蔣青榮，劉 璇，劉偉國(guó)，楊立彬*

1.固安君德同創(chuàng)生物工程有限公司，河北廊坊 065500；

2.北京君德同創(chuàng)生物技術(shù)股份有限公司，北京 100085

胍基乙酸（GAA）屬于氨基酸及其衍生物，是肌酸的唯一前提物質(zhì)，可以通過代謝途徑提高動(dòng)物體內(nèi)肌酸水平以調(diào)節(jié)能量代謝，提高動(dòng)物生長(zhǎng)速度；通過調(diào)節(jié)氨基酸代謝，提高蛋白質(zhì)沉積，改善肉品質(zhì)，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)外界的抗逆性，具有其他氨基酸無法替代的作用[1-7]。

GAA 在瘤胃中易被微生物降解，最終到達(dá)小腸被吸收利用的量較少。Hannah 等[8]以荷斯坦公牛為研究對(duì)象，在其瘤胃或真胃中注射GAA，通過血漿肌酸和尿肌酸濃度估算GAA 的吸收利用率發(fā)現(xiàn)，瘤胃注入GAA 的效果約為真胃注入GAA 的50%。在實(shí)際生產(chǎn)中，常采用纖維素包被、聚合物膠囊包被、酵母富集等方法，降低氨基酸類物質(zhì)在反芻動(dòng)物瘤胃中的降解率，提高小腸吸收利用率，進(jìn)而減少在反芻動(dòng)物飼料中的使用量，節(jié)約飼料成本。本試驗(yàn)以一種新研發(fā)的包被胍基乙酸（CGAA）為研究對(duì)象，采用體外法測(cè)定CGAA 產(chǎn)品在不同緩沖液中的釋放率，衡量GAA 的包被效果，旨在為后續(xù)制劑的開發(fā)和在生產(chǎn)中的使用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

GAA 樣品(有效含量≥96%）和CGAA 樣品（有效含量≥70%）均由固安君德同創(chuàng)生物工程有限公司提供。甲醇、乙腈，色譜純，購(gòu)自賽默飛世爾科技有限公司。檸檬酸、磷酸氫二鈉、碳酸氫鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂等均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

1.2 主要儀器

高效液相色譜儀（安捷倫1260 InfintyⅡ）、恒溫水浴鍋（HWS-28）、超聲水浴鍋（KQ5200DE）。

1.3 溶液的制備

人工唾液模擬反芻動(dòng)物口腔，按文獻(xiàn)[9]配制，具體配方見表1。

表1 人工唾液配方 g

pH 6.6、pH 5.4、pH 2.4 緩沖液分別模擬反芻動(dòng)物瘤胃、真胃、十二指腸，按文獻(xiàn)[10]配制，具體配方見表2。

表2 不同pH 值緩沖液配方 g

1.4 試驗(yàn)方法

準(zhǔn)確稱取5.0 g（精確至0.001 g）GAA（GAA組）和CGAA（CGAA 組）樣品放入50 mL 具塞試管底部，加入20 mL 人工唾液、pH 6.6、pH 5.4 和pH 2.4 緩沖液中，蓋緊試管在39 ℃恒溫水浴鍋內(nèi)消化4、8、12、24 h，沖洗、過濾，濾液定容至50 mL 容量瓶中，充分混合均勻后，收集濾液。采用高效液相色譜法測(cè)定濾液中的GAA 含量（具體測(cè)定色譜條件見本文“1.5”），計(jì)算樣品在人工消化液中的釋放率。

釋放率=濾液中GAA 含量/樣品中GAA 含量×100%。

1.5 含量測(cè)定色譜條件

使用Kromasil NH2 色譜柱對(duì)樣品進(jìn)行色譜分析。流動(dòng)相為配比為40∶60 的磷酸氫二鈉水溶液與乙腈，磷酸氫二鈉水溶液pH 值為8，流速為1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為200 nm，柱溫為35 ℃，進(jìn)樣量為20 μL。

1.6 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 處理后，采用SPSS 23.0 軟件中的獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

由表3 可知，GAA 組和CGAA 組在人工唾液、人工瘤胃液、人工真胃液、人工腸液中的釋放率均隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而提高。與GAA 組相比，CGAA 組在人工唾液、人工瘤胃液、人工真胃液中各時(shí)間點(diǎn)的釋放率均極顯著較低，在人工腸液中各時(shí)間點(diǎn)的釋放率無顯著差異。CGAA 在人工瘤胃液中24 h 釋放率不超過8.51%，在人工腸液中8 h 釋放率可達(dá)99.76%。結(jié)果表明，CGAA 組樣品在人工唾液、人工瘤胃液中具有良好的穩(wěn)定性，在人工真胃液中逐漸釋放，在人工小腸液中快速釋放，不存在過保護(hù)現(xiàn)象。

表3 CGAA 在人工消化液中的釋放率 %

3 結(jié) 論

CGAA 在人工唾液、人工瘤胃液中具有良好的穩(wěn)定性，且在人工腸液中與GAA 具有同等良好的釋放率。