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        聚氨酯/BSP復合水凝膠的制備及傷口應用

        2023-01-05 08:13:56欒鳳蘭邢桂紅陳麗君
        粘接 2022年12期
        關鍵詞:凡士林體液傷口

        沈 月,欒鳳蘭,邢桂紅,陳麗君

        (江蘇省腫瘤醫(yī)院 ,江蘇 南京 210009)

        隨著現(xiàn)代醫(yī)學的進步,對傷口敷料的要求也隨之提高,傳統(tǒng)棉麻和紗布敷料在使用的過程中,受滲透液的影響,可能與傷口發(fā)生粘連,在去除敷料時,可能對傷口造成二次傷害。有研究提出將抗菌水凝膠應用于生物醫(yī)學領域的傷口敷料中[1];通過化學交聯(lián)方法,制備出一種新型水凝膠傷口敷料[2]。結果表明:水凝膠傷口敷料,在生物相容性方面優(yōu)于傳統(tǒng)傷口敷料;但制作的水凝膠敷料在抗菌性方面還存在不足;又有研究表明,部分天然多糖具有穩(wěn)定性高、無毒、抗菌性能優(yōu)異、可降解等優(yōu)點,在醫(yī)學領域的應用較為廣泛[3]。針對目前水凝膠敷料的現(xiàn)狀,本文在文獻[3]的研究基礎上,嘗試將白及多糖溶入水凝膠敷料內,制備一種具有較好理化性能和生物性能的新型傷口敷料,為傷口敷料的發(fā)展提供一些數(shù)據(jù)支撐。

        1 材料與方法

        1.1 材料與設備

        1.1.1主要材料

        無水乙醇(濟南豪坤化工有限公司,AR)、聚乙二醇(PEG)(濟南泉勝化工有限責任公司,AR)、白及塊莖(成都拓青農業(yè)有限公司,標準)、異佛爾酮二異氰酸酯(IPDI)(濟南云佰匯生物科技有限公司,AR)、二羥甲基丙酸(DMPA)(濟南匯錦川商貿有限公司,CP)、一縮二乙二醇(DEG)(濟寧三石生物科技有限公司,AR)、丙酮(AC)(南京合誠化工有限公司,AR)。

        1.1.2主要設備

        HH-1恒溫水浴鍋(無錫瑪瑞特科技有限公司)、LM321旋轉蒸發(fā)儀(山東龍煤工礦機械有限公司)、GT10-2高速離心機(北京新時代北利醫(yī)療器械有限公司)、GeminiSEM 560場發(fā)射掃描電鏡(蘇州沃弗本精密機械有限公司)、TFDH-1冷凍干燥機(諸城市恒濱機械有限公司)、DTC-27C超聲清洗機(湖北鼎泰高科有限公司)、FPOST-IROS-05傅里葉紅外光譜儀(博爾儀器儀表(天津)有限公司)、GL1004C電子天平(南京貝登醫(yī)療股份有限公司)。

        1.2 試驗方法

        1.2.1白及多糖(BSP)的提取

        (1)粉碎白及塊莖,得到粗白及粉末。稱取40 g白及粉末,用200 mL無水乙醇浸泡,浸泡時間為12 h;

        (2)過濾后用400 mL去離子水中浸泡過濾產(chǎn)物,并恒溫浸提,浸提溫度和時間分別為80 ℃和4 h。過濾4次后取出濾液,重復以上步驟3次,收集所有濾液;

        (3)將濾液濃縮至原體積的1/3,蒸發(fā)溫度為55 ℃;然后將五分之一體積的Sevage試劑放入蒸發(fā)后濾液中,充分振蕩使之混合均勻,以3 500 r/min的轉速離心處理10 min,取出上清液加入3倍無水乙醇,靜置沉淀12 h。重復沖洗沉淀步驟3次,冷凍干燥,得到白及多糖(BSP)。

        1.2.2雙鍵封端水性聚氨酯(WBPU)的制備

        (1)將15 g脫水后的聚乙二醇和聚己內酯(PCL)放入四口燒杯,緩慢加入13.32 g異佛爾酮二異氰酸酯,提高反應溫度至90 ℃反應3 h;

        (2)降低體系溫度至50 ℃,分別將1.69 g二羥甲基丙酸、2.17 g一縮二乙二醇和少量丙酮放入四口燒瓶中,升溫至80 ℃反應1 h,降溫至50 ℃;

        (3)分別滴入2滴T9和T12,升溫至70 ℃催化反應4 h。根據(jù)體系黏度選擇是否加入丙酮,對體系黏度進行調節(jié),繼續(xù)將體系溫度降至50 ℃,加入10 mL丙酮和計量聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯(PEGMA)剩余異氰酸酯基(—NCO)進行封端反應,反應溫度和時間分別為66 ℃和2 h;將體系溫度降至40 ℃,加入1.2 mL三乙醇胺(TEA)進行中和,中和時間為3 min;

        (4)在攪拌條件下緩慢加入H2O進行乳化,攪拌速度和乳化時間分別為1 300 r/min和10 min,得到水性聚氨酯(WBPU)乳液。

        1.2.3聚氨酯/白及多糖水凝膠(WBPU-BSP)的制備

        (1)提前對WBPU乳液進行脫丙酮處理,然后稀釋成固含為15%的乳液;

        (2)分別在6個燒杯中放入13.33 g的WBPU乳液,分別加入10 g的H2O、0.03 g過硫酸鉀 (KPS)、0.08 g的PEGDA、4 g丙烯酰胺(AM)和不同質量的BSP,混合均勻后用超聲清洗機分散0.5 h;

        (3)將其置于恒溫水浴鍋中70 ℃反應4 h,得到不同白及多糖含量的WBPU-BSP水凝膠;

        (4)將WBPU-BSP水凝膠放入去離子水進行浸泡7 d,間隔12 h換水;然后冷凍干燥處理,得到WBPU-BSP干凝膠。BSP添加量如表1所示。

        表1 WBPU-BSP中BSP添加量Tab.1 BSP addition in wbpu-bsp

        1.3 性能測試

        1.3.1掃描電鏡測試

        將經(jīng)過凍干處理凝膠樣品低溫脆斷,在截面噴金后用場發(fā)射掃描電鏡以5 kV的加速電壓對凝膠樣品形貌進行觀察。

        1.3.2模擬體液溶脹性能測試

        參照標準YY/T 0471.1—2004配制模擬體液,將經(jīng)過干燥的大小、質量相近的干凝膠塊置于37 ℃溫度的模擬體液中浸泡,間隔t時刻后取出稱重,繼續(xù)浸泡稱重過程,直至質量不發(fā)生變化,即可認為達到溶脹平衡。

        溶脹比(S)表達式[4]:

        (1)

        式中:m0、mt分別為干凝膠和t時刻水凝膠的質量。

        1.3.3水凝膠保水性能試驗

        將大小、質量、達到溶脹平衡的水凝膠樣品放置在溫度37 ℃環(huán)境中,間隔t時刻后稱重,直至樣品質量不發(fā)生變化。

        水凝膠保水率(SR)表達式[5]:

        (2)

        式中:me為溶脹平衡時水凝膠的質量。

        1.3.4抗菌性能試驗

        參照 GB/T 20944—2007,測定水凝膠樣品對大腸桿菌(E.coli)和金黃色葡萄球菌(S.aureus)的抑菌性能進行測定,用瓊脂平皿擴散法評估2種細菌的活性[6]。

        1.4 動物試驗

        選擇體重約為30 g的雌性ICR小鼠進行動物試驗。在小鼠背部制造8 mm的全層傷口,分別用凡士林紗布和質量分數(shù)為4%BSP的WBPU-BSP水凝膠敷料覆蓋小鼠傷口,并用無菌紗布進行包扎;然后將小鼠放入同樣的環(huán)境培養(yǎng),觀察小鼠傷口愈合情況。

        2 結果與討論

        2.1 SEM分析

        圖1為水凝膠樣品的SEM照片。由圖1可知,在WBPU-BSP水凝膠中,加大BCP摻入量,水凝膠樣品逐漸轉化成致密均勻的多孔結構,當BCP質量分數(shù)為5%時,樣品孔洞又轉變成較為松散不均勻的大孔結構。當BCP含量較多時,WBPU-BSP體系內黏度較大,在固化成為水凝膠的過程中,形成了部分孔洞結構;當進一步冷凍干燥處理時,又變成了較為松散的大孔洞[10]。當WBPU-BSP水凝膠中BSP質量分數(shù)為4%時,水凝膠的多孔結構最致密均勻。

        圖1 WBPU-BSP水凝膠樣品的SEM照片F(xiàn)ig.1 SEM photographs of hydrogel samples

        2.2 WBPU-BSP水凝膠在模擬體液中的溶脹

        圖2為樣品在模擬體液中的溶脹比隨時間變化曲線。由圖2可知,WBPU-BSP水凝膠中,隨時間的增加,凝膠吸水率也表現(xiàn)出先增加,然后趨于平衡的態(tài)勢。說明本文制備的WBPU-BSP水凝膠在模擬體液中具備較大的吸水能力,能吸收傷口滲出液,可作為傷口敷料使用。

        圖2 WBPU-BSP水凝膠在模擬體液中的溶脹比隨時間變化曲線Fig.2 Curve of swelling ratio of sample in simulated body fluid with time

        2.3 WBPU-BSP水凝膠保水性能

        圖3為水凝膠的保水曲線。由圖3可知,WBPU-BSP水凝膠在初階段水分流失較快;但在24 h內,水分保持率仍在65%以上,直至80 h,失水速率下降,且水分流失趨于平衡。說明WBPU-BSP水凝膠作為傷口敷料使用時,能維持濕潤環(huán)境至少80 h,幫助傷口的愈合。

        2.4 WBPU-BSP水凝膠抗菌性能

        圖4為WBPU-BSP水凝膠對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌性能。由圖4(A)、(C)可知,在經(jīng)過質量分數(shù)0%BPS的WBPU-BSP水凝膠覆蓋的樣品,有少量細菌繁殖,證明質量分數(shù)0%BPS的WBPU-BSP水凝膠樣品本身具有一定的抗菌性,但抗菌效果一般。在經(jīng)過質量分數(shù)4%BPS的WBPU-BSP水凝膠覆蓋的樣品,幾乎沒有細菌繁殖,證明質量分數(shù)4%BPS的WBPU-BSP水凝膠樣品對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌有明顯的抑菌效果,將其作為傷口敷料使用時,可有效防止細菌對傷口進行二次感染。

        圖4 WBPU-BSP水凝膠對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌性能Fig.4 Antibacterial activity of WBPU-BSP hydrogel against escherichia coli and staphylococcus aureus

        2.5 動物實驗

        圖5為凡士林紗布和BSP質量分數(shù)為4%WBPU-BSP水凝膠作為敷料小鼠傷口愈合圖。由圖5可知,在術后3 d內,用凡士林紗布的小鼠傷口結痂,但傷口大小并沒有任何變化。而質量分數(shù)為4%BSP的WBPU-BSP水凝膠敷料傷口明顯縮??;在術后14 d內,小鼠傷口愈合皆表現(xiàn)良好。

        圖5 小鼠傷口愈合圖Fig.5 Wound healing in mice

        圖6為14 d小鼠傷口愈合的組織切片圖,其中圖6(a)為凡士林紗布組,圖6(b)為WBPU-BSP水凝膠中BSP質量分數(shù)為4%試驗組,箭頭所指部分為小鼠傷口形成的再生表皮。由圖6可知,在14 d后,WBPU-BSP水凝膠中BSP質量分數(shù)為4%組再生表皮明顯厚于凡士林紗布組,同時有新的真皮層和新生血管形成。而凡士林組并未完成角質層的新生,且有間質水腫出現(xiàn),新生血管也較少。這表明本文制備的質量分數(shù)為4%BSP的WBPU-BSP水凝膠能有效促進傷口愈合,幫助新的真皮層和新生血管形成。

        圖6 小鼠傷口愈合組織切片F(xiàn)ig.6 Tissue sections of wound healing in mice

        3 結語

        本文在聚氨酯水凝膠中引入BSP ,制備一種新型的聚氨酯/白及多糖水凝膠(WBPU-BSP),通過對WBPU-BSP水凝膠理化性能和生物性能進行研究,確定WBPU-BSP水凝膠作為傷口敷料應用的可行性。

        (1)當WBPU-BSP水凝膠中BSP質量分數(shù)為4%時,水凝膠表現(xiàn)出較為致密均勻的多孔結構,具有良好的滲透性,對細胞的增殖和傷口愈合有促進作用;

        (2)WBPU-BSP水凝膠在模擬體液中具備較大的吸水能力,能吸收傷口滲出液,具備傷口敷料的使用條件;

        (3)WBPU-BSP水凝膠具備較好的保水性能,能維持濕潤環(huán)境至少80 h,對促進傷口愈合產(chǎn)生積極的影響;

        (4)WBPU-BSP水凝膠對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌有明顯的抑菌效果,可有效防止細菌對傷口進行二次感染;

        (5)WBPU-BSP水凝膠能有效促進傷口愈合,幫助新的真皮層和新生血管形成。

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