d。在推薦劑量范圍內(nèi)可放心使用，為桃樹(shù)褐腐病的防治藥劑提供多種選擇。另外，建議與已登記的其他不同作用機(jī)制的殺菌劑輪換使用，以延緩抗性產(chǎn)生和發(fā)展。