尹紅梅，陳 薇，郭照輝，王 震，周映華，高書峰，劉 標

(湖南省微生物研究院，湖南長沙 410009)

抗生素在促進動物生長和抗病抑菌方面效果明顯，但也給畜禽產(chǎn)業(yè)和人類健康帶來嚴重威脅[1]。微生態(tài)制劑是一類有益微生物活菌制劑，具有維持腸道菌群平衡、提高腸道有益菌數(shù)量、抑制病原菌增殖、提高飼料利用率、增強機體免疫力等功能。此外，添加微生態(tài)制劑不會使細菌產(chǎn)生耐藥性，且具有無環(huán)境污染等優(yōu)點，是一種有效的抗生素替代品[2]。筆者在仔豬日糧中添加0.1%微生態(tài)制劑，研究其對仔豬生長性能、血液生化指標、糞便大腸桿菌和乳酸菌數(shù)量以及糞便氮、磷排放量的影響，旨在為其在生豬生產(chǎn)中的應(yīng)用提供數(shù)據(jù)信息與技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 微生態(tài)制劑試驗用液體微生態(tài)制劑由湖南省微生物研究院提供，主要成分為酵母菌與芽孢桿菌，活菌數(shù)≥2×109CFU/mL。

1.2 試驗動物60頭12 kg左右的湘西黑豬斷奶仔豬，由湖南湘西某豬場提供。

1.3 試驗設(shè)計將60頭健康斷奶仔豬隨機分成2組(對照組、試驗組)，每組30頭仔豬，每組3個重復，每個重復10頭仔豬。2組飼喂日糧相同，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗組在基礎(chǔ)日糧中添加0.1%微生態(tài)制劑，對照組在基礎(chǔ)日糧中添加0.1%中藥包(主要成分為大蒜素)。試驗組與對照組仔豬的飼養(yǎng)管理方式相同，均采取自由采食和飲水，試驗期35 d 。

1.4 樣品采集

1.4.1糞便樣品的采集。試驗第5、15、25、35天采樣，在試驗組與對照組每個重復豬舍四角和中間點隨機采集新鮮糞便 500 g，分別置于無菌袋中，待標記樣品貼好標簽后將無菌袋置于 2～8 ℃冰盒中保存。將新鮮糞樣迅速帶回實驗室，一部分冰箱保存(用于測定大腸桿菌與乳酸菌數(shù)量)，另一部分烘干備用。

1.4.2血清樣品的采集。試驗結(jié)束當天早晨從各組隨機抽取3頭空腹仔豬，耳靜脈采血10 mL，采血過程中傾斜采血管，靜置30 min 后3 000 r/min離心15 min，吸取上清液1.0～1.5 mL注入1.5 mL離心管中，標記好組別和日期后置于-20 ℃冰箱中保存。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平Table 1 The composition and nutritional level of the basal diet

1.5 測定指標與方法

1.5.1生產(chǎn)性能和腹瀉率的測定。 ①平均日增重：于試驗第1天(試驗開始)和第35天(試驗結(jié)束)08：00空腹稱重，根據(jù)始重和末重以及試驗時間，計算平均日增重。②平均日采食量：記錄各組每天的采食量及試驗時間，計算平均日采食量。③料重比：根據(jù)平均日增重和平均日采食量，計算料重比。④試驗期間，每天定時觀察仔豬糞便狀況，記錄試驗豬的腹瀉次數(shù)，計算腹瀉率。

1.5.2血液生化指標的測定。使用全自動生化儀邁瑞B(yǎng)S-420測定試驗豬血清中堿性磷酸酶活性、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性以及尿素氮、葡萄糖、總蛋白、白蛋白和球蛋白含量，試驗所用試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.5.3糞便中微生物數(shù)量的測定。取無菌采集的新鮮糞便樣品10 g溶解于90 mL 無菌水中，充分混合均勻后吸取1 mL溶解于9 mL無菌水中，依次進行梯度稀釋，取10-6～ 10-3倍的稀釋液各0.1 mL分別接種于EMB瓊脂培養(yǎng)基和乳酸菌培養(yǎng)基(MRS)上，進行大腸桿菌與乳酸菌的培養(yǎng)和計數(shù)[3-4]。

1.5.4糞便理化指標的測定。使用pH計測定糞便樣品的pH；采用凱氏定氮法測定糞便中的總氮含量；采用釩鉬酸銨顯色法測定糞便中的磷含量；采用石墨消解-火焰原子吸收分光光度法測定糞便中的總銅含量。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析試驗數(shù)據(jù)使用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進行t檢驗，P<0.05表示差異顯著，試驗結(jié)果均以“平均值±標準差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 微生態(tài)制劑對斷奶仔豬生長性能和腹瀉率的影響由表2可知，試驗結(jié)束時，試驗組和對照組仔豬的平均日增重分別為(395.00±20.35)和(358.00±17.52)g/d，試驗組和對照組仔豬的平均日采食量分別為(0.61±0.02)和(0.58±0.04)kg/d。與對照組相比，試驗組仔豬的平均日增重提高了10.34%(P<0.05)，平均日采食量提高了5.17%(P<0.05)；試驗組和對照組仔豬料重比分別為(1.54±0.02)和(1.62±0.03)，與對照組相比試驗組料重比降低了4.94%(P<0.05)。以上結(jié)果表明，在基礎(chǔ)日糧中添加微生態(tài)制劑可以很好地促進仔豬的生長。

表2 微生態(tài)制劑對斷奶仔豬生長性能和腹瀉率的影響Table 2 The effects of microecological preparation on the growth performance and diarrhea rate of weaned piglets

2.2 微生態(tài)制劑對斷奶仔豬血液生化指標的影響由表3可知，試驗結(jié)束時，試驗組仔豬血清谷草轉(zhuǎn)氨酶活性與對照組相比降低了44.09%，差異極顯著(P<0.01)；與對照組相比，試驗組仔豬血清堿性磷酸酶活性提高了10.24%，差異顯著(P<0.05)；試驗組斷奶仔豬血清尿素氮含量比對照組降低了14.03%(P<0.05)，試驗組仔豬血清葡萄糖含量比對照組提高了14.42%(P<0.05)；試驗組仔豬血清總蛋白與球蛋白的含量均顯著高于對照組(P<0.05)，試驗組仔豬血清白蛋白含量顯著低于對照組(P<0.05)。

2.3 微生態(tài)制劑對斷奶仔豬糞便乳酸菌、大腸桿菌數(shù)量及腹瀉率的影響從表4可以看出，與對照組相比，5、15、25和35 d時試驗組仔豬糞便中乳酸菌數(shù)量分別提高了128.46%、533.12%、112.75%和88.24%，差異均達到顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)水平。由表5可知，5和15 d時試驗組仔豬糞便中未檢測到大腸桿菌，對照組大腸桿菌數(shù)量分別為45.30×105和3.89×105CFU/g；25和35 d時，試驗組大腸桿菌數(shù)量分別為4.12×105和5.51×105CFU/g，比對照組分別降低了66.50%和85.54%，差異顯著(P<0.05)。從表2可以看出，試驗結(jié)束時，試驗組與對照組仔豬腹瀉率分別為1.23%和2.45%，試驗組比對照組降低了49.80%，2組間差異顯著(P<0.05)。以上結(jié)果表明在斷奶仔豬基礎(chǔ)日糧中添加微生態(tài)制劑能夠有效改善斷奶仔豬腸道微生物菌群平衡狀況，降低腹瀉率。

表3 微生態(tài)制劑對斷奶仔豬血液生化指標的影響Table 3 Effects of microecological preparation on the blood biochemical indies of weaned piglets

表4 微生態(tài)制劑對斷奶仔豬糞便中乳酸菌數(shù)量的影響Table 4 Effects of microecological preparation on the number of L.plantarum in the feces of weaned piglets 單位：×108 CFU/g

2.4 微生態(tài)制劑對斷奶仔豬糞便理化指標的影響從表6可以看出，整個試驗期間，試驗組斷奶仔豬糞便pH均低于對照組，但差異均不顯著(P>0.05)；試驗后期2組斷奶仔豬糞便中總氮含量差異不顯著(P>0.05)，但試驗前期、中期試驗組總氮含量顯著低于對照組(P<0.05)；整個試驗期間，試驗組糞便中磷含量顯著低于對照組(P<0.05)，2組總銅含量差異均不顯著(P>0.05)。由此可見，斷奶仔豬基礎(chǔ)日糧中添加微生態(tài)制劑能夠有效減少畜禽糞便中氮、磷的排放。

表5 微生態(tài)制劑對斷奶仔豬糞便中大腸桿菌數(shù)量的影響Table 5 Effects of microecological preparation on the number of E.coli in the feces of weaned piglets 單位：×105 CFU/g

表6 微生態(tài)制劑對斷奶仔豬糞便理化指標的影響Table 6 Effects of microecological preparation on the physical and chemical indices in the feces of weaned piglets

3 討論

3.1 微生態(tài)制劑對仔豬生長性能的影響該試驗所用的微生態(tài)制劑是由酵母菌和芽孢桿菌按1∶1的比例制作而成。試驗所用益生菌可以分泌蛋白酶、淀粉酶和纖維素酶等各種消化酶以及有機酸，能有效促進機體對營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收利用，從而提高動物的生長性能[5-6]。陳勇等[7]研究發(fā)現(xiàn)復合微生態(tài)制劑能顯著提高仔豬對營養(yǎng)物質(zhì)的消化率，從而提高仔豬的生產(chǎn)性能。劉輝等[8]研究發(fā)現(xiàn)益生菌可以顯著提高生長豬的末重和平均日增重，同時降低其料重比。高書鋒等[9]研究發(fā)現(xiàn)添加0.15%凝結(jié)芽孢桿菌制劑對仔豬的生長性能有顯著的提升作用。該研究中試驗組斷奶仔豬的平均日增重和平均日采食量較對照組顯著增加(P<0.05)，與前人研究結(jié)果[8-10]基本一致。這可能是因為微生態(tài)制劑進入動物機體后可在腸道內(nèi)定植，促進了腸道消化酶的分泌，提高了日糧營養(yǎng)成分的吸收利用率，從而提高了仔豬的生長性能。

3.2 微生態(tài)制劑對斷奶仔豬血液生化指標的影響機體新陳代謝產(chǎn)生的變化可以通過血液生化指標的變化來體現(xiàn)。谷草轉(zhuǎn)氨酶主要分布在心肌附近，其活性增加可以反映心肌細胞受損，進而反映心肌細胞受損的狀態(tài)[11]。該研究結(jié)果表明，與對照組相比，試驗組谷草轉(zhuǎn)氨酶活性顯著降低(P<0.001)，說明微生態(tài)制劑對仔豬心肌組織有一定的保護作用。堿性磷酸酶水平升高表示成骨細胞活性升高，骨質(zhì)生成旺盛[12]，堿性磷酸酶活性與動物的生長速度密切相關(guān)。該研究中添加微生態(tài)制劑的試驗組堿性磷酸酶活性顯著高于對照組，進一步證實了微生態(tài)制劑可以提高仔豬的生長性能。

葡萄糖是動物機體的能量物質(zhì)，為機體合成蛋白質(zhì)提供能量。在動物生長階段，適當升高葡萄糖濃度，可以促進機體骨骼的生長以及提高營養(yǎng)物質(zhì)的代謝效率[13]。該試驗結(jié)果表明，與對照組相比，試驗組葡萄糖含量顯著增加(P<0.05)，與屈圣富等[10]試驗結(jié)果相一致，說明微生態(tài)制劑通過提高營養(yǎng)物質(zhì)的代謝效率，提高了仔豬的生長性能。

血清中尿素氮含量可以反映動物機體蛋白質(zhì)代謝和氨基酸之間的平衡狀況，其濃度與體內(nèi)氮沉積率、蛋白質(zhì)或氨基酸利用率呈顯著負相關(guān)[12]。該試驗結(jié)果表明，添加微生態(tài)制劑的試驗組仔豬血清尿素氮含量顯著低于對照組(P<0.05)，表明微生態(tài)制劑的添加有利于蛋白質(zhì)合成，能促進仔豬的生長。

血清中總蛋白含量反映機體對蛋白的吸收情況和體液免疫的關(guān)系。血清球蛋白是由機體免疫器官制造的，對機體免疫力具有重要作用。免疫水平間接反映機體對疾病的抵抗力。該試驗結(jié)果表明，添加微生態(tài)制劑的試驗組仔豬血清總蛋白和球蛋白含量顯著高于對照組(P<0.05)，與Ren等[14]和林標聲等[15]研究結(jié)果相一致，說明微生態(tài)制劑可以提高仔豬蛋白質(zhì)的合成能力，從而改善機體免疫力。

3.3 微生態(tài)制劑對斷奶仔豬糞便中微生物數(shù)量與腹瀉率的影響一般情況下，動物腸道內(nèi)各種微生物菌群處于一種微生態(tài)平衡中。仔豬在斷奶前后由于飲食、飼養(yǎng)環(huán)境的急劇改變，極易誘發(fā)因斷奶應(yīng)激導致的腸道微生物菌落失衡，這種失衡主要體現(xiàn)在有害細菌(如大腸桿菌等)的數(shù)量增加，而有益細菌(如乳酸桿菌等)的數(shù)量減少會導致仔豬腸道功能的迅速降低，極易誘發(fā)各種疾病[16]。該研究中添加微生態(tài)制劑的試驗組仔豬糞便中乳酸菌數(shù)量顯著或極顯著高于對照組，大腸桿菌數(shù)量顯著低于對照組(P<0.05)，試驗組仔豬腹瀉率顯著低于對照組(P<0.05)，與謝大識等[17]研究結(jié)果相一致。這可能是因為微生態(tài)制劑中的有益微生物以及代謝產(chǎn)物進入仔豬腸道后，通過競爭腸黏膜定植位點，產(chǎn)乳酸會降低腸道環(huán)境的pH，促進乳酸菌的生長，抑制有害菌的生長，從而調(diào)節(jié)和優(yōu)化腸道的微生物菌群。

3.4 微生態(tài)制劑對斷奶仔豬糞便氮、磷排放量的影響畜禽排泄物中含有大量的氮、磷，而氮、磷沉積在土壤中或直接滲入地下水或進入河流湖泊，可導致水體富營養(yǎng)化，污染生態(tài)環(huán)境[18]。微生態(tài)制劑中的微生物可產(chǎn)生多種消化酶，可將大分子物質(zhì)轉(zhuǎn)化為小分子物質(zhì)，改善飼料適口性和品質(zhì)，更好地促進營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。另外，益生菌產(chǎn)生的有機酸可以促進腸道對礦物質(zhì)的吸收，從而減少氮、磷的排放量。該研究中添加微生態(tài)制劑的試驗組仔豬糞便氮、磷的排放量均低于對照組，說明微生態(tài)制劑促進了動物機體對氮、磷的吸收，從源頭上減少了畜禽排泄物中氮、磷的排放，這與呂月琴等[19]和李瑞等[20]研究結(jié)果相一致。

4 結(jié)論

在斷奶仔豬基礎(chǔ)日糧中添加0.1%微生態(tài)制劑效果良好，能有效改善腸道微生物菌群平衡，有效提高有益菌數(shù)量，抑制有害菌的繁殖，降低腹瀉率，提高飼料報酬率，提高仔豬的生長性能，提高仔豬免疫力。微生態(tài)制劑的添加從源頭上減少了畜禽排泄物氮、磷的排放，環(huán)境效益顯著。