張貴珍 余祖江 韓雙?。ㄠ嵵荽髮W(xué)第一附屬醫(yī)院感染科，鄭州 450052）

嵌合抗原受體T細(xì)胞（chimeric antigen receptor-T cells，CAR-T）治療是目前被臨床廣泛關(guān)注的一種新型細(xì)胞免疫療法，從患者或異體供者血液中獲取T細(xì)胞后利用基因工程技術(shù)將靶向腫瘤抗原的CAR引入到T細(xì)胞，體外擴(kuò)增后回輸患者體內(nèi)發(fā)揮特異性抗腫瘤作用。2017年CAR-T細(xì)胞治療迎來了階段性勝利，美國食品藥品監(jiān)督管理局先后批準(zhǔn)兩個(gè)CD19 CAR-T活細(xì)胞藥物“Tisagenlecleucel”和“Axi?cabtagene ciloleucel”，用于急性B細(xì)胞白血病和B細(xì)胞淋巴瘤 的 治療［1-2］。2020年7月，第三個(gè)CD19 CAR-T藥物“brexucabtagene autoleucel”也獲得加速審批，用于治療復(fù)發(fā)難治性套細(xì)胞淋巴瘤患者［3］。

CAR-T細(xì)胞在血液系統(tǒng)腫瘤中取得了令人矚目的進(jìn)展極大提高了研究者的熱情將CAR-T研究延伸至實(shí)體瘤治療領(lǐng)域中。CAR-T抗腫瘤效果有賴于CAR對腫瘤抗原的特異性識別。因此，合適的抗原靶點(diǎn)對CAR-T治療的成功實(shí)施至關(guān)重要。B7-H3（也稱CD276）是一種在多種實(shí)體瘤中過表達(dá)的B7家族成員跨膜蛋白，由于其在免疫學(xué)和腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的生物學(xué)作用而備受關(guān)注，在腫瘤免疫治療領(lǐng)域中作為分子靶點(diǎn)被廣泛研究［4］。

1 B7-H3的分子特征

B7-H3基因由CHAPOVAL等［5］于2001年在人樹突狀細(xì)胞cDNA文庫中首次克隆而出，因其結(jié)構(gòu)與B7家族基因相似，故命名為B7Homolog 3（B7-H3）。B7-H3位于人類染色體15q24.1，含10個(gè)外顯子，其mRNA長4.1 kb。B7-H3分子是Ⅰ型跨膜蛋白，為免疫球蛋白超家族成員，由1個(gè)氨基端信號肽、1個(gè)胞外結(jié)構(gòu)域（含免疫球蛋白樣可變區(qū)IgV和恒定區(qū)IgC）、1個(gè)跨膜域和1個(gè)僅有45個(gè)氨基酸的胞內(nèi)域組成。B7-H3與其他B7家族成員20%~27%的氨基酸具有同一性，是最保守的家族成員，人B7-H3與小鼠B7-H3的序列相似性高達(dá)88%。由于外顯子復(fù)制，人B7-H3有兩種剪切異構(gòu)體：即2Ig-B7-H3，胞外域含IgV-IgC，包含316個(gè)氨基酸，分子量為45~66 kD；4Ig-B7-H3是胞外域?yàn)镮gV-IgC-IgV-IgC的另一種異構(gòu)體，含534個(gè)氨基酸，分子量為90~110 kD，是人體組織中最主要的存在形式［6-7］。此外，由于內(nèi)含子的可變剪切，可生成可溶性B7-H3（soluble B7-H3，sB7-H3）；膜型B7-H3也可被基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）裂解形成sB7-H3，并可在人類血漿中檢測［8-9］。

2 B7-H3的表達(dá)與分布

B7-H3 mRNA廣泛表達(dá)于人類多種細(xì)胞和組織中。在非免疫性的靜止成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成骨細(xì)胞和羊水干細(xì)胞上均可檢測到B7-H3 mRNA，在心臟、肝臟、胰腺、小腸、結(jié)腸、前列腺、子宮、胎盤、胸腺、脾臟等淋巴器官中也有表達(dá)，外周血單核細(xì)胞中不表達(dá)；但B7-H3蛋白的表達(dá)卻較為局限且呈低水平，主要表達(dá)于局灶性肝細(xì)胞以及胃、結(jié)腸的少數(shù)腔上皮細(xì)胞，廣泛的mRNA表達(dá)譜與局限的蛋白表達(dá)與轉(zhuǎn)錄后嚴(yán)密的調(diào)控機(jī)制有關(guān)［10-11］。B7-H3蛋白還可表達(dá)于未成熟和成熟的樹突狀細(xì)胞中，經(jīng)誘導(dǎo)也可表達(dá)于NK細(xì)胞、B細(xì)胞、T細(xì)胞。然而，與健康組織的局限性表達(dá)不同，B7-H3蛋白在多種實(shí)體瘤中過表達(dá)，包括膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（glioblastoma，GBM）、神經(jīng)母細(xì)胞瘤（neuroblastoma，NB）、胰腺導(dǎo)管腺癌（pancreatic ductal adenocarcinoma，PDAC）、肺癌、黑色素瘤、前列腺癌、膀胱癌、卵巢癌、腎癌、乳腺癌和宮頸癌等。多項(xiàng)研究表明，B7-H3在非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者中表達(dá)率可高達(dá)100%［12］；SUN等［13］發(fā)現(xiàn)93.8%肝癌患者中B7-H3過表達(dá)；前列腺癌患者的B7-H3表達(dá)率也高達(dá)95.9%；76%的NB和100%的髓母細(xì)胞瘤及超過70%的GBM均呈現(xiàn)B7-H3過表達(dá)［14］；此外，95%的腎透明細(xì)胞癌患者的腫瘤間質(zhì)和脈管系統(tǒng)中也發(fā)現(xiàn)了B7-H3陽性表達(dá)［15］。

3 B7-H3功能與腫瘤

目前對B7-H3特異性受體和下游信號知之甚少，但大量研究表明B7-H3對固有免疫和適應(yīng)性免疫均有調(diào)節(jié)作用。早期研究發(fā)現(xiàn)，B7-H3陽性的NB細(xì)胞可免受NK細(xì)胞介導(dǎo)的裂解作用，推測NK細(xì)胞表面可能含有與B7-H3結(jié)合的抑制性受體［16］。在T細(xì)胞介導(dǎo)的適應(yīng)性免疫中，最初研究表明B7-H3作為共刺激分子，可促進(jìn)CD4+和CD8+T細(xì)胞的增殖，增強(qiáng)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞活性，選擇性刺激IFN-γ的產(chǎn)生。然而隨研究深入，越來越多的證據(jù)表明B7-H3可抑制T細(xì)胞的活化，并有效抑制活化T細(xì)胞的增殖、細(xì)胞因子產(chǎn)生和細(xì)胞毒性功能。臨床前研究表明，阻斷B7-H3可增強(qiáng)CTL和NK細(xì)胞活性，減少腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的數(shù)量，減輕腫瘤負(fù)荷［17-18］。

除上述免疫調(diào)節(jié)功能外，B7-H3也在腫瘤發(fā)生、增殖、凋亡等生物學(xué)進(jìn)程中發(fā)揮作用。多項(xiàng)研究表明B7-H3可改變細(xì)胞糖代謝，增加腫瘤細(xì)胞的有氧糖酵解能力，即Warburg效應(yīng)，促進(jìn)腫瘤發(fā)生相關(guān)生物大分子的合成［19］。B7-H3可能通過抑制Nrf2的轉(zhuǎn)錄提高活性氧和低氧誘導(dǎo)因子1-α（hypoxia-induc?ible factorα，HIF1-α）的水平，從而上調(diào)乳酸脫氫酶A和丙酮酸脫氫酶激酶1，促進(jìn)糖酵解［20-22］。B7-H3還可提高基質(zhì)金屬蛋白酶水平，募集并激活VEGF和Tie-2，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞在基質(zhì)間隙的擴(kuò)散和遷移，從而促進(jìn)腫瘤新生血管的形成［23］。此外，B7-H3可能通過PI3K/AKT途徑干擾細(xì)胞周期，加快G1期/S期進(jìn)程，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞快速增殖［24］。研究顯示B7-H3基因表達(dá)可明顯促進(jìn)宮頸癌、食管癌、口腔癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖，基因敲除后細(xì)胞增殖明顯減弱。在肝癌研究中發(fā)現(xiàn)B7-H3可通過JAK2/STAT3/SLUG通路靶向上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程，促進(jìn)肝癌的侵襲和轉(zhuǎn)移［25］。尚有研究表明B7-H3還與腫瘤耐藥有關(guān)。B7-H3可能通過JAK2/STAT3和PI3K/Akt/mTOR途徑激活survivin，Mcl-1，Bcl-xL和Bcl-2等凋亡抑制因子抑制caspase級聯(lián)反應(yīng)，或與主穹隆蛋白結(jié)合，激活MAPK激酶途徑，促進(jìn)腫瘤干細(xì)胞的產(chǎn)生，從而發(fā)揮抗腫瘤細(xì)胞凋亡作用并使其對化療藥物產(chǎn)生耐藥性［26-28］。B7-H3的過表達(dá)和其在腫瘤進(jìn)展中的生物學(xué)作用也得到了臨床數(shù)據(jù)的支持。大量研究表明，B7-H3過表達(dá)與腫瘤分級、高腫瘤負(fù)荷、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高復(fù)發(fā)率和總體生存期縮短有關(guān)。TANG等［29］的研究發(fā)現(xiàn)，B7-H3在高級別神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)較高，而在低級別膠質(zhì)瘤中表達(dá)較低，在正常腦組織中不表達(dá)；低級別膠質(zhì)瘤患者中，B7-H3低表達(dá)組中位生存期136.1個(gè)月，而高表達(dá)組僅55.5個(gè)月。

4 B7-H3 CAR-T用于實(shí)體瘤免疫治療

B7-H3過表達(dá)和在腫瘤生物學(xué)進(jìn)程中的功能使其在實(shí)體瘤免疫治療中備受關(guān)注。靶向B7-H3的單克隆抗體MGA271在腎細(xì)胞癌和膀胱癌臨床前模型中表現(xiàn)出有效的抗腫瘤活性。Ⅰ期臨床試驗(yàn)已在前列腺癌、黑色素瘤、NSCLC等患者中開展。在轉(zhuǎn)移性NB的補(bǔ)救治療中，131I標(biāo)志的8H9使83.3%的患者生存期延長，中位生存期達(dá)33個(gè)月［30］。目前，Ⅰ期臨床試驗(yàn)已在腹膜腫瘤、GBM和軟腦膜轉(zhuǎn)移瘤患者中開展。mAb376.96是靶向B7-H3的另一種單克隆抗體。單藥應(yīng)用于卵巢癌、胰腺癌模型時(shí)，與未治療組相比可延長小鼠中位生存期2~3倍［31-32］。此外，新型雙特異性抗體（如MGD009）、抗體偶聯(lián)藥物（如mAb276-PBD、MGC018和8H9-PE38）在肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌等多種腫瘤中已有研究，在異種移植模型中產(chǎn)生了實(shí)質(zhì)性腫瘤消退，部分已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。

與傳統(tǒng)放化療及抗體治療相比，CAR-T細(xì)胞治療具有獨(dú)特的優(yōu)勢。CAR由胞外域、跨膜域和胞內(nèi)域組成（圖1）。胞外單鏈可變片段（single-chain variable fragment，scFv）用于識別抗原靶點(diǎn)，胞內(nèi)域含CD3鏈和共刺激分子，用于傳遞活化、共刺激信號。第一代CAR-T胞內(nèi)域僅含CD3ζ結(jié)構(gòu)。第二代和第三代CAR-T胞內(nèi)域分別含有一個(gè)和兩個(gè)共刺激分子（如CD28、4-1BB）與CD3ζ串聯(lián)。第四代CAR-T引 入了增 強(qiáng)T細(xì) 胞功能 的細(xì)胞因 子［33-34］。CAR-T細(xì)胞靶向性強(qiáng)，靶點(diǎn)范圍廣，可識別蛋白質(zhì)、糖類和脂類等多種腫瘤抗原；CAR-T以MHC非限制性方式識別腫瘤抗原，因此不受腫瘤中MHC表達(dá)下調(diào)的影響；CAR-T內(nèi)信號域的修飾可彌補(bǔ)共刺激分子的下調(diào)，在CAR胞內(nèi)信號域加入CD28和4-1BB等共刺激分子可顯著增強(qiáng)T細(xì)胞增殖、存活、細(xì)胞因子分泌和腫瘤溶解能力。此外，CAR-T在體外可快速大量增殖，可在短期內(nèi)獲得足夠的腫瘤特異性細(xì)胞滿足治療所需［34-35］。

圖1 CAR結(jié)構(gòu)示意圖Fig.1 Schematic structure of CAR

目前靶向B7-H3的CAR-T在神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、骨肉瘤、胰腺癌、卵巢癌、黑色素瘤等多種實(shí)體瘤中研究。有研究測試了基于MGA271的第二代CAR-BBζ-T在B7-H3陽性骨肉瘤、髓母細(xì)胞瘤、尤文氏肉瘤細(xì)胞系中的作用，體外共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)B7-H3 CAR-T可有效靶向腫瘤細(xì)胞并分泌大量IFN-γ、TNF-α和IL-2［36］。隨后有相關(guān)研究團(tuán)隊(duì)在非典型畸胎橫紋肌樣瘤（atypi?cal teratoid/rhabdoid tumors，ATRTs）中測試了B7-H3 CAR-T對8種不同ATRT細(xì)胞系的殺傷作用，結(jié)果表明B7-H3 CAR-T可有效殺傷腫瘤細(xì)胞，其中與BT12細(xì)胞系共培養(yǎng)時(shí)，即使以1∶5效靶比，仍可清除幾乎所有腫瘤細(xì)胞［37］。DU等［11］發(fā)現(xiàn)B7-H3 CAR-T反應(yīng)強(qiáng)度與腫瘤細(xì)胞表面B7-H3的表達(dá)量有關(guān)，即B7-H3 CAR-T優(yōu)先靶向B7-H3高表達(dá)腫瘤細(xì)胞，對抗原低表達(dá)腫瘤細(xì)胞活性顯著降低，顯示出“治療窗”，與上述團(tuán)隊(duì)在不同B7-H3表達(dá)水平的NALM-6細(xì)胞系中研究相似。B7-H3 CAR-T的抗原密度依賴性反應(yīng)在GBM中也得到驗(yàn)證。在B7-H3高表達(dá)GBM組，B7-H3 CAR-T可產(chǎn)生強(qiáng)烈的特異性裂解作用，在中表達(dá)組可觀察到中等強(qiáng)度細(xì)胞裂解，而在B7-H3陰性或低表達(dá)組未觀察到明顯反應(yīng)，提示B7-H3 CAR-T可能更適用于治療B7-H3高表達(dá)腫瘤［29］。此外，B7-H3 CAR-T在卵巢癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤和黑色素瘤的體外試驗(yàn)中亦顯示出有效的抗腫瘤活性［11，38］。

為探究不同CAR結(jié)構(gòu)對T細(xì)胞功能的影響，研究者基于不同B7-H3 mAb設(shè)計(jì)了包含不同共刺激信號的CAR-T［36］。體外試驗(yàn)表明基于MGA271的第二代CAR-BBζ-T在特異性識別B7-H3陽性腫瘤細(xì)胞同時(shí)細(xì)胞因子分泌能力最佳。同樣，DU等［11］基于mAb376.96構(gòu)建了二代B7-H3 CAR-28ζ-T和B7-H3 CAR-BBζ-T，發(fā)現(xiàn)兩種CAR-T均可特異性識別并殺傷B7-H3陽性PDAC細(xì)胞系，但在靶向組成性表達(dá)PD-L1的PDAC細(xì)胞系時(shí)，相比B7-H3 CAR-28ζ-T，B7-H3 CAR-BBζ-T表面PD-1表達(dá)更低，并具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，表明B7-H3 CAR-BBζ-Ts對PD-L1介導(dǎo)的抑制作用較小。除優(yōu)化CAR結(jié)構(gòu)外，研究者們也從CAR-T表面共表達(dá)分子上另辟蹊徑。HUANG等［39］基 于mAb7E12設(shè) 計(jì) 了 共 表 達(dá)PD-1誘騙受體（PD28/PDmut7R）的B7-H3 CAR-T，該受體由CD28的共刺激信號域或組成性活化IL-7受體胞內(nèi)域與PD-1的胞外域嵌合而成，以期將PD-1介導(dǎo)的抑制信號逆轉(zhuǎn)為刺激信號，從而改善CAR-T的抗腫瘤活性。與B7-H3陽性肺巨細(xì)胞癌或卵巢癌細(xì)胞系共培養(yǎng)，PD28 CAR-T或PDmut7R CAR-T可產(chǎn)生更高水平的Th1細(xì)胞因子，提示PD-1誘騙受體在B7-H3 CAR-T的共表達(dá)可提高其抗腫瘤活性。

基于前期良好的體外試驗(yàn)結(jié)果，研究者們相繼開展了B7-H3 CAR-T體內(nèi)試驗(yàn)。在骨肉瘤（n=5）和尤文氏肉瘤（n=5）原位異種移植模型中，向NSG小鼠尾靜脈注射1×107個(gè)B7-H3 CAR-T導(dǎo)致了腫瘤的完全退縮和消除，并顯著延長小鼠生存期。在骨肉瘤轉(zhuǎn)移模型中，B7-H3 CAR-T組（n=10），9例小鼠生存時(shí)間超過5個(gè)月，而對照組（n=5）均在50 d內(nèi)死亡，生存獲益明顯［36］。B7-H3在多種神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中過表達(dá)，為測試B7-H3 CAR-T能否有效穿越血腦屏障并根除腫瘤，研究者向髓母細(xì)胞瘤原位異種移植小鼠尾靜脈注射B7-H3 CAR-T，注射7 d后，小鼠顱內(nèi)即可檢測到大量B7-H3 CAR-T，最終5只小鼠顱內(nèi)腫瘤均被有效根除；即便在高侵襲性模型中，仍有效清除腫瘤（4只/6只），與CD19 CAR-T對照組相比，顯著延長小鼠生存期（20 dvs80 d）［36］。受到前期結(jié)果的鼓舞，有相關(guān)研究團(tuán)隊(duì)繼續(xù)探索了B7-H3 CAR-T在兒童ATRTs中的作用［37］。在兩組侵襲性ATRT-PDX（patient-derived xenograft，PDX）模型中，B7-H3 CAR-BBζ-T靜脈給藥后（1×107個(gè)細(xì)胞）成功根除腫瘤（10只/10只，9只/10只）。與靜脈注射相比，局部（腫瘤內(nèi)或腦室內(nèi)）給予B7-H3 CAR-BBζ-T歸巢更快，抗腫瘤效果更好，與其他學(xué)者在卵巢癌研究中的結(jié)論相似［11］。劑量滴定實(shí)驗(yàn)顯示，腦室內(nèi)給予0.25×106個(gè)B7-H3 CAR-T可清除60%的小鼠腫瘤，清除全部小鼠腫瘤需0.5×106個(gè)B7-H3 CAR-T，而靜脈注射組則需2.5×106個(gè)B7-H3 CAR-T。此外，局部給藥全身炎癥因子水平更低，表明局部應(yīng)用CAR-T的毒性可能小于全身應(yīng)用。在腫瘤再挑戰(zhàn)模型評估中，無論是靜脈注射還是腦室內(nèi)給藥均介導(dǎo)了抗原特異性的免疫記憶，為防止腫瘤復(fù)發(fā)提供了可能。GBM也是備受關(guān)注的中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤。國內(nèi)學(xué)者構(gòu)建了靶向B7-H3的第三代CAR-T（CD28-4-1BB-CD3ζ）［29］。在 原 位GBM-PDX模 型（n=5）中向NOD-SCID小鼠靜脈注射2×106個(gè)B7-H3 CAR-T后觀察到明顯的腫瘤生長抑制，2只小鼠復(fù)發(fā)。排除抗原丟失引起的復(fù)發(fā)后，TANG等［29］采用不同劑量給藥，發(fā)現(xiàn)B7-H3 CAR-T呈現(xiàn)劑量依賴性抗腫瘤作用和生存期延長，在NB模型中得出了同樣的結(jié)論。NEHAMA等［40］還測試了含不同共刺激分子的B7-H3 CAR-T在GBM模型中的抗腫瘤作用，B7-H3 CAR-28ζ-T組和B7-H3 CAR-BBζ-T組未觀察到治療相關(guān)不良反應(yīng)，均出現(xiàn)持續(xù)的腫瘤退縮，并具有顯著的生存獲益（6只/11只>120 dvs6只/10只>120 d），兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同樣地，在PDAC細(xì)胞系原位異種移植模型、轉(zhuǎn)移模型和PDAC-PDX模型中，兩種B7-H3 CAR-T也表現(xiàn)出相似的抗腫瘤特性，其中，在PDAC-PDX模型中，B7-H3 CAR-T可有效根除腫瘤并持續(xù)控制腫瘤生長長達(dá)80 d。但在靶向組成性表達(dá)PD-L1的PDAC模型時(shí)，CAR-BBζ-T表面PD-1表達(dá)更低，抗腫瘤作用明顯優(yōu)于CAR-28ζ-T，與體外試驗(yàn)結(jié)果一致［11］。為提高CAR-T的抗腫瘤作用，HUANG等［39］在人肺巨細(xì)胞癌和卵巢癌皮下異種移植模型中測試了共表達(dá)PD-1誘騙受體（PD28/PDmut7R）的B7-H3 CAR-T，與對照組相比，共表達(dá)PD-1誘騙受體的B7-H3 CAR-T，特別是PD?mut7R CAR-T，表現(xiàn)出更優(yōu)異的抗腫瘤活性，且在腫瘤再挑戰(zhàn)模型中，單次注射5 d后即可成功清除腫瘤。另有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在B7-H3 CAR-28ζ-T細(xì)胞表面共表達(dá)41BBL，可增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞的體內(nèi)擴(kuò)增能力，改善其抗腫瘤活性，并將共表達(dá)41BBL的CAR-T細(xì)胞用于早期臨床試驗(yàn)［41］。針對實(shí)體瘤的抗原異質(zhì)性，國內(nèi)華西醫(yī)院學(xué)者設(shè)計(jì)了同時(shí)靶向CD70和B7-H3的CAR-T細(xì)胞，與單靶點(diǎn)CAR-T相比，低劑量的雙靶點(diǎn)CAR-T細(xì)胞即可有效控制肺癌和黑色素瘤異種移植瘤并改善模型動(dòng)物的總體存活率［42］。CAR-T的安全性是CAR-T應(yīng)用中的焦點(diǎn)，為此，有研究探究了具有免疫能力的荷瘤C57BL/6J小鼠中的潛在毒性，結(jié)果表明B7-H3 CAR-T不僅可控制PDAC生長達(dá)4周，且血細(xì)胞計(jì)數(shù)和組成均無顯著變化，未檢測到組織損傷和器官毒性［11］。

臨床前期令人鼓舞的結(jié)果也推動(dòng)了B7-H3 CAR-T向臨床階段的發(fā)展。國內(nèi)學(xué)者率先發(fā)表了B7-H3 CAR-T用于1例復(fù)發(fā)性間變性腦膜瘤患者的結(jié)果。研究者將B7-H3 CAR-T采用局部腔內(nèi)注射方式連續(xù)治療3個(gè)周期，患者耐受性良好，未出現(xiàn)3級及以上的毒性反應(yīng)。B7-H3 CAR-T可浸潤至輸注裝置附近的腫瘤組織并可有效控制浸潤部位的腫瘤生長，但無法浸潤至遠(yuǎn)處腫瘤組織。免疫組化分析顯示，治療3個(gè)周期后，浸潤部位的腫瘤組織B7-H3表達(dá)量明顯降低，而遠(yuǎn)處無浸潤部位B7-H3仍呈高表達(dá)［43］。第一例臨床治療結(jié)果提示局部注射B7-H3 CAR-T是安全的，并可產(chǎn)生局部生物學(xué)活性，未來解決抗原損失和CAR-T細(xì)胞浸潤可進(jìn)一步增強(qiáng)B7-H3 CAR-T療效。目前B7-H3 CAR-T已有多項(xiàng)臨床試驗(yàn)進(jìn)行（表1）。其中一項(xiàng)Ⅰ期臨床試驗(yàn)計(jì)劃將B7-H3 CAR-T腫瘤內(nèi)或腦室內(nèi)局部給藥，評估其在彌漫性膠質(zhì)瘤、ATRT等在內(nèi)的多種兒童復(fù)發(fā)性或難治性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中的安全性和可行性（NCT04185038）。一項(xiàng)Ⅰ/Ⅱ期試驗(yàn)由國內(nèi)一家機(jī)構(gòu)開展，預(yù)探究在難治性或復(fù)發(fā)性GBM中，與替莫唑胺單藥相比，局部給予B7-H3 CAR-T聯(lián)合替莫唑胺的安全性和有效性（NCT04077866）。

表1 最近正在開展的B7-H3 CAR-T細(xì)胞治療實(shí)體瘤的臨床試驗(yàn)Tab.1 Recently ongoing clinical trials with B7-H3 CAR-T cell therapy in solid tumors

5 總結(jié)與展望

CAR-T在血液系統(tǒng)腫瘤中的進(jìn)展為實(shí)體瘤的免疫治療奠定基礎(chǔ)。以B7-H3為靶點(diǎn)的CAR-T臨床前研究展示了良好的耐受性和抗腫瘤作用。但由于實(shí)體瘤的復(fù)雜性和臨床前實(shí)驗(yàn)的局限性，B7-H3 CAR-T的臨床實(shí)施未來還需在以下方面做出努力：①深入研究B7-H3受體和信號傳導(dǎo)機(jī)制為CART應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)；②引入趨化因子受體或?qū)で笞罴呀o藥方式促進(jìn)CAR-T細(xì)胞浸潤；③發(fā)掘CAR-T調(diào)控因子、優(yōu)化共刺激結(jié)構(gòu)、同時(shí)靶向腫瘤基質(zhì)或聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)治療以克服實(shí)體瘤免疫抑制微環(huán)境；④基于實(shí)體瘤的高度異質(zhì)性，設(shè)計(jì)多靶點(diǎn)CAR-T，防止因單靶點(diǎn)耐受而免疫逃逸；⑤完善治療體系，確定最佳給藥時(shí)機(jī)和劑量，在保證抗腫瘤作用同時(shí)盡量減少毒副作用。CAR-T治療腫瘤存在研究意義，盡管存在諸多困難，但隨著人們對腫瘤生物學(xué)、免疫學(xué)認(rèn)識的不斷加深和CAR-T技術(shù)的成熟與改進(jìn)，CAR-T將為眾多實(shí)體瘤患者治療提供研究基礎(chǔ)。