查欣欣，曲 瀅，杜功名，萬宏劍，余鵬敏，葉 劍，王永青

（1.江蘇恒生檢測(cè)有限公司，南京 210046；2.江蘇省濱海縣植物保護(hù)站，鹽城 224500）

甲哌鎓（Mepiquat chloride），化學(xué)名稱為五硼酸1,1-二甲基哌啶鎓鹽（圖1），CAS號(hào)為24307-26-4，分子量為149.7，分子式為C7H16ClN，屬于季銨鹽化合物，易溶于水，其陽離子以游離形態(tài)存在于溶液中。甲哌鎓是一種新型植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，對(duì)植物有較好的內(nèi)吸傳導(dǎo)性，通過縮短稈長(zhǎng)和加強(qiáng)稈壁可以提高小麥植株的抗倒伏能力。主要混劑有甲哌鎓·乙烯利、甲哌鎓·葉菌唑、甲哌鎓·多效唑、甲哌鎓·烯效唑，可以提高小麥抗倒伏能力、產(chǎn)量和品質(zhì)[1-3]。

圖1 甲哌鎓結(jié)構(gòu)式

評(píng)估甲哌鎓化學(xué)殘留時(shí)，需要同時(shí)考慮用于監(jiān)管MRL的殘留定義[4]和用于膳食攝入評(píng)估的殘留定義[5]，兩者殘留定義均為甲哌鎓陽離子，以甲哌鎓計(jì)。目前國(guó)標(biāo)制定了甲哌鎓在小麥、棉籽、大豆、花生仁、馬鈴薯和甘薯上的最大殘留限量（MRL），但未推薦任何關(guān)于甲哌鎓的檢測(cè)方法。目前已有文獻(xiàn)用質(zhì)譜檢測(cè)甲哌鎓在棉花、大豆、水稻和土壤中殘留[6-9]，主要檢測(cè)方法為離子色譜法和共振光散射法[8-12]。而關(guān)于甲哌鎓在小麥上的殘留分析方法尚未見報(bào)道，因此，本研究旨在建立一種超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定小麥中甲哌鎓的殘留分析方法，為甲哌鎓的膳食風(fēng)險(xiǎn)攝入評(píng)估提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

91.1%甲哌鎓（標(biāo)準(zhǔn)品），廣州佳途科技股份有限公司；乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純），TEDIA；甲酸（分析純）、乙酸銨（分析純），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；氯化鈉（分析純），江蘇強(qiáng)盛功能化學(xué)股份有限公司；N-丙基乙二胺，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；無水硫酸鎂（分析純），上海麥克林生化科技有限公司。

濾膜（0.22μm），天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；超純水儀，默克化工技術(shù)（上海）有限公司；AL204萬分之一天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；AM600刀式研磨儀，螞蟻源科學(xué)儀器有限公司；ACQUITY UPLC BEH Amide C18柱（2.1 mm×100 mm，1.7μm）、Waters Xevo TQD液相質(zhì)譜儀，沃特世科技（上海）有限公司。

1.2 試驗(yàn)材料

小麥品種為‘鎮(zhèn)麥12號(hào)’，由江蘇恒生檢測(cè)有限公司提供。

1.3 檢測(cè)條件

色譜柱：ACQUITY UPLC BEH Amide C18柱，2.1 mm×100 mm（內(nèi)徑），1.7μm（粒徑）；柱溫：30℃；進(jìn)樣體積：5μL；流動(dòng)相A：5 mmol/L乙酸銨-0.1%甲酸水，流動(dòng)相B：甲醇，梯度進(jìn)樣條件見表1。

表1 梯度洗脫條件

離子源類型：ESI；掃描方式：正離子掃描;離子源溫度：110℃；脫溶劑氣溫度：400℃；毛細(xì)管電壓：3.5 kV；脫溶劑為N2，流量：500 L/h；碰撞氣為Ar，流量：0.10 mL/min；保留時(shí)間：1.47 min；檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），見表2。

表2 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)條件

1.4 樣品的提取及凈化

準(zhǔn)確稱取小麥籽粒5.0 g、小麥秸稈2.5 g，置于50 mL離心管中，加入20 mL 0.2 mol/L乙酸銨-0.1%甲酸水：甲醇（9∶1，V/V），渦旋1 min，振蕩30 min，5000 r/min離心5 min。取1.0 mL上清液至裝有50 mg PSA和50 mg GCB的1.5 mL離心管中，渦旋30 s，10000 r/min離心5 min，取上清液過0.22μm水系濾膜，待UPLC-MS/MS檢測(cè)。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取0.010 4 g甲哌鎓標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇定容至10 mL，用甲醇逐級(jí)稀釋配制成100、10 mg/L和1 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，于0～4℃保存，備用。

1.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別用溶劑空白、小麥籽粒空白基質(zhì)溶液、小麥秸稈基質(zhì)空白溶液配制濃度為0.5、0.2、0.1、0.05、0.02、0.01、0.005 mg/L的甲哌鎓系列溶液，按照1.3的檢測(cè)條件，以甲哌鎓進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制溶劑空白和基質(zhì)空白標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.7 添加回收試驗(yàn)

分別在小麥籽粒和秸稈空白樣品中添加甲哌鎓標(biāo)準(zhǔn)溶液，制備成0.05、0.5、1 mg/kg的添加樣品，每個(gè)添加水平做5個(gè)平行，同時(shí)做2個(gè)空白樣品（不加標(biāo)準(zhǔn)溶液）和1個(gè)全溶劑空白樣品（不加樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液），計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，評(píng)價(jià)檢測(cè)方法有效性。

1.8 計(jì)算

按式（1）（2）分別計(jì)算比斜率和回收率。

式中：K為比斜率，Am表示空白基質(zhì)中標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率，Ac表示純?nèi)軇┲袠?biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。

式中：r為回收率，%；Cs為樣品的檢測(cè)濃度，mg/kg；Ct為添加濃度，mg/kg。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)方法線性相關(guān)性分析

甲哌鎓的溶劑空白、小麥籽?？瞻谆|(zhì)溶液、小麥秸稈基質(zhì)空白溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線方程和相關(guān)系數(shù)見表3。在0.005～0.5 mg/L線性范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)均大于0.999，表明檢測(cè)方法的線性關(guān)系良好。

表3 甲哌鎓標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

根據(jù)添加回收試驗(yàn)得出，甲哌鎓在小麥籽粒和秸稈的定量限均為0.05 mg/kg，最小檢出量均為0.025 ng。

2.2 基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià)

檢測(cè)溶劑空白和基質(zhì)空白（小麥籽粒、秸稈），在目標(biāo)峰位置的干擾峰響應(yīng)均滿足不超過30%定量限峰響應(yīng)的要求[13]。

基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線與標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率的比值（K）可用來表示基質(zhì)效應(yīng)的強(qiáng)弱[14]。K大于1為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，小于1為弱基質(zhì)效應(yīng)，越接近1，基質(zhì)影響越小。根據(jù)表3計(jì)算，小麥籽粒和秸稈空白基質(zhì)的K值分別為1.29和1.30，均為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，為提高檢測(cè)準(zhǔn)確度，本研究樣品檢測(cè)均使用基質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.3 正確度和精密度分析

甲哌鎓在小麥中的MRL值為0.5 mg/kg，因此添加濃度設(shè)置為0.05、0.5 mg/kg和1 mg/kg，符合準(zhǔn)則中規(guī)定：如果已制定相關(guān)MRL值，添加水平應(yīng)包括MRL值和檢測(cè)方法定量限[13]。從表4可知，甲哌鎓在小麥籽粒和小麥秸桿中平均回收率分別為91%～103%和78%～84%；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.3%～6.6%和2.8%～8.9%。試驗(yàn)結(jié)果表明檢測(cè)方法正確度和精密度良好，穩(wěn)定可靠。

表4 甲哌鎓加標(biāo)平均回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=5）

3 結(jié)論

本研究建立了一種超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定小麥中甲哌鎓殘留量的分析方法。該檢測(cè)方法在0.005～0.5 mg/L范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。添加水平為0.05、0.05 mg/kg和1 mg/kg時(shí)，方法回收率為78%～103%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.3%～8.9%。該分析方法的靈敏度和精確性滿足農(nóng)藥殘留化學(xué)評(píng)估的監(jiān)管MRL和膳食攝入評(píng)估的殘留量檢測(cè)需求，具有操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，可用于甲哌鎓在小麥中的殘留檢測(cè)分析。