白 星，程翻娥，楊長沅，李 錚，李衛(wèi)強,

1.寧夏醫(yī)科大學中醫(yī)學院，寧夏 銀川 750004

2.廣州中醫(yī)藥大學第二臨床醫(yī)學院，廣東 廣州 510006

3.寧夏少數(shù)民族醫(yī)藥現(xiàn)代化教育部重點實驗室，寧夏 銀川 750004

胃癌是世界第4 大惡性腫瘤[1]，由于其發(fā)病隱匿、早期不易診斷且胃癌細胞具有循環(huán)擴散性，大多數(shù)患者在確診時已發(fā)展為晚期胃癌或伴有轉(zhuǎn)移。其中，肝臟是胃癌細胞血行轉(zhuǎn)移最常見的器官，其臨床治療仍是亟待解決的難題[2-3]。人類腸道菌群中既包含致癌菌群又包含抑癌菌群，共同維護腸道黏膜穩(wěn)態(tài)環(huán)境，癌癥的發(fā)生及轉(zhuǎn)移與腸道菌群失調(diào)密切相關(guān)[4]。研究表明，胃癌肝轉(zhuǎn)移患者腸道菌群存在紊亂現(xiàn)象[5]。因此，從浸潤轉(zhuǎn)移相關(guān)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）及腸道菌群調(diào)控等多靶點開展干預胃癌肝轉(zhuǎn)移的作用及機制闡釋為中醫(yī)藥抗癌研究提供科學依據(jù)具有重要意義。

EMT 是上皮細胞獲得間充質(zhì)細胞表型的過程[6]。這一生物過程常被癌細胞利用則致使癌細胞具有抗凋亡、獲得侵襲等癌細胞特性。EMT 是腫瘤轉(zhuǎn)移的重要標志，SNAIL 是EMT 的標志物，能夠抑制Ecadherin 的表達，促進EMT 進程[7]。SNAIL 的異常激活與腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)移及其預后密切相關(guān)[8]。

密點麻蜥Eremias multiocellataGünther 始載于《中國藥用動物志》[9]，《本草綱目》載蜥蜴有活血化瘀、消癭散結(jié)之功。本課題組前期開展了密點麻蜥及其為主組成的復方中藥干預胃癌的相關(guān)研究，證實密點麻蜥含藥血清能夠抑制胃癌SGC-7091 細胞的增殖，抑制Sirt1 表達，降低p53 蛋白表達，促進胃癌細胞的調(diào)亡[10]；其復方能夠改善癌前病變大鼠病理形態(tài)，降低p53 和PUMA 表達，逆轉(zhuǎn)癌變趨勢[11]，且闡明蜥蜴復方中藥能夠通過上調(diào)Ecadherin、下調(diào)整合素β1和基質(zhì)金屬蛋白酶9（matrix metalloproteinases 9，MMP9）表達，阻斷EMT，抑制胃癌浸潤轉(zhuǎn)移[12]。本課題基于以上前期研究，進一步探索密點麻蜥基于SNAIL 信號通路影響EMT及腸道菌群調(diào)節(jié)，從多途徑、多靶點對胃癌肝轉(zhuǎn)移的抑制作用及機制。

1 材料

1.1 動物

SPF 級雄性BALB/c 裸鼠36 只，4 周齡，體質(zhì)量（20±2）g，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，動物合格證號SCXK（京）2021-0006。動物飼養(yǎng)于寧夏醫(yī)科大學實驗動物中心SPF 級動物房，恒溫（22±1）℃，光照晝夜交替各12 h，自由進食飲水。動物實驗經(jīng)寧夏醫(yī)科大學實驗動物倫理審查委員會批準（批準號2021-091）。

1.2 細胞株

人胃腺癌HGC-27 細胞株購自上海中喬新舟生物科技有限公司。

1.3 藥材

密點麻蜥（批號20180501）購自寧夏醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院門診，經(jīng)寧夏醫(yī)科大學藥學院劉艷華教授鑒定為密點麻蜥E.multiocellataGünther。

1.4 藥品與試劑

5-氟脲嘧啶（5-fluorouracil，5-FU，批號2005181）購自天津金耀藥業(yè)有限公司；蘇木素-伊紅（HE）染色液（批號202010）購自北京博奧拓達科技有限公司；兔抗鼠β-actin 多克隆抗體（批號12w2944）、SNAIL 多克隆抗體（批號78m6660）、E-cadherin 多克隆抗體（批號32p9942）、N-cadherin多克隆抗體（批號12j8872）多克隆抗體購自Affinity Biosciences；HRP 標記的山羊抗兔IgG 抗體（批號ATTNO0301）購自亞科因生物技術(shù)有限公司；E.Z.N.A.?DNA 提取試劑盒（批號M9636020000J13V）購自美國 Bio-Tek 公司；AxyPrepDNA 凝膠回收試劑盒（批號11214KA1）購自Axygen Biosciences；Quantus? Fluorometer 檢測試劑盒（批號0000302722）購自美國Promega 公司。

1.5 儀器

CO2培養(yǎng)箱（美國Thermo Fisher Scientific 公司）；CKX53 型倒置顯微鏡（日本Olympus 公司）；RM2255 型全自動輪轉(zhuǎn)式石蠟切片機（德國Leica 公司）；MiniProteanTetra 蛋白電泳系統(tǒng)（美國伯樂公司）；Amersham Imager 680RGB 型超靈敏多功能成像儀（美國GE 公司）；NovaSeqpE250 型平臺（美國Illumina 公司）。

2 方法

2.1 胃癌肝轉(zhuǎn)移模型制備、分組與給藥

36 只雄性BALB/c 裸鼠按照隨機數(shù)字表法隨機分為對照組（9 只）和造模組（27 只）。參考相關(guān)文獻，采用脾臟注射法[13]建立胃癌肝轉(zhuǎn)移模型。造模動物蘇醒后，隔天對傷口進行碘伏消毒處理。飼養(yǎng)4 周并對其精神狀態(tài)、活動度、體質(zhì)量飲食、皮膚顏色、腫瘤生長等情況進行隔日觀察記錄。造模4周時，隨機取對照組1 只與造模組3 只剖腹探查驗證造模成功。對照組裸鼠肝組織色澤鮮明、表面光滑；造模組裸鼠肝組織出現(xiàn)肉眼可見白色結(jié)節(jié)，肝臟受損，部分肝組織被轉(zhuǎn)移性結(jié)節(jié)代替，表明胃癌肝轉(zhuǎn)移模型構(gòu)建成功。

造模成功的裸鼠按照隨機數(shù)字表法隨機分為模型組、5-FU（0.025 g/kg）組和密點麻蜥（2.6 g/kg，臨床等效劑量）組，每組8 只，并由第3 方對實驗組進行隨機編碼，編號為不透明的密封信封以避免選擇性偏倚。

取密點麻蜥5.2 g，加入純水定容至600 mL，浸泡30 min，放入數(shù)顯恒溫加熱電熱套中100 ℃煮沸后，將溫度調(diào)至80 ℃，煎煮至300 mL 時濾過，繼續(xù)80 ℃加熱至200 mL，制備成終質(zhì)量濃度為0.026 g/mL 的水煎劑。密點麻蜥組ig 水煎劑，2 次/d；5-FU組ip 5-FU 原液稀釋10 倍后的溶液，1 次/d，對照組和模型組ig 生理鹽水，連續(xù)4 周。

2.2 樣本采集

用無菌EP 管收集各組裸鼠末次給藥2 h 后的新鮮糞便，迅速轉(zhuǎn)移至-80 ℃保存。各組小鼠ip 2%戊巴比妥鈉麻醉，取一小塊肝組織以生理鹽水沖洗后，于4%多聚甲醛中固定24 h，剩余肝組織于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 肝組織病理觀察

取固定好的肝組織，沖水后脫水、透明，石蠟包埋，切成4 μm 厚的石蠟切片，脫蠟水化后蒸餾水沖洗5 min，蘇木素染色4 min，水洗多余染液，鹽酸酒精分化，水洗15 min，伊紅染色3 min 后蒸餾水沖洗，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，滴加中性樹膠封片。晾干后用切片掃描儀觀察。

2.4 肝組織SNAIL、E-cadherin 和N-cadherin 蛋白表達檢測

取各組裸鼠肝組織100 mg，加入含蛋白酶抑制劑的裂解液1 mL，用冷凍研磨儀低溫研磨至充分裂解，4 ℃、12 000 r/min 離心10 min，吸取上清。BCA 法測定蛋白濃度。蛋白樣品經(jīng)10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)至PVDF 膜，加入無蛋白快速封閉液封閉15 min，TBST 洗滌5 次，每次5 min，加入一抗（1∶1000），4 ℃孵育過夜；TBST 洗滌5 次，每次5 min，加入二抗（1∶10 000），室溫孵育2 h，TBST 洗滌5 次，加入ECL 發(fā)光試劑顯影，采用Image J 軟件分析條帶灰度值。

2.5 裸鼠糞便DNA 提取及IIluminaNovaSeq 測序

將每組裸鼠的糞便混合后，用E.Z.N.A.?DNA提取試劑盒抽提腸道微生物總DNA，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測 DNA 質(zhì)量，用引物 338F（5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’）和806R（5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’）對V3～V4 可變區(qū)基因進行PCR 擴增，95 ℃預變性3 min，27個循環(huán)（95 ℃變性30 s，55 ℃退火30s，72 ℃延伸30 s），72 ℃穩(wěn)定延伸10 min，4 ℃進行保存。PCR 反應(yīng)體系：5×TransStart Fastpfu 緩沖液4 μL，2.5 mmol/L dNTPs 2 μL，上游引物0.8 μL，下游引物0.8 μL，TransStart Fastpfu DNA 聚合酶0.4 μL，模板DNA 10 ng，雙蒸水補足至20 μL。每個樣本6 個重復。

使用2%瓊脂糖凝膠回收同一樣本PCR 產(chǎn)物，利用AxyPrepDNA凝膠回收試劑盒進行回收產(chǎn)物純化，2%瓊脂糖凝膠電泳檢測，用 Quantus?Fluorometer 檢測試劑盒對回收產(chǎn)物進行檢測定量。送由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司進行測序。分別用Ace、Sobs、Shannon 和Simpson 指數(shù)測定α-多樣性。用Bray-Curtis 計算β-多樣性，主坐標分析可視化，R 軟件繪制結(jié)果來比較不同樣本菌群豐富度和多樣性。

2.6 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 23.0 軟件進行統(tǒng)計分析，對定量資料進行正態(tài)性檢驗，符合正態(tài)分布的用表示；非正態(tài)分布的采用中位數(shù)（四分位數(shù)）［M（Q1，Q3）］表示。兩組間比較方差齊且符合正態(tài)分布采用StudentT檢驗，方差不齊且不符合正態(tài)分布用Wilcoxon 秩和檢驗。多組間比較采用單因素方差分析單因素方差分析（One-way ANOVA）或Kruskal-Wallis 秩和檢驗。

3 結(jié)果

3.1 密點麻蜥對胃癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠肝組織病理變化的影響

如圖1 所示，對照組肝組織細胞排列整齊，肝小葉結(jié)構(gòu)完整；模型組癌細胞在肝組織內(nèi)聚集成灶性，肝小葉破壞，癌細胞核大、固縮、深染，異性明顯，肝細胞水腫可見炎細胞浸潤，部分可見肝組織壞死；5-FU 組和密點麻蜥組肝組織病灶變小，肝細胞較模型組排列整齊，炎性細胞減少，肝細胞表現(xiàn)出新生性，病變均有改善。

3.2 密點麻蜥對胃癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠肝組織SNAIL、Ecadherin 和N-cadherin 蛋白表達的影響

如圖2 和表1 所示，與對照組比較，模型組裸鼠肝組織SNAIL 和N-cadherin 蛋白表達水平均顯著升高（P＜0.001），E-cadherin 蛋白水平顯著降低（P＜0.001）；與模型組比較，密點麻蜥組SNAIL 和N-cadherin 蛋白表達水平均顯著降低（P＜0.001），E-cadherin 表達水平顯著升高（P＜0.001）。

表1 密點麻蜥對胃癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠肝組織中SNAIL、E-cadherin 和N-cadherin 蛋白表達的影響 (,n=8)Table 1 Effect of E.multiocellata on SNAIL,E-cadherin and N-cadherin protein expressions in liver tissue of nude mice with gastric cancer of liver metastasis (,n=8)

表1 密點麻蜥對胃癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠肝組織中SNAIL、E-cadherin 和N-cadherin 蛋白表達的影響 (,n=8)Table 1 Effect of E.multiocellata on SNAIL,E-cadherin and N-cadherin protein expressions in liver tissue of nude mice with gastric cancer of liver metastasis (,n=8)

與對照組比較：***P＜0.001；與模型組比較：#P＜0.05 ###P＜0.001***P ＜ 0.001 vs control group;#P ＜ 0.05 ###P ＜ 0.001 vs model group

圖2 密點麻蜥對胃癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠肝組織中SNAIL、Ecadherin 和N-cadherin 蛋白表達的影響Fig.2 Effect of E.multiocellata on SNAIL,E-cadherin and N-cadherin protein expressions in liver tissue of nude mice with gastric cancer of liver metastasis

3.3 密點麻蜥對胃癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠腸道菌群的影響

3.3.1 稀釋曲線 Rank-Abundance 曲線用來反映物種的均勻度和豐富度，橫坐標寬度代表物種豐度，縱坐標平滑度表示物種均勻度，曲線平滑下降且水平延伸表示物種豐度高且均勻，陡然下降則表示優(yōu)勢菌群所占比例較高均勻度較低。如圖3-A 所示，對照組和密點麻蜥組優(yōu)勢菌群所占比較高，密點麻蜥組和5-FU 組物種豐富度較高。

稀釋曲線用于評價測序深度能否反映總體所包含的每個樣本微生物多樣性，也可以比較相同的測序深度下不同樣本操作分類單元（operational taxonomic unit，OTU）數(shù)。如圖3-B 所示，橫坐標代表測序量，縱坐標表示多樣性指數(shù)。使用Shannon算法的稀釋曲線測序量在400 時，Shannon 曲線走向平緩，曲線較長且集中在平緩，說明在本實驗中繼續(xù)增加測序量產(chǎn)生新的物種較少，測序數(shù)據(jù)量能夠反映樣本生物信息。

圖3 物種等級豐度圖 (A) 和Shannon 稀釋曲線圖 (B)Fig.3 Species Rank-abundance curve (A) and Shannon dilution curve (B)

3.3.2 α 多樣性指數(shù)組間差異 sob 指數(shù)代表物種實際觀測豐度，Shannon 指數(shù)反映菌落的多樣性，Chao 指數(shù)反映物種的豐富度，pd 指數(shù)反映菌群進化譜系多樣性。如圖4 所示，與對照組比較，模型組sob 指數(shù)和pd 指數(shù)均顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，5-FU 組和密點麻蜥組sob 指數(shù)和pd 指數(shù)均顯著降低（P＜0.05、0.01），密點麻蜥組Shannon指數(shù)顯著降低（P＜0.05）。結(jié)合多樣性指數(shù)和均勻豐富度，胃癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠腸道菌群與對照組比較表現(xiàn)菌群失調(diào)趨向，經(jīng)密點麻蜥治療后更接近對照組。

圖4 各組腸道菌群的α 多樣性分析 (,n=6)Fig.4 α Diversity analysis of gut microbiota in each group (,n=6)

3.3.3 β 多樣性分析 偏最小二乘法-判別分析（partial least squares-discriminant analysis，PLS-DA）將多組數(shù)據(jù)間差異反映在坐標中，坐標中樣品的距離越接近，表明其樣品結(jié)構(gòu)相似性越高，反之差異性越顯著。如圖5 所示，模型組與對照組腸道菌群構(gòu)成表現(xiàn)出差異；5-FU 組與密點麻蜥組結(jié)構(gòu)接近，與模型組有一定的距離，更接近對照組，表明密點麻蜥可以調(diào)節(jié)胃癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠腸道菌群的結(jié)構(gòu)。

圖5 各組腸道菌群β 多樣性的PLS-DAFig.5 PLS-DA of β diversity of gut microbiota in each group

3.3.4 腸道菌落物種組成分析 如圖6-A 和表2 所示，在門水平上各組胃癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠腸道菌群相對豐度＞1%的菌群有厚壁菌門（Firmicutes）、擬桿菌門（Bacteroidota）、變形菌門（Proteobacteria）、疣微菌 門（Verrucomicrobiota）、放線菌門（Actinobacteriota）。與對照組比較，模型組厚壁菌門豐度降低，擬桿菌門豐度升高；與模型組比較，密點麻蜥組厚壁菌門豐度升高。厚壁菌門/擬桿菌門（F/B）可反映胃腸整體健康狀況，與對照組比較，模型組F/B 值下降；經(jīng)5-FU 和密點麻蜥干預后F/B值均升高。如圖6-B 所示，在屬水平各組占比差異較大的菌屬為擬桿菌屬Bacteroides，各組在擬桿菌屬的豐度比例為對照組20.57%、模型組28.39%、5-FU 組5.71%、密點麻蜥組9.49%。

圖6 門 (A) 和屬 (B) 水平腸道菌群物種組成分析Fig.6 Species composition analysis of intestinal flora at phyla (A) and genus (B) levels

表2 密點麻蜥對胃癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠腸道菌群擬桿菌門和厚壁菌門的影響 (,n=6)Table 2 Effect of E.multiocellata on Firmicutes and Bacteroidota in gut microbiota of nude mice with liver metastasis of gastric cancer (,n=6)

表2 密點麻蜥對胃癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠腸道菌群擬桿菌門和厚壁菌門的影響 (,n=6)Table 2 Effect of E.multiocellata on Firmicutes and Bacteroidota in gut microbiota of nude mice with liver metastasis of gastric cancer (,n=6)

3.3.5 屬水平物種差異分析 如圖7 所示，屬水平各組間差異顯著的菌群主要有norank_f__Muribaculaceae、擬桿菌屬、乳酸桿菌屬Lactobacillus、梭狀芽孢桿菌屬Clostridia_UCG-014、副擬桿菌屬Parabacteroides、幽門螺旋桿菌Helicobacter。其中norank_f__Muribaculaceae 在模型組較對照組豐度增加，經(jīng)5-FU 和密點麻蜥治療后為表現(xiàn)出下降趨勢；擬桿菌屬在各組間豐度差異顯著，與對照組相比模型組中顯著富集（P＜0.05），經(jīng)密點麻蜥治療后豐度顯著下降（P＜0.01）；與對照組相比模型組中乳酸桿菌屬豐度降低，經(jīng)藥物治療后未見顯著調(diào)節(jié)作用；與對照組相比，Clostridia_UCG-014 在模型組中占比下降，經(jīng)密點麻蜥干預后顯著提高，各組間差異顯著（P＜0.001）。副擬桿菌屬在模型組中較對照組顯著提高（P＜0.05），經(jīng)藥物治療后豐度下降接近對照組（P＜0.001）。幽門螺旋桿菌在模型組中的豐度明顯增加（P＜0.01），經(jīng)藥物干預后恢復生理水平（P＜0.01）。密點麻蜥主要對胃癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠腸道中擬桿菌屬、梭狀芽孢桿菌屬、副擬桿菌屬、幽門螺旋桿菌進行調(diào)節(jié)。

圖7 屬水平物種差異分析Fig.7 Analysis of species differences at genus level

4 討論

目前胃癌的治療手段主要是手術(shù)切除、圍術(shù)期放化療及分子靶向治療。但腫瘤的遠處轉(zhuǎn)移常常影響手術(shù)的可行性，且一部分病人對于化療藥物表現(xiàn)為不耐受以及耐藥等一系列問題仍亟待解決。研究發(fā)現(xiàn)中醫(yī)藥通過多途徑多靶點對腫瘤具有較好的治療作用[14]。因此探究中藥抗癌機制為臨床提供科學依據(jù)、促進藥物研發(fā)具有重要意義。

在腫瘤形成中SNAIL 可抑制E-cadherin 的轉(zhuǎn)錄從而誘導EMT 發(fā)生，促進癌細胞增殖、抗調(diào)亡及轉(zhuǎn)移[15]。另外SNAIL 誘導的EMT 可以通過抑制宿主的免疫監(jiān)視能力促進腫瘤的轉(zhuǎn)移及復發(fā)[16]。本研究發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，模型組SNAIL 和N-cadherin蛋白表達上調(diào)，E-cadherin 表達下調(diào)，蛋白表達上調(diào)；與模型組比較，密點麻蜥上調(diào)E-cadherin 表達，下調(diào)SNAIL、N-cadherin 的表達，表明密點麻蜥可能通過抑制轉(zhuǎn)錄因子SNAIL 的表達，增加Ecadherin 表達調(diào)控EMT 的進程，對胃癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠模型具有較好的抑制作用。

近年研究表明，腸道菌群成分與癌癥發(fā)生有關(guān)。其中腸道菌群產(chǎn)生的短鏈脂肪酸（short-chain fattyacids，SCFAs）在細胞穩(wěn)態(tài)中至關(guān)重要，它們有助于調(diào)節(jié)組蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase，HDAC），從而影響細胞附著、免疫細胞遷移、細胞因子產(chǎn)生、趨化性和程序性細胞死亡[17]。SCFAs 能夠作用于乳腺癌細胞表面的G 蛋白偶聯(lián)受體，調(diào)節(jié)腫瘤抑制基因，使癌細胞E-cadherin 表達升高、應(yīng)力纖維含量降低，阻斷EMT 進展[18]。因此，通過改變腸道菌群結(jié)構(gòu)來控制SCFAs 水平亦可抑制腫瘤。

機體SCFAs 中的丁酸主要由厚壁菌門產(chǎn)生[19]。本研究中胃癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠腸道菌群中厚壁菌門在對照組豐度占比40.9%，模型組中厚壁菌門的豐度為26.4%。經(jīng)密點麻蜥干預后厚壁菌門的豐度提高到30.2%。與對照組比較，擬桿菌門在模型組中豐度顯著提高，經(jīng)5-FU 治療后豐度下降，密點麻蜥干預后未見改變。F/B 值可反映胃腸整體健康狀況，是診斷菌群紊亂的標志，與對照組比較，模型組F/B 值下降，表明胃癌肝轉(zhuǎn)移發(fā)生后裸鼠腸道菌群發(fā)生紊亂，經(jīng)5-FU 和密點麻蜥干預后F/B 值均提高，因此證實密點麻蜥可調(diào)節(jié)菌群失調(diào)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)胃癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠腸道中厚壁菌門豐度下降，且以密點麻蜥為主藥的復方表現(xiàn)出提高胃癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠腸道厚壁菌門豐度的作用，因此表明密點麻蜥可通過增加厚壁菌門的豐度，補充機體SCFAs 的缺失來抑制胃癌[20]。

屬水平上，密點麻蜥主要對胃癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠腸道中擬桿菌屬、梭狀芽孢桿菌屬、副細菌屬、幽門螺旋桿菌屬進行調(diào)節(jié)。其中擬桿菌屬和副細菌屬的生理功能相似，均可代謝碳水化合物和產(chǎn)生SCFAs，對宿主健康和免疫調(diào)節(jié)有益[21]。副細菌屬還表現(xiàn)鎖定腫瘤壞死因子的釋放發(fā)揮對腫瘤的抑制作用[22]。梭狀芽孢桿菌能夠誘導宿主腸道T 細胞反應(yīng)表型從而發(fā)揮對人體免疫調(diào)節(jié)的作用[23]。幽門螺旋桿菌屬是胃癌發(fā)生的主要原因，根除幽門螺旋桿菌可降低SNAIL 的表達，增加E-cadherin 從而抑制EMT 的發(fā)生[24]。同時幽門螺桿菌影響成纖維細胞向具有腫瘤相關(guān)成纖維細胞特征的細胞方向分化，可能在上皮RGM-1 細胞中啟動EMT 過程，表明幽門螺旋桿菌屬具有誘導胃癌發(fā)生且影響轉(zhuǎn)移[25]。本研究結(jié)果顯示，與對照組比較，模型組中幽門螺旋桿菌屬豐度增加，經(jīng)密點麻蜥干預后幽門螺旋桿菌屬豐度降低，表明密點麻蜥可降低幽門螺旋桿菌屬而抑制胃癌。

以上研究表明，密點麻蜥能夠通過降低轉(zhuǎn)錄因子SNAIL 蛋白表達，增加E-cadherin 蛋白表達，降低N-cadherin 蛋白表達而改變EMT 進程，發(fā)揮對胃癌肝轉(zhuǎn)移的抑制作用。同時可能通過調(diào)節(jié)腸道菌群穩(wěn)態(tài)平衡，增加產(chǎn)生SCFAs 菌群厚壁菌門豐度，降低致癌菌屬幽門螺桿菌豐度，調(diào)節(jié)機體免疫和SCFAs 相關(guān)菌屬（擬桿菌屬、梭狀芽孢桿菌屬、副細菌屬）的豐度，發(fā)揮對胃癌的抑制作用。

本研究基于SNAIL 信號通路影響EMT 及調(diào)節(jié)腸道菌群，闡釋了密點麻蜥從多途徑多靶點對胃癌肝轉(zhuǎn)移的抑制作用及機制，為密點麻蜥治療胃癌肝轉(zhuǎn)移提供一定的實驗證據(jù)，下一步將從通路-SCFAs-SCFAs 相關(guān)菌群，宏基因?qū)用孢M一步揭示密點麻蜥多途徑、多靶點治療胃癌的作用機制。此外，密點麻蜥作為蜥蜴科的動物藥，目前藥物提取和成分鑒定一直是一個難題。本課題組前期與南京中醫(yī)藥大學段金廒教授合作對復方蜥蜴散在動物體內(nèi)的代謝產(chǎn)物進行初步鑒定，由于相關(guān)藥物研究較少尚未查詢到可以做質(zhì)譜的對照品，具體蜥蜴成分仍未明確。目前課題組仍在進行密點麻蜥單味提取及成分鑒定工作。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突