張貴珍 余祖江 韓雙?。ㄠ嵵荽髮W(xué)第一附屬醫(yī)院感染科，鄭州 450052）

嵌合抗原受體T細(xì)胞（chimeric antigen receptor-T cells，CAR-T）治療是目前被臨床廣泛關(guān)注的一種新型細(xì)胞免疫療法，從患者或異體供者血液中獲取T細(xì)胞后利用基因工程技術(shù)將靶向腫瘤抗原的CAR引入到T細(xì)胞，體外擴(kuò)增后回輸患者體內(nèi)發(fā)揮特異性抗腫瘤作用。2017年CAR-T細(xì)胞治療迎來(lái)了階段性勝利，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局先后批準(zhǔn)兩個(gè)CD19 CAR-T活細(xì)胞藥物“Tisagenlecleucel”和“Axi?cabtagene ciloleucel”，用于急性B細(xì)胞白血病和B細(xì)胞淋巴瘤 的 治療［1-2］。2020年7月，第三個(gè)CD19 CAR-T藥物“brexucabtagene autoleucel”也獲得加速審批，用于治療復(fù)發(fā)難治性套細(xì)胞淋巴瘤患者［3］。

CAR-T細(xì)胞在血液系統(tǒng)腫瘤中取得了令人矚目的進(jìn)展極大提高了研究者的熱情將CAR-T研究延伸至實(shí)體瘤治療領(lǐng)域中。CAR-T抗腫瘤效果有賴于CAR對(duì)腫瘤抗原的特異性識(shí)別。因此，合適的抗原靶點(diǎn)對(duì)CAR-T治療的成功實(shí)施至關(guān)重要。B7-H3（也稱CD276）是一種在多種實(shí)體瘤中過(guò)表達(dá)的B7家族成員跨膜蛋白，由于其在免疫學(xué)和腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的生物學(xué)作用而備受關(guān)注，在腫瘤免疫治療領(lǐng)域中作為分子靶點(diǎn)被廣泛研究［4］。

1 B7-H3的分子特征

B7-H3基因由CHAPOVAL等［5］于2001年在人樹(shù)突狀細(xì)胞cDNA文庫(kù)中首次克隆而出，因其結(jié)構(gòu)與B7家族基因相似，故命名為B7Homolog 3（B7-H3）。B7-H3位于人類染色體15q24.1，含10個(gè)外顯子，其mRNA長(zhǎng)4.1 kb。B7-H3分子是Ⅰ型跨膜蛋白，為免疫球蛋白超家族成員，由1個(gè)氨基端信號(hào)肽、1個(gè)胞外結(jié)構(gòu)域（含免疫球蛋白樣可變區(qū)IgV和恒定區(qū)IgC）、1個(gè)跨膜域和1個(gè)僅有45個(gè)氨基酸的胞內(nèi)域組成。B7-H3與其他B7家族成員20%~27%的氨基酸具有同一性，是最保守的家族成員，人B7-H3與小鼠B7-H3的序列相似性高達(dá)88%。由于外顯子復(fù)制，人B7-H3有兩種剪切異構(gòu)體：即2Ig-B7-H3，胞外域含IgV-IgC，包含316個(gè)氨基酸，分子量為45~66 kD；4Ig-B7-H3是胞外域?yàn)镮gV-IgC-IgV-IgC的另一種異構(gòu)體，含534個(gè)氨基酸，分子量為90~110 kD，是人體組織中最主要的存在形式［6-7］。此外，由于內(nèi)含子的可變剪切，可生成可溶性B7-H3（soluble B7-H3，sB7-H3）；膜型B7-H3也可被基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）裂解形成sB7-H3，并可在人類血漿中檢測(cè)［8-9］。

2 B7-H3的表達(dá)與分布

B7-H3 mRNA廣泛表達(dá)于人類多種細(xì)胞和組織中。在非免疫性的靜止成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成骨細(xì)胞和羊水干細(xì)胞上均可檢測(cè)到B7-H3 mRNA，在心臟、肝臟、胰腺、小腸、結(jié)腸、前列腺、子宮、胎盤(pán)、胸腺、脾臟等淋巴器官中也有表達(dá)，外周血單核細(xì)胞中不表達(dá)；但B7-H3蛋白的表達(dá)卻較為局限且呈低水平，主要表達(dá)于局灶性肝細(xì)胞以及胃、結(jié)腸的少數(shù)腔上皮細(xì)胞，廣泛的mRNA表達(dá)譜與局限的蛋白表達(dá)與轉(zhuǎn)錄后嚴(yán)密的調(diào)控機(jī)制有關(guān)［10-11］。B7-H3蛋白還可表達(dá)于未成熟和成熟的樹(shù)突狀細(xì)胞中，經(jīng)誘導(dǎo)也可表達(dá)于NK細(xì)胞、B細(xì)胞、T細(xì)胞。然而，與健康組織的局限性表達(dá)不同，B7-H3蛋白在多種實(shí)體瘤中過(guò)表達(dá)，包括膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（glioblastoma，GBM）、神經(jīng)母細(xì)胞瘤（neuroblastoma，NB）、胰腺導(dǎo)管腺癌（pancreatic ductal adenocarcinoma，PDAC）、肺癌、黑色素瘤、前列腺癌、膀胱癌、卵巢癌、腎癌、乳腺癌和宮頸癌等。多項(xiàng)研究表明，B7-H3在非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者中表達(dá)率可高達(dá)100%［12］；SUN等［13］發(fā)現(xiàn)93.8%肝癌患者中B7-H3過(guò)表達(dá)；前列腺癌患者的B7-H3表達(dá)率也高達(dá)95.9%；76%的NB和100%的髓母細(xì)胞瘤及超過(guò)70%的GBM均呈現(xiàn)B7-H3過(guò)表達(dá)［14］；此外，95%的腎透明細(xì)胞癌患者的腫瘤間質(zhì)和脈管系統(tǒng)中也發(fā)現(xiàn)了B7-H3陽(yáng)性表達(dá)［15］。

3 B7-H3功能與腫瘤

目前對(duì)B7-H3特異性受體和下游信號(hào)知之甚少，但大量研究表明B7-H3對(duì)固有免疫和適應(yīng)性免疫均有調(diào)節(jié)作用。早期研究發(fā)現(xiàn)，B7-H3陽(yáng)性的NB細(xì)胞可免受NK細(xì)胞介導(dǎo)的裂解作用，推測(cè)NK細(xì)胞表面可能含有與B7-H3結(jié)合的抑制性受體［16］。在T細(xì)胞介導(dǎo)的適應(yīng)性免疫中，最初研究表明B7-H3作為共刺激分子，可促進(jìn)CD4+和CD8+T細(xì)胞的增殖，增強(qiáng)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞活性，選擇性刺激IFN-γ的產(chǎn)生。然而隨研究深入，越來(lái)越多的證據(jù)表明B7-H3可抑制T細(xì)胞的活化，并有效抑制活化T細(xì)胞的增殖、細(xì)胞因子產(chǎn)生和細(xì)胞毒性功能。臨床前研究表明，阻斷B7-H3可增強(qiáng)CTL和NK細(xì)胞活性，減少腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的數(shù)量，減輕腫瘤負(fù)荷［17-18］。

除上述免疫調(diào)節(jié)功能外，B7-H3也在腫瘤發(fā)生、增殖、凋亡等生物學(xué)進(jìn)程中發(fā)揮作用。多項(xiàng)研究表明B7-H3可改變細(xì)胞糖代謝，增加腫瘤細(xì)胞的有氧糖酵解能力，即Warburg效應(yīng)，促進(jìn)腫瘤發(fā)生相關(guān)生物大分子的合成［19］。B7-H3可能通過(guò)抑制Nrf2的轉(zhuǎn)錄提高活性氧和低氧誘導(dǎo)因子1-α（hypoxia-induc?ible factorα，HIF1-α）的水平，從而上調(diào)乳酸脫氫酶A和丙酮酸脫氫酶激酶1，促進(jìn)糖酵解［20-22］。B7-H3還可提高基質(zhì)金屬蛋白酶水平，募集并激活VEGF和Tie-2，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞在基質(zhì)間隙的擴(kuò)散和遷移，從而促進(jìn)腫瘤新生血管的形成［23］。此外，B7-H3可能通過(guò)PI3K/AKT途徑干擾細(xì)胞周期，加快G1期/S期進(jìn)程，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞快速增殖［24］。研究顯示B7-H3基因表達(dá)可明顯促進(jìn)宮頸癌、食管癌、口腔癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖，基因敲除后細(xì)胞增殖明顯減弱。在肝癌研究中發(fā)現(xiàn)B7-H3可通過(guò)JAK2/STAT3/SLUG通路靶向上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程，促進(jìn)肝癌的侵襲和轉(zhuǎn)移［25］。尚有研究表明B7-H3還與腫瘤耐藥有關(guān)。B7-H3可能通過(guò)JAK2/STAT3和PI3K/Akt/mTOR途徑激活survivin，Mcl-1，Bcl-xL和Bcl-2等凋亡抑制因子抑制caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，或與主穹隆蛋白結(jié)合，激活MAPK激酶途徑，促進(jìn)腫瘤干細(xì)胞的產(chǎn)生，從而發(fā)揮抗腫瘤細(xì)胞凋亡作用并使其對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性［26-28］。B7-H3的過(guò)表達(dá)和其在腫瘤進(jìn)展中的生物學(xué)作用也得到了臨床數(shù)據(jù)的支持。大量研究表明，B7-H3過(guò)表達(dá)與腫瘤分級(jí)、高腫瘤負(fù)荷、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高復(fù)發(fā)率和總體生存期縮短有關(guān)。TANG等［29］的研究發(fā)現(xiàn)，B7-H3在高級(jí)別神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)較高，而在低級(jí)別膠質(zhì)瘤中表達(dá)較低，在正常腦組織中不表達(dá)；低級(jí)別膠質(zhì)瘤患者中，B7-H3低表達(dá)組中位生存期136.1個(gè)月，而高表達(dá)組僅55.5個(gè)月。

4 B7-H3 CAR-T用于實(shí)體瘤免疫治療

B7-H3過(guò)表達(dá)和在腫瘤生物學(xué)進(jìn)程中的功能使其在實(shí)體瘤免疫治療中備受關(guān)注。靶向B7-H3的單克隆抗體MGA271在腎細(xì)胞癌和膀胱癌臨床前模型中表現(xiàn)出有效的抗腫瘤活性。Ⅰ期臨床試驗(yàn)已在前列腺癌、黑色素瘤、NSCLC等患者中開(kāi)展。在轉(zhuǎn)移性NB的補(bǔ)救治療中，131I標(biāo)志的8H9使83.3%的患者生存期延長(zhǎng)，中位生存期達(dá)33個(gè)月［30］。目前，Ⅰ期臨床試驗(yàn)已在腹膜腫瘤、GBM和軟腦膜轉(zhuǎn)移瘤患者中開(kāi)展。mAb376.96是靶向B7-H3的另一種單克隆抗體。單藥應(yīng)用于卵巢癌、胰腺癌模型時(shí)，與未治療組相比可延長(zhǎng)小鼠中位生存期2~3倍［31-32］。此外，新型雙特異性抗體（如MGD009）、抗體偶聯(lián)藥物（如mAb276-PBD、MGC018和8H9-PE38）在肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌等多種腫瘤中已有研究，在異種移植模型中產(chǎn)生了實(shí)質(zhì)性腫瘤消退，部分已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。

與傳統(tǒng)放化療及抗體治療相比，CAR-T細(xì)胞治療具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。CAR由胞外域、跨膜域和胞內(nèi)域組成（圖1）。胞外單鏈可變片段（single-chain variable fragment，scFv）用于識(shí)別抗原靶點(diǎn)，胞內(nèi)域含CD3鏈和共刺激分子，用于傳遞活化、共刺激信號(hào)。第一代CAR-T胞內(nèi)域僅含CD3ζ結(jié)構(gòu)。第二代和第三代CAR-T胞內(nèi)域分別含有一個(gè)和兩個(gè)共刺激分子（如CD28、4-1BB）與CD3ζ串聯(lián)。第四代CAR-T引 入了增 強(qiáng)T細(xì) 胞功能 的細(xì)胞因 子［33-34］。CAR-T細(xì)胞靶向性強(qiáng)，靶點(diǎn)范圍廣，可識(shí)別蛋白質(zhì)、糖類和脂類等多種腫瘤抗原；CAR-T以MHC非限制性方式識(shí)別腫瘤抗原，因此不受腫瘤中MHC表達(dá)下調(diào)的影響；CAR-T內(nèi)信號(hào)域的修飾可彌補(bǔ)共刺激分子的下調(diào)，在CAR胞內(nèi)信號(hào)域加入CD28和4-1BB等共刺激分子可顯著增強(qiáng)T細(xì)胞增殖、存活、細(xì)胞因子分泌和腫瘤溶解能力。此外，CAR-T在體外可快速大量增殖，可在短期內(nèi)獲得足夠的腫瘤特異性細(xì)胞滿足治療所需［34-35］。

圖1 CAR結(jié)構(gòu)示意圖Fig.1 Schematic structure of CAR

目前靶向B7-H3的CAR-T在神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、骨肉瘤、胰腺癌、卵巢癌、黑色素瘤等多種實(shí)體瘤中研究。有研究測(cè)試了基于MGA271的第二代CAR-BBζ-T在B7-H3陽(yáng)性骨肉瘤、髓母細(xì)胞瘤、尤文氏肉瘤細(xì)胞系中的作用，體外共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)B7-H3 CAR-T可有效靶向腫瘤細(xì)胞并分泌大量IFN-γ、TNF-α和IL-2［36］。隨后有相關(guān)研究團(tuán)隊(duì)在非典型畸胎橫紋肌樣瘤（atypi?cal teratoid/rhabdoid tumors，ATRTs）中測(cè)試了B7-H3 CAR-T對(duì)8種不同ATRT細(xì)胞系的殺傷作用，結(jié)果表明B7-H3 CAR-T可有效殺傷腫瘤細(xì)胞，其中與BT12細(xì)胞系共培養(yǎng)時(shí)，即使以1∶5效靶比，仍可清除幾乎所有腫瘤細(xì)胞［37］。DU等［11］發(fā)現(xiàn)B7-H3 CAR-T反應(yīng)強(qiáng)度與腫瘤細(xì)胞表面B7-H3的表達(dá)量有關(guān)，即B7-H3 CAR-T優(yōu)先靶向B7-H3高表達(dá)腫瘤細(xì)胞，對(duì)抗原低表達(dá)腫瘤細(xì)胞活性顯著降低，顯示出“治療窗”，與上述團(tuán)隊(duì)在不同B7-H3表達(dá)水平的NALM-6細(xì)胞系中研究相似。B7-H3 CAR-T的抗原密度依賴性反應(yīng)在GBM中也得到驗(yàn)證。在B7-H3高表達(dá)GBM組，B7-H3 CAR-T可產(chǎn)生強(qiáng)烈的特異性裂解作用，在中表達(dá)組可觀察到中等強(qiáng)度細(xì)胞裂解，而在B7-H3陰性或低表達(dá)組未觀察到明顯反應(yīng)，提示B7-H3 CAR-T可能更適用于治療B7-H3高表達(dá)腫瘤［29］。此外，B7-H3 CAR-T在卵巢癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤和黑色素瘤的體外試驗(yàn)中亦顯示出有效的抗腫瘤活性［11，38］。

為探究不同CAR結(jié)構(gòu)對(duì)T細(xì)胞功能的影響，研究者基于不同B7-H3 mAb設(shè)計(jì)了包含不同共刺激信號(hào)的CAR-T［36］。體外試驗(yàn)表明基于MGA271的第二代CAR-BBζ-T在特異性識(shí)別B7-H3陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞同時(shí)細(xì)胞因子分泌能力最佳。同樣，DU等［11］基于mAb376.96構(gòu)建了二代B7-H3 CAR-28ζ-T和B7-H3 CAR-BBζ-T，發(fā)現(xiàn)兩種CAR-T均可特異性識(shí)別并殺傷B7-H3陽(yáng)性PDAC細(xì)胞系，但在靶向組成性表達(dá)PD-L1的PDAC細(xì)胞系時(shí)，相比B7-H3 CAR-28ζ-T，B7-H3 CAR-BBζ-T表面PD-1表達(dá)更低，并具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，表明B7-H3 CAR-BBζ-Ts對(duì)PD-L1介導(dǎo)的抑制作用較小。除優(yōu)化CAR結(jié)構(gòu)外，研究者們也從CAR-T表面共表達(dá)分子上另辟蹊徑。HUANG等［39］基 于mAb7E12設(shè) 計(jì) 了 共 表 達(dá)PD-1誘騙受體（PD28/PDmut7R）的B7-H3 CAR-T，該受體由CD28的共刺激信號(hào)域或組成性活化IL-7受體胞內(nèi)域與PD-1的胞外域嵌合而成，以期將PD-1介導(dǎo)的抑制信號(hào)逆轉(zhuǎn)為刺激信號(hào)，從而改善CAR-T的抗腫瘤活性。與B7-H3陽(yáng)性肺巨細(xì)胞癌或卵巢癌細(xì)胞系共培養(yǎng)，PD28 CAR-T或PDmut7R CAR-T可產(chǎn)生更高水平的Th1細(xì)胞因子，提示PD-1誘騙受體在B7-H3 CAR-T的共表達(dá)可提高其抗腫瘤活性。

基于前期良好的體外試驗(yàn)結(jié)果，研究者們相繼開(kāi)展了B7-H3 CAR-T體內(nèi)試驗(yàn)。在骨肉瘤（n=5）和尤文氏肉瘤（n=5）原位異種移植模型中，向NSG小鼠尾靜脈注射1×107個(gè)B7-H3 CAR-T導(dǎo)致了腫瘤的完全退縮和消除，并顯著延長(zhǎng)小鼠生存期。在骨肉瘤轉(zhuǎn)移模型中，B7-H3 CAR-T組（n=10），9例小鼠生存時(shí)間超過(guò)5個(gè)月，而對(duì)照組（n=5）均在50 d內(nèi)死亡，生存獲益明顯［36］。B7-H3在多種神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中過(guò)表達(dá)，為測(cè)試B7-H3 CAR-T能否有效穿越血腦屏障并根除腫瘤，研究者向髓母細(xì)胞瘤原位異種移植小鼠尾靜脈注射B7-H3 CAR-T，注射7 d后，小鼠顱內(nèi)即可檢測(cè)到大量B7-H3 CAR-T，最終5只小鼠顱內(nèi)腫瘤均被有效根除；即便在高侵襲性模型中，仍有效清除腫瘤（4只/6只），與CD19 CAR-T對(duì)照組相比，顯著延長(zhǎng)小鼠生存期（20 dvs80 d）［36］。受到前期結(jié)果的鼓舞，有相關(guān)研究團(tuán)隊(duì)繼續(xù)探索了B7-H3 CAR-T在兒童ATRTs中的作用［37］。在兩組侵襲性ATRT-PDX（patient-derived xenograft，PDX）模型中，B7-H3 CAR-BBζ-T靜脈給藥后（1×107個(gè)細(xì)胞）成功根除腫瘤（10只/10只，9只/10只）。與靜脈注射相比，局部（腫瘤內(nèi)或腦室內(nèi)）給予B7-H3 CAR-BBζ-T歸巢更快，抗腫瘤效果更好，與其他學(xué)者在卵巢癌研究中的結(jié)論相似［11］。劑量滴定實(shí)驗(yàn)顯示，腦室內(nèi)給予0.25×106個(gè)B7-H3 CAR-T可清除60%的小鼠腫瘤，清除全部小鼠腫瘤需0.5×106個(gè)B7-H3 CAR-T，而靜脈注射組則需2.5×106個(gè)B7-H3 CAR-T。此外，局部給藥全身炎癥因子水平更低，表明局部應(yīng)用CAR-T的毒性可能小于全身應(yīng)用。在腫瘤再挑戰(zhàn)模型評(píng)估中，無(wú)論是靜脈注射還是腦室內(nèi)給藥均介導(dǎo)了抗原特異性的免疫記憶，為防止腫瘤復(fù)發(fā)提供了可能。GBM也是備受關(guān)注的中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤。國(guó)內(nèi)學(xué)者構(gòu)建了靶向B7-H3的第三代CAR-T（CD28-4-1BB-CD3ζ）［29］。在 原 位GBM-PDX模 型（n=5）中向NOD-SCID小鼠靜脈注射2×106個(gè)B7-H3 CAR-T后觀察到明顯的腫瘤生長(zhǎng)抑制，2只小鼠復(fù)發(fā)。排除抗原丟失引起的復(fù)發(fā)后，TANG等［29］采用不同劑量給藥，發(fā)現(xiàn)B7-H3 CAR-T呈現(xiàn)劑量依賴性抗腫瘤作用和生存期延長(zhǎng)，在NB模型中得出了同樣的結(jié)論。NEHAMA等［40］還測(cè)試了含不同共刺激分子的B7-H3 CAR-T在GBM模型中的抗腫瘤作用，B7-H3 CAR-28ζ-T組和B7-H3 CAR-BBζ-T組未觀察到治療相關(guān)不良反應(yīng)，均出現(xiàn)持續(xù)的腫瘤退縮，并具有顯著的生存獲益（6只/11只>120 dvs6只/10只>120 d），兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同樣地，在PDAC細(xì)胞系原位異種移植模型、轉(zhuǎn)移模型和PDAC-PDX模型中，兩種B7-H3 CAR-T也表現(xiàn)出相似的抗腫瘤特性，其中，在PDAC-PDX模型中，B7-H3 CAR-T可有效根除腫瘤并持續(xù)控制腫瘤生長(zhǎng)長(zhǎng)達(dá)80 d。但在靶向組成性表達(dá)PD-L1的PDAC模型時(shí)，CAR-BBζ-T表面PD-1表達(dá)更低，抗腫瘤作用明顯優(yōu)于CAR-28ζ-T，與體外試驗(yàn)結(jié)果一致［11］。為提高CAR-T的抗腫瘤作用，HUANG等［39］在人肺巨細(xì)胞癌和卵巢癌皮下異種移植模型中測(cè)試了共表達(dá)PD-1誘騙受體（PD28/PDmut7R）的B7-H3 CAR-T，與對(duì)照組相比，共表達(dá)PD-1誘騙受體的B7-H3 CAR-T，特別是PD?mut7R CAR-T，表現(xiàn)出更優(yōu)異的抗腫瘤活性，且在腫瘤再挑戰(zhàn)模型中，單次注射5 d后即可成功清除腫瘤。另有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在B7-H3 CAR-28ζ-T細(xì)胞表面共表達(dá)41BBL，可增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞的體內(nèi)擴(kuò)增能力，改善其抗腫瘤活性，并將共表達(dá)41BBL的CAR-T細(xì)胞用于早期臨床試驗(yàn)［41］。針對(duì)實(shí)體瘤的抗原異質(zhì)性，國(guó)內(nèi)華西醫(yī)院學(xué)者設(shè)計(jì)了同時(shí)靶向CD70和B7-H3的CAR-T細(xì)胞，與單靶點(diǎn)CAR-T相比，低劑量的雙靶點(diǎn)CAR-T細(xì)胞即可有效控制肺癌和黑色素瘤異種移植瘤并改善模型動(dòng)物的總體存活率［42］。CAR-T的安全性是CAR-T應(yīng)用中的焦點(diǎn)，為此，有研究探究了具有免疫能力的荷瘤C57BL/6J小鼠中的潛在毒性，結(jié)果表明B7-H3 CAR-T不僅可控制PDAC生長(zhǎng)達(dá)4周，且血細(xì)胞計(jì)數(shù)和組成均無(wú)顯著變化，未檢測(cè)到組織損傷和器官毒性［11］。

臨床前期令人鼓舞的結(jié)果也推動(dòng)了B7-H3 CAR-T向臨床階段的發(fā)展。國(guó)內(nèi)學(xué)者率先發(fā)表了B7-H3 CAR-T用于1例復(fù)發(fā)性間變性腦膜瘤患者的結(jié)果。研究者將B7-H3 CAR-T采用局部腔內(nèi)注射方式連續(xù)治療3個(gè)周期，患者耐受性良好，未出現(xiàn)3級(jí)及以上的毒性反應(yīng)。B7-H3 CAR-T可浸潤(rùn)至輸注裝置附近的腫瘤組織并可有效控制浸潤(rùn)部位的腫瘤生長(zhǎng)，但無(wú)法浸潤(rùn)至遠(yuǎn)處腫瘤組織。免疫組化分析顯示，治療3個(gè)周期后，浸潤(rùn)部位的腫瘤組織B7-H3表達(dá)量明顯降低，而遠(yuǎn)處無(wú)浸潤(rùn)部位B7-H3仍呈高表達(dá)［43］。第一例臨床治療結(jié)果提示局部注射B7-H3 CAR-T是安全的，并可產(chǎn)生局部生物學(xué)活性，未來(lái)解決抗原損失和CAR-T細(xì)胞浸潤(rùn)可進(jìn)一步增強(qiáng)B7-H3 CAR-T療效。目前B7-H3 CAR-T已有多項(xiàng)臨床試驗(yàn)進(jìn)行（表1）。其中一項(xiàng)Ⅰ期臨床試驗(yàn)計(jì)劃將B7-H3 CAR-T腫瘤內(nèi)或腦室內(nèi)局部給藥，評(píng)估其在彌漫性膠質(zhì)瘤、ATRT等在內(nèi)的多種兒童復(fù)發(fā)性或難治性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中的安全性和可行性（NCT04185038）。一項(xiàng)Ⅰ/Ⅱ期試驗(yàn)由國(guó)內(nèi)一家機(jī)構(gòu)開(kāi)展，預(yù)探究在難治性或復(fù)發(fā)性GBM中，與替莫唑胺單藥相比，局部給予B7-H3 CAR-T聯(lián)合替莫唑胺的安全性和有效性（NCT04077866）。

表1 最近正在開(kāi)展的B7-H3 CAR-T細(xì)胞治療實(shí)體瘤的臨床試驗(yàn)Tab.1 Recently ongoing clinical trials with B7-H3 CAR-T cell therapy in solid tumors

5 總結(jié)與展望

CAR-T在血液系統(tǒng)腫瘤中的進(jìn)展為實(shí)體瘤的免疫治療奠定基礎(chǔ)。以B7-H3為靶點(diǎn)的CAR-T臨床前研究展示了良好的耐受性和抗腫瘤作用。但由于實(shí)體瘤的復(fù)雜性和臨床前實(shí)驗(yàn)的局限性，B7-H3 CAR-T的臨床實(shí)施未來(lái)還需在以下方面做出努力：①深入研究B7-H3受體和信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制為CART應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)；②引入趨化因子受體或?qū)で笞罴呀o藥方式促進(jìn)CAR-T細(xì)胞浸潤(rùn)；③發(fā)掘CAR-T調(diào)控因子、優(yōu)化共刺激結(jié)構(gòu)、同時(shí)靶向腫瘤基質(zhì)或聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)治療以克服實(shí)體瘤免疫抑制微環(huán)境；④基于實(shí)體瘤的高度異質(zhì)性，設(shè)計(jì)多靶點(diǎn)CAR-T，防止因單靶點(diǎn)耐受而免疫逃逸；⑤完善治療體系，確定最佳給藥時(shí)機(jī)和劑量，在保證抗腫瘤作用同時(shí)盡量減少毒副作用。CAR-T治療腫瘤存在研究意義，盡管存在諸多困難，但隨著人們對(duì)腫瘤生物學(xué)、免疫學(xué)認(rèn)識(shí)的不斷加深和CAR-T技術(shù)的成熟與改進(jìn)，CAR-T將為眾多實(shí)體瘤患者治療提供研究基礎(chǔ)。