高永博 洪 滔

齦溝液是通過溝內(nèi)上皮和結(jié)合上皮從牙齦結(jié)締組織滲入到齦溝內(nèi)的液體。齦溝液在牙齦組織的防御體系中起著重要作用。齦溝液內(nèi)含有多種細(xì)胞因子、受體、抗體-補(bǔ)體系統(tǒng)成分、電解質(zhì)、蛋白酶等[1]。研究齦溝液的量及內(nèi)容的變化，對了解牙周疾病的發(fā)生機(jī)制、病情變化及治療效果等均有重要意義[2]。本研究比較了牙齦炎全口潔治，齦緣齲Z350 納米樹脂修復(fù)前后齦溝液內(nèi)天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate transaminase，AST）、彈性蛋白酶（elastase，EA）、Ⅱ型膠原酶（type Ⅱcollagenase，COL-Ⅱ）的變化，報道如下。

1 臨床資料

選擇2017 年6 月至2020 年12 月杭州市紅十字會醫(yī)院口腔科就診的伴慢性牙齦炎頰側(cè)頸部齦緣齲患者14 例，男9 例，女5 例，平均年齡20.3 歲，每位患者至少有四顆及以上患牙需要充填治療，且齲損未累及牙髓，牙齦炎癥局限于牙齦組織無附著喪失。本研究獲得杭州市紅十字會醫(yī)院倫理委員會審核通過，所有患者均簽署知情同意書。

2 方 法

2.1 牙齦炎全口潔治前齦溝液收集 將濾紙條裁成2 mm×4 mm 大小，每四個濾紙條裝入1 個離心管，消毒、稱重備用。齦溝液收集前輕輕去除齦上菌斑，清潔牙面，棉球隔濕后輕輕吹干牙面。將濾紙條插入齦緣下約1 mm，靜置30 s。棄去有血液污染的標(biāo)本。放入離心管，稱重，-80 ℃冰箱凍存。每四顆患牙收集的齦溝液放入1 個標(biāo)本收集管內(nèi)。標(biāo)本測量前，同一患者的兩個同類標(biāo)本管合并為1 個標(biāo)本。

2.2 牙齦炎全口潔治 齦上及齦下2 mm 常規(guī)全口超聲潔治。

2.3 Z350 修復(fù)前齦溝液收集 牙齦炎全口潔治1周后齦溝液Z350 修復(fù)前收集齦溝液。

2.4 窩洞制備及充填 1 周后復(fù)診，齲損部位排齦線排齦，去腐備洞Z350 納米樹脂（美國3M 公司NE17150）修復(fù)，細(xì)金鋼砂車針修整打磨外形，矽離子拋光。第3 次收集齦溝液，即Z350 修復(fù)后1 周齦溝液。

2.5 齦溝液AST、EA、COL-Ⅱ測定

2.5.1 樣本處理 放有濾紙的EP 管解凍后，每管加入70 μL 0.01 mol/L 的PBS 緩沖液（pH=7.4），室溫下振蕩1 h，高速離心機(jī)離心5min（4 ℃，1000 r/min），提取上清液，同一患者的2 個同類標(biāo)本管合并為1個標(biāo)本。計算取樣前后重量差為標(biāo)本質(zhì)量，樣本濃度=測量濃度×（標(biāo)本質(zhì)量＋0.07）/標(biāo)本。

2.5.2 EA、AST、COL-Ⅱ檢測 酶標(biāo)儀在405 nm 下測定樣本光密度，EA 結(jié)果以每樣本光密度值表示。全自動生化分析儀檢測各樣本AST 含量。按試劑盒（上海聯(lián)邁生物，批號LM-981-ES）說明步驟底物法測量OD 值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本COL-Ⅱ含量。

2.6 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 18.0 對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計處理，符合正態(tài)分布的計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用t 檢驗；非正態(tài)數(shù)據(jù)采用非參數(shù)秩和檢驗。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 牙齦炎全口潔治前后1 周齦溝液AST、EA、COL-Ⅱ比較 牙齦炎全口潔治后1 周齦溝液內(nèi)AST、EA 含量低于治療前（P＜0.05）；COL-Ⅱ含量治療后較治療前降低但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 牙齦炎全口潔治前后齦溝液AST、EA、COL-Ⅱ水平比較（）

表1 牙齦炎全口潔治前后齦溝液AST、EA、COL-Ⅱ水平比較（）

注：AST 為天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；EA 為彈性蛋白酶；COL-Ⅱ為Ⅱ型膠原酶

3.2 Z350 修復(fù)前后齦溝液AST、EA、COL-Ⅱ比較

Z350 修復(fù)齦緣齲后，齦溝液內(nèi)三種酶含量稍降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 Z350 納米樹脂修復(fù)前及修復(fù)后1 周齦溝液AST、EA、COL-Ⅱ水平比較（）

表2 Z350 納米樹脂修復(fù)前及修復(fù)后1 周齦溝液AST、EA、COL-Ⅱ水平比較（）

注：AST 為天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；EA 為彈性蛋白酶；COL-Ⅱ為Ⅱ型膠原酶

3.3 Z350 修復(fù)前后齦溝液流量比較 Z350 修復(fù)前及修復(fù)后1 周齦溝液流量數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布，Mann-Whitney 兩樣本秩和檢驗α=0.05 水平時，齦緣齲修復(fù)前齦溝液（N+秩均）39（30.88）與修復(fù)后1 周齦溝液流量（N＋秩均）22（31.20）比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Z=0.068，P=0.946）。

4 討論

牙周炎動物模型試驗表明，長期菌斑堆積，牙齦炎癥可以向深層組織發(fā)展造成附著喪失，最終導(dǎo)致牙周炎的發(fā)生。第四次全國口腔健康流行病學(xué)調(diào)查報告顯示，目前我國成年人的牙周健康情況不容樂觀，牙齦炎和牙周炎的患病率居高不下[3-4]。其超高的發(fā)病率已經(jīng)造成巨大的疾病負(fù)擔(dān)和社會經(jīng)濟(jì)影響[5-7]。

牙齦炎和牙周炎早期的一個重要病理變化過程均是牙齦炎癥，牙齦炎癥的發(fā)生發(fā)展在一定程度上能揭示牙周炎的發(fā)病機(jī)制[8]。EA 可破壞多種結(jié)締組織，在牙周組織的破壞過程中起重要作用[9]。牙周炎患者經(jīng)牙周治療后唾液內(nèi)EA 含量明顯下降[10-12]。這與本研究結(jié)果一致，隨著炎癥緩解EA 表達(dá)降低。AST 與牙周炎癥狀態(tài)呈高度相關(guān)性，組織破壞時，AST 大量出現(xiàn)于細(xì)胞外環(huán)境[1，13]。COL-Ⅱ通過降解膠原導(dǎo)致牙周組織破壞，其活性水平也隨著牙周炎癥的加重及牙周袋的加深而增加[14]。本研究結(jié)果顯示，牙齦炎癥控制后AST、EA 表達(dá)明顯降低，但COL-Ⅱ的變化不明顯。AST、EA 在牙齦炎癥早期明顯高表達(dá)于齦溝液內(nèi)，牙齦炎癥控制后齦溝液內(nèi)含量降低。AST、EA 在牙齦炎癥早期段高表達(dá)，對檢測早期牙周炎癥有一定的意義。COL-Ⅱ在牙齦炎癥狀態(tài)表達(dá)不明顯，這可能是由于COL-Ⅱ隨著牙周炎癥狀加重表達(dá)逐漸增加，但在炎癥早期表達(dá)不明顯。

Z350 治療楔狀缺損取得較好的臨床效果[15]。本研究結(jié)果顯示，齦緣齲損Z350 修復(fù)前后三種酶的濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義。其對牙周組織產(chǎn)生炎性刺激輕微，具有良好的生物相容性。Z350 修復(fù)齦緣齲損前后齦溝液流量差異無統(tǒng)計學(xué)意義，與酶的檢測結(jié)果一致。

齦溝液內(nèi)酶的檢測雖然在牙齦炎癥的早期診斷上有優(yōu)勢，但也有明顯的不足。首先，健康牙齦齦溝液量極少，收集足夠檢測量齦溝液臨床操作困難。本研究將四顆牙齒收集的齦溝液標(biāo)本作為一個檢測標(biāo)本，測量階段仍需合并同一患者標(biāo)本。樣本數(shù)量受到一定程度影響。其次，齦溝液收集過程中極易受到牙齦上皮潰瘍程度及牙齦炎癥狀態(tài)影響，牙齦炎癥充血水腫時，牙齦易出血，增加取樣難度。齦溝液量少、齦溝液稱量、存儲都對后續(xù)檢測有影響，進(jìn)而使得各種細(xì)胞因子、酶類檢測結(jié)果差異很大[16]。因此，通過齦溝液內(nèi)標(biāo)志物對牙齦炎、牙周炎的研究仍需進(jìn)一步探索。