范昆,周文慧,宮小迪,曲健祿,付麗*

(1.山東省果樹(shù)研究所，山東泰安 271000；2.泰安市林業(yè)保護(hù)發(fā)展中心，山東泰安 271000)

蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病是中國(guó)蘋(píng)果產(chǎn)區(qū)的重要病害之一，由半知菌亞門鏈格孢屬的鏈格孢蘋(píng)果轉(zhuǎn)化型(Alternariaalternataf.sp. mali)侵染所致，該病害不僅危害蘋(píng)果葉片，對(duì)新梢和果實(shí)也會(huì)有影響[1,2]。發(fā)病嚴(yán)重時(shí)，病葉率可達(dá)90%，造成果樹(shù)提前落葉，直接影響后期果實(shí)產(chǎn)量和品質(zhì)[3]。目前，對(duì)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病的防治主要以化學(xué)藥劑為主，較多使用的農(nóng)藥為代森錳鋅、戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑等單劑產(chǎn)品[4,5]。由于常年使用這些藥劑，導(dǎo)致蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病對(duì)這些藥劑已逐漸產(chǎn)生抗藥性[6]。生產(chǎn)上急需新的高效、低毒的殺菌劑配方。

農(nóng)藥復(fù)配是研制和開(kāi)發(fā)農(nóng)藥新品種的重要途徑之一。苯醚甲環(huán)唑?qū)儆谌蝾悮⒕鷦?，其殺菌原理是通過(guò)干擾病原菌細(xì)胞的C14脫甲基化作用，抑制麥角甾醇的生物合成，從而使甾醇滯留于細(xì)胞膜內(nèi)，損壞膜的生理作用，導(dǎo)致真菌死亡[7]。該藥劑具有良好的內(nèi)吸性，兼具預(yù)防和治療的作用。吡唑醚菌酯是一種兼具吡唑結(jié)構(gòu)的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，通過(guò)阻止細(xì)胞色素b和C1間電子傳遞而抑制線粒體呼吸作用，使線粒體不能產(chǎn)生和提供細(xì)胞正常代謝所需要的能量，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡[8]。該藥劑具有保護(hù)、冶療、葉片滲透?jìng)鲗?dǎo)等作用。筆者對(duì)苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯具有不同作用機(jī)制的藥劑進(jìn)行科學(xué)復(fù)配研究，開(kāi)展室內(nèi)聯(lián)合毒力測(cè)定，選擇適合的混配制劑進(jìn)行田間藥效試驗(yàn)，以篩選出高效、低殘留的殺菌劑配方，為有效防控蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病危害，提高蘋(píng)果品質(zhì)和產(chǎn)量提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試藥劑，共6種，如表1，其中苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯原藥分別先用少量丙酮溶解，配成10 000 μg/mL的母液，再以0.2%的體積分?jǐn)?shù)加入乳化劑吐溫80，于冰箱中4 ℃下貯藏備用，使用時(shí)以無(wú)菌水稀釋至所用濃度。

供試病原菌及培養(yǎng)基，蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌(Alternariaalternataf.sp.mali)由山東省果樹(shù)研究所果樹(shù)植保團(tuán)隊(duì)病理學(xué)方向鑒定、保存；PDA培養(yǎng)基(馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂16 g，去離子水1 000 mL)。

表1 試驗(yàn)藥劑及來(lái)源

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法

1.2.1 室內(nèi)聯(lián)合毒力測(cè)定

室內(nèi)單劑毒力測(cè)定[5]：先將苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯母液分別配制成5個(gè)濃度梯度(0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mg/L)，將病原菌于PDA培養(yǎng)基上25 ℃預(yù)培養(yǎng)4 d，用直徑5 mm的打孔器在靠近菌落邊緣的圓周上打取菌餅，接種到含有不同藥劑濃度的培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)基上兩種藥劑終濃度均為0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mg/L，每皿一片，置于25 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)4 d，用十字交叉法測(cè)定各處理的菌落生長(zhǎng)直徑，以清水為對(duì)照，每濃度處理重復(fù)4次。測(cè)定菌落徑向線性生長(zhǎng)量，確定藥劑對(duì)菌落生長(zhǎng)的抑制率。通過(guò)菌絲生長(zhǎng)抑制概率值和藥劑濃度對(duì)數(shù)值之間的線性回歸分析，求出各藥劑對(duì)菌株的有效抑制中濃度(EC50值)。

室內(nèi)混配藥劑聯(lián)合毒力測(cè)定[9]：在單劑毒力測(cè)定的基礎(chǔ)上，將供混配的苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯母液分別按體積比例分別設(shè)置4∶1、2∶1 、1∶1 、1∶2、1∶3共5個(gè)配比，按不同配比配制成最終質(zhì)量濃度為0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mg/L 5個(gè)系列濃度的含藥PDA培養(yǎng)基，確定藥劑對(duì)菌落生長(zhǎng)的抑制率。每處理濃度重復(fù)4次，以不加藥劑的PDA培養(yǎng)基作為對(duì)照，求出混配藥劑對(duì)菌株的有效抑制中濃度EC50值，利用孫云沛法[10]計(jì)算混配劑的共毒系數(shù)(CTC)，評(píng)價(jià)混配劑的增效作用。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均由Microsoft Excel 2010、DPS數(shù)據(jù)處理工作平臺(tái)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算出每種藥劑的EC50值、95%置信限區(qū)間。

混配劑理論毒力指數(shù)TTI=單劑A的TI × PA+單劑B的TI × PB

(PA和PB分別為混配劑中有效成分的百分含量)

增效作用判斷：CTC≥120，具有增效作用；80

1.2.2 田間藥效試驗(yàn)

試驗(yàn)地點(diǎn)在山東省果樹(shù)研究所天平湖基地。蘋(píng)果品種為新紅星，樹(shù)齡為8年，株行距為3 m×5 m，常規(guī)管理，歷年來(lái)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病發(fā)生較嚴(yán)重。

試驗(yàn)濃度設(shè)置為30%苯醚甲環(huán)唑·吡唑醚菌酯懸浮劑有效成分用量85.7、100、120 mg/kg；10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑66.7 mg/kg；250 g/L吡唑醚菌酯乳油166.7 mg/kg；80%代森錳鋅可濕性粉劑1 000 mg/kg；以清水為空白對(duì)照。

小區(qū)隨機(jī)排列，每小區(qū)2株樹(shù)，重復(fù)4次。分別于2021年于5月27日(發(fā)病前)、6月10日、6月24日進(jìn)行3次噴藥。每株噴灑藥液4 L。于2021年6月24日、7月8日分別調(diào)查病葉發(fā)生情況，按分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)記載并計(jì)算病情指數(shù)和防治效果[6]。

2 結(jié)果分析

2.1 室內(nèi)毒力測(cè)定

苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯及5個(gè)不同配比的混配藥劑對(duì)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌的毒力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯對(duì)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌均有較好的抑制活性。其中苯醚甲環(huán)唑與吡唑醚菌酯的配比2∶1、1∶1、1∶3的共毒系數(shù)(CTC)分別為126.28、120.37、137.15，對(duì)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌的毒力具有明顯的增效作用，當(dāng)配比為1∶3時(shí)的共毒系數(shù)值最高，增效作用最顯著。

表2 苯醚甲環(huán)唑與吡唑醚菌酯不同比例混配對(duì)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌的毒力測(cè)定結(jié)果

2.2 田間藥效試驗(yàn)

30%苯醚甲環(huán)唑·吡唑醚菌懸浮劑對(duì)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病田間防效試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。2021年6、7月施藥后的2次調(diào)查，30%苯醚甲環(huán)唑·吡唑醚菌酯懸浮劑120 mg/kg處理防效(84.35%，86.14%)均顯著高于對(duì)照藥劑10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑66.7 mg/kg、250 g/L吡唑醚菌酯乳油166.7 mg/kg、80%代森錳鋅可濕性粉劑1 000 mg/kg，其100 mg/kg處理的防效(82.61%、84.38%)與對(duì)照藥劑10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑66.7 mg/kg防效(81.35%、82.88%)差異不顯著，而顯著優(yōu)于250 g/L吡唑醚菌酯乳油 166.7 mg/kg(79.07%、80.67%)和80%代森錳鋅可濕性粉劑1 000 mg/kg的防效(78.91%、80.93%)；其85.7 mg/kg處理的防效與對(duì)照藥劑10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑66.7 mg/kg、250 g/L吡唑醚菌酯乳油 166.7 mg/kg和80%代森錳鋅可濕性粉劑1 000 mg/kg防效差異的不顯著 。

表3 30%苯醚甲環(huán)唑·吡唑醚菌酯懸浮劑防治蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病藥效結(jié)果

3 小結(jié)與討論

本試驗(yàn)室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明，苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯以2∶1、1∶1、1∶2和1∶3復(fù)配后，均對(duì)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌防治有增效作用，其中以1∶3增效最為顯著，共毒系數(shù)(CTC)為137.15。田間藥效試驗(yàn)表明，30%苯醚甲環(huán)唑·吡唑醚菌酯懸浮劑3個(gè)濃度處理均對(duì)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病的防效均在80%以上，其中以有效成分120 mg/kg的防效最高，顯著優(yōu)于3種對(duì)照藥劑。綜合考慮田間防效、有效成分用量成本及抗藥性風(fēng)險(xiǎn)等因素，推薦30%苯醚甲環(huán)唑·吡唑醚菌酯懸浮劑有效成分用量為85.6～120 mg/kg。

2018年，劉保友等[11]將苯醚甲環(huán)唑與克菌丹混配防治蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病，農(nóng)藥制劑減少了50.55%，降低農(nóng)藥投入成本35.35%以上。2020年，郝麗霞等[12]使用38%吡唑醚菌酯·戊唑醇懸浮劑防治蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病，田間藥效試驗(yàn)的防效在90%以上，顯著優(yōu)于對(duì)照藥劑。可見(jiàn)，復(fù)配藥劑的使用確實(shí)增加了對(duì)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病的防治效果，減少了藥劑使用量，延緩了抗藥性的產(chǎn)生。目前尚未有苯醚甲環(huán)唑與吡唑醚菌酯進(jìn)行復(fù)配防治蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病的藥劑登記及文獻(xiàn)報(bào)道。因此，30%苯醚甲環(huán)唑·吡唑醚菌酯懸浮劑作為蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病有效防控藥劑和延緩病原菌抗藥性發(fā)展的混配制劑具有良好的推廣和應(yīng)用潛力。