謝炎福，押輝遠(yuǎn)，張新雨，樊悅君，趙 冰，王瑞鴿，楊紫怡

（洛陽師范學(xué)院 食品與藥品學(xué)院，河南 洛陽 471934）

淫羊藿（Epimedium brevicornuMaxim.）具有補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕的作用，常用于腎陽虛衰、陽痿遺精、筋骨萎軟、風(fēng)濕麻痹、麻木拘攣等病癥，其主要活性成分為具異戊烯基取代的黃酮類化合物[1]，淫羊藿中的黃酮類化合物主要以多糖苷、雙糖苷、單糖苷的形式存在，淫羊藿多糖苷黃酮滲透性差，吸收利用率低，單糖苷和苷元的的生物活性是多糖苷的數(shù)十倍[2]。但淫羊藿中多糖苷黃酮數(shù)量多、含量高，低糖苷尤其是單糖苷和苷元含量低，采用綠色安全的方法將淫羊藿中大量的多糖苷類成分轉(zhuǎn)化為更具活性的低糖苷或苷元成為現(xiàn)在的研究熱點(diǎn)問題之一[3]。

淫羊藿經(jīng)傳統(tǒng)油炙炮制后可以提高淫羊藿苷、淫羊藿次苷的含量[4-5]，該方法需高溫，不同溫度油炙后成分差異巨大。蔣艷榮等[6-7]分別利用β-葡萄糖苷酶、蝸牛酶將淫羊藿苷轉(zhuǎn)化為苷元和寶藿苷I，酶解法環(huán)境友好，常溫常壓下即可完成，但酶的成本高昂。谷春秀等[8]用黑曲霉固態(tài)發(fā)酵淫羊藿后，淫羊藿苷含量得到大幅提高，顯示出生物發(fā)酵法在淫羊藿活性成分轉(zhuǎn)化方面的巨大潛力。植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）能產(chǎn)生蛋白酶，葡萄糖苷酶等豐富的酶系，能有效破除植物類中藥細(xì)胞壁和果膠類物質(zhì)形成的物理屏障，使有效活性成分溶出，且具有打斷β糖苷鍵，將多糖苷轉(zhuǎn)化為單糖苷和苷元的潛力[9-10]。超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿飛行時間質(zhì)譜（ultra-performance liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry，UPLC-Q-TOF-MS）已被廣泛應(yīng)用于食品、藥品、化妝品等化學(xué)成分的快速鑒定，可通過將液相色譜-質(zhì)譜（liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS）掃描的碎片離子信息和化合物裂解規(guī)律與對照品或文獻(xiàn)比對來快速、準(zhǔn)確地分析化合物中所含化學(xué)成分。淫羊藿中不同母核結(jié)構(gòu)的化學(xué)成分在電噴霧電離質(zhì)譜（electrospray ionization-mass spectrometry，ESI-MS）法中有不同的特征碎片，可根據(jù)碎片離子特征和裂解規(guī)律鑒定其所含的化學(xué)成分[11]。目前，中藥的生物轉(zhuǎn)化大多將中藥中的某一特定有效成分提取出來，經(jīng)生物轉(zhuǎn)化后，尋找新的化合物[3]，并通過藥理篩選來確定對新化合物的轉(zhuǎn)化是否有益。而中藥往往含有多種成分或組分，這種研究思路不適于一些靠復(fù)合成分起作用的中藥，也不利于將中藥中的一些無活性的前體轉(zhuǎn)化后形成活性成分，對中藥多成分或某一類組分的生物轉(zhuǎn)化研究能更真實(shí)反映中藥的作用機(jī)制[12]。

本研究以淫羊藿為研究對象，以植物乳桿菌為發(fā)酵菌株，考察淫羊藿發(fā)酵過程中1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）和羥基自由基清除能力及多酚、黃酮、多糖含量的變化，采用UPLC-Q-TOF-MS法研究淫羊藿滅菌前后及發(fā)酵過程中主要活性成分的變化，以期在更深層次上闡明生物轉(zhuǎn)化在中藥發(fā)揮藥效過程中的作用，為制定合理的生物轉(zhuǎn)化工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 材料與菌株

植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）GIM1.191：廣東省微生物菌種保藏中心；淫羊藿（Epimedium brevicornuMaxim.）（批號：20211024）：洛陽醫(yī)藥城。

1.1.2 試劑

1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）：上海思域化工科技有限公司；蘆丁、朝藿定A1、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ、去水淫羊藿素、8-異戊烯基山柰酚標(biāo)準(zhǔn)品（純度均＞98%）：上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

X500R液質(zhì)聯(lián)用儀（配有sciex os數(shù)據(jù)處理軟件和質(zhì)譜自動校準(zhǔn)調(diào)諧系統(tǒng)（calibrant delivery system，CDS））：美國AB sciex公司；PE Victor Nivo多功能酶標(biāo)儀：帕金埃爾默企業(yè)管理有限公司；3-18KS高速冷凍離心機(jī)：德國Sigma公司；TDZ5-WS大容量離心機(jī)：湖南湘儀實(shí)驗室儀器開發(fā)有限公司；JP300G超聲波提取、萃取機(jī)組：武漢嘉鵬電子有限公司；FMS超低溫超微粒粉碎機(jī)：臺灣弘荃機(jī)械企業(yè)有限公司；SPX-250BSH-Ⅱ生化培養(yǎng)箱：上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司；ALX-2000W 離心過濾器：北京金鼐科技發(fā)展有限公司；F-7000熒光分光光度計：日立科學(xué)儀器（北京）有限公司。

1.3 方法

1.3.1 發(fā)酵培養(yǎng)基的制備

將淫羊藿于60 ℃干燥箱中烘干至恒質(zhì)量，用實(shí)驗室小型粉碎機(jī)粉碎過120目篩，按照料液比1∶8（g∶mL）添加體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇，置于超聲波提取裝置中超聲（超聲功率400 W，超聲頻率20 kHz，溫度40 ℃，轉(zhuǎn)速20 r/min）提取40 min后放入離心過濾器中過濾，離心（4 500 r/min、5 min），提取2次，合并2次濾液，將過濾后的濾液放入40 ℃恒溫水浴鍋中，蒸發(fā)至無醇味，按照1∶30（g∶mL）的比例添加蒸餾水稀釋作為發(fā)酵培養(yǎng)基，pH值自然，于121 ℃高壓滅菌15 min。

1.3.2 植物乳桿菌種子液的制備

將植物乳桿菌接入MRS固體培養(yǎng)基中，在34 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，挑取單菌落在固體培養(yǎng)基上劃線，連續(xù)活化2次后，挑取單菌落接種于MRS液體培養(yǎng)基，置于34 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18 h，使最終植物乳桿菌濃度為1×106CFU/mL，即為植物乳桿菌三代種子液。

1.3.3 淫羊藿發(fā)酵液的制備

以10%的比例接種植物乳桿菌種子液至滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基，裝液量為200 mL/250 mL，在34 ℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)61 h，分別在滅菌前、滅菌后以及不同發(fā)酵時間點(diǎn)（7 h、13 h、24 h、37 h、47 h、61 h）進(jìn)行取樣，取樣后將發(fā)酵液離心（5 000 r/min、5 min）取上清液。

1.3.4 分析方法

（1）理化指標(biāo)的測定

總黃酮含量測定：參照呂亭亭等[13]的方法，在波長510 nm處用酶標(biāo)儀分別測定不同濃度蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值，以蘆丁質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)，吸光度值（Y）為縱坐標(biāo)，繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，獲得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=0.131 6X+0.002 4（相關(guān)系數(shù)R2=0.999），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計算總黃酮含量。

總多酚含量的測定：參照王海坤等[14]的方法，于波長770 nm處測定沒食子酸吸光度值，以沒食子酸質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)，吸光度值（Y）為縱坐標(biāo)，繪制沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，獲得沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=0.130 9X+0.075 4（相關(guān)系數(shù)R2=0.998 9），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計算多酚含量。

多糖含量的測定：參照牛曉方等[15]的方法，在波長490nm處測定葡萄糖吸光度值，以葡萄糖質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)，以吸光度值（Y）為縱坐標(biāo)，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，獲得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=8.161X+0.024（相關(guān)系數(shù)R2=0.977），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計算多糖含量。

（2）抗氧化性能的測定

DPPH自由基清除率參照張巖松等[16]的方法進(jìn)行測定，其計算公式如下：

式中：A0為空白組吸光度值；A為樣品組吸光度值。

羥基自由基清除率參照白建華等[17]的方法進(jìn)行測定，其計算公式如下：

式中：A0為空白組（緩沖液替代樣品）吸光度值；Ax為樣品組吸光度值；Ax0為樣品對照組（緩沖液替代H2O2溶液）吸光度值。

1.3.5 淫羊藿活性成分的質(zhì)譜條件

淫羊藿活性成分的檢測采用超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿飛行時間質(zhì)譜法進(jìn)行分析鑒定。

超高效液相色譜條件：Agilent eclipse plus C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；流動相為0.01%甲酸水溶液（A）-0.01%甲酸乙腈（B），梯度洗脫（0～3 min，5%B；3～63 min，5%～95%B；63～68 min，95%B；68～69 min，95%～5%B；69～73 min，5%B）；流速0.3 mL/min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量3 μL。

質(zhì)譜條件：化合物掃描范圍m/z 50～1 500 Da；離子化溫度（temperature，TEM）：500 ℃；霧化氣（GS1）：50 psi；輔助加熱氣（GS2）：50 psi；氣簾氣（curtain gas，CUR）：30 psi；去簇電壓（declustering potential，DP）：80 V；碰撞能量（collision energy，CE）：7 eV；正、負(fù)離子模式下噴霧電壓（ion spray voltage floating，ISVF）分別為5 500 V和-4 500 V。采用信息關(guān)聯(lián)采集；子離子掃描模式的參數(shù)設(shè)置如下：分子質(zhì)量掃描范圍50～1 000 m/z，碰撞能量（CE）：（35±15）eV；其他主要參數(shù)同TOF-MS掃描模式，采用CDS對分子質(zhì)量準(zhǔn)確度進(jìn)行自動校準(zhǔn)。

1.3.6 淫羊藿化學(xué)成分的鑒定

查閱國內(nèi)外淫羊藿及其同科屬植物化學(xué)成分研究相關(guān)文獻(xiàn)[18-22]，收集整理了淫羊藿中化學(xué)成分信息，建立包括化合物中文名、英文名稱、結(jié)構(gòu)式、分子式、精確相對分子質(zhì)量以及特征碎片的淫羊藿化學(xué)成分文獻(xiàn)信息。通過分析化學(xué)成分的質(zhì)譜信息，利用SCIEX公司的Sciex os分析軟件，采用質(zhì)量虧損過濾、中性丟失、產(chǎn)物離子過濾方法[23-25]提取色譜峰和對應(yīng)的1級和2級質(zhì)譜圖，與部分對照品和整理的化學(xué)成分文獻(xiàn)信息比對，根據(jù)準(zhǔn)分子離子峰精確質(zhì)量數(shù)，同位素峰，確定化合物分子式，然后結(jié)合軟件自帶譜庫、二級質(zhì)譜碎片與對照品裂解規(guī)律進(jìn)行比對或參照文獻(xiàn)，鑒定和推測出淫羊藿化學(xué)成分，利用Sciex os軟件對淫羊藿中化合物的峰面積進(jìn)行積分，以色譜峰面積的大小來表示各化合物的相對含量。

1.3.7 數(shù)據(jù)處理

試驗重復(fù)3次，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。采用SPSS26.0軟件進(jìn)行顯著性分析，顯著水平為P＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 淫羊藿發(fā)酵過程中抗氧化活性的變化

自由基是生物生命活動中的重要物質(zhì)，生物氧化代謝產(chǎn)生的氧自由基中以羥基自由基的氧化作用最強(qiáng)，它可通過電子轉(zhuǎn)移、奪取氫原子和羥基化反應(yīng)攻擊脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和核酸等生物分子造成機(jī)體損傷，活性成分對DPPH自由基和羥基自由基清除能力的強(qiáng)弱，能直觀反映其抗氧化活性的能力[26]。淫羊藿發(fā)酵過程中對DPPH自由基和羥基自由基清除率的變化見圖1。

圖1 淫羊藿發(fā)酵過程中DPPH自由基（A）和羥基自由基（B）清除率的變化Fig.1 Changes of DPPH radical (A) and hydroxyl radical (B)scavenging rates during Epimedium fermentation process

由圖1A和圖1B可知，隨著發(fā)酵的進(jìn)行，在0～37 h內(nèi)，DPPH自由基清除率和羥基自由基清除率均呈現(xiàn)增加的趨勢；當(dāng)發(fā)酵時間為37 h時，DPPH自由基清除率、羥基自由基清除率均達(dá)到最大值，分別為29.59%、46.33%；發(fā)酵進(jìn)行37 h后，兩者均呈緩慢下降的趨勢。

2.2 淫羊藿發(fā)酵過程中總黃酮、多酚、多糖含量的變化

淫羊藿發(fā)酵過程中對總黃酮、多酚、多糖含量的變化見圖2。

由圖2A可知，在發(fā)酵0～13 h，總黃酮含量呈快速增加的趨勢；當(dāng)發(fā)酵時間＞13 h時，總黃酮含量整體呈現(xiàn)下降后增加的趨勢；當(dāng)發(fā)酵時間為37 h時，總黃酮含量達(dá)到最大值，為11.90 mg/L；發(fā)酵時間＞37 h后，總黃酮含量變化趨于平緩。由圖2B可知，在發(fā)酵0～13 h，多酚含量呈快速增加的趨勢；當(dāng)發(fā)酵時間＞13 h時，多酚含量整體呈先增加后下降的趨勢，當(dāng)發(fā)酵時間為24 h時，多酚含量達(dá)到最大值，為1.56 mg/L；發(fā)酵時間＞24 h后，多酚含量變化趨于平緩。由圖2C可知，在發(fā)酵0～13 h，多糖含量呈快速增加的趨勢；當(dāng)發(fā)酵時間＞13 h時，多糖含量整體呈先增加后下降的趨勢，當(dāng)發(fā)酵時間為24 h時，多糖含量達(dá)到最大值，為0.18 g/L；當(dāng)發(fā)酵時間＞37 h時，多糖含量逐漸下降。結(jié)合發(fā)酵過程中DPPH自由基和羥自由基清除率的變化（圖1）可知，植物乳桿菌對淫羊藿的發(fā)酵時間控制為37 h為宜，此時DPPH自由基清除率、羥自由基清除率、總黃酮、多酚、多糖含量分別為29.59%、46.33%、11.90 mg/L、1.51 mg/L、0.18 g/L。發(fā)酵過程中，多糖、多酚、黃酮含量和自由基清除率的變化具有明顯相關(guān)性，這和楊娟等[27]的實(shí)驗結(jié)果類似，植物乳桿菌利用淫羊藿作為發(fā)酵的藥性基質(zhì)，植物乳桿菌能產(chǎn)生淀粉酶，葡萄糖苷酶等豐富的酶系，能有效破除植物類中藥細(xì)胞壁和果膠類物質(zhì)形成的物理屏障，使有效活性成分溶出，且可以打斷β糖苷鍵，將淫羊藿中含有的大量多糖苷轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的低糖苷或苷元，將酚酸轉(zhuǎn)化為小分子物質(zhì)[9]，從而引起總黃酮和總多酚含量的升高，多糖含量的升高可能更多的來源于植物乳桿菌對淫羊藿糖苷類物質(zhì)的分解，轉(zhuǎn)化為胞外多糖或自身多糖貯存[10]。在發(fā)酵后期，多糖、多酚、黃酮等物質(zhì)的含量下降，其原因可能是，其營養(yǎng)物質(zhì)消耗殆盡，植物乳桿菌更將多糖、多酚、黃酮作為能源物質(zhì)消耗[28]。

圖2 淫羊藿發(fā)酵過程中總黃酮（A）、多酚（B）、多糖（C）含量的影響Fig.2 Changes of total flavonoids(A),polyphenols(B) and polysaccharides(C) during Epimedium fermentation process

2.3 淫羊藿活性成分的UPLC/Q-TOF/MS分析結(jié)果

淫羊藿化合物的UPLC/Q-TOF/MS分析結(jié)果見表1。由表1可知，利用UPLC-Q-TOF-MS共鑒定滅菌前、滅菌后及發(fā)酵13 h、37 h、61 h淫羊藿發(fā)酵液中含有57種化合物，其中，黃酮類成分51種，酚酸類成分4種，其他成分2種。黃酮類物質(zhì)主要以黃酮苷的形式存在，其中，以去水淫羊藿素（以A表示）為苷元的成分有26種，以8-異戊烯基山奈酚（以B表示）為苷元的成分有10種，其他黃酮類成分15種，主要特征活性成分為以去水淫羊藿素（別名anhydroicaritin或8-異戊烯基山奈素）、8-異戊烯基山奈酚為苷元的具異戊烯基取代的黃酮，4種苷元結(jié)構(gòu)如下所示。糖基取代發(fā)生在C-3位或C-7位，以多糖苷、二糖苷、單糖苷以及部分醛酸的形式存在[20-23]。

表1 淫羊藿黃酮苷類化合物的UPLC-Q-TOF-MS分析結(jié)果Table 1 Results of Epimedium flavonoid glycosides compound analyzed by UPLC-Q-TOF-MS

續(xù)表

續(xù)表

2.3.1 淫羊藿發(fā)酵過程中黃酮成分的變化

由表1可知，與滅菌后相比，植物乳桿菌發(fā)酵淫羊藿后，多糖苷中山柰酚-3-O-鼠李糖-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷、淫羊藿新苷E、diphylloside B、朝藿定A1、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、去水淫羊藿素-3-O-吡喃鼠李糖基-葡萄糖醛酸-7-O-葡萄糖苷、寶藿苷Ⅵ、8-異戊烯基山奈酚-7-O-吡喃葡萄糖基-3-O-乙?；拎罄钐腔?木糖苷、1,3-異戊二烯基朝藿定A、1,3-異戊二烯基朝藿定C、1,3-異戊二烯基箭藿苷B-7-O-葡萄糖醛酸、朝藿苷丙、淫羊藿素-3-O-[（4-乙酰氧基）鼠李糖-2-O-（2-乙酰氧基）葡萄糖]-7-O-葡萄糖苷或其同分異構(gòu)體發(fā)酵61 h后相對含量降低，其中朝藿定A1、朝藿定A、1,3-異戊二烯基箭藿苷B-7-O-葡萄糖醛酸、朝藿苷丙發(fā)酵后相對含量顯著降低（P＜0.05）。二葉淫羊藿苷B發(fā)酵61 h后無明顯變化。

與滅菌后相比，雙糖苷中，槲皮素-3,7-O-二鼠李糖苷、山柰苷、朝藿定E、淫羊藿新苷A、箭藿苷C、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ、大花淫羊藿苷F、箭藿苷A、箭藿苷B、鼠李糖基淫羊藿次苷II的異構(gòu)體、淫羊藿素-3-O-呋喃鼠李糖苷及其異構(gòu)體、淫羊藿素-3-O-（4-乙酰氧基）木糖-7-O-（3-乙酰氧基）葡萄糖苷、1,3-異戊二烯基箭藿苷A發(fā)酵61 h后相對含量降低，其中淫羊藿新苷A、箭藿苷C、大花淫羊藿苷F、箭藿苷A、箭藿苷B、淫羊藿素-3-O-呋喃鼠李糖苷及其異構(gòu)體、淫羊藿素-3-O-（4-乙酰氧基）木糖-7-O-（3-乙酰氧基）葡萄糖苷、1,3-異戊二烯基箭藿苷A相對含量顯著降低（P＜0.05）；寶藿苷VII先降低再升高，去水淫羊藿素-3-O-吡喃鼠李糖基-呋喃酸或其異構(gòu)體先升高再降低，但未達(dá)到顯著水平（P＞0.05）；去甲基箭藿苷A、去水淫羊藿素-3,7-二-O-葡萄糖苷發(fā)酵后相對含量顯著升高（P＜0.05），淫羊藿苷無明顯變化。

單糖苷中，淫羊藿次苷Ⅰ、寶藿苷Ⅱ發(fā)酵后先增加后減少，其最大值出現(xiàn)在發(fā)酵37 h，且最大值和滅菌后相對含量相比均具有顯著性差異（P＜0.05）；紫云英苷、槲皮苷發(fā)酵后含量先增加后降低，且最低值和滅菌前相比有顯著差異（P＜0.05）。在淫羊藿黃酮苷元中，去水淫羊藿素隨發(fā)酵時間增加而增加，8-異戊烯基山奈酚、大黃素、槲皮素、山奈酚、木犀草素發(fā)酵過程中先增加后減少，8-異戊烯基山奈酚、大黃素最大值出現(xiàn)在發(fā)酵37 h，槲皮素、山奈酚、木犀草素最大值出現(xiàn)在發(fā)酵后13 h，木犀草素最大值和發(fā)酵前相對含量相比有顯著差異（P＜0.05）。

總體上來看，植物乳酸菌對淫羊藿的發(fā)酵呈現(xiàn)多糖苷、雙糖苷向單糖苷和苷元轉(zhuǎn)化的規(guī)律。低糖苷和苷元從化學(xué)結(jié)構(gòu)上增加了活性的OH級，減少了空間位阻，具有更大的抗氧化活性，這和國內(nèi)外多位學(xué)者的研究是相符的[29]，本次研究DPPH自由基、羥基自由基清除率的增加以及總黃酮含量的提高也再一次印證了這個結(jié)果。

2.3.2 高溫滅菌對淫羊藿黃酮成分的影響

由表1可知，滅菌后，次糖苷淫羊藿苷和寶藿苷I相對含量升高；多糖苷中，朝藿定A、淫羊藿素-3-O-[（4-乙酰氧基）鼠李糖-2-O-（2-乙酰氧基）葡萄糖]-7-O-葡萄糖苷等多糖苷的相對含量降低，但是大部分多糖苷，如朝藿定A1、朝藿定B、朝藿定C、寶藿苷Ⅵ、1,3-異戊二烯基朝藿定等的相對含量不僅沒有降低而且較高溫滅菌前均有所升高。孫娥等[30]的研究表明，將淫羊藿油炙（油炙溫度160～170 ℃，受熱時間5～7 min）可以使淫羊藿黃酮脫去糖基，由多糖苷轉(zhuǎn)化為次糖苷（多糖苷朝藿定A、B、C含量降低，淫羊藿苷、寶藿苷I的含量增高），這可能和實(shí)驗中采用的溶劑、溫度、濕度、壓力等條件不同所致。

另外，淫羊藿3種酚酸中，綠原酸、對羥基肉桂酸、3-O-對香豆?；鼘幩岣邷販缇蠛恳诧@著升高。滅菌的高溫高壓條件下淫羊藿糖苷類成分可能同時發(fā)生兩種變化，一種是高溫、高壓條件下的化學(xué)變化，多糖苷和低糖苷水解，分別轉(zhuǎn)化為低糖苷或苷元，另外一種是滅菌的高溫高壓的物理作用和酶的“破壁作用”，破壞了植物類中藥細(xì)胞壁和果膠類物質(zhì)形成的物理屏障，使得活性成分溶出增加所致[31]，這從滅菌后多糖、黃酮、多酚含量和羥基自由基、DPPH自由基清除率增加的實(shí)驗結(jié)果中也得到了驗證。

3 結(jié)論

淫羊藿經(jīng)乳酸菌發(fā)酵后，DPPH自由基清除率、羥基自由基清除率、總黃酮、多酚、多糖含量均顯著提高，發(fā)酵后的淫羊藿具有更高的抗氧化功效，最適的發(fā)酵時間為厭氧發(fā)酵37 h。從淫羊藿經(jīng)植物乳桿菌發(fā)酵前后組分共鑒定出57種，其中，黃酮類51種，酚酸類4種、其他類2種。植物乳桿菌以淫羊藿作為藥性基質(zhì)進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化總體上顯著提高了酚酸類、黃酮單糖苷和黃酮苷元的含量，降低了淫羊藿黃酮多級糖苷和二級糖苷的含量。單糖苷和苷元含量的提高可能來自于黃酮多糖苷和二糖苷的生物轉(zhuǎn)化，植物乳酸菌利用淫羊藿中的營養(yǎng)成分和轉(zhuǎn)化糖苷后的糖類作為自身生長的物質(zhì)基礎(chǔ)，多糖含量有了明顯提高，多糖和酚酸含量的提高可能分別來自于植物乳桿菌的合成代謝和對植物細(xì)胞的破壁作用。