肖 瑜，魏引平，袁小倩

(1.寶雞市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，陜西 寶雞 721013； 2.陜西省藥品和疫苗檢查中心寶雞分中心，陜西 寶雞 721013)

0 引言

六神曲是由辣蓼、青蒿六味原料加工發(fā)酵制成的曲劑，是中醫(yī)傳統(tǒng)曲類中藥飲片中用量最大的品種，臨床多用于脾胃虛弱、飲食停滯及食積不消等癥，是雞內(nèi)金散、補(bǔ)中益氣湯等常用藥的生產(chǎn)原料和處方用藥。六神曲原料并沒有消食功效，而是在發(fā)酵后具備了健脾消食的作用，說明藥效作用是由發(fā)酵產(chǎn)生[1]，因此發(fā)酵是六神曲產(chǎn)生藥效的工藝基礎(chǔ)。

企業(yè)生產(chǎn)中多采用自然發(fā)酵，有效生產(chǎn)時(shí)間根據(jù)地域氣候不同而不同。但現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)發(fā)酵程度沒有有效控制指標(biāo)，1998年頒布的衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)[2]僅對(duì)性狀、常規(guī)檢查等簡(jiǎn)單項(xiàng)目做了規(guī)范，沒有含量測(cè)定項(xiàng)目，無法對(duì)六神曲質(zhì)量進(jìn)行有效評(píng)價(jià)。全國各地六神曲標(biāo)準(zhǔn)不同，各省地方標(biāo)準(zhǔn)也沒有量化控制指標(biāo)，文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)處方和制法也有所不同，導(dǎo)致市售六神曲質(zhì)量差異較大。在標(biāo)準(zhǔn)開發(fā)中約束發(fā)酵程度、控制發(fā)酵終點(diǎn)是質(zhì)量控制指標(biāo)急需解決的問題。

收集了陜西省六神曲主要生產(chǎn)廠家不同月份生產(chǎn)的六神曲數(shù)批，采用電位滴定法，在參考文獻(xiàn)[3-5]的基礎(chǔ)上，研究建立六神曲中總有機(jī)酸含量的測(cè)定方法，為有效控制質(zhì)量、提升質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

SQPPractum224-1CN電子天平(Sartorius)，SevevMulti pH計(jì)(梅特勒-托利多)，78-1磁力攪拌器(常州國華生產(chǎn))。24批六神曲樣品購自陜西省廠家A、廠家B、廠家C、廠家D，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法

枸櫞酸溶液的制備。精密稱取枸櫞酸約3 g至燒杯中，加新沸過的冷水100 mL溶解，轉(zhuǎn)移定容至500 mL容量瓶中，制成含枸櫞酸6 mg/mL的溶液，搖勻，備用。

樣品溶液的制備。精密稱取六神曲粉末約25 g于三角瓶中，加新沸過的冷水150 mL，搖勻，室溫放置30 min后超聲30 min，用新沸過的冷水轉(zhuǎn)移并定容至250 mL量瓶中，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，備用。

測(cè)定方法。精密移取上述樣品溶液25 mL至200 mL燒杯中，加入新沸過的冷水50 mL，開啟磁力攪拌器，放入電極，用0.1 mol/L氫氧化鈉滴定液滴定至pH8.2即可，同時(shí)進(jìn)行空白實(shí)驗(yàn)。通過氫氧化鈉的消耗量計(jì)算樣品中相當(dāng)于枸櫞酸[6](C6H8O7)的含量。

2.2 實(shí)驗(yàn)考察

重復(fù)性試驗(yàn)。按樣品溶液的制備方法制備供試品溶液，平行6份，按上述測(cè)定方法測(cè)定，空白校正，RSD為0.92%(n=6)，表明該方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)。同上制備供試品溶液，分別于0、1、2、4、6、8 h進(jìn)行測(cè)定，空白校正，結(jié)果RSD為0.56%，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

加樣回收實(shí)驗(yàn)。取15 g六神曲粉末6份，精密稱定，分別精密加入枸櫞酸對(duì)照品溶液20 mL，按上述方法制備供試品溶液，進(jìn)行方法測(cè)定，空白校正。計(jì)算回收率為99.5%，RSD%=1.23(n=6)，測(cè)定結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率結(jié)果 (n=6)Tab.1 Recovery rate of the added sample (n=6)

2.3 樣品測(cè)定

24批次樣品按上述方法制備供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 不同批次六神曲總有機(jī)酸含量Tab.2 Total organic acid content in different batches of Liushenqu

3 討論

六神曲中含有沒食子酸、隱綠原酸、異綠原酸A等[7]，且文獻(xiàn)報(bào)道從六神曲中成功分離鑒定出2種乳酸菌[8]，乳酸菌在發(fā)酵過程中產(chǎn)生代謝物乳酸。六神曲作為面曲類，基質(zhì)中存在淀粉、蛋白質(zhì)、油脂等大分子物質(zhì)，發(fā)酵過程中極易被微生物利用，分解為人體易吸收的低聚糖、氨基酸、脂肪酸等[9]。發(fā)酵后，產(chǎn)品中含有脂肪酸、氨基酸、脂類等香味物質(zhì)，如發(fā)酵條件控制不當(dāng)，發(fā)酵程度和方向偏離后可能會(huì)使有機(jī)酸過度產(chǎn)生，因此適宜的酸度區(qū)間可作為發(fā)酵工藝的一個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)，故而選擇總有機(jī)酸作為六神曲質(zhì)量控制指標(biāo)。由于六神曲供試品顏色較深，用指示劑法難以觀察終點(diǎn)顏色，故選擇電位滴定法。此測(cè)定方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為六神曲總有機(jī)酸含量的測(cè)定方法。

24批次六神曲總有機(jī)酸以枸櫞酸計(jì)，含量在0.69%～2.05%，平均含量為1.24%，不同批次總有機(jī)酸含量差異較明顯，說明不同工藝條件對(duì)六神曲質(zhì)量影響較大，且相同的廠家不同月份產(chǎn)品存在差異，因此對(duì)六神曲總有機(jī)酸含量測(cè)定很有必要。