張趙一淳 郭靜 綜述 邱新毓 馮劍穎 審校

1 細(xì)胞外囊泡

細(xì)胞外囊泡(extracellular vesicles, EVs)是指細(xì)胞分泌的各種類型的膜囊泡，電鏡下EVs為杯狀或球形的雙層脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)，其內(nèi)包含了許多不同種類的生物活性分子，比如蛋白質(zhì)、DNA、RNA、長鏈非編碼RNA(long non-coding RNAs, lncRNAs)和脂質(zhì)等[1]。包括免疫細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSCs)和血細(xì)胞等在內(nèi)的各種細(xì)胞均能夠分泌EVs，使其廣泛地分布于血液、尿液、乳汁等各類體液中，從而發(fā)揮特定的生物學(xué)功能。目前EVs的分類方式有很多，根據(jù)目前對(duì)細(xì)胞外囊泡生物起源的了解，其大致可分為外泌體、微囊泡和凋亡小體三大類。外泌體一般直徑大小在50～150 nm，來源于細(xì)胞的胞內(nèi)體，而微囊泡直徑大小在50～500 nm，甚至?xí)_(dá)到1 μm，一般來自細(xì)胞膜[2]。而凋亡小體一般由細(xì)胞發(fā)生凋亡后產(chǎn)生，直徑約在1～5 μm左右。

作為生命體進(jìn)化過程中一個(gè)十分保守的環(huán)節(jié)，EVs的分泌起初被認(rèn)為是發(fā)揮著清除細(xì)胞內(nèi)不必要物質(zhì)的作用。隨著研究技術(shù)手段的不斷革新，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，EVs作為細(xì)胞間彼此相互溝通的橋梁，能夠參加細(xì)胞間的多種信號(hào)傳導(dǎo)。同時(shí)，通過運(yùn)輸不同種類的生物分子，EVs還能夠?qū)崿F(xiàn)細(xì)胞之間的成分交換，介導(dǎo)細(xì)胞各種各樣的生理與病理過程[2]。

2 EVs的生物學(xué)功能及其臨床診療作用

目前研究表明，EVs是由母細(xì)胞在炎癥、缺氧、氧化應(yīng)激、衰老和細(xì)胞凋亡等不同因素影響下構(gòu)成或激活后產(chǎn)生的[1]。EVs內(nèi)容物種類主要取決于母細(xì)胞的類型和分化程度及所處微環(huán)境的刺激因素，其內(nèi)含物包括脂質(zhì)(如類花生酸)、蛋白質(zhì)(如細(xì)胞因子、趨化因子、生長因子或其他信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中介體)、遺傳物質(zhì)(如mRNAs、lncRNAs)和在大囊泡中包含的整個(gè)細(xì)胞器結(jié)構(gòu)(如線粒體等)[1-2]。EVs在特定條件下與受體細(xì)胞相互作用后，釋放其內(nèi)容物，從而發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)功能。雖然介導(dǎo)EVs作用于受體細(xì)胞的具體機(jī)制目前仍不十分清楚，但已有部分研究證實(shí)，EVs能夠參與細(xì)胞的絕大多數(shù)生理病理過程，包括信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞生長及發(fā)育、代謝調(diào)節(jié)、組織穩(wěn)態(tài)與修復(fù)再生、抗原呈遞與免疫應(yīng)答等等[1,3-5]。

2.1 EVs的形成過程

EVs形成過程中的不同步驟涉及多種分選機(jī)制[2]。首先，脂質(zhì)和膜相關(guān)蛋白在細(xì)胞膜(形成微囊泡)和多囊泡核內(nèi)體(multivesicular endosome， MVE)的有限膜區(qū)域(形成外泌體)中聚集，這些區(qū)域一般被稱為分散的微域。隨后，這些微域參與可溶性成分(比如胞質(zhì)內(nèi)蛋白質(zhì)和不同RNA)的募集，而這些可溶性成分要在EVs中進(jìn)行分選。集群的微域形成與外加的機(jī)械作用共同促進(jìn)細(xì)胞膜出芽的過程，隨后出現(xiàn)質(zhì)膜向細(xì)胞外介質(zhì)或MVE的限制膜向MVE腔的分裂過程。在外泌體和微囊泡分選的跨膜蛋白仍然保持在質(zhì)膜上同樣的拓?fù)鋵W(xué)結(jié)構(gòu)。目前，外泌體形成的機(jī)制已經(jīng)較為明確，其中涉及到運(yùn)輸所需的內(nèi)體分選復(fù)合物(endosomal sorting complex required for transport， ESCRT)的亞單位具有十分重要的作用。在管腔內(nèi)囊泡(Intraluminal vesicles， ILVs)進(jìn)入MVE腔內(nèi)時(shí)，在不同程度上需要ESCRT-III的參與，而內(nèi)含物的聚集和膜出芽的過程則不完全依賴于ESCRT[6-7]。相較于外泌體，微囊泡發(fā)生的機(jī)制目前也仍在研究中。

EVs內(nèi)包含不同物質(zhì)，包括主要組織相容性復(fù)合體2(major histocompatibility complex class II，MHC class II)[8]、糖基磷脂酰肌醇-錨定蛋白(glycosylphosphatidylinositol-anchored proteins，GPI-anchored proteins)[9]、載脂蛋白E(apolipoprotein E，Apo E)[10]、mRNA及DNA片段[2]等參與調(diào)節(jié)生命活動(dòng)的生物分子。盡管微囊泡和外泌體在細(xì)胞內(nèi)不同的位置生成，但這兩種不同EVs的合成過程有共同的細(xì)胞內(nèi)機(jī)制和分選機(jī)制。EVs的生成過程是十分復(fù)雜的，往往取決于包含物和母體細(xì)胞的類型，同時(shí)也會(huì)受到細(xì)胞接收的其他刺激信號(hào)的影響。包含物通過逐步聚集，參與到EVs發(fā)芽、裂變和釋放的過程。另外，EVs內(nèi)含物的性質(zhì)和含量具有特異性，經(jīng)常受到母體細(xì)胞的生理或病理狀態(tài)、調(diào)節(jié)其產(chǎn)生和釋放的刺激以及促進(jìn)其生成的分子機(jī)制的影響。

2.2 EVs的作用方式

由于EVs的大小和其表面分子特性的差別，不同EVs對(duì)受體細(xì)胞的識(shí)別和捕獲能力也不盡相同。研究表明，外泌體的作用方式可以通過小胞飲作用的理論進(jìn)行解釋。而對(duì)于較大的微囊泡，其本身可通過與受體細(xì)胞的胞外特異性分子相互作用或膜與受體細(xì)胞膜融合而產(chǎn)生后續(xù)作用[11]。EVs在特定條件下與受體細(xì)胞相互作用后，釋放其內(nèi)容物，從而發(fā)揮對(duì)應(yīng)的生物學(xué)功能。在受體細(xì)胞(可以是生產(chǎn)細(xì)胞本身)中，外源性的EVs會(huì)結(jié)合到細(xì)胞表面，并經(jīng)歷不同的作用過程。根據(jù)受體細(xì)胞類型的不同，它們可以保持與表面結(jié)合(例如與整合素結(jié)合)，并啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路(例如抗原提呈過程)。同時(shí)，EVs還可以通過多種途徑內(nèi)化，包括網(wǎng)格蛋白依賴性和網(wǎng)格蛋白非依賴性途徑介導(dǎo)的內(nèi)吞作用，最終將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中[12-13]。外源性EVs可以通過典型的內(nèi)體通路，由細(xì)胞外到達(dá)MVE。在MVE中，內(nèi)化的囊泡可能與ILV混合。與含有溶酶體的MVE融合會(huì)導(dǎo)致EVs和其內(nèi)容物的降解，此過程不斷循環(huán)以促進(jìn)受體細(xì)胞的新陳代謝[2,9]。除此之外，EVs還通過與細(xì)胞膜或MVE的有限膜的融合，釋放其內(nèi)容物進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)或ILV中，參與細(xì)胞生命活動(dòng)的調(diào)節(jié)。EVs與細(xì)胞表面的相互作用模式以及介導(dǎo)EVs內(nèi)含物轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制尚未完全闡明，但這一過程對(duì)于如miRNA 等信號(hào)分子的傳遞效應(yīng)十分重要。

2.3 疾病診斷與預(yù)后評(píng)估

在過去的十幾年中，EVs被廣泛認(rèn)為是可靠的診斷和監(jiān)測(cè)人類疾病狀態(tài)的生物性指標(biāo)[14]。EVs在機(jī)體不同的體液(血液、尿液、支氣管肺泡液、膽汁和唾液等)中均能夠存在。除了EVs的分布范圍以外，其還可以通過攜帶來自母細(xì)胞的相關(guān)特定物質(zhì)(如蛋白質(zhì)、miRNAs、mRNAs、lncRNAs和脂質(zhì)等)來動(dòng)態(tài)地反映疾病狀態(tài)[1-2]。研究證實(shí)，EVs的內(nèi)容物反映著母細(xì)胞的病理生理特征，并且比其循環(huán)所處的生物流體更具有特異性[15]。同時(shí)，作為能夠顯示疾病特異性動(dòng)態(tài)信息的EVs內(nèi)容物，甚至具備評(píng)價(jià)疾病預(yù)后情況的重大潛力。在許多臨床疾病中，如冠狀動(dòng)脈疾病、腎臟疾病、肝臟疾病、神經(jīng)退行性疾病和自身免疫性疾病[15-19]等，EVs已被提出可作為預(yù)測(cè)疾病預(yù)后水平的可靠性指標(biāo)。

2.4 組織工程與臨床治療

如前所述，機(jī)體中收集到的天然EVs，因攜帶有具體生物學(xué)意義的信息分子，使其有益于臨床進(jìn)行疾病診斷與預(yù)后評(píng)估。而因EVs具有能夠穿越生物屏障和天然趨化性等特點(diǎn)，使得讓EVs作為體內(nèi)藥物遞送載體成為可能。近年來，隨著組織工程技術(shù)的不斷發(fā)展，EVs已經(jīng)可以實(shí)現(xiàn)工程化的改造與構(gòu)建，使其成為新的藥物遞送載體。相較于其他類似藥物遞送系統(tǒng)(如聚合物納米顆粒和脂質(zhì)體等)，EVs具有許多獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)[20]，它可以遞送不同類型的物質(zhì)，例如干擾RNA (siRNA)或藥物活性分子等。EVs在血液中的穩(wěn)定度較高，即使是體內(nèi)遠(yuǎn)距離的傳輸，也可以特異性地完成遞送[21-22]。此外，由于EVs的體積較小且具有生物源性，它可以繞過溶酶體的吞噬，將包含的內(nèi)容物直接釋放到受體細(xì)胞，從而發(fā)揮功能。由于EVs是來源于宿主自身的產(chǎn)物，所以不會(huì)引起機(jī)體強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)[20]。同時(shí)，EVs的親水性核心也使其成為水溶性藥物的優(yōu)質(zhì)載體[23]。目前使用EVs的治療方法已經(jīng)在體外和體內(nèi)進(jìn)行了檢驗(yàn)，被證實(shí)可用于治療不同的疾病，例如癌癥、免疫或神經(jīng)性疾病等等。目前，關(guān)于EVs的最新研究主要集中在如何通過有效地修飾，來改善EVs內(nèi)容物的成分，提高遞送靶向效率和精準(zhǔn)調(diào)控分布位置。例如，研究者們想通過在EVs表面錨定一些特定設(shè)計(jì)的肽段，來實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)識(shí)別靶細(xì)胞上的特定受體[1,24]，從而進(jìn)一步加強(qiáng)EVs的治療效果。

3 EVs的臨床應(yīng)用

隨著人們對(duì)于EVs認(rèn)知與研究的不斷加深，其得到了越來越多的應(yīng)用。EVs通過將其內(nèi)容物傳遞給受體細(xì)胞，來參與受體細(xì)胞生命活動(dòng)并調(diào)節(jié)機(jī)體穩(wěn)態(tài)。EVs在免疫上是具有惰性的，因此能夠最低程度的避免觸發(fā)先天和適應(yīng)性的免疫反應(yīng)[25]。臨床應(yīng)用研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，樹突狀細(xì)胞分泌的EVs可以刺激免疫系統(tǒng)，用作抗腫瘤疫苗的研發(fā)。在肺癌和黑色素瘤患者治療的臨床試驗(yàn)中，采用EVs的免疫療法也具有巨大潛力[26]。此外，MSCs來源的EVs已在動(dòng)物模型中被證實(shí)可以用于治療急性腎衰竭、皮膚損傷和心肌梗死等多種疾病。目前還有一些臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行，主要是基于EVs的體外操作，裝載特定的內(nèi)含物(例如siRNA，miRNA和藥物)，然后將其運(yùn)送到目標(biāo)細(xì)胞，從而發(fā)揮治療效能[27-28]。因此，高精度、高特異性及免疫惰性的優(yōu)點(diǎn)，使得EVs在臨床疾病應(yīng)用中具有巨大潛力。

3.1 心血管系統(tǒng)疾病

EVs通過調(diào)節(jié)細(xì)胞間信號(hào)，引導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)發(fā)生改變來應(yīng)對(duì)血流動(dòng)力學(xué)等環(huán)境的變化，從而幫助機(jī)體控制心血管的穩(wěn)態(tài)。EVs從母細(xì)胞攜帶到細(xì)胞外的信息可以作用于局部(同一組織內(nèi))和遠(yuǎn)端(血流下游)的受體細(xì)胞。一方面，有研究表明EVs內(nèi)包含的病理性生物信號(hào)分子可能進(jìn)一步誘發(fā)或者加重各種心血管系統(tǒng)疾病。另一方面，研究表明將體外培養(yǎng)細(xì)胞(例如內(nèi)皮細(xì)胞，心肌細(xì)胞等)獲得的EVs注射到病變組織中可以促進(jìn)組織功能的恢復(fù)。

由于EVs包含的不同生物分子可以反映出細(xì)胞表型的改變，臨床上常將血液中的EVs作為一種非侵入性的檢查來監(jiān)測(cè)全身組織狀態(tài)。這在心血管系統(tǒng)疾病的診斷中有很多應(yīng)用。有研究表明，暴露于致動(dòng)脈粥樣硬化脂蛋白的平滑肌細(xì)胞，會(huì)釋放miRNA譜顯著改變的EVs，這其中包含的miRNA-24-3p和miRNA-130a-3p含量會(huì)相應(yīng)減少[29]，而這兩種miRNA在家族性高膽固醇血癥患者的循環(huán)EVs中表達(dá)也降低。因此臨床上可通過監(jiān)測(cè)血液中EVs的miRNA-24-3p和-130a-3p含量變化篩選高膽固醇血癥或動(dòng)脈粥樣硬化患者，從而增強(qiáng)診斷的可靠性與可信度。除了有助于臨床診斷以外，EVs能夠作為治療載體幫助恢復(fù)組織穩(wěn)態(tài)。例如有研究發(fā)現(xiàn)，通過引入體外細(xì)胞培養(yǎng)獲得的EVs，可預(yù)防或逆轉(zhuǎn)心血管系統(tǒng)的病理重塑。內(nèi)皮細(xì)胞來源的EVs可包含功能性的內(nèi)皮一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase， eNOS)，eNOS可以通過自分泌的方式參與恢復(fù)脂肪酸誘導(dǎo)氧化應(yīng)激[30]后的穩(wěn)態(tài)。同時(shí)，也有研究表明，冠脈內(nèi)注射心球樣細(xì)胞來源的EVs可以減輕大鼠和豬急性心肌梗死中的心肌壁損傷[31]。以上提及的EVs修復(fù)作用可能是通過其在病變組織[32]中有效遞送并提高穩(wěn)態(tài)基因表達(dá)和非炎癥表型的miRNA來實(shí)現(xiàn)的，這也為未來心血管疾病的治療方法提供了新思路。

3.2 肝臟疾病

近期研究表明，EVs可用于檢測(cè)、監(jiān)測(cè)和預(yù)測(cè)肝臟疾病患者的疾病進(jìn)展?fàn)顩r及生存率。以肝硬化為例，EVs計(jì)數(shù)可用于監(jiān)測(cè)全身的炎癥狀態(tài)[33]，而EVs在肝硬化患者體內(nèi)含量比正常的健康人更高[34]。同時(shí)，相較于健康的正常人，肝硬化患者血漿中含有CD4、CD8、CD11a、CD31、CD235和CK-18等表面標(biāo)記的EVs亞群的數(shù)量有所增加[33]。前期有研究證實(shí)，CK-18標(biāo)記的EVs水平與肝硬化病情的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，并通過這一指標(biāo)預(yù)測(cè)了疾病的6 個(gè)月死亡率[35]。此外，血漿來源EVs內(nèi)包含的miRNA可作為評(píng)價(jià)患者纖維化水平的生物指標(biāo)。通過檢測(cè)機(jī)體血漿EVs內(nèi) miRNA-101、miRNA-122、miRNA-195、miRNA-224和let-7的變化，可以診斷肝硬化或監(jiān)測(cè)其早期到晚期的進(jìn)展情況，而檢測(cè)體內(nèi)EVs中miRNA-192的增加情況，有助于診斷非常早期的肝纖維化病變[34]。

除了疾病診斷與監(jiān)測(cè)外，基于前體細(xì)胞和MSCs來源的EVs治療肝臟相關(guān)疾病的應(yīng)用研究也有很大前景。研究證實(shí)，對(duì)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose-derived mesenchymal stem cells, ADMSCs)進(jìn)行 miRNA-122(一種肝星狀細(xì)胞的抑制劑)轉(zhuǎn)染[36]，而轉(zhuǎn)染后ADMSCs產(chǎn)生的EVs可以抑制原代肝星狀細(xì)胞和其LX2細(xì)胞系的活化與增殖，這可以直接抑制肝纖維化的發(fā)生與發(fā)展。同時(shí)，這些EVs也可以提高由CCl4注射誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠的存活率。更加值得注意的是，同步在CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠脾臟內(nèi)注射ADMSCs來源的EVs(過表達(dá)miRNA-181-5p)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)肝臟中I型膠原蛋白、Vimentin、α-平滑肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)和纖維連接蛋白的表達(dá)較對(duì)照組均明顯減少[37]。同樣，還有研究發(fā)現(xiàn)，在CCl4誘導(dǎo)小鼠肝纖維化的模型中，人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, UCMSCs)來源的EVs減輕了肝纖維化的組織病理學(xué)改變，抑制了Caspase-3的活化，并降低了ROS與TGF-β的產(chǎn)生[38]。

3.3 腎臟疾病

EVs扮演著細(xì)胞間信使的角色，并通過不同類型的腎細(xì)胞，參與形成腎小球?yàn)V液的過程[1]。研究表明，足細(xì)胞來源的EVs附著在腎臟近端小管上皮細(xì)胞的刷狀邊緣，并易出現(xiàn)濃度依賴性內(nèi)化[1,39]。在各種影響腎臟的病理因素刺激下，細(xì)胞出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，從而EVs的特性也發(fā)生改變[40]，提示疾病的發(fā)生和發(fā)展。比如，機(jī)械性牽張和高血糖環(huán)境會(huì)誘導(dǎo)腎小球?yàn)V液中EVs的釋放，而這可以作為高血壓和糖尿病腎病中腎小球損傷的早期尿液檢測(cè)標(biāo)志物。腎小球?yàn)V過液中釋放的泌尿生殖道上皮脫落的EVs均可從尿液中提取，因此可作為考察泌尿系統(tǒng)的臨床狀況的非侵入性生物標(biāo)志物[1]。同時(shí)，轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析可以幫助確定尿液EVs的具體來源，比如EVs內(nèi)包含特定的mRNAs，如編碼podocin(膜蛋白，定位在腎小球)和 aquaporin 2(水通道蛋白2，定位在集合管)的mRNAs，可以表明其起源于腎元和集合管的特定區(qū)域。除此以外，全面的蛋白質(zhì)組學(xué)或脂質(zhì)組學(xué)分析研究也可以幫助識(shí)別尿EVs的來源，利于疾病診斷[1]。

除了標(biāo)記不同類型的腎臟疾病外，目前臨床試驗(yàn)證據(jù)也表明，EVs可以促進(jìn)多種慢性腎病(chronic kidney disease, CKD)的修復(fù)與再生。 EVs內(nèi)的生物分子富含調(diào)節(jié)信息，能夠參與調(diào)節(jié)受體細(xì)胞內(nèi)包括炎癥、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡和血管生成等一系列的生理病理過程，而這些過程都與CKD 的疾病進(jìn)展密切相關(guān)。高血壓和糖尿病腎病患者的臨床試驗(yàn)驗(yàn)證了EVs在改善腎損傷和功能障礙方面的安全性與有效性，并將能夠釋放EVs的MSCs定為CKD 患者細(xì)胞療法的有利種子細(xì)胞。目前，在CKD 疾病模型中的研究揭示了 MSCs來源的 EVs 在保護(hù)腎臟結(jié)構(gòu)和功能方面的可行性和有效性，推動(dòng)了非細(xì)胞治療在腎臟修復(fù)再生中的應(yīng)用。

3.4 口腔系統(tǒng)疾病

唾液的EVs中已被證實(shí)包含有多種具有口腔疾病信息的生物活性分子，可以輔助完成口腔疾病的診斷。以口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)為例，研究表明OSCC患者的唾液微囊泡含量水平升高，這與患者臨床表現(xiàn)和預(yù)后情況密切相關(guān)[41]。另有研究結(jié)果表明，OSCC患者唾液EVs中miR-412-3p 和 miR-512-3p的表達(dá)含量有所增加，而miR-302b-3p和 miR-517b-3p出現(xiàn)選擇性富集[42]。這4 種唾液EVs中的 miRNAs均有輔助診斷 OSCC的潛在價(jià)值。除此以外，臨床常見的牙周炎患者唾液EVs中的 PD-L1表達(dá)也被發(fā)現(xiàn)與非牙周炎患者間存在顯著差異，可作為牙周炎的輔助診斷標(biāo)記物[43]。不僅在診斷方面，EVs在口腔疾病的治療中也有很大應(yīng)用前景。研究證實(shí)，舌癌 Tca8113細(xì)胞能分泌包含腫瘤免疫相關(guān)蛋白的EVs，可以通過樹突狀細(xì)胞，誘導(dǎo)T細(xì)胞成為抗原特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞，從而進(jìn)一步特異性殺傷腫瘤細(xì)胞[44]，為口腔腫瘤的免疫治療提供了新可能。

3.5 免疫調(diào)節(jié)

EVs對(duì)先天性和適應(yīng)性免疫的調(diào)節(jié)作用也不容忽視。一方面，在先天性免疫中，中性粒細(xì)胞趨化募集是由趨化中性粒細(xì)胞來源的EVs內(nèi)包含的白三烯B4驅(qū)動(dòng)自分泌/旁分泌級(jí)聯(lián)反應(yīng)所介導(dǎo)的[1]。最新研究表明，活化的單核細(xì)胞分泌的EVs內(nèi)所包含的線粒體，可在內(nèi)皮細(xì)胞中誘導(dǎo)系統(tǒng)性促炎I型IFN和TNF反應(yīng)[45]，這可能是導(dǎo)致部分心血管疾病的潛在原因，通過分析血液中EVs內(nèi)包含的相關(guān)物質(zhì)，可以幫助提高疾病診斷與病情分析水平。與此同時(shí)，來自MSCs的EVs可以通過轉(zhuǎn)移miR-451a、miR-1202、miR-630和miR-638等調(diào)控物質(zhì)，作用于Toll樣受體信號(hào)通路和NF-kB通路，參與抑制巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答反應(yīng)[46]。因此，MSCs來源的EVs可以參與治療多種炎癥相關(guān)疾病，甚至可以作為免疫治療藥物載體發(fā)揮關(guān)鍵作用。另一方面，關(guān)于適應(yīng)性免疫與EVs的關(guān)系，目前的研究發(fā)現(xiàn)MHC II類限制性抗原的呈遞依賴于囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)[47]。來自樹突狀細(xì)胞的EVs能夠促進(jìn)抗原特異性T細(xì)胞活化和T輔助細(xì)胞(Th)向Th1表型分化[1]。也有研究表明，T調(diào)節(jié)細(xì)胞通過EVs介導(dǎo)的miRNAs轉(zhuǎn)移抑制Th1細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子分泌，從而抑制Th1(CD4+ IFNgamma+)的炎癥反應(yīng)[1]。以上這些發(fā)現(xiàn)均表明，EVs可以作為免疫疾病治療的新手段。

4 前景與展望

許多體外細(xì)胞與體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果和部分臨床研究數(shù)據(jù)表明，EVs在疾病的診斷和治療中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，但目前EVs的臨床應(yīng)用產(chǎn)品仍然較少，EVs在輔助臨床診斷和疾病預(yù)后監(jiān)測(cè)評(píng)估，參與疾病治療的潛力仍然有待發(fā)掘。

EVs能夠通過生物屏障，并且可以較為容易地從生物體液(如眼淚、血液、尿液等)中獲得，EVs能提供機(jī)體器官或組織在病理生理?xiàng)l件下有價(jià)值的生物信息，尤其是對(duì)于某些無法獲取或不方便直接獲取的器官或系統(tǒng)，如中樞神經(jīng)系統(tǒng)，腎臟和胚胎-胎兒胎盤組織等。這些寶貴信息有助于輔助疾病診斷與病情監(jiān)測(cè)，甚至于疾病預(yù)后評(píng)估。但由于不同研究使用了不同的EVs分離和表征方法，因此在分析結(jié)果和總結(jié)結(jié)論方面也仍存在挑戰(zhàn)。此外，抑制EVs的形成與釋放可能是臨床上新的治療方法，對(duì)控制中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥、轉(zhuǎn)移性腫瘤擴(kuò)散、腎性子癇等疾病有潛在的應(yīng)用價(jià)值。EVs還可以作為納米載體，將治療藥物轉(zhuǎn)運(yùn)到受體組織或細(xì)胞中，從而達(dá)到治療目的。安全來源的EVs(例如MSCs來源EVs)可能包含選擇性遺傳物質(zhì)或蛋白，靶向輸送到受體組織或細(xì)胞，參與生命活動(dòng)。因此，基于EVs的納米載體技術(shù)為藥物在人體內(nèi)的定向傳輸提供了良好遠(yuǎn)景。然而，相關(guān)的大多數(shù)研究均是在體外和動(dòng)物模型中進(jìn)行的，這種方法在臨床試驗(yàn)中的安全性和特異性仍然有待觀察?？傮w來說，雖然EVs有很好的應(yīng)用前景，但在其提取與鑒定標(biāo)準(zhǔn)化以及臨床轉(zhuǎn)化應(yīng)用等方面還存在諸多挑戰(zhàn)，因此在臨床上廣泛使用EVs仍需克服許多障礙，我們期待通過對(duì)EVs的不斷深入研究，可以促進(jìn)EVs在臨床醫(yī)療成果轉(zhuǎn)化方面的進(jìn)一步發(fā)展。