徐世微，Vivian Hlordzi，2， 鄒 岷， 植心妍， 崔志英， 遲淑艷，2*

（1.廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，廣東湛江 524088；2.廣東省水產(chǎn)動(dòng)物精準(zhǔn)營(yíng)養(yǎng)與高效飼料工程技術(shù)研究中心，廣東湛江 524088；3.茂名希普生物科技股份有限公司，廣東茂名 525000）

魚(yú)粉富含魚(yú)類生長(zhǎng)所需的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、必需氨基酸、必需脂肪酸、維生素以及無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)成分，具有高消化性和適口性（Zhou等，2005；Zhou等，2004）。然而，隨著養(yǎng)殖業(yè)和飼料工業(yè)的蓬勃發(fā)展，魚(yú)粉的需求量上升。面臨有限的魚(yú)粉資源，同時(shí)兼顧不與人爭(zhēng)糧，不與糧爭(zhēng)地的愿景，開(kāi)發(fā)利用非糧型飼料資源如大宗農(nóng)產(chǎn)品加工副產(chǎn)物、餐飲殘?jiān)Ｓ辔锖蛣?dòng)物源加工副產(chǎn)物、水產(chǎn)品加工副產(chǎn)品或者廢棄物等已成為研究熱點(diǎn)（阮征等，2015）。

水解魚(yú)蛋白粉（Hydrolyzed fish protein powder）是主要以冰鮮魚(yú)或其加工副產(chǎn)品為原料，在一定條件下進(jìn)行水解后獲得的一種含游離氨基酸和不同肽鏈長(zhǎng)度小肽的蛋白質(zhì)產(chǎn)品（王新星等，2011），其中小肽分子質(zhì)量主要分布在1000 Da以下，低分子量組分是保證肉食性魚(yú)類正常生長(zhǎng)必不可少的成分（Kousoulaki等，2009），有研究表明，飼料中用適當(dāng)含量的水解魚(yú)蛋白替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆（Scophthalmus maximusL.）（李本相等，2019；衛(wèi)育良，2014）和大西洋鮭（Atlantic salmon）（Kousoulaki等，2012；Refstie等，2004）的生長(zhǎng)性能不會(huì)產(chǎn)生負(fù)面影響。作為非糧植物蛋白源的棉籽蛋白，是將棉籽粕通過(guò)加工、生物降解或遺傳改良的方式（Alam等，2018；Pelitire等，2014；Zhang等，2007）消減或鈍化棉籽中的游離棉酚（申建飛等，2019），成為水產(chǎn)飼料優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)來(lái)源之一。不同種類的魚(yú)對(duì)棉籽蛋白的耐受程度不同，已有研究表明添加3%~30%棉籽蛋白替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)（He等，2021；殷彬，2019）、草魚(yú)（Ctenopharyngodon idellus）（嚴(yán)全根等，2014）、羅非魚(yú)（Oreochromis niloticus）（林仕梅等，2011）、虹鱒（Oncorhynchus mykiss）（Luo等，2006）和卵形鯧鲹（Trachinotus ovatus）（申建飛等，2019）幼魚(yú)的生長(zhǎng)性能不會(huì)產(chǎn)生負(fù)面影響。

棉籽蛋白是可替代部分魚(yú)粉的優(yōu)質(zhì)植物蛋白源（嚴(yán)全根等；2014），但所含賴氨酸等必需氨基酸含量遠(yuǎn)低于魚(yú)粉（Li等，2006），替代大部分魚(yú)粉后會(huì)造成生長(zhǎng)速度下降、飼料效率降低等（Krogdahl等，2003；Carter等，2000）問(wèn)題，因此棉籽蛋白在使用量上存在瓶頸。與單一蛋白源替代魚(yú)粉相比，復(fù)合蛋白源具有營(yíng)養(yǎng)成分互補(bǔ)和氨基酸平衡等優(yōu)點(diǎn)，已有研究表明用復(fù)合蛋白源替代一定比例的魚(yú)粉對(duì)大菱鲆（郝甜甜等，2019）和大口黑鱸（Micropterus salmoides）（朱旺明等，2019）的生長(zhǎng)性能和魚(yú)粉對(duì)照組相比沒(méi)有產(chǎn)生顯著影響。石斑魚(yú)是我國(guó)四大海水養(yǎng)殖魚(yú)類之一，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，因其為肉食性魚(yú)類，對(duì)魚(yú)粉的依賴性較大，因此本試驗(yàn)以珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)（Epinephelus lanceolatu♂×E.fuscoguttatus♀）為研究對(duì)象，綜合考慮氨基酸平衡和適口性等因素，以適量棉籽蛋白與水解魚(yú)蛋白粉進(jìn)行復(fù)合，探討在降低魚(yú)粉后石斑魚(yú)對(duì)該復(fù)合蛋白源的使用效果，以此拓展替代蛋白源的使用方式，為石斑魚(yú)飼料配制提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 將水解魚(yú)蛋白粉和棉籽蛋白（氨基酸組成見(jiàn)表1）按一定比例進(jìn)行配合后以復(fù)合蛋白源形式添加，按照約1.9%的比例遞增替代魚(yú)粉，最后一組遞增量加大1倍，使復(fù)合蛋白源在飼料中占比分別為4.10%、5.90%、7.77%、9.66%、11.55%、13.44%和17.25%，分別替代魚(yú)粉的比例為0.0%（F0）、5.0%（F5）、10.0%（F10）、15.0%（F15）、20.0%（F20）、25.0%（F25）和35.0%（F35），配制7種等氮（粗蛋白質(zhì)50%）等脂（粗脂肪9%）的試驗(yàn)飼料（表2）。將原料粉碎后過(guò)60目篩，按照配方混合均勻后，加工成粒徑為2 mm和2.5 mm兩種規(guī)格的顆粒飼料（F-26（II），華南理工大學(xué)實(shí)業(yè)總公司，廣東），自然狀態(tài)下室溫風(fēng)干24 h，自封袋密封，放置于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 魚(yú)粉、水解魚(yú)蛋白粉與棉籽蛋白氨基酸組成%

表2 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平 %

1.2 飼養(yǎng)管理 將遺傳背景一致的珍珠龍膽石斑魚(yú)暫養(yǎng)在水泥池中（廣東海洋大學(xué)海洋生物研究基地，東海島，湛江），投喂商業(yè)飼料馴化飼養(yǎng)3周。禁飼24 h，選擇健康無(wú)損傷、規(guī)格一致的珍珠龍膽石斑幼魚(yú)[初始個(gè)體體重（31.56±0.04）g]隨機(jī)分為7組，分別放養(yǎng)于海洋生物研究基地室內(nèi)玻璃鋼養(yǎng)殖桶內(nèi)（300 L），每試驗(yàn)組設(shè)置3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30尾魚(yú)，養(yǎng)殖周期8周。每天定點(diǎn)投喂飼料2次（08：00和16：00），記錄在此期間的飼料消耗量，投喂試驗(yàn)飼料至石斑魚(yú)表觀飽食。試驗(yàn)期間水體溫度（29±1）℃，溶解氧≥5 mg/L，氨氮含量≤0.03 mg/L，每天換水占玻璃鋼養(yǎng)殖桶水量約70%。

1.3 樣品采集與處理8周的養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束，禁飼24 h后稱重，記錄每個(gè)重復(fù)的存活尾數(shù)，分別用于計(jì)算各處理組增重率（WGR）、特定生長(zhǎng)率（SGR）和存活率（SR）。每個(gè)重復(fù)取2尾全魚(yú)冷凍保存用于體成分分析。用丁香酚（1：10000）將石斑魚(yú)麻醉，每個(gè)重復(fù)取3尾石斑魚(yú)稱重、量體長(zhǎng)用于計(jì)算肥滿度，用75%酒精擦拭石斑魚(yú)體表，無(wú)菌解剖剪剪開(kāi)腹部，在無(wú)菌條件下剝離其后腸，無(wú)菌生理鹽水沖洗后裝入無(wú)菌凍存管并放入液氮中，用于腸道菌群分析。

1.4 飼料、魚(yú)體概略養(yǎng)分分析 對(duì)飼料和魚(yú)體樣本進(jìn)行常規(guī)養(yǎng)分分析（AOAC，1995），其中水分的測(cè)定采用105℃恒溫烘干失重法測(cè)定；粗蛋白質(zhì)的含量采用半微量凱氏定氮法測(cè)定；粗脂肪的含量采用索氏抽提法測(cè)定；粗灰分采用550℃灼燒恒重法測(cè)定。

1.5 腸道菌群分析 試驗(yàn)魚(yú)腸道樣品中微生物總DNA用MN NucleoSpin 96 Soi DNA試劑盒提取，采用通用引物338F（5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3'） 和 806R （5'-GGACTACHVGGGTWTC TAAT-3'）擴(kuò)增細(xì)菌16S rRNA基因的V3~V4區(qū)。PCR反應(yīng)體系為20 μL，反應(yīng)參數(shù)：95℃預(yù)變性5 min；95℃變性30 s，58℃退火20 s，72℃延伸6 s，30個(gè)循環(huán)；最后在72℃下再延伸7 min。用1.0 %瓊脂糖凝膠電泳法對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化和回收，純化后的PCR產(chǎn)物，委托北京百邁客生物科技有限公司，通過(guò)Illumina高通量測(cè)序平臺(tái)（www.biocloud.org）進(jìn)行生物信息學(xué)檢測(cè)分析。

將測(cè)序的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行拼接，得到高質(zhì)量的Tags序列。使用USEARCH（版本10.0）將相似性高于97 %的序列聚類成同一個(gè)分類操作單元（OTUs），默認(rèn)以測(cè)序所有序列數(shù)的0.005%作為閾值過(guò)濾OTUs。根據(jù)OTU數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理后，選取前80個(gè)物種進(jìn)行相關(guān)分析。

1.6 計(jì)算方法 生長(zhǎng)指標(biāo)計(jì)算公式：

增重率/%=（末均重-初均重）/初均重×100；特定生長(zhǎng)率/（%/d）=（ln末均重-ln初均重）/飼喂天數(shù)×100；

飼料系數(shù)=攝食飼料干重/（終末體重-初始體重）；

存活率/%=試驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚(yú)尾數(shù)/試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)魚(yú)尾數(shù)×100；

攝食率/（%/d）=攝食量/[（初始體重+終末體重）/2]/天數(shù)×100；

肥滿度/（g/cm3）=終末體重（g）/體長(zhǎng)（cm）3×100。

1.7 數(shù)據(jù)分析 采用Excel 2010進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，利用SPSS 22.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），顯著水平為P<0.05。當(dāng)差異顯著時(shí)采用Tukey’s多重比較分析差異顯著性，數(shù)據(jù)采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)合蛋白源替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響 由表3可知，與對(duì)照組相比，各飼料處理對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)的增重率、攝食率、特定生長(zhǎng)率、飼料系數(shù)和存活率無(wú)顯著影響（P>0.05），但F20和F35組的魚(yú)體肥滿度分別比對(duì)照組顯著降低14.46%、15.69%（P<0.05）。

表3 復(fù)合蛋白源替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

2.2 復(fù)合蛋白源替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)魚(yú)體成分的影響 由表4可知，各組魚(yú)體的水分和粗脂肪含量無(wú)顯著變化（P>0.05）。隨著復(fù)合蛋白源替代水平的增加，各處理組的粗蛋白質(zhì)含量開(kāi)始出現(xiàn)升高的趨勢(shì)，F(xiàn)25、F35組的粗蛋白質(zhì)分別比對(duì)照組顯著升高9.58%、10.14%（P<0.05）。此外各組的粗灰分含量分別比對(duì)照組顯著增加30.45%、30.25%、86.93%、36.68%、33.97%、22.41%（P<0.05）。

表4 復(fù)合蛋白源替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)體成分的影響%

2.3 復(fù)合蛋白源替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)腸道菌群的影響 根據(jù)生長(zhǎng)性能的結(jié)果，對(duì)F0、F5和F35組的腸道組織進(jìn)行菌群測(cè)序。結(jié)果顯示，3個(gè)處理組的OTUs數(shù)分別為1823、1757和1667，無(wú)顯著差異（圖1）。F0、F5和F35組3個(gè)處理組共有的OTUs數(shù)為1330，特有的OTUs數(shù)量分別為107、78和102。F0與F5、F0與F35、F5與F35組 共 有 的OTUs數(shù) 量 分 別 為1580、1466和1429。此外，三組之間的Alpha多樣性如ACE、Chao、Shannon和Simpson指數(shù)均無(wú)顯著性差異（P>0.05，表5）。

圖1 珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)飼喂3組不同試驗(yàn)飼料的腸道菌群OTU韋恩圖

在門水平，F(xiàn)0組石斑魚(yú)腸道菌群的優(yōu)勢(shì)門為變形菌門（Proteobacteria）、厚壁菌門（Firmicutes）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、放線菌門（Actinobacteria），分別占腸道菌群比例為24.56%、24.79%、18.33%、8.98%（表6）。然而，三組之間的變形菌門、厚壁菌門、擬桿菌門、放線菌門、酸桿菌門（Acidobacteria）、疣微菌門（Verrucomicrobia）、藍(lán)藻門（Cyanobacteria）、綠彎菌門（Chloroflexi）、芽單胞菌門（Gemmatimonadetes）以及Epsilonbacteraeota的相對(duì)豐度均無(wú)顯著性差異（P>0.05，表6）。

表6 珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)腸道中微生物門水平前10的分布%

在屬水平，石斑魚(yú)腸道菌群中優(yōu)勢(shì)菌屬為Muribaculaceae、乳酸菌屬（Lactobacillus）、毛螺旋菌屬（Lachnospiraceae）、Akkermansia和擬桿菌屬，分別占腸道菌群比例為8.44%、3.68%、3.17%、2.74%、2.82%（表7）。其余的菌屬主要為不動(dòng)桿菌屬（Acinetobacter，2.05%）、大腸桿菌-志賀菌屬（Es-

cherichia-Shigella，1.89%）、Cutibacterium（0.92%）、uncultured_bacterium_c_Subgroup_6（1.48%）和雙歧桿菌屬（Bifidobacterium，0.93%）。除乳酸菌屬和Cutibacterium外，其余8個(gè)菌屬的相對(duì)豐度在F0、F5和F35組均無(wú)顯著差異（P>0.05，表7），其中F35組的乳酸菌屬相對(duì)豐度比對(duì)照組顯著降低30.47%，F(xiàn)5和F35組的Cutibacterium相對(duì)豐度比對(duì)照組顯著降低74.05%、77.30%（P<0.05）。

表7 珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)腸道中微生物屬水平前10的分布%

3 討論

3.1 復(fù)合蛋白源替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能及體成分的影響 復(fù)合蛋白源為水解魚(yú)蛋白粉和棉籽蛋白，其中水解魚(yú)蛋白粉主要以小分子肽類和游離氨基酸為主，谷氨酸、甘氨酸、天冬氨酸和脯氨酸含量較高（Tang等，2015；衛(wèi)育良，2014；Shamloo等，2012；Chalamaiah等，2010；Liaset等，2003），可以促進(jìn)幼魚(yú)腸道上皮細(xì)胞的發(fā)育和成熟，提高蛋白質(zhì)的消化和吸收，從而促進(jìn)仔稚魚(yú)的生長(zhǎng)和發(fā)育（李文杰，2013；劉峰，2007；Cahu等，2004）。并且，水解魚(yú)蛋白小肽分子質(zhì)量主要分布在1000 Da以下，對(duì)大菱鲆（衛(wèi)育良，2014）、大西洋鮭（Kousoulaki等，2012）、大西洋鱈（Aksnes等，2006）和牙鲆（Paralichthys olivaceus）（Zheng等，2012）的生長(zhǎng)均有較好的影響。在本試驗(yàn)中，采用復(fù)合蛋白源替代不同水平的魚(yú)粉對(duì)石斑魚(yú)幼魚(yú)存活率沒(méi)有顯著影響，這與尼羅羅非魚(yú)（Mbahinzireki等，2001）的研究結(jié)果一致，表明復(fù)合蛋白源替代魚(yú)粉后對(duì)石斑魚(yú)幼魚(yú)的健康沒(méi)有產(chǎn)生不利影響。有研究表明，用動(dòng)植物蛋白源替代魚(yú)粉造成生長(zhǎng)下降是由于適口性低引起的（Kader等，2010），但在本研究中各組的攝食率、增重率和飼料系數(shù)均無(wú)顯著差異，這可能是因?yàn)閺?fù)合蛋白源中的水解魚(yú)蛋白粉含有較多的鮮味氨基酸、小肽、?；撬岬?，改善了飼料的適口性，且分子質(zhì)量小于1000 Da的小肽占比達(dá)78.5%，具有耗能低、轉(zhuǎn)運(yùn)速度快、載體不易飽和等優(yōu)點(diǎn)（Zheng等，2012；Mbahinzireki等，2001；SèVE，1994），使石斑魚(yú)幼魚(yú)保持較高的攝食率，同時(shí)水解魚(yú)蛋白份和棉籽蛋白在蛋氨酸和賴氨酸上可較好的互補(bǔ)，對(duì)生長(zhǎng)也起到了較好的作用。可見(jiàn)，將棉籽蛋白與適宜水平的水解魚(yú)蛋白粉進(jìn)行配伍使用可以替代35%魚(yú)粉而不影響石斑魚(yú)幼魚(yú)的生長(zhǎng)性能。

在本試驗(yàn)中用復(fù)合蛋白源替代不同水平的魚(yú)粉不會(huì)對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)的體成分產(chǎn)生負(fù)面影響。在Zheng等（2013）研究中發(fā)現(xiàn)，含有高植物蛋白的大菱鲆飼料中分別添加1.2%、3.7%的低分子水解魚(yú)蛋白替代魚(yú)粉，可提高魚(yú)體粗蛋白質(zhì)含量。在牙鲆飼料中添加不同水平水解魚(yú)蛋白替代魚(yú)粉也能顯著提高魚(yú)體粗蛋白質(zhì)含量（許團(tuán)輝等，2012）。在本試驗(yàn)中，當(dāng)魚(yú)粉替代比例達(dá)到20%時(shí)，魚(yú)體粗蛋白質(zhì)含量顯著上升?？赡苁且?yàn)閺?fù)合蛋白源中的水解魚(yú)蛋白粉中含有的游離氨基酸、小肽、胺類等化學(xué)物質(zhì)（王佳麗等，2003；王碧蓮等，2001；Takii等，1986），更易于參與蛋白質(zhì)合成，使魚(yú)體氨基酸的吸收速度提高，促進(jìn)蛋白質(zhì)的吸收利用，也可能是復(fù)合蛋白源中脯氨酸的作用。榮華等（2022）研究表明，飼料中添加脯氨酸可顯著提高淺色黃姑魚(yú)的粗蛋白質(zhì)含量，脯氨酸作為魚(yú)類的功能性氨基酸能夠調(diào)控膠原蛋白的合成，促進(jìn)損傷組織的修復(fù)，在代謝、營(yíng)養(yǎng)和蛋白質(zhì)合成等方面 發(fā) 揮 重 要 的 作 用 （榮 華 等，2021；Karna等，2020），因此復(fù)合蛋白源中兩種蛋白源均含有較高的脯氨酸，能夠增強(qiáng)配合飼料的營(yíng)養(yǎng)性能，在一定程度上影響蛋白質(zhì)的合成。 已有研究表明，復(fù)合蛋白源替代魚(yú)粉對(duì)牙鲆（Deng等，2006）和黃顙魚(yú)（Pelteobagrus fulvidraco）（羅嘉翔等，2017）灰分含量無(wú)顯著影響，但本試驗(yàn)中，飼料中復(fù)合蛋白源替代魚(yú)粉能夠顯著增加魚(yú)體粗灰分含量。魚(yú)體粗灰分含量與礦物質(zhì)的沉積密切相關(guān)（李學(xué)麗等，2017），推斷是復(fù)合蛋白源中的水解魚(yú)蛋白粉含有的小肽在腸道與金屬元素結(jié)合生成螯合物，增加了鈣、鐵等金屬離子的可溶性，提高其吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)速度（Zambonino等，1997），從而使魚(yú)體粗灰分含量上升?？梢?jiàn)，復(fù)合蛋白源可以替代35%魚(yú)粉而不影響石斑魚(yú)幼魚(yú)的體成分。

3.2 復(fù)合蛋白源替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)腸道菌群的影響 腸道是與食物直接相互作用的重要功能器官，其中的菌群可參與調(diào)節(jié)機(jī)體消化營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、免疫、腸道增殖、抗病和病原體定植等（Nayak，2010），有益菌屬以改善宿主營(yíng)養(yǎng)吸收能力和免疫調(diào)節(jié)能力等來(lái)促進(jìn)宿主良好生長(zhǎng)（Cahenzli等，2013），而有害菌屬則因改變了腸道黏膜層的通透性，使細(xì)菌和其他大分子穿過(guò)黏膜屏障（Lee等，2000），良好的腸道微生態(tài)系統(tǒng)對(duì)魚(yú)類健康生長(zhǎng)尤為重要。已有研究表明，當(dāng)飼料中添加水解豬血肽替代10%魚(yú)粉后，伴隨腸道中乳酸菌屬的相對(duì)豐度增加，改善了珍珠龍膽石斑魚(yú)的生長(zhǎng)性能（He等，2021）。

在本研究中，飼料中添加復(fù)合蛋白源替代魚(yú)粉對(duì)石斑魚(yú)的腸道Alpha多樣性沒(méi)有產(chǎn)生顯著影響，變形菌門、厚壁菌門、擬桿菌門、放線菌門為優(yōu)勢(shì)菌群。在濃縮棉籽蛋白、大米發(fā)酵蛋白和豬血肽等（He等，2021；He等，2021；Ye等，2020）蛋白源替代魚(yú)粉的試驗(yàn)也觀察到類似的結(jié)果。不管飼料組成如何，這些門水平通常構(gòu)成珍珠龍膽石斑魚(yú)的核心腸道菌群（張衛(wèi)，2020；Ayiku，2020）。變形菌門、厚壁菌門和擬桿菌門代表了各種海洋和淡水物種中高達(dá)80%以上的腸道微生物（何嬌嬌等，2018；唐楊等，2017；邢孟欣，2013）。多種魚(yú)類的腸道微生物群中細(xì)菌分類群的相似性表明，這些細(xì)菌參與了重要的宿主腸道功能，如消化、營(yíng)養(yǎng)吸收和免疫反應(yīng)等（潘厚軍等，2005）。在本試驗(yàn)中，各組間優(yōu)勢(shì)菌在門水平的相對(duì)豐度沒(méi)有顯著差異，這表明復(fù)合蛋白源替代魚(yú)粉不會(huì)對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)腸道菌群組成產(chǎn)生不利影響。

在屬水平上，主要為Muribaculaceae、乳酸菌屬、毛螺旋菌屬、Akkermansia和擬桿菌屬。本試驗(yàn)中，飼料中添加復(fù)合蛋白源替代35%魚(yú)粉會(huì)顯著降低乳酸菌屬和Cutibacterium的含量，這與大西洋鮭（Hartviksen等，2014）研究結(jié)果一致。可能與復(fù)合蛋白源中的棉籽蛋白有關(guān)，棉籽蛋白所含的甲硫氨酸即蛋氨酸，能夠改善大菱鲆（Gao等，2019）和石斑魚(yú)（Li等，2020）的腸道發(fā)育和提高腸道吸收效率，在飼料中添加適量的蛋氨酸能夠改善草魚(yú)（Su等，2018）腸道免疫功能。乳酸菌屬是水生動(dòng)物的有益菌，可以通過(guò)分泌乳酸等有機(jī)酸降低pH來(lái)抑制革蘭氏致病菌擴(kuò)散，對(duì)增強(qiáng)腸道免疫力、改善腸道結(jié)構(gòu)、提高抗病力等具有重要意義（章文明等，2012）。Cutibacterium曾被稱為痤瘡丙酸桿菌（Propionibacterium acnes）（UNNA，1896），與痤瘡引起的毛囊皮脂腺單位的慢性炎癥性疾病發(fā)生密切相關(guān)（Platsidaki等，2018）。可見(jiàn)，飼料中用復(fù)合蛋白源替代到35%魚(yú)粉時(shí)，其主要優(yōu)勢(shì)屬并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)顯著改變，雖然潛在益生菌乳酸菌屬的豐度降低，但同時(shí)也顯著抑制了可能致病菌Cutibacterium。

4 結(jié)論

在本試驗(yàn)的條件下，飼料中復(fù)合蛋白源替代35%魚(yú)粉不會(huì)對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)的生長(zhǎng)性能和體成分產(chǎn)生顯著的負(fù)面影響，且沒(méi)有顯著改變石斑魚(yú)腸道菌群的優(yōu)勢(shì)門和優(yōu)勢(shì)屬的相對(duì)豐度，但復(fù)合蛋白源對(duì)石斑魚(yú)腸道微生物組成和結(jié)構(gòu)的影響還需要進(jìn)一步分析。這一研究結(jié)果拓寬了石斑魚(yú)蛋白源的選擇和配伍，為優(yōu)化其配方提供重要數(shù)據(jù)支持。