劉 策， 張云海，2， 劉公言， 林振國， 黃 驊， 姚 婷， 孫海濤*

（1.山東省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，山東省畜禽疫病防治與繁育重點實驗室，山東濟南 250100；2.青島農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，山東青島 266109；3.北京市獸藥飼料監(jiān)測中心，北京 100029）

寵物食品的香味、色澤及觸感能夠增加寵物主人的消費愿望。寵物食品中的很多食品原料本身存在適口性問題，如豆類飼料中的腥味物質(zhì)及外源凝集素等，都會對食品的適口性造成不良影響。寵物風味增強劑是根據(jù)寵物采食的需要，特別設(shè)計的一種能夠引誘寵物采食、增加寵物適口性、增進寵物食欲的非營養(yǎng)性添加劑。風味增強劑是將動物源原料經(jīng)過酶解和美拉德反應(yīng)，制備出具有肉香味的膏狀、粉狀香味劑。寵物食品制粒干燥后，其和油脂一起噴涂到寵物食品上，起到遮蓋不良氣味、改善適口性和增加采食量的效果。目前關(guān)于風味增強劑生產(chǎn)加工技術(shù)的研究報道很多，有研究采用正交試驗得到的組合，做出了牛肉風味香底物，并選擇10條貴賓犬進行寵物飼喂試驗發(fā)現(xiàn)，試驗犬的采食量提高了1.5倍（孔凌等，2015）。在工藝優(yōu)化后，通過對寵物糧及寵物風味增強劑進行氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析，可以系統(tǒng)的分析誘食劑中的風味指紋譜圖，并與適口性分析的結(jié)果進行回歸分析，可以預(yù)測出引起寵物適口性及采食量提高的關(guān)鍵性風味分子。本團隊前期研究表明，通過臨清獅貓研究不同酵母提取物制作的誘食劑的適口性，發(fā)現(xiàn)三種誘食劑的適口性由大到小排序為啤酒酵母提取物>畢赤酵母提取物>無酵母提取物（劉策等，2020）。但是不同風味增強劑中究竟是何種物質(zhì)對適口性造成影響不得而知。相比寵物犬，寵物貓對食品的風味和口感更加挑剔。本研究團隊研究發(fā)現(xiàn)，含有不同風味增強劑貓糧中的谷氨酸和胱氨酸的含量與單盆采食率呈現(xiàn)顯著線性相關(guān)（劉策等，2020）。風味增強處理的貓糧中的揮發(fā)性風味物質(zhì)種類和相對峰面積比例（濃度）高于對照組。含有不同風味增強劑貓糧中的酸類、酮類及烷烴類物質(zhì)的相對峰面積比例與適口性具有顯著的回歸關(guān)系。在分析貓糧的風味物質(zhì)之后，本研究進一步開展系統(tǒng)飼喂試驗，研究不同風味增強劑對寵物貓健康、采食量和營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響，為寵物食品的選擇和加工提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 風味增強劑制備及試驗設(shè)計 寵物風味增強劑的制備方法是先將動物內(nèi)臟等原料洗凈，勻漿10 min，制為均勻的漿體。勻漿液進行生物酶處理。加入酵母抽提物、糖類等進行美拉德熱反應(yīng)。風味增強劑是稠狀液態(tài)，主要成分為魚、氨基酸、?；撬帷⒕S生素、黃原膠、食鹽、酵母膏、山梨酸鉀、魚油、蝦油等。本試驗提供四種不同的貓糧，同時設(shè)置沒有添加任何風味增強劑的基礎(chǔ)貓糧作為對照組（CON），三種風味增強劑按照3%的比例噴涂加入基礎(chǔ)貓糧中進行試驗。其中一組以雞肝作為原料，第二組以牛肝作為原料，最后一組以雞肝和牛肝1:1混合作為其原料，并在最終產(chǎn)品形成之前添加焦磷酸鈉。試驗基礎(chǔ)飼糧參照美國飼料協(xié)會AAFCO寵物營養(yǎng)需要標準配制，采用膨化方式加工。寵物基礎(chǔ)貓糧配方如表1所示。

表1 基礎(chǔ)全價寵物貓飼糧組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.2 試驗動物及采食特性測定 本試驗于山東省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所寵物貓舍進行，選取健康成年臨清獅貓40只。試驗動物6~9月齡，體重（2.8±0.5）kg。根據(jù)遺傳品系一致、年齡及體重相近，雌雄各半的原則。隨機分成4組，每組10只貓。每組10個重復(fù)，每個重復(fù)（每只貓）在寵物貓籠（3 m×1 m×2 m）內(nèi)單欄飼養(yǎng)。試驗前進行免疫、驅(qū)蟲處理。自由飲水，每天更換貓砂，清理貓舍，打掃衛(wèi)生，保持寵物貓舍的清潔，每組寵物貓分別飼喂對照糧（CON）、焦磷酸鈉（SP）、雞肝（CL）、牛肝（BL）四種貓糧，每天每只貓投喂100 g貓糧。

所有試驗貓預(yù)飼期7 d，正飼期30 d。正式期前后對所有試驗動物進行稱重，得到初始體重（IBW）和終體重（FBW）。并計算在30 d內(nèi)的日增重（ADG）。在飼喂過程中每天記錄貓糧的干物質(zhì)采食量（DMI），即投料量減剩料量。同時，使用量筒精確稱量每日的飲水量（WI）。為了消除動物體重存在的差異，試驗貓日采食量和飲水量采用單位代謝體重表示。根據(jù)NRC2007，成年期瘦型寵物貓體況評分（4~6分）的代謝能需要量MER=100×BW0.67。體重的0.67次冪（BW0.67）即為動物的代謝體重。以初始體重為標準計算每只試驗貓的在單位代謝體重下的采食量（DMI/BW0.67）和飲水量（WI/BW0.67）。同時計算每只貓的采食量/飲水量比例（DMI/WI）。

1.3 糞便評分及營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率測定 在動物試驗結(jié)束前開展動物營養(yǎng)消化試驗，試驗歷時5 d。營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率采用全收糞法。在每組試驗貓中隨機選擇5只貓進行，每天收集1次，連續(xù)收集5 d的糞便。每天排除的糞便稱重（鮮重），同時測定糞便的干物質(zhì)組成（DM%）。每天對糞便質(zhì)量進行評分，評分標準如下：水狀可以流動液體狀（1分）；軟、不成形，需要容器（2分）；軟、成形、濕潤（3分）；硬、成形、干但是保持軟狀態(tài)（4分）；硬、干、小顆粒（5分）（Carciofit等，2009）。同時測定新鮮糞便及日糧的營養(yǎng)成分，全消化道營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率（CTTAD）。

全消化道營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率/%=[營養(yǎng)物質(zhì)攝入（g）-營養(yǎng)物質(zhì)排出（g）]/營養(yǎng)物質(zhì)攝入（g）×100。

1.4血液指標測定 在試驗結(jié)束當天上午未飼喂前，對全部參試動物進行頸靜脈采血2 mL注入加有抗凝劑的專用采血管內(nèi)，使用全自動血細胞分析儀測定相關(guān)血常規(guī)指標。使用半自動生化分析儀測定血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、肌酸激酶同功酶（CK-MB）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、無機磷（P）、肌酸激酶（CK）、三酰甘油（TG）、乳酸脫氫酶（LDH）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GT）、總膽紅素（TB）、總鈣（Ca2+）、總蛋白（TP）、肌酐（CR）、尿酸（UA）、白蛋白（ALB）、血尿素氮（BUN）、酸性磷酸酶（ACP）、淀粉酶（AMS）等生化指標。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 所有數(shù)據(jù)使用Excel進行簡單整理后，采用SPSS 17.0軟件進行單因素方差分析（one-way ANOVA），以P<0.05表示差異顯著。并用Duncan′s法進行不同組別之間的多重比較檢驗。

2 結(jié)果

2.1 采食量與飲水量 通過表2可知，在30 d的飼養(yǎng)期內(nèi)，初始體重及試驗終體重沒有顯著的差異。說明不同的飼喂處理對寵物的初始體重和終體重沒有顯著的影響（P>0.05）。同時研究發(fā)現(xiàn)，不同風味增強劑對貓糧的日增重也沒有顯著影響（P>0.05），日增重甚至出現(xiàn)了負數(shù)。表明在30 d的飼喂期內(nèi)，不同的貓糧處理沒有引起貓體重的變化。

表2 飼喂不同類型風味增強劑貓糧的采食量及飲水量

但是研究表明，不同貓糧的日采食量產(chǎn)生顯著的變化（P<0.05）。牛肝組試驗貓的采食量相較于對照組、焦磷酸組、雞肝組分別提高46.4%、10.6%、11.3%（P<0.05）。換算成單位代謝體重（BW0.67）下采食量，焦磷酸組、雞肝組、牛肝組試驗貓單位代謝體重下采食量較對照組分別提高30.4%、27.4%、45.7%（P<0.05）。對于飲水量而言，單位代謝體重（BW0.67）下試驗貓的飲水量也產(chǎn)生顯著的差異。焦磷酸組、雞肝組、牛肝組試驗貓單位代謝體重下飲水量相較于對照組分別提高16.8%、16.9%、31.4%（P<0.05）。牛肝組試驗貓的單位代謝體重下飲水量相較于焦磷酸組和雞肝組分別提高12.5%、12.4%（P<0.05）。進一步將每一只貓的日飲水量除以日采食量，得到的比值在4 mL/g左右，但是該數(shù)據(jù)在各組之間沒有顯著差異（P＞0.05）。

2.2 糞便特征及營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率 由表3可知，不同類型的貓糧對試驗貓糞便評分及糞便的干物質(zhì)沒有顯著的影響（P>0.05）。所有動物的糞便評分在3分左右，即接近呈現(xiàn)“軟、成形、濕潤”。對于全消化道營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率而言，試驗貓對貓糧的粗蛋白質(zhì)營養(yǎng)消化率具有顯著差異（P<0.05）。具體而言，焦磷酸組、雞肝組、牛肝組的粗蛋白質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)消化率相較于對照組分別降低2.4%、3.4%、5.5%（P<0.05）。另外需要注意的是，貓糧對淀粉的營養(yǎng)物質(zhì)消化率高達90%以上，而且各組之間沒有顯著差異（P>0.05）。2.3血液指標 由表4可知，不同的貓糧處理能夠顯著改變血液中的淀粉酶（AMY）及甘油三脂（TG）的含量（P<0.05）。具體而言，相比對照組，牛肝組試驗貓的淀粉酶含量及甘油三脂含量分別降低27.5%、52.7%（P<0.05）。其他血液指標沒有顯著變化。

表3 飼喂不同類型風味增強劑貓糧的糞便特征及營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率

表4 飼喂不同類型風味增強劑貓糧的血液指標

3 討論

3.1 生長特性和消化率寵物貓是非經(jīng)濟型觀賞動物，其生長性能并不受到重視，尤其是對于非生長期的貓。與食草動物如羊、馬等相比，家貓消化道較短，適合高蛋白的肉食。寵物貓融入城市生活后，逐漸由捕食鼠類和喂養(yǎng)魚類的捕獵生活轉(zhuǎn)變?yōu)槲故掣苫暳系倪M食方式（李凱年等，2010）。因此寵物飼料對于動物本身的健康和長壽具有重要的意義（Di Cerbo等，2017）。有研究表明，通過對成年期試驗貓飼喂不同類型減肥貓糧28 d發(fā)現(xiàn)，體重變化率基本沒有變化，呈現(xiàn)負數(shù)（-0.02±0.03）%（Hooper等，2018）。王朝好等（2020）發(fā)現(xiàn)，在應(yīng)激情況下寵物試驗貓在14 d的飼喂期內(nèi)體重維持在3.96 kg左右，應(yīng)激組甚至出現(xiàn)體重下降的現(xiàn)象。肖長峰等（2019）研究表明，不同劑量的抗性糊精飼喂老年貓，體重均維持在2.19 kg，并在試驗期內(nèi)保持不變。同時該試驗研究表明，老年貓的采食量在50~70 g/d，飲水量在120 mL/d，本試驗結(jié)果與其基本一致。蔡旋等（2018）研究表明，2.5 kg老年貓的采食量在50~60 g。由于寵物的特殊性，寵物的隨機采食量受到了寵物貓糧的營養(yǎng)結(jié)構(gòu)、能量密度等因素的影響。寵物對于低適口性的貓糧或其他寵物食品是拒絕食用的。本研究團隊在寵物食品的適口性方面有很多研究。這些研究表明，寵物食品的適口性與采食量之間有緊密的關(guān)系（劉策等，2020、2019）。水分對于寵物和其他動物的營養(yǎng)價值意義不言而喻，寵物貓作為沙漠起源的動物，并不愛喝水。水分較少的攝入會導(dǎo)致寵物貓尿液飽和度提高，從而造成泌尿道結(jié)石（Catherine和Buckley等，2011）。因此足量的水分攝入是必需的。本研究表明，不同處理組的飲水量沒有顯著區(qū)別，貓糧的飲水量可能與采食量有關(guān)，即采食量越大，飲水量越多。采食量/飲水量的比例大約在4左右，即飲水量（mL）是采食量（g）的四倍左右。研究表明，在相同干物質(zhì)能量密度的條件下，飼喂80%水分貓糧的干物質(zhì)采食量顯著低于含有6%水分的貓糧采食量（Janet等2014）。因此貓糧的水分含量會顯著影響寵物貓的適口性和采食行為。水分適宜的貓糧能夠增加飽腹感，從而降低采食量。

糞便評分是法國皇家寵物營養(yǎng)研究院頒布的一套用于對寵物犬貓糞便進行感官評價的評分系統(tǒng)，旨在對寵物飼料及食品的消化程度和腸道應(yīng)激反應(yīng)進行快速、直觀、準確的臨床判斷（包書芳等，2021）。本研究表明，寵物的糞便評分在3.07~3.83，因此在臨床上可以被認為是健康合理的評分狀況。同時結(jié)合糞便的干物質(zhì)含量數(shù)據(jù)，可以得到不論何種添加劑，對其糞便評分沒有顯著的影響。

研究表明，添加400 g/d噴漿血清粉的貓糧的干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)及鈣磷含量顯著提高。試驗貓的糞便評分在3.2~3.4，沒有顯著的變化（Rodriguez等，2016）。Sabchuk等（2017）研究在犬糧中添加大豆殼提取物對試驗犬消化率的影響發(fā)現(xiàn)，試驗犬對犬糧的消化率在85%~90%。糞便評分在3.14~3.75，且沒有顯著差異。不同水分含量的犬糧對試驗犬的消化率和適口性有顯著的影響（Cleusa等，2010）。研究表明，犬糞便的干物質(zhì)在35%~38%，同時糞便評分在4.0左右。本研究表明，寵物貓糧的粗蛋白質(zhì)有顯著的變化，對照組（無風味增強劑添加）貓糧的營養(yǎng)物質(zhì)消化率顯著高于其他各處理組，分析其可能的原因是貓通過提高對照糧的消化率，來彌補采食量降低的營養(yǎng)攝入不足，降低食糜的流動速度。

3.2 血液生理生化指標 寵物主人除了追求全價和營養(yǎng)均衡的貓糧產(chǎn)品之外，更加注重飼料食品的定向保健功效。保健功效包括并不限制提高犬貓免疫力、體重控制、腸道保健、泌尿保健等功效。王朝好等（2020）研究了不同貓糧對試驗貓血液白細胞數(shù)目、紅細胞數(shù)目、血紅蛋白濃度、淋巴細胞數(shù)目及嗜中性粒細胞數(shù)目的影響。肖長峰等（2019）研究老年貓飼喂抗性淀粉。與對照組相比較，處理組老年貓葡萄糖、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇水平顯著降低；抗性糊精可以在一定程度上改善丙二醛和提高免疫球蛋白G水平。顏澤清（2016）等研究表明，保健犬糧可顯著提高犬的淋巴細胞轉(zhuǎn)換率、血清免疫球蛋白G、免疫球蛋白M和溶菌酶的含量，從而提高老年犬的免疫力。余盼等（2020）研究了高溫環(huán)境下日糧中添加復(fù)合抗氧化劑對犬血清抗氧化指標及激素水平的影響。結(jié)果表明，添加抗氧化劑的試驗組血清丙二醛含量、去甲腎上腺素含量顯著降低，谷胱甘肽過氧化物酶活性和睪酮含量顯著升高，在日糧中添加復(fù)合抗氧化劑可以提高犬的抗氧化能力，緩解熱應(yīng)激。

不同風味增強劑及適口性增加的日糧調(diào)控技術(shù)的研究日益增多。相比于需要2~3個月甚至更久的飼喂周期才能體現(xiàn)出抗氧化、免疫力增強、皮毛護理等功效（Zaghini和Biagi，2005）。適口性的提高是顯而易見的而且易于覺察。但是絕大多數(shù)風味增強劑和適口性的營養(yǎng)研究更多僅僅停留在簡雙盆對比飼喂試驗，并沒有研究適口性差異對健康狀況和血液指標的影響 （Becques等，2014）。本研究表明，在不同的誘食策略造成的采食量差異下，寵物貓的血液生化指標發(fā)生顯著的變化。具體而言，血液中的甘油三酯和血液淀粉酶顯著提高。下一步需要繼續(xù)研究寵物食品的適口性增強技術(shù)，以期能夠研制出具有保健功效、高適口性的貓糧產(chǎn)品。

4 結(jié)論

貓糧中添加風味增強劑能夠顯著提高試驗貓的采食量和飲水量。而無風味增強劑處理的貓糧（對照組）的蛋白質(zhì)表觀消化率顯著提高，同時血液中甘油三酯和血液淀粉酶的含量顯著提高，這可能與對照組試驗貓低采食量有關(guān)。添加牛肝的風味增強劑貓糧的采食量顯著高于其他各組，效果最好，可以應(yīng)用于貓糧生產(chǎn)中。