連增維，龔小麗，陳月紅，胡彧嫻，倪建成，胡銀鳳,

（1.漳州市農(nóng)業(yè)檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)中心，福建漳州 363000；2.吉克檢測(cè)技術(shù)（福建）有限公司，福建漳州 363005；3.寧德師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，福建寧德 352100）

三唑磷是廣譜性的有機(jī)磷殺蟲殺螨劑，還兼有一定的殺線蟲作用[1-2]。截至2022年3月25日，從中國農(nóng)藥信息網(wǎng)上可以查到有效成分含三唑磷的農(nóng)藥登記產(chǎn)品有387個(gè)，其中用于水稻防治螟蟲、稻水象甲和稻癭蚊的有338種；用于棉花防治棉鈴蟲和紅鈴蟲的有30種[3]。在國內(nèi)，農(nóng)業(yè)部2032號(hào)公告決定自2016年12月31日起，禁止在蔬菜上使用[4]。而目前GB 2763-2021卻沒有規(guī)定三唑磷在茶葉上的使用限量，導(dǎo)致地方政府抽檢的行政處罰缺少法律依據(jù)[5]；在國外，三唑磷被世界衛(wèi)生組織定義為高毒農(nóng)藥，日本、美國和歐盟在茶葉上的殘留限量均為0.01 mg/kg，而印度自2020年12月31日起禁用三唑磷[6-8]。出口的茶葉的三唑磷殘留限量低，而國內(nèi)部分茶農(nóng)在茶葉的生產(chǎn)種植過程中會(huì)使用三唑磷防治紅蜘蛛等[9]，導(dǎo)致茶葉中的三唑磷時(shí)有檢出，有研究表明茶葉中三唑磷在沖泡過程中的浸出率為30%左右[10]，對(duì)飲茶愛好者構(gòu)成潛在的健康威脅。

目前，《國家食品安全監(jiān)督抽檢實(shí)施細(xì)則（2022年版）》規(guī)定了豇豆、柑、橘、橙需要抽檢三唑磷項(xiàng)目，采用GB 2763進(jìn)行判定，檢測(cè)方法為GB 23200.113、GB 23200.116、GB 23200.121或NY/T 761?！稒z驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定能力評(píng)價(jià) 食品復(fù)檢機(jī)構(gòu)要求》里面規(guī)定了食品復(fù)檢項(xiàng)目除了給出檢測(cè)結(jié)果外，還需提供相應(yīng)的擴(kuò)展不確定度[11]。測(cè)量不確定度是用于評(píng)價(jià)不同人檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量的一個(gè)重要參數(shù)，是用來表征檢測(cè)結(jié)果的分散程序，其數(shù)值的大小反映了檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量的高低，在特定條件下還與檢測(cè)結(jié)果的符合性判定相關(guān)[12-14]。目前主流實(shí)驗(yàn)室測(cè)定茶葉中的三唑磷殘留量主要采用的測(cè)定方法是GB 23200.113（GC-MS/MS）和GB 23200.13（LC-MS/MS），而早期一些文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的農(nóng)產(chǎn)品（蔬菜、谷物和茶葉）中三唑磷不確定度評(píng)定涉及的主要檢測(cè)設(shè)備是氣相色譜儀（配備火焰光度檢測(cè)器，GC-FPD）和氣相色譜儀串聯(lián)質(zhì)譜儀（配EI源，GC-MS），而采用LC-MS/MS檢測(cè)方法評(píng)定三唑磷的不確定度的基質(zhì)是中藥材元胡，其不確定度的來源主要有添加回收率、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合、數(shù)據(jù)修約、體積量取定容、儀器穩(wěn)定性、標(biāo)準(zhǔn)溶液配制[15-21]，未見有人對(duì)采用GC-MS/MS法測(cè)定茶葉中的三唑磷殘留量的不確定度進(jìn)行評(píng)定，且已有的文獻(xiàn)均是采用GUM法評(píng)定，未見有采用控制圖法進(jìn)行評(píng)定。

本文采用GC-MS/MS法對(duì)綠茶中的三唑磷殘留量進(jìn)行檢測(cè)，并用GUM法和控制圖法分別對(duì)茶葉中的三唑磷的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行不確定度評(píng)定，通過比較和分析GUM法和控制圖法的優(yōu)劣，為實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)，為其他檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)提供不確定度評(píng)定思路。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

綠茶 購自當(dāng)?shù)爻?；三唑?CAS：24017-47-8，德國Dr.E公司，純度99.99%，擴(kuò)展不確定度0.3%；乙腈、乙酸乙酯、乙酸 均為色譜純，德國Merck公司；氯化鈉、硫酸鎂 均為分析純，西隴科學(xué)股份有限公司 ；C18粉末、N-丙基乙二胺（PSA）粉末、石墨化炭黑（GCB）粉末 天津博納艾杰爾科技有限公司。

TSQ 8000 EVO三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀 配EI源，賽默飛世爾科技（中國）有限公司；LA130SF電子天平 德國Sartorius公司；MS3 Basic渦旋振蕩器 德國IKA公司；HGC-12A氮吹儀 上海禾工科學(xué)儀器有限公司；HP-5MS毛細(xì)管柱（規(guī)格：30 m×0.25 mm，0.25 μm） 美國Agilent公司；SIGMA2-16K臺(tái)式離心機(jī) 德國Sartorius公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品前處理 自制質(zhì)控樣品：取1 kg綠茶于粉碎機(jī)粉碎后，過425 μm的標(biāo)準(zhǔn)篩網(wǎng)過篩，混勻，從中稱取400 g樣品并加入100 μg/mL的三唑磷標(biāo)液0.50 mL，混勻并放入粉碎機(jī)重新粉碎一次后用自封袋封裝后置于-18 ℃中冷凍保存?zhèn)溆?。剩余未添加三唑磷的樣品可用于制作?biāo)準(zhǔn)曲線的空白基質(zhì)和回收率的考察，用自封袋封裝后置于-18 ℃中冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

準(zhǔn)確稱取2 g（精確至0.01 g）綠茶粉末至50 mL塑料離心管中，加入10 mL去離子水，渦旋混勻靜置30 min，加入含有1%醋酸乙腈15 mL、6 g無水硫酸鎂、1.5 g氯化鈉和一顆陶瓷均質(zhì)子，蓋上蓋子，劇烈振蕩提取3 min。于10000 r/min離心5 min，準(zhǔn)確移取上清液6 mL于15 mL凈化管中，管內(nèi)含有1200 mg無水硫酸鈉、400 mgN-丙基乙二胺硅烷（PSA）粉末，400 mg 石墨化炭黑（GCB）粉末、200 mg C18粉末渦旋凈化3 min，于10000 r/min離心5 min，準(zhǔn)確移取上清液3.00 mL于10 mL塑料離心管中氮吹至干，準(zhǔn)確移取1.00 mL乙酸乙酯復(fù)溶上機(jī)測(cè)定。

1.2.2 儀器條件 依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法GB 23200.113-2018的色譜和質(zhì)譜條件，并進(jìn)行微調(diào)。色譜柱：HP-5MS毛細(xì)管柱；進(jìn)樣口：260 ℃；分流模式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1 μL；柱流量：1.0 mL/min；升溫程序：60 ℃保持2 min，30 ℃/min升至150 ℃，5 ℃/min升至250 ℃，10 ℃/min升至300 ℃保持6 min。傳輸線溫度：280 ℃；離子源溫度：230 ℃；四極桿溫度：150 ℃；溶劑延遲5 min，其他參數(shù)與儀器自帶調(diào)諧參數(shù)一致。三唑磷的定性離子對(duì)：257.0＞162.0（CE：10 V，駐留時(shí)間20 ms）、257.0＞134.0（CE：20 V，駐留時(shí)間20 ms）；定量離子對(duì)：257.0＞162.0（CE：10 V，駐留時(shí)間20 ms）。

1.2.3 結(jié)果計(jì)算 茶葉中的三唑磷殘留量的檢測(cè)結(jié)果采用空白樣品標(biāo)準(zhǔn)加入法制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，外標(biāo)法定量，其計(jì)算公式如下：

式中：X，被測(cè)物殘留量，mg/kg；C，被測(cè)物的質(zhì)量濃度，μg/mL；V，提取液定容體積，mL；m，試樣質(zhì)量，g；V1，試樣提取溶劑體積，mL；V2，試樣分取體積，mL；R，回收率，%；1000，單位換算系數(shù)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

1.3.1 GUM法 通常情況下GUM法的評(píng)定流程：一是分析不確定度來源并建立測(cè)定模型；二是評(píng)定各分量標(biāo)準(zhǔn)不確定度；三是計(jì)算合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度；四是確定擴(kuò)展不確定度；五是報(bào)告測(cè)量結(jié)果。采用魚骨圖分析法對(duì)綠茶中三唑磷殘留量的測(cè)定過程中的不確定度來源進(jìn)行分析，其測(cè)量模型的建立與1.2.3結(jié)果計(jì)算的公式一致，并對(duì)各不確定度分量進(jìn)行不確定度評(píng)定。

1.3.2 控制圖法 在日常檢測(cè)過程中稱取2個(gè)平行質(zhì)控樣品（綠茶）與常規(guī)樣品一同檢測(cè)，并依據(jù)1.2.3結(jié)果計(jì)算數(shù)據(jù)處理，記錄和獲得一系列不同人員在不同時(shí)間下對(duì)綠茶中三唑磷殘留量進(jìn)行測(cè)定的檢測(cè)結(jié)果，再運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行異常值檢驗(yàn)、正態(tài)性和獨(dú)立性檢驗(yàn)，并作圖分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 GUM法評(píng)定綠茶中三唑磷殘留量的不確定度

2.1.1 不確定度來源分析 對(duì)綠茶中三唑磷殘留量檢測(cè)結(jié)果的不確定度來源分析見圖1。其中回收率、校準(zhǔn)曲線擬合和測(cè)量重復(fù)性屬于A類不確定度評(píng)定，其他屬于B類不確定度評(píng)定。

圖1 氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定茶葉中三唑磷殘留量的不確定度來源Fig.1 Uncertainty source for determination of triazophos in tea by GC-MS/MS

2.1.2 各標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量的評(píng)定 由1.2.3的檢測(cè)結(jié)果計(jì)算公式和圖1可知，不確定度分量有質(zhì)量濃度C、回收率R、測(cè)量重復(fù)性、樣品質(zhì)量m、體積量取V、數(shù)字修約A和儀器穩(wěn)定性Y，其中環(huán)境條件的穩(wěn)定性已經(jīng)在測(cè)量重復(fù)性里面體現(xiàn)了，不再考慮。因各不確定度分量是乘除關(guān)系，故可用簡(jiǎn)易方法進(jìn)行相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度的合成：

式中：urel（C），質(zhì)量濃度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量；urel（R），回收率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量；urel（），測(cè)量重復(fù)性的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量；urel（m），樣品質(zhì)量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量；urel（A），數(shù)字修約的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量；urel（Y），儀器穩(wěn)定性的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量；urel（V），分取或定容體積量取的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量。

2.1.2.1 被測(cè)物的質(zhì)量濃度C引入的不確定度 質(zhì)量濃度C的不確定度由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度、標(biāo)準(zhǔn)溶液配制的不確定度和標(biāo)準(zhǔn)曲線線性擬合的不確定度三個(gè)部分組成。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制又包括儲(chǔ)備液配制、儲(chǔ)備液稀釋及工作曲線配制三個(gè)過程。

a.儲(chǔ)備液配制過程引入的不確定度u（C1） 操作：用十萬分之一天平準(zhǔn)確稱取25.01 mg的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)三唑磷于50 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解定容，得到質(zhì)量濃度為500 mg/L。三唑磷純度引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（p）：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書上給出三唑磷的擴(kuò)展不確定度U（p）=0.3%，擴(kuò)展因子k=2，純度p為99.99%。則代入公式urel（p）=U（p）/（k×p）=0.3%/（2×99.99%）=0.00150。天平稱量三唑磷質(zhì)量時(shí)引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（ms）：天平的檢定證書給出的最大允差為按均勻分布計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)不確定度稱量時(shí)包括歸零和稱量?jī)蓚€(gè)操作，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度容量瓶定容時(shí)引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（V1）：JJG 196-2006《常用玻璃量器》規(guī)定20 ℃時(shí)50 mL A級(jí)容量瓶的容量充差是0.05 mL，假設(shè)為三角分布，其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為實(shí)驗(yàn)室正常的溫度波動(dòng)是（20±5）℃，乙酸乙酯的體積膨脹系數(shù)為0.00138 ℃-1，假設(shè)溫度的波動(dòng)為均勻分布，則容量瓶由溫度引入的體積不確定度為容量瓶引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為儲(chǔ)備液配制過程中所產(chǎn)生的合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

b.儲(chǔ)備液稀釋過程引入的不確定度u（C2） 操作：用1 mL移液管移取1.00 mL儲(chǔ)備液至50 mL容量瓶，用乙酸乙酯定容至刻度，搖勻，得中間液A為10 mg/L，再用另一支移液管移取1.00 mL工作液A至10 mL容量瓶，乙酸乙酯定容至刻度，搖勻，得工作液B為1.0 mg/L。移液管按均勻分布，容量瓶按三角分布，則移液管和容量瓶引入的不確定度計(jì)算見表1。

表1 儲(chǔ)備液稀釋過程引入的不確定度Table 1 Uncertainty resulting from stock solution dilution

則儲(chǔ)備液稀釋過程產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

式中：urel（V1mL移液管），1 mL移液管的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度；urel（V10mL容量瓶），10 mL容量瓶的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度；urel（V50mL容量瓶），50 mL容量瓶的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度。

c.標(biāo)準(zhǔn)工作曲線配制過程引入的不確定度u（C3） 操作：分別稱取2 g（精確至0.01 g）空白綠茶粉末于編號(hào)為1～6的50 mL離心管內(nèi)，向1～3號(hào)管內(nèi)添加40、100、200 μL質(zhì)量濃度為1.00 mg/L的工作液B，向4～6號(hào)管內(nèi)添加40、100、200 μL質(zhì)量濃度為10.0 mg/L的工作液A，按照1.2.1的樣品前處理，得到含量為0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 mg/kg的空白基質(zhì)添加的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線（標(biāo)準(zhǔn)加入法）。移液器刻度誤差參照J(rèn)JG 646-2006《移液器檢定規(guī)程》的要求，按均勻分布處理，則移液器和環(huán)境溫度波動(dòng)引入的不確定度計(jì)算見表2。

表2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線制作過程引入的不確定度Table 2 Uncertainty introduced by the production process of standard working curve

則由空白基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定過程中產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（C3）：

式中：urel（V50μL），移液器移取50 μL標(biāo)準(zhǔn)工作液引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度；urel（V100μL），移液器移取100 μL標(biāo)準(zhǔn)工作液引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度；urel（V200μL），移液器移取200 μL標(biāo)準(zhǔn)工作液引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度；urel（V1000μL），移液器移取1000 μL標(biāo)準(zhǔn)工作液引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度。

d.標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合產(chǎn)生的不確定度u（C4） 校準(zhǔn)曲線上對(duì)應(yīng)的6個(gè)濃度點(diǎn)為：0.008、0.020、0.040、0.080、0.200、0.400 mg/L，每個(gè)濃度點(diǎn)重復(fù)測(cè)定三次，得到相應(yīng)的峰面積A，通過Excel 2010進(jìn)行線性擬合（包含原點(diǎn)），擬合方程為A=k×C+b（A為峰面積、k為斜率、C為質(zhì)量濃度、b為截距），各濃度點(diǎn)對(duì)應(yīng)的峰面積檢測(cè)結(jié)果見表3。線性擬合產(chǎn)生的不確定度計(jì)算公式如下：

表3 標(biāo)準(zhǔn)添加工作曲線線性擬合結(jié)果Table 3 Linear fitting results of standard added working curve

式中，s，各濃度點(diǎn)對(duì)應(yīng)的峰面積殘差和，s=5423；n為測(cè)定次數(shù)，6個(gè)濃度點(diǎn)各自重復(fù)測(cè)定3次，n=18；p為對(duì)質(zhì)控樣品測(cè)定次數(shù)，平行測(cè)定3次，p=3；Cy為質(zhì)控樣品測(cè)定的質(zhì)量濃度（見表4），為各濃度點(diǎn)的平均質(zhì)量濃度，代入式中，線性擬合的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（C4）=0.0163。

表4 陽性樣品平行檢測(cè)結(jié)果Table 4 Parallel determination results of positive samples

綜上，三唑磷質(zhì)量濃度C引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.1.2.2 測(cè)量回收率產(chǎn)生的不確定度u （R） 操作：稱取空白綠茶2 g（精確至0.01 g）并加入1.00 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液0.200 mL，相當(dāng)于理論加標(biāo)水平：0.1 mg/kg，平行測(cè)定10次，將重復(fù)測(cè)定的平均回收率和標(biāo)準(zhǔn)偏差0.0105（其中n為平行測(cè)定次數(shù)），計(jì)算得到的回收率引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度見表5。

表5 綠茶中三唑磷加標(biāo)回收的不確定度評(píng)定結(jié)果Table 5 Uncertainty evaluation results of triazophos recovery in green tea

采用t檢驗(yàn)法驗(yàn)證結(jié)果是否需要校正回收：，查t值的雙邊分布表，自由度為9時(shí)，95%的置信度條件下，臨界值為2.262，t計(jì)算小于臨界值，檢測(cè)結(jié)果不需要校正回收。

表6 綠茶中三唑磷重復(fù)測(cè)定的不確定度評(píng)定結(jié)果Table 6 Uncertainty evaluation results of repeated determination of triazophos in green tea

2.1.2.4 試樣稱量引入的不確定度u（m） 操作：使用百分位天平稱取2 g樣品，天平的校準(zhǔn)證書顯示其最大允差為±0.01 g，按均勻分布計(jì)算，其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為因稱量時(shí)對(duì)天平有歸零的操作，引入了兩次的不確定度，故其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

2.1.2.5 體積量取引入的不確定度u（V） 操作：用20 mL移液管準(zhǔn)確移取1%的醋酸乙腈15.00 mL至50 mL塑料離心管中，再用5 mL移液管準(zhǔn)確移取3.00 mL凈化液去氮吹至近干，后用1 mL移液管準(zhǔn)確移取1.00 mL乙酸乙酯定容上機(jī)，其不確定度評(píng)定結(jié)果見表7。合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：其中urel（V25mL），25 mL移液管的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度；urel（V5mL），5 mL移液管的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度；urel（V1mL），1 mL移液管的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度。因?qū)嶒?yàn)室溫度變化引起溶劑的熱脹冷縮而引入的不確定度不能夠被忽略（如采用25 mL移液管移取15.00 mL溶劑移液管引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度是0.0578 mL，而溶劑的熱脹冷縮引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度是0.0600 mL）。

表7 體積引入的不確定度評(píng)定結(jié)果Table 7 Uncertainty evaluation results of volume

2.1.2.6 數(shù)字修約引入的不確定度u（A） 綠茶中的三唑磷殘留量的檢測(cè)結(jié)果為0.112 mg/kg，檢測(cè)結(jié)果保留至小數(shù)點(diǎn)后三位，數(shù)字修約間隔d=0.001，半寬度為0.5d，按均勻分布處理，則其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

2.1.2.7 儀器穩(wěn)定性引入的不確定度u（Y） 查GCMS/MS的校準(zhǔn)證書，其擴(kuò)展不確定度U（Y）為5.5%，故其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為urel（Y）=U（Y）/k=0.0275。

2.1.3 擴(kuò)展不確定度 因?yàn)楦鞑淮_定度分量是乘除關(guān)系，故可用簡(jiǎn)易方法進(jìn)行合成，帶入2.1.2的公式中，得urel（X）=0.0552。質(zhì)控樣品綠茶中三唑磷的檢測(cè)結(jié)果平均值為0.112 mg/kg，當(dāng)k取2時(shí)，其擴(kuò)展不確定度故采用GUM法評(píng)定綠茶中三唑磷殘留量的檢測(cè)結(jié)果可表示為：（0.112±0.012） mg/kg，k=2。通過魚骨圖和測(cè)量模型可知采用GUM法評(píng)定綠茶中三唑磷殘留量的不確定度主要來源有7個(gè)方面（見圖2），其中質(zhì)量濃度C引入的不確定度分量最大，質(zhì)量濃度C的不確定度分量包含了標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的稱量與配制、工作曲線的配制和校準(zhǔn)線性擬合三個(gè)次分量。分析發(fā)現(xiàn)，在線性擬合過程中，當(dāng)待測(cè)物質(zhì)量濃度在各校準(zhǔn)濃度點(diǎn)平均值附近時(shí)，其引入的不確定度分量最小。由公式urel（C4）也可以得到驗(yàn)證，當(dāng)n，p一定時(shí)，Cy的質(zhì)量濃度越靠近時(shí)，urel（C4）的值就越小，反過來說就是當(dāng)檢測(cè)結(jié)果越靠近校準(zhǔn)曲線的兩端，其不確定度越大。在實(shí)際操作過程中，為了避免測(cè)量不確定度的值過大，對(duì)于陽性樣品的復(fù)測(cè)，最好是預(yù)估一下待測(cè)物的上機(jī)質(zhì)量濃度，而后配制一條讓待測(cè)物質(zhì)量濃度在這條校準(zhǔn)曲線的平均濃度點(diǎn)附近，同時(shí)各濃度點(diǎn)最好是均勻分布在質(zhì)量濃度軸上。其次是儀器穩(wěn)定性引入的不確定度，查看校準(zhǔn)證書，發(fā)現(xiàn)儀器穩(wěn)定性的最大分量是校準(zhǔn)時(shí)用的配制好的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為1.5%，其次是10 μL進(jìn)樣針進(jìn)樣1 μL溶液引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度是1%，儀器的穩(wěn)定性對(duì)不確定度有很大的貢獻(xiàn)，占了約1/4。其他如回收率、重復(fù)性測(cè)定、定容等引入的不確定度相對(duì)較小，雖然本文的檢測(cè)結(jié)果沒有校正回收率，其引入的誤差被忽略，但是回收率對(duì)檢測(cè)結(jié)果是有影響的，其引入的不確定度不能夠忽略。綠茶中三唑磷殘留量的不確定度分量的主要來源與洪澤淳等[16]、龔珊等[19]的分析是一致的；與李俊等[21]的分析結(jié)果類似，不確定度的主要來源是標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合、回收率和測(cè)量重復(fù)性，但李俊等在文中沒有對(duì)儀器的穩(wěn)定性進(jìn)行不確定度分析。

圖2 各相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量的占比Fig.2 Proportion of relative standard uncertainty component

2.2 控制圖法評(píng)定綠茶中三唑磷殘留量的不確定度

不同人在不同時(shí)間內(nèi)對(duì)綠茶中的三唑磷殘留量進(jìn)行不定期的測(cè)定，共匯集了35個(gè)有效檢測(cè)結(jié)果，并按時(shí)間的先后順序列入表8的第二列中。

2.2.1 異常值檢驗(yàn) 采用格拉布斯（Grubbs）準(zhǔn)則對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行異常值檢驗(yàn)。對(duì)35個(gè)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行升序排序，其排序結(jié)果見表8。經(jīng)計(jì)算s（x）=0.0092 mg/kg，最大值為X2（0.130 mg/kg），最小值為X14（0.089 mg/kg），G2,max=（0.130-0.108）/0.0092=2.391，G14,min=（0.108-0.089）/0.0092=2.065。查格拉布斯表，在顯著水平α=0.01且n=35時(shí)，其Gα=0.01（n=35）=3.178，經(jīng)計(jì)算所得的最大值與最小值的Gi值均小于臨界值，故檢測(cè)結(jié)果不存在異常值，無需剔除。

2.2.2 正態(tài)性和獨(dú)立性檢驗(yàn) 正態(tài)性和獨(dú)立性采用統(tǒng)計(jì)量的計(jì)算方式進(jìn)行分析，將檢測(cè)結(jié)果按升序排列后，其標(biāo)準(zhǔn)化值（Wi）計(jì)算公式的平均值；si，Xi的標(biāo)準(zhǔn)差，按貝塞爾公式（s式）或移動(dòng)極差公式（MR式）求得，其中將標(biāo)準(zhǔn)化值（Wi）換算成正態(tài)概率Pi值的計(jì)算引用EXCEL 2010中自帶的函數(shù)“NORM.DIST”，在表格中輸入“=NORM.DIST（Wi，平均值，標(biāo)準(zhǔn)偏差，TRUE）”可得。Ai值的計(jì)算公式A2和A2*值的計(jì)算公式分別為經(jīng)計(jì) 算 可 知A2*（s）=0.36＜0.752，A2*（MR）=0.43＜0.752（見表8），接受測(cè)量系統(tǒng)99.5%包含概率下的正態(tài)性和獨(dú)立性假定，可建立控制圖對(duì)其進(jìn)一步的分析。

2.2.3 移動(dòng)極差圖、系統(tǒng)誤差檢驗(yàn)與EWMA疊加作圖分析 由表5的加標(biāo)回收率的t檢驗(yàn)可知測(cè)量系統(tǒng)的偏倚可忽略不計(jì)。由表8的結(jié)果可以計(jì)算Xi的行動(dòng)限UCL和LCL分別為上行動(dòng)限和下行動(dòng)限；EWMAi系列值的計(jì)算：EWMA1=X1，EWMAi=（1-λ）EWMAi-1+λXi，通常情況下λ值取0.4；EWMA疊加值的UCL和LCL的計(jì)算：對(duì)Xi值與EWMAi值作圖（如圖2）。MR-圖的控制限其沒有行動(dòng)下限，以MR、MR的控制限和MR的平均值作圖（如圖3）。

表8 期間精密度條件下測(cè)量結(jié)果的A2*統(tǒng)計(jì)匯總Table 8 A2* statistical summary of measurement results under the condition of period precision

對(duì)圖3進(jìn)行分析可知沒有出現(xiàn)GB/T 27407-2010中失控準(zhǔn)則規(guī)定的5種情況，且EWMAi均沒有超出其行動(dòng)限，可見測(cè)量系統(tǒng)僅受隨機(jī)變異影響的統(tǒng)計(jì)假定基本成立[22]，圖4也說明了測(cè)量系統(tǒng)受控。

圖3 平均值圖與EWMA疊加Fig.3 Superposition of average value chart and EWMA stack

圖4 移動(dòng)極差圖Fig.4 MR-chart

2.2.4 不確定度評(píng)定 經(jīng)2.2.1～2.2.3的分析，實(shí)驗(yàn)室無偏操作的假設(shè)是成立的，各檢測(cè)結(jié)果相互獨(dú)立，且不存在系統(tǒng)偏差，可以以檢測(cè)結(jié)果的平均值0.108 mg/kg作為質(zhì)控樣品的估計(jì)值，精密度sR”為不確定度的標(biāo)準(zhǔn)偏差，則對(duì)表8中綠茶的三唑磷殘留量進(jìn)行擴(kuò)展不確定度評(píng)定：U=2×sR”=2×0.0088=0.018 mg/kg，綠茶中三唑磷殘留量的檢測(cè)結(jié)果可表示為：（0.108±0.018） mg/kg，k=2。

3 討論與結(jié)論

不確定度評(píng)定的方式通常有兩種：一種是自下而上的不確定度評(píng)定，通常就是指GUM法，也稱為Down-Top技術(shù)；另外一種是自上而下的不確定度評(píng)定，通常有控制圖法、精密度法、線性擬合法和經(jīng)驗(yàn)?zāi)Ｐ头?，稱為Top-Down技術(shù)。文中采用的控制圖法是實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行內(nèi)部質(zhì)量控制比較常用的一種方法，注重通過一段時(shí)間，從整體上去反應(yīng)一個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目在檢測(cè)過程中包含的不確定度，反映的是長(zhǎng)期的期間精密度，充分考察了人員操作的穩(wěn)定性、環(huán)境條件的穩(wěn)定性、儀器設(shè)備的穩(wěn)定性，有效降低了隨機(jī)因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。通過對(duì)檢測(cè)結(jié)果的異常值檢驗(yàn)、系統(tǒng)正態(tài)性和獨(dú)立性檢驗(yàn)、系統(tǒng)受控狀態(tài)分析，并作出EWMA圖和移動(dòng)極差圖，更加直觀地反映檢測(cè)結(jié)果的趨勢(shì)，更加真實(shí)地反映實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力。本文對(duì)綠茶中三唑磷殘留量進(jìn)行不確定度評(píng)定，其擴(kuò)展不確定度的結(jié)果分別為：U=0.012 mg/kg（GUM法）和U=0.018 mg/kg（控制圖法），控制圖法評(píng)定的U值比GUM法大，其可能原因是GUM法體現(xiàn)的是實(shí)驗(yàn)室短期內(nèi)的重復(fù)性檢測(cè)結(jié)果及回收率的標(biāo)準(zhǔn)偏差、溶液配制及線性擬合等的經(jīng)驗(yàn)性估計(jì)，不能夠體現(xiàn)出檢測(cè)結(jié)果的長(zhǎng)期穩(wěn)定性及整個(gè)測(cè)量系統(tǒng)是否受控，不能夠識(shí)別出是否存在系統(tǒng)性缺陷。但是，在實(shí)際檢驗(yàn)檢測(cè)活動(dòng)中無法對(duì)陽性樣品進(jìn)行長(zhǎng)期性精密度考察，故控制圖法的適用范圍小于GUM法。GUM法和控制圖法都是不確定度評(píng)定的常用方法，有其各自的優(yōu)缺點(diǎn)，檢測(cè)員需要自己評(píng)估并選擇合適的不確定度評(píng)定方法，使得不確定度評(píng)定結(jié)果更加客觀地反映實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力，更加符合客戶的實(shí)際使用需求。