余培瓊 黃小毅 黃鉅明 張 琦 陳雪英 李結(jié)敏

廣東省肇慶市中心血站，廣東肇慶 526000

不規(guī)則抗體多為免疫球蛋白M（immunoglobulin M，IgM）和免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）；通常人體血液中不存在不規(guī)則抗體，但作為機(jī)體的防疫機(jī)制，紅細(xì)胞免疫可以通過輸血、藥物制劑等的免疫刺激產(chǎn)生不規(guī)則抗體[1-2]。當(dāng)血液中含有不規(guī)則抗體時(shí)極易引發(fā)免疫性溶血輸血反應(yīng)，雖然我國正常人群血液中檢出不規(guī)則抗體的概率較低，但患者輸注不規(guī)則抗體可能會引發(fā)致命危險(xiǎn)[3]。為了降低輸血反應(yīng)，國內(nèi)外越來越重視無償獻(xiàn)血工作中血液不規(guī)則抗體的篩查[4-5]。為了提升臨床輸血安全，本研究一方面對肇慶市無償獻(xiàn)血過程中的獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體進(jìn)行了篩查，建立不規(guī)則抗體獻(xiàn)血者電子檔案，另一方面通過對不規(guī)則抗體血液的洗滌制備以及臨床應(yīng)用，驗(yàn)證了不規(guī)則抗體血液采取科學(xué)處理后可應(yīng)用于臨床，提升血液資源利用率。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究選擇2021年4月至2022年4月肇慶市中心血站采集的61 700份無償獻(xiàn)血血液樣本（2 ml/份，EDTA-K2抗凝劑）為研究對象，獻(xiàn)血者資料齊全。標(biāo)本采集72 h內(nèi)進(jìn)行不規(guī)則抗體檢測。研究對象資料的收集符合相關(guān)醫(yī)學(xué)倫理委員會規(guī)定。

1.2 方法

1.2.1 確定不規(guī)則抗體血液樣本洗滌方案 取23份

不規(guī)則抗體血液樣本，每1 U紅細(xì)胞懸液中加入0.9%氯化鈉溶液100～150 ml，混合均勻后4℃、3600 g，離心5 min，并去除白膜層和上清液；反復(fù)洗滌3次后，再加入0.9%氯化鈉溶液，使溶液容量達(dá)到1 U或2 U；留取其血清及洗滌紅細(xì)胞的上清液，并測定洗滌后殘留抗體及血清抗體效價(jià)，確定該類血液樣本的洗滌方案。

1.2.2 不規(guī)則抗體篩查 ①留取獻(xiàn)血者血液樣本，通過微板法進(jìn)行ABO血型正反定型并檢測Rh血型；②對于O型紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集、正反定型不符以及RhD（-）的血液樣本進(jìn)行抗體篩查；③對抗體篩查結(jié)果陽性的樣本應(yīng)用O型抗篩細(xì)胞，并通過抗球蛋白試驗(yàn)、鹽水法檢測其抗體的分類及特異性。

1.2.3 微板法檢測方法及判定標(biāo)準(zhǔn) ①按照微

孔板紅細(xì)胞凝集法原理，全血標(biāo)本5 ml/份，質(zhì)控品QC1和QC2均為10 ml/份，按照3000 r/min的速度離心12 min，微孔板采用12×10孔階梯型，樣本通過血型儀自動條碼閱讀、加樣、樣本分配以及試劑分配；將血型儀的孵育器溫度設(shè)置為（30.00±1.00）℃進(jìn)行樣本孵育，孵育60 min后用儀器自帶的CCD圖像分析技術(shù)和電腦數(shù)據(jù)進(jìn)行處理、分析判定，并傳輸打印結(jié)果。②血型檢測時(shí)每塊板檢測10個(gè)樣本，其布局依次是陰性鹽水對照REF，抗-D、抗-A、抗-B、Ac、Bc、Oc。③通過SPC、P/C、LIA三個(gè)參數(shù)判斷是否發(fā)生凝集，其判定標(biāo)準(zhǔn)如下：SPC＜10為凝集，SPC=10為可疑，SPC＞10為不凝集；P/C＜30為凝集，P/C為15～30為可疑，P/C＞15為不凝集；LIA＞300為凝集，LIA為100～300為可疑，LIA＜100為不凝集；判定是否發(fā)生凝集時(shí)以SPC結(jié)果為主，當(dāng)P/C、LIA值為可疑時(shí)，按照SPC值判定結(jié)果，當(dāng)SPC值為可疑時(shí)，由質(zhì)管科再次鑒定。

1.2.4 抗球蛋白試驗(yàn)（微柱凝膠法）、鹽水法 ①抗球蛋白試驗(yàn)（微柱凝膠法）：按試劑說明書進(jìn)行操作，在試管中加入50 μl譜細(xì)胞含100 μl血漿，在37 ℃下孵育30 min，鹽水洗滌3次，以3400 r/min的轉(zhuǎn)速離心1 min，之后加入50 μl多特異性抗球蛋白試劑，3400 r/min離心15 s后觀察是否出現(xiàn)凝集，出現(xiàn)凝集為陽性。②鹽水法：在試管中加入50 μl譜細(xì)胞含100 μl血漿，在室溫下放置30 min后以3400 r/min離心15 s，離心結(jié)束后觀察是否出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，如出現(xiàn)凝集則為陽性。

1.2.5 不規(guī)則抗體血液的處置 ①將含有不規(guī)則抗體的獻(xiàn)血者信息錄入血液管理信息系統(tǒng)，建立專門的電子檔案，并定期進(jìn)行電話回訪，分析評估，建立統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)置相應(yīng)的電腦信息提示，當(dāng)該類獻(xiàn)血者再次獻(xiàn)血時(shí)可以幫助體檢醫(yī)生判斷是否能夠獻(xiàn)血或延期獻(xiàn)血或淘汰。②直接抗人球蛋白試驗(yàn)（微柱凝膠法）陽性血液進(jìn)行報(bào)廢處理，間接抗人球蛋白試驗(yàn)（微柱凝膠法）陽性血液按照1.2.1的方法制備成洗滌紅細(xì)胞，無菌接駁留取樣品后通過抗球蛋白法、鹽水法檢測殘留抗體。

1.2.6 合格率計(jì)算 洗滌3次后無不規(guī)則抗體殘留且質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)符合《全血及成分血質(zhì)量要求》[6]（GB18469-2012）（以下簡稱《要求》）的發(fā)往臨床醫(yī)院，并追蹤應(yīng)用情況；仍有殘留的加洗1～2次后留樣檢測，如果無抗體殘留且質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)符合《要求》的發(fā)往臨床醫(yī)院；如果仍有殘留則報(bào)廢處理。RhD（-）血液可制備冰凍紅細(xì)胞臨床備用。合格率=洗滌3次后抗體殘留血液數(shù)/進(jìn)行洗滌處理的血液總數(shù)×100%。

2 結(jié)果

2.1 不規(guī)則抗體血液樣本洗滌后抗體殘留情況

只含有IgM抗體的23份血液樣本按1.2.1流程洗滌后的合格率為91.30%（21/23），未合格的2袋中1袋“O”型洗滌3次殘留抗-A1效價(jià)為1，洗滌4次后無抗體殘留。由此可將1.2.1中血液洗滌流程定為含不規(guī)則抗體血液的標(biāo)準(zhǔn)化洗滌方法。具體洗滌后抗體殘留狀況見表1。

表1 23份未含不規(guī)則抗體血液洗滌后抗體殘留情況

2.2 獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體篩查情況

61 700份無償獻(xiàn)血血液樣本中共檢出間接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性血液44份（0.07%）；其中IgM占54.55%（24/44），IgG占40.91%（18/44），IgM/IgG占4.55%（2/44）。見表2。

表2 獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體篩查情況

2.3 不規(guī)則抗體血液抗體效價(jià)、特異性、類型及洗滌效果

44份不規(guī)則抗體血液按1.2.1流程洗滌后的合格率為90.91%（40/44），IgM類的合格率為100.00%（25/25），IgG類合格率為73.68%（14/19），IgG/IgM類合格率100.00%（1/1）；4份IgG-D類樣本不合格，1份洗滌4次后合格，3份洗滌5次后合格，未發(fā)往臨床應(yīng)用。見表3。

表3 不規(guī)則抗體血液抗體效價(jià)、特異性、類型及洗滌效果

2.4 不規(guī)則抗體血液處理后臨床應(yīng)用狀況

44份不規(guī)則抗體血液樣本經(jīng)洗滌后，有11份應(yīng)用于3家臨床機(jī)構(gòu)，應(yīng)用過程中均未發(fā)生輸血反應(yīng)。

3 討論

無償獻(xiàn)血者的血液在臨床治療與搶救中發(fā)揮重要作用，其血液的安全性會直接影響患者的臨床治療效果及其生命安全[7]。雖然由于血液診斷篩查技術(shù)的發(fā)展及輸血流程的規(guī)范化管理，ABO血型不符所引發(fā)的急性溶血性輸血反應(yīng)明顯減少；但由于血液成分復(fù)雜且多樣，加之患者體質(zhì)差異，輸血過程中仍有發(fā)生不規(guī)則抗體所致遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)[8-9]。研究顯示，血液中含有的不規(guī)則抗體是導(dǎo)致交叉配血困難、新生兒溶血病、遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)的重要危險(xiǎn)因素[10]。進(jìn)行血液抗體篩查，可以避免因獻(xiàn)血者血液中含有不規(guī)則抗體破壞輸血者紅細(xì)胞進(jìn)而引發(fā)溶血性輸血反應(yīng)，常用的篩查方法包括鹽水法、微板法、抗人球蛋白法等[11]。目前我國已有的血液抗體篩查結(jié)果顯示，不規(guī)則抗體血液的檢出率為0.02%～1.51%[12]。而本研究對肇慶市中心血站采集的61 700份無償獻(xiàn)血血液樣本進(jìn)行抗體篩查，結(jié)果不規(guī)則抗體檢出率為0.07%，與國內(nèi)血站檢出比例相符。近年，由于臨床血液診斷和篩查技術(shù)的發(fā)展和輸血流程管理的規(guī)范化，ABO血型不符所導(dǎo)致的急性溶血性輸血反應(yīng)發(fā)生率明顯下降，但由于血液成分的多樣性及患者體質(zhì)的差異，輸血階段仍有可能發(fā)生不規(guī)則抗體所導(dǎo)致的遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)。為了降低遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，加強(qiáng)不規(guī)則抗體獻(xiàn)血者的管理，本血站建立了不規(guī)則抗體獻(xiàn)血者電子檔案，幫助體檢醫(yī)生判斷是否獻(xiàn)血、延期獻(xiàn)血或者淘汰，可以有效減少血液浪費(fèi)。

本研究除了對獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體進(jìn)行篩查外，還根據(jù)篩查結(jié)果制訂不規(guī)則抗體血液處理原則。研究顯示，血液中的不規(guī)則抗體對輸血者的影響與其抗體效價(jià)、特異性以及輸注量等相關(guān)[13]。因?yàn)橄♂屪饔?，只有在高效價(jià)、大劑量輸注含不規(guī)則抗體的血液時(shí)才會對輸血者造成不良影響[14]。為了提高輸血安全性，一般血站在檢出血液含不規(guī)則抗體時(shí)，會選擇將血液報(bào)廢。但為了提升血液資源利用率，臨床一直致力于不規(guī)則抗體的開發(fā)應(yīng)用研究，并取得了一定的進(jìn)展，如可以將含不規(guī)則抗體的血液制備成特殊抗體試劑進(jìn)行稀有血型篩查；或者將血液中的紅細(xì)胞洗滌后應(yīng)用于臨床，但目前關(guān)于該方面的詳細(xì)報(bào)道較少[15]。用大量等滲溶液對保存期內(nèi)的懸浮紅細(xì)胞、全血進(jìn)行洗滌制備成洗滌紅細(xì)胞，可以去除幾乎全部的血漿成分和部分非紅細(xì)胞成分，進(jìn)而減少不規(guī)則抗體對輸血者紅細(xì)胞的破壞[16]。隨著不規(guī)則抗體血液制備處理應(yīng)用研究的不斷深入，越來越多的研究證實(shí)將其制備處理應(yīng)用于臨床是可行的[17]。臨床多將制備處理后的不規(guī)則抗體血液應(yīng)用于過敏反應(yīng)、自身免疫性溶血性貧血等患者中[18]。

本研究篩查出的44份不規(guī)則血液經(jīng)洗滌制備處置后，整體洗滌紅細(xì)胞制備合格率為90.91%，IgM類合格率為100.00%，IgG類合格率為73.68%，IgM類抗體洗滌3次即可符合要求；當(dāng)IgG類抗體效價(jià)＜8時(shí)，洗滌3次可符合要求，但效價(jià)≥8時(shí)，需加洗1～2次。這提示1.2.1的洗滌紅細(xì)胞制備的合格率較高，且IgM類的合格率比IgG類更好。而這或許與分子量大小有關(guān)，具體原因還需深入研究?？偟膩碚f將不規(guī)則液體洗滌制備后使用的方法是可行的，但受制備方法、人員操作等因素的影響，洗滌后血液可能仍舊有抗體殘留。為了保證洗滌后血液質(zhì)量，需對其進(jìn)行檢測直到檢測結(jié)果顯示無抗體殘留且符合《要求》才可發(fā)往臨床，以避免出現(xiàn)輸血反應(yīng)。將本研究中經(jīng)洗滌制備處理的11份不規(guī)則抗體血液應(yīng)用于臨床且并未發(fā)生輸血反應(yīng)。這初步驗(yàn)證了將經(jīng)洗滌制備后的不規(guī)則抗體血液應(yīng)用于臨床是安全的。但后期仍有不少問題亟待解決，如0.9% 氯化鈉溶液保存洗滌紅細(xì)胞的周期僅為24 h，但初期醫(yī)務(wù)人員認(rèn)知不足，導(dǎo)致了部分血液浪費(fèi)。所以加強(qiáng)不規(guī)則抗體血液調(diào)查及應(yīng)用研究的同時(shí)，也需要增強(qiáng)醫(yī)務(wù)人員和患者輸血相關(guān)知識培訓(xùn)，提高血液利用率和安全性。

綜上所述，篩查獻(xiàn)血者血液中的不規(guī)則抗體，并建立不規(guī)則抗體獻(xiàn)血者電子檔案，可以有效降低輸血反應(yīng)，對不規(guī)則抗體血液采取科學(xué)處理后應(yīng)用于臨床既可以提升血液資源利用率，又可以提升輸血安全性。