楊正麗，劉君麗，錢(qián)科蕾，劉 璽，楊 雋，洪新宇

（上海市疾病預(yù)防控制中心，上海 200336）

人參果是五加科植物人參的成熟果實(shí)。與人參其他部位如根和根莖等悠久的藥用歷史比較，人參果的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用相對(duì)較少；隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，有研究發(fā)現(xiàn)，人參果具有與人參其他部位相似的成分和藥理功效[1]。Yahara等[2]研究了人參不同部位人參皂苷的含量，發(fā)現(xiàn)人參根、莖、葉、花和果均含有人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re和Rg1，其中在人參果中Re含量最高。從人參果中提取的人參果皂苷具有舒張血管、抗氧化和抗炎功效，因此被廣泛用于治療中風(fēng)、阿爾茨海默病、帕金森病、高血壓、高膽固醇血癥和心肌缺血等疾病[3-4]。Liu Meiyan等[5]研究發(fā)現(xiàn)人參果皂苷通過(guò)調(diào)節(jié)大腦皮層5-羥色胺水平發(fā)揮抗抑郁癥作用。上述研究均提示人參果具有潛在的藥用功效。

皂苷、黃酮類(lèi)化合物、萜類(lèi)化合物和木脂素等植物化學(xué)物可調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能[6]。姚月梅等[7]研究發(fā)現(xiàn)，人參果汁可提高小鼠吞噬細(xì)胞吞噬功能和細(xì)胞免疫功能，提示人參果可增強(qiáng)小鼠的固有免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)功能。然而，關(guān)于人參果的免疫調(diào)節(jié)功能目前研究仍較少。本研究擬通過(guò)分析人參果汁濃縮液對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫低下小鼠體質(zhì)量、免疫器官質(zhì)量、外周血白細(xì)胞數(shù)量、淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量、血清細(xì)胞因子水平和免疫細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的影響，探討其免疫調(diào)節(jié)功能，以期為人參果汁濃縮液的藥理功效和進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

健康SPF級(jí)雄性C57BL/6J小鼠，6～8 周，體質(zhì)量18～22 g，由浙江維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（浙）2020-0002。動(dòng)物飼養(yǎng)于屏障環(huán)境中，溫度23～26 ℃、相對(duì)濕度50%～60%，照明模擬自然光照，12 h/12 h明暗更替。實(shí)驗(yàn)期間小鼠自由飲水與進(jìn)食。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)通過(guò)上海市疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理審查委員會(huì)批準(zhǔn)。

五加科植物人參（Panax ginsengC.A.Mey.）鮮果產(chǎn)自吉林撫松；環(huán)磷酰胺 美國(guó)Sigma公司；STROMATOLYSER-4DL白細(xì)胞分類(lèi)溶血?jiǎng)?日本Sysmex公司；小牛血清 美國(guó)Gibco公司；抗小鼠抗體（CD16/32、CD3、CD4、CD8a和CD19） 美國(guó)Biolegend公司；小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（transforming growth factor，TGF）-β、白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-4、IL-17A、IL-2試劑盒 上海酶聯(lián)生物科技有限公司；TRIzol 美國(guó)Invitrogen公司；SuperReal熒光定量預(yù)混試劑增強(qiáng)版 天根生化科技（北京）有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

XT-2000i動(dòng)物血液細(xì)胞分析儀 日本Sysmex公司；Spark全波長(zhǎng)多功能酶標(biāo)儀 瑞士Tecan公司；CytoFlex流式細(xì)胞儀 美國(guó)Thermo公司；5910R 4 ℃平板離心機(jī) 德國(guó)Eppendorf公司；熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）儀 美國(guó)Agilent公司。

1.3 方法

1.3.1 人參果汁濃縮液制備

人參果經(jīng)壓榨、過(guò)濾、濃縮等工藝制成人參果汁濃縮液，每100 g鮮人參果經(jīng)濃縮得到2 g人參果汁濃縮液。

1.3.2 小鼠分組及其處理

將72 只C57BL/6J雄性小鼠分成6 組：空白組（蒸餾水）、模型組（40 mg/kgmb環(huán)磷酰胺＋蒸餾水）、83 mg/kgmb人參果汁濃縮液組（40 mg/kgmb環(huán)磷酰胺）、166 mg/kgmb人參果汁濃縮液組（40 mg/kgmb環(huán)磷酰胺）、249 mg/kgmb人參果汁濃縮液組（40 mg/kgmb環(huán)磷酰胺）和332 mg/kgmb人參果汁濃縮液組（40 mg/kgmb環(huán)磷酰胺）（依次相當(dāng)于人體推薦劑量的10、20、30 倍和40 倍），每組12 只小鼠。模型組和人參果汁濃縮液各劑量組自第1天開(kāi)始，每日腹腔注射40 mg/kgmb環(huán)磷酰胺，連續(xù)10 d，以建立免疫低下小鼠模型，空白組腹腔注射等量的pH為7.4的1 mol/L磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）。同時(shí)自第1天開(kāi)始，人參果汁濃縮液各劑量組每天灌胃人參果汁濃縮液1 次，灌胃劑量為20 mL/kgmb，空白組和模型組灌胃等量的蒸餾水，連續(xù)15 d。第16天稱(chēng)取小鼠體質(zhì)量并取材，計(jì)算和檢測(cè)各組小鼠的免疫器官臟器指數(shù)、外周血白細(xì)胞（white blood cell，WBC）數(shù)量、淋巴細(xì)胞（lymphocyte，LYM）亞群數(shù)量、血清細(xì)胞因子水平和免疫細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)。

1.3.3 免疫器官臟器指數(shù)測(cè)定

各組小鼠摘眼球取血后斷頸處死，稱(chēng)量分離的脾臟和胸腺質(zhì)量。臟器指數(shù)按式（1）計(jì)算。

1.3.4 小鼠外周血液學(xué)指標(biāo)測(cè)定

小鼠摘眼球取血后，取適量全血于EDTA-K2抗凝管中，充分混勻，用動(dòng)物血液細(xì)胞分析儀測(cè)定WBC、LYM數(shù)量和LYM比例（LYM與WBC之比）。

1.3.5 小鼠免疫細(xì)胞分型測(cè)定

分離小鼠胸腺與脾臟，經(jīng)研磨過(guò)濾，移至離心管中，493hg離心5 min，棄上清液，其中胸腺加入1 mL含體積分?jǐn)?shù)5%小牛血清的PBS，制備成單細(xì)胞懸液備用；脾臟中加入1 mL紅細(xì)胞裂解液混勻，室溫靜置340 s，加入10 mL含5%小牛血清的PBS終止裂解，493hg離心5 min，棄上清液，加入4 mL含5%小牛血清的PBS，制備成單細(xì)胞懸液備用。胸腺和脾臟細(xì)胞懸液以每孔200 μL鋪于96 孔板中，于4 ℃平板離心機(jī)中493hg離心5 min，棄上清液，每孔加入50 μL抗小鼠CD16/32抗體，冰上孵育20 min；于4 ℃平板離心機(jī)中493hg離心5 min，棄上清液后，胸腺細(xì)胞中加入50 μL含有抗小鼠CD3、CD4和CD8a的抗體混合液，脾臟細(xì)胞中加入50 μL含有抗小鼠CD3、CD4、CD8a和CD19的抗體混合液，避光于冰上孵育30 min，于4 ℃平板離心機(jī)493hg離心5 min，棄上清液，PBS洗滌一遍后，493hg離心5 min，棄上清液，每孔加入200 μL體積分?jǐn)?shù)1%多聚甲醛溶液固定細(xì)胞。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T、CD4＋T、CD8＋T細(xì)胞和B細(xì)胞數(shù)量占比。

1.3.6 小鼠血清中細(xì)胞因子水平測(cè)定

小鼠摘眼球取血，12000 r/min離心10 min，制備血清，取適量血清按照試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定IL-4、IL-17A、IL-2、TGF-β質(zhì)量濃度。

1.3.7 免疫細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)測(cè)定

按照TRIzol說(shuō)明書(shū)提取小鼠脾臟細(xì)胞RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA，取逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增。引物序列見(jiàn)表1。采用式（2）計(jì)算基因相對(duì)表達(dá)量。

表1 擴(kuò)增基因引物序列Table 1 Primer sequences used for amplification of genes

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用單因素方差分析比較組間差異；方差齊時(shí)，兩兩比較采用最小顯著差異法-t分析；方差不齊時(shí)，兩兩比較則采用Dunnett-t檢驗(yàn)。數(shù)據(jù)不滿足方差分析條件時(shí)，采用非參數(shù)檢驗(yàn)。以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 人參果汁濃縮液對(duì)免疫低下小鼠體質(zhì)量的影響

如表2所示，各組間小鼠初始體質(zhì)量差異不顯著（P＞0.05）。與空白組比較，模型組小鼠終末體質(zhì)量極顯著降低（P＜0.01）；人參果汁濃縮液各劑量組小鼠終末體質(zhì)量與模型組比較差異不顯著（P＞0.05）；人參果汁濃縮液各劑量組間終末體質(zhì)量差異不顯著（P＞0.05）。上述結(jié)果表明環(huán)磷酰胺可降低小鼠體質(zhì)量，本研究中人參果汁濃縮液并不能恢復(fù)環(huán)磷酰胺引起的小鼠體質(zhì)量降低。

表2 人參果汁濃縮液對(duì)免疫低下小鼠體質(zhì)量的影響Table 2 Effects of Panax ginseng fruit juice concentrate on body mass in immunocompromised mice

2.2 人參果汁濃縮液對(duì)免疫低下小鼠免疫器官的影響

如表3所示，與空白組比較，模型組小鼠脾臟質(zhì)量和脾臟指數(shù)極顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，249 mg/kgmb人參果汁濃縮液組小鼠脾臟質(zhì)量和脾臟指數(shù)顯著降低（P＜0.05）。與空白組比較，模型組小鼠胸腺質(zhì)量極顯著降低（P＜0.01）；人參果汁濃縮液各劑量組小鼠胸腺質(zhì)量與模型組比較差異并不顯著（P＞0.05）。各組小鼠胸腺指數(shù)無(wú)顯著差異（P＞0.05）。上述結(jié)果表明環(huán)磷酰胺可損傷小鼠的免疫器官，人參果汁濃縮液可減輕環(huán)磷酰胺對(duì)脾臟的損傷，但對(duì)環(huán)磷酰胺引起的胸腺損傷并無(wú)恢復(fù)作用。

表3 人參果汁濃縮液對(duì)免疫低下小鼠免疫器官的影響Table 3 Effects of Panax ginseng fruit juice concentrate on immune organ indices in immunocompromised mice

2.3 人參果汁濃縮液對(duì)免疫低下小鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響

如表4所示，與空白組比較，模型組WBC數(shù)量降低（P＞0.05）；與模型組比較，83 mg/kgmb人參果汁濃縮液組小鼠WBC數(shù)量顯著升高（P＜0.05）。與空白組比較，模型組LYM比例極顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，249 mg/kgmb人參果汁濃縮液組小鼠LYM比例顯著升高（P＜0.05）。上述結(jié)果表明人參果汁濃縮液對(duì)環(huán)磷酰胺引起的外周血免疫細(xì)胞失衡有一定的緩解作用。

表4 人參果汁濃縮液對(duì)免疫低下小鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響Table 4 Effects of Panax ginseng fruit juice concentrate on hematological indicators in immunocompromised mice

2.4 人參果汁濃縮液對(duì)免疫低下小鼠脾臟和胸腺中淋巴細(xì)胞的影響

如表5所示，與空白組比較，模型組小鼠胸腺中CD4＋T細(xì)胞占比和CD8＋T細(xì)胞占比極顯著降低（P＜0.05）；249 mg/kgmb人參果汁濃縮液組小鼠胸腺中CD4＋T細(xì)胞占比顯著高于模型組（P＜0.05），接近空白組水平；249 mg/kgmb人參果汁濃縮液組小鼠胸腺中CD8＋T細(xì)胞占比顯著高于模型組（P＜0.05）。上述結(jié)果表明人參果汁濃縮液在一定劑量下可以恢復(fù)免疫低下小鼠胸腺淋巴細(xì)胞的數(shù)量。

表5 人參果汁濃縮液對(duì)免疫低下小鼠胸腺淋巴細(xì)胞的影響Table 5 Effects of Panax ginseng fruit juice concentrate on percentages of thymic lymphocytes in immunocompromised mice

如表6所示，與空白組比較，模型組小鼠脾臟中T細(xì)胞、CD4＋T細(xì)胞和CD8＋T細(xì)胞比例極顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，人參果汁濃縮液各劑量組小鼠脾臟中T細(xì)胞、CD4＋T細(xì)胞和CD8＋T細(xì)胞比例均升高，其中249 mg/kgmb人參果汁濃縮液組與模型組比較差異顯著（P＜0.05）。與空白組比較，模型組小鼠脾臟中B細(xì)胞比例極顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，83、166 mg/kgmb和249 mg/kgmb人參果汁濃縮液組小鼠脾臟中B細(xì)胞比例均升高，其中249 mg/kgmb人參果汁濃縮液組B細(xì)胞比例極顯著升高（P＜0.01）。上述結(jié)果表明249 mg/kgmb人參果汁濃縮液組對(duì)恢復(fù)免疫低下小鼠脾臟中淋巴細(xì)胞有較好的效果。

表6 人參果汁濃縮液對(duì)免疫低下小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的影響Table 6 Effects of Panax ginseng fruit juice concentrate on percentages of splenic lymphocytes in immunocompromised mice

2.5 人參果汁濃縮液對(duì)免疫低下小鼠血清中細(xì)胞因子水平的影響

如表7所示，模型組與空白組IL-2、IL-4、IL-17A和TGF-β質(zhì)量濃度均差異不顯著（P＞0.05）。與空白組比較，166 mg/kgmb人參果汁濃縮液組IL-2質(zhì)量濃度顯著降低（P＜0.05），而332 mg/kgmb人參果汁濃縮液組IL-2質(zhì)量濃度顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，166 mg/kgmb人參果汁濃縮液組IL-2質(zhì)量濃度極顯著降低（P＜0.01）。與空白組比較，249、332 mg/kgmb人參果汁濃縮液組IL-4質(zhì)量濃度顯著或極顯著升高（P＜0.05、P＜0.01）；與模型組比較，166、249 mg/kgmb和332 mg/kgmb人參果汁濃縮液組IL-4質(zhì)量濃度顯著或極顯著升高（P＜0.05、P＜0.01）。與空白組和模型組比較，332 mg/kgmb人參果汁濃縮液組IL-17A質(zhì)量濃度均極顯著升高（P＜0.01）。與空白組和模型組比較，332 mg/kgmb人參果汁濃縮液組TGF-β質(zhì)量濃度顯著或極顯著降低（P＜0.05、P＜0.01）。上述結(jié)果表明332 mg/kgmb人參果汁濃縮液對(duì)改善免疫低下小鼠免疫活性分子水平效果較好。

表7 人參果汁濃縮液對(duì)免疫低下小鼠血清中細(xì)胞因子的影響Table 7 Effects of Panax ginseng fruit juice concentrate on serum cytokine levels in immunocompromised mice

2.6 人參果汁濃縮液對(duì)免疫低下小鼠脾臟中免疫細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

如圖1 所示，與空白組比較，模型組T-b e t、Gata3、RoRγt、Foxp3mRNA相對(duì)表達(dá)量均極顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，249 mg/kgmb人參果汁濃縮液組T-betmRNA相對(duì)表達(dá)量極顯著升高（P＜0.01），332 mg/kgmb人參果汁濃縮液組Foxp3mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著升高（P＜0.05）。上述結(jié)果表明人參果汁濃縮液可使免疫低下小鼠部分免疫細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)水平得以改善。

圖1 人參果汁濃縮液對(duì)免疫低下小鼠脾臟中免疫細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子mRNA相對(duì)表達(dá)水平的影響Fig.1 Effects of Panax ginseng fruit juice concentrate on relative mRNA expression levels of nuclear transcription factors in spleen of immunocompromised mice

3 討論

環(huán)磷酰胺是一種烷化劑，已經(jīng)被廣泛用作于化療藥物，可產(chǎn)生免疫抑制、骨髓抑制、白細(xì)胞減少癥和氧化應(yīng)激等多種不良反應(yīng)[8-11]。本研究參照高敏等[12]的研究，給予小鼠連續(xù)10 d腹腔注射40 mg/kgmb環(huán)磷酰胺，以建立免疫低下小鼠模型。本研究結(jié)果顯示，環(huán)磷酰胺降低了小鼠體質(zhì)量、免疫器官質(zhì)量和外周血免疫細(xì)胞數(shù)量，這與Qi Qiuchen等[13]報(bào)道的環(huán)磷酰胺能夠引起小鼠體質(zhì)量降低、免疫器官受損和外周血血細(xì)胞失衡結(jié)果一致，提示小鼠免疫低下模型建立成功。

本研究結(jié)果顯示，人參果汁濃縮液干預(yù)組小鼠終末體質(zhì)量與模型組比較無(wú)顯著變化且均低于空白組（P＞0.05），一方面提示環(huán)磷酰胺明顯的毒性作用使得體質(zhì)量恢復(fù)過(guò)程緩慢；另一方面提示在該研究方案中人參果汁濃縮液改善免疫低下小鼠體質(zhì)量的能力可能較弱或者欠缺。

脾臟與胸腺是機(jī)體重要的免疫器官，胸腺是T細(xì)胞分化與成熟的重要場(chǎng)所，脾臟含有多種免疫細(xì)胞，參與多項(xiàng)免疫應(yīng)答[14]。脾臟質(zhì)量與胸腺質(zhì)量在一定程度上可以反映機(jī)體的免疫功能[15]。在本研究中，模型組脾臟質(zhì)量與脾臟指數(shù)均極顯著高于空白組（P＜0.01），這與前期造模時(shí)出現(xiàn)的環(huán)磷酰胺引起脾臟質(zhì)量與脾臟指數(shù)降低表現(xiàn)不一，表明脾臟隨時(shí)間延長(zhǎng)出現(xiàn)了代償性變化，提示脾臟可能存在水腫和增生[16]；與模型組比較，人參果汁濃縮液干預(yù)組脾臟質(zhì)量和脾臟指數(shù)均呈現(xiàn)降低趨勢(shì)，其中249 mg/kgmb人參果汁濃縮液組脾臟質(zhì)量和脾臟指數(shù)顯著低于模型組（P＜0.05）；上述研究結(jié)果提示人參果汁濃縮液對(duì)環(huán)磷酰胺引起的小鼠脾臟損害有緩解作用。模型組與人參果汁濃縮液干預(yù)組胸腺質(zhì)量均極顯著低于空白組（P＜0.01），提示在本研究方案中人參果汁濃縮液對(duì)環(huán)磷酰胺引起的小鼠胸腺損傷無(wú)改善作用。

外周血WBC是免疫系統(tǒng)重要組成成分，通過(guò)與體內(nèi)其他系統(tǒng)協(xié)同工作，以定位和殺死入侵的病原體等[17]。因此，若WBC數(shù)量降低，機(jī)體感染的風(fēng)險(xiǎn)則會(huì)增加，故WBC的數(shù)量可反映機(jī)體免疫功能情況。在本研究中，模型組WBC數(shù)量與空白組比較呈現(xiàn)下降趨勢(shì)；83 mg/kgmb人參果汁濃縮液組白細(xì)胞數(shù)增加，提示人參果汁濃縮液對(duì)免疫低下小鼠WBC數(shù)量有一定的改善作用。外周血LYM數(shù)量可反映機(jī)體免疫狀態(tài)[18]。與模型組比較，249 mg/kgmb人參果汁濃縮液LYM數(shù)量和比例升高，提示人參果汁濃縮液可以改善環(huán)磷酰胺引起的小鼠外周血LYM的失衡。

LYM分布于人體不同的器官中，如中樞淋巴器官（骨髓和胸腺）和外周淋巴器官（脾臟和淋巴結(jié)等）等[18]。胸腺是T細(xì)胞免疫功能發(fā)育的初始部位，對(duì)T細(xì)胞發(fā)育和成熟至關(guān)重要[19-21]。本研究探討了胸腺和脾臟中主要免疫細(xì)胞的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組胸腺中CD4＋T細(xì)胞比例和CD8＋T細(xì)胞比例均極顯著低于空白組（P＜0.01），提示環(huán)磷酰胺對(duì)胸腺免疫細(xì)胞的損害作用。經(jīng)人參果汁濃縮液干預(yù)后，CD4＋T細(xì)胞和CD8＋T細(xì)胞不同程度地恢復(fù)，其中249 mg/kgmb人參果汁濃縮液組CD4＋T細(xì)胞恢復(fù)至與空白組相當(dāng)水平，提示人參果汁濃縮液可恢復(fù)免疫低下小鼠胸腺中免疫細(xì)胞的水平。脾臟在免疫防御過(guò)程中發(fā)揮重要作用[22]。脾臟中免疫細(xì)胞數(shù)量在一定程度上反映出機(jī)體免疫狀態(tài)。本研究中模型組脾臟T細(xì)胞、CD4＋T細(xì)胞、CD8＋T細(xì)胞比例和B細(xì)胞比例均極顯著低于空白組（P＜0.01）；人參果汁濃縮液干預(yù)后，僅249 mg/kgmb人參果汁濃縮液組呈現(xiàn)出改善作用，提示此劑量對(duì)恢復(fù)脾臟中免疫細(xì)胞數(shù)量具有良好的效果。

細(xì)胞因子是免疫反應(yīng)的重要介質(zhì)[23-24]。本研究探討了IL-2、IL-4、IL-17A質(zhì)量濃度和TGF-β質(zhì)量濃度的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在該免疫抑制模型中，環(huán)磷酰胺對(duì)上述細(xì)胞因子的水平無(wú)明顯影響；但經(jīng)人參果汁濃縮液干預(yù)后，細(xì)胞因子的水平均呈現(xiàn)出變化。IL-2在早期T淋巴細(xì)胞克隆擴(kuò)增和分化中起重要作用[25-26]；人參果汁濃縮液對(duì)的IL-2影響呈現(xiàn)出雙向性；在人參果汁濃縮液劑量相對(duì)較高水平下，可促進(jìn)IL-2生成，提示人參果汁濃縮液在一定劑量水平下可能會(huì)促進(jìn)T細(xì)胞增殖[27]。IL-4可促進(jìn)促炎性巨噬細(xì)胞向抑炎性巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)變[28]；IL-4質(zhì)量濃度隨人參果汁濃縮液劑量升高而升高，提示人參果汁濃縮液可能具有一定的抑制炎癥功效。IL-17是組織信號(hào)細(xì)胞因子，有利于保護(hù)皮膚、肺和胃腸道等屏障器官[29]；人參果汁濃縮液可促使IL-17的生成，提示其對(duì)屏障器官可能有一定的保護(hù)作用。TGF-β是負(fù)向調(diào)控因子，可抑制免疫應(yīng)答[30]；模型組TGF-β質(zhì)量濃度較空白組呈升高趨勢(shì)；人參果汁濃縮液干預(yù)后，隨其劑量升高TGF-β質(zhì)量濃度降低，提示人參果汁濃縮液可能對(duì)免疫抑制作用具有緩解功效。

T-bet、Gata3、RoRγt和Foxp3分別為輔助性T細(xì)胞（helper T cell，Th）1、Th2、Th17和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory cells，Treg）特異性核轉(zhuǎn)錄因子，可調(diào)控Th細(xì)胞分化，而不同的Th細(xì)胞群具有不同的免疫功能[23]。模型組T-bet、Gata3、RoRγt、Foxp3mRNA相對(duì)表達(dá)量均極顯著低于空白組（P＜0.01），提示環(huán)磷酰胺對(duì)Th1、Th2、Th17和Treg特異性核轉(zhuǎn)錄因子均抑制作用。人參果汁濃縮液干預(yù)后，上述基因水平不同程度地恢復(fù)，其中249 mg/kgmb人參果汁濃縮液可使T-betmRNA相對(duì)表達(dá)量水平恢復(fù)至與空白組相當(dāng)水平；332 mg/kgmb人參果汁濃縮液使Foxp3mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于模型組（P＜0.05）。上述研究結(jié)果提示人參果汁濃縮液可改善免疫低下小鼠的免疫細(xì)胞特異性核轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)使用環(huán)磷酰胺建立免疫低下小鼠模型，研究人參果汁濃縮液是否可以改善免疫低下小鼠的免疫功能，結(jié)果發(fā)現(xiàn)人參果汁濃縮液可以減輕環(huán)磷酰胺對(duì)脾臟的損傷、增加外周血及免疫器官中免疫細(xì)胞的數(shù)量、升高血清中IL-2、IL-4、IL-17A細(xì)胞因子的水平和抑制負(fù)調(diào)控因子TGF-β的表達(dá)以及部分恢復(fù)免疫細(xì)胞中核轉(zhuǎn)錄因子水平，提示人參果汁濃縮液對(duì)免疫低下小鼠免疫器官、免疫細(xì)胞以及免疫活性分子等均有改善作用，其中以249 mg/kgmb人參果汁濃縮液效果最為顯著，未存在明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系，不同劑量的人參果汁濃縮液可改善免疫低下小鼠不同的免疫指標(biāo)，表明人參果汁濃縮液在一定劑量水平下可以增強(qiáng)免疫低下小鼠的免疫功能。本研究初步探討出人參果汁濃縮液可以改善免疫功能，但關(guān)于其通過(guò)何種機(jī)制來(lái)調(diào)控免疫功能需要在后續(xù)的研究中進(jìn)一步探索。