李婷婷，王 蓉，任興權(quán)，劉 盼，陳 昆，霍文清，曾文錦

（酒泉市食品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，甘肅酒泉 735000）

隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的發(fā)展和人類(lèi)對(duì)糧食增產(chǎn)需求的增長(zhǎng)，農(nóng)藥被廣泛應(yīng)用于糧食的種植生產(chǎn)過(guò)程，其中有機(jī)磷農(nóng)藥具有高效、易生物降解、廣譜性高等特點(diǎn)，使用頻率較高。但因大量使用而產(chǎn)生的負(fù)面效應(yīng)也日益突顯，當(dāng)其在植物的可食用部分富集并通過(guò)食物鏈進(jìn)入人體后，對(duì)人體健康產(chǎn)生的潛在危害主要表現(xiàn)在細(xì)胞毒性、遺傳毒性和致癌性等方面[1]。因此，植物源性食品中有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留問(wèn)題在食品安全監(jiān)管領(lǐng)域內(nèi)得到較多關(guān)注[2]，其中，氧樂(lè)果、三唑磷、毒死蜱等高毒禁限用有機(jī)磷農(nóng)藥是關(guān)注的重點(diǎn)之一[3]。有機(jī)磷農(nóng)藥的儀器分析方法主要有氣相色譜法[4-5]、液相色譜法[6]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[7-8]和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[9]。氣相色譜法具有選擇性好、靈敏度高、應(yīng)用范圍廣、儀器運(yùn)行成本相對(duì)較低等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于食品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)[10]；液相色譜法在強(qiáng)極性及熱不穩(wěn)定性農(nóng)藥的檢測(cè)方面有較為突出的表現(xiàn)[6]。較色譜法而言，色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法可實(shí)現(xiàn)多種性質(zhì)相近且分離困難的農(nóng)藥殘留物的定性鑒定和定量分析，但儀器價(jià)格昂貴，運(yùn)行成本較高且對(duì)操作人員的專(zhuān)業(yè)素質(zhì)要求較高。同時(shí)，為最大限度保留待測(cè)物質(zhì)并消除雜質(zhì)和基體對(duì)測(cè)定的干擾，樣品前處理技術(shù)也在不斷優(yōu)化，常用的有固相萃取技術(shù)[11]、加速溶劑萃取技術(shù)[12]、凝膠色譜滲透技術(shù)[13]和QuEChERS技術(shù)[14-15]等。在本文中選擇QuEChERS技術(shù)作為樣品前處理方法，在節(jié)約試劑、提高前處理效率等方面有較為顯著的優(yōu)勢(shì)。

在GB 2763-2021《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中最大殘留限量》[16]中，規(guī)定了小麥中氧樂(lè)果等26種有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留限量和二溴磷等8種有機(jī)磷農(nóng)藥的臨時(shí)殘留限量，其中，二嗪磷、庚烯磷和特丁硫磷的臨時(shí)限量均為0.01 mg/kg，其余農(nóng)藥的最大殘留限量均在0.02 mg/kg以上，故而在檢測(cè)時(shí)所用方法的定量限應(yīng)小于其最大殘留限量值。小麥胚片是面粉加工工業(yè)的副產(chǎn)品之一，因富含人體必需的8種氨基酸、優(yōu)質(zhì)的植物脂肪酸、維生素及礦物元素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)而受到人們的喜愛(ài)[17-18]。近年來(lái)，隨著小麥胚營(yíng)養(yǎng)成分和功能性成分研究的深入，小麥胚的新產(chǎn)品開(kāi)發(fā)及精深加工在食品行業(yè)亦得到較多關(guān)注[19-20]。目前，小麥胚及以其為主要原料的食品中農(nóng)藥殘留現(xiàn)狀的研究在國(guó)內(nèi)報(bào)道較少。小麥胚及其深加工產(chǎn)品基體組成復(fù)雜，基質(zhì)效應(yīng)給其中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的檢測(cè)帶來(lái)一定難度。因此，開(kāi)發(fā)小麥胚片中多種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法和明確基質(zhì)效應(yīng)的影響對(duì)研究其農(nóng)藥殘留現(xiàn)狀有較為積極的意義。

本文研究了氣相色譜同時(shí)測(cè)定小麥胚片中26種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留物的方法并探究了基質(zhì)效應(yīng)對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。采用乙腈-醋酸溶液提取小麥胚片樣品中的待測(cè)物，通過(guò)QuEChERS技術(shù)凈化樣品提取溶液，利用DB-17型毛細(xì)管色譜柱和程序升溫實(shí)現(xiàn)待測(cè)物的分離，采用火焰光度檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，使用空白基質(zhì)溶液配制的標(biāo)準(zhǔn)工作液作為標(biāo)準(zhǔn)系列溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以保留時(shí)間定性，以外標(biāo)法定量。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

小麥胚片 酒泉市雙禧面粉有限責(zé)任公司；農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液 濃度均為100 μg/mL，溶劑均為丙酮，天津農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測(cè)所；乙腈 色譜純，德國(guó)Meker公司；丙酮 色譜純，南京化學(xué)試劑股份有限公司；十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）、乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠（PSA） 40～60 μm，美國(guó)Agilent公司；石墨化碳黑（GCB） 40～120 μm，上海麥克林生化科技有限公司；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

7890B氣相色譜儀（配有火焰光度檢測(cè)器）、DB-17型毛細(xì)管色譜柱30 m×0.32 mm×0.25 μm 美國(guó)Agilent公司；PL602E/02電子天平 梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；TG16離心機(jī) 上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司；MV5高通量平行濃縮儀 北京萊伯泰科儀器股份有限公司；渦旋混合器 德國(guó)IKA公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 柱溫箱升溫程序的優(yōu)化 配制26種目標(biāo)農(nóng)藥濃度為0.5 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，通過(guò)不斷改變升溫速率和保持時(shí)間，優(yōu)化柱溫箱升溫程序，以確保所有的待測(cè)目標(biāo)物得到有效分離。再配制濃度為0.50 μg/mL的單一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液依次進(jìn)樣，逐一確定每種目標(biāo)農(nóng)藥的保留時(shí)間。

1.2.2 樣品前處理方法 將樣品粉碎后，過(guò)篩混勻，于-18 ℃冰箱中密封保存。參照GB 23200.116-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中90種有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定》[21]中的前處理方法，加入無(wú)水硫酸鎂進(jìn)一步去除樣品提取溶液中的水分，得到第一種樣品前處理方式，即未采取凈化措施的前處理方法。參照GB 23200.113-2018《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中208種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定》[22]中的QuEChERS凈化技術(shù)，并加入石墨化炭黑（GCB）去除樣品提取液中的色素，得到第二種前處理方式，即采取凈化措施的前處理方式。

第一種：準(zhǔn)確稱(chēng)取5.00 g樣品于50 mL離心管中，加入10.0 mL水浸潤(rùn)30 min，加入15.0 mL乙腈，2000 r/min渦旋震蕩5 min，加入1顆陶瓷均質(zhì)子后再加入3 g氯化鈉和1 g無(wú)水硫酸鎂，劇烈震蕩1 min，4000 r/min離心5 min。準(zhǔn)確吸取上層乙腈相3.0 mL于試管中，40 ℃下加氮?dú)饩従彺抵两?，?zhǔn)確加入1.0 mL丙酮復(fù)溶，過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜，上機(jī)分析。

第二種：準(zhǔn)確稱(chēng)取5.00 g樣品于50 mL離心管中，加入10.0 mL水浸潤(rùn)30 min，加入15.0 mL乙腈-醋酸溶液（體積比為99:1），2000 r/min渦旋震蕩5 min，加入1顆陶瓷均質(zhì)子后再加入1.5 g乙酸鈉和3 g無(wú)水硫酸鎂，劇烈震蕩1 min，4000 r/min離心5 min。準(zhǔn)確吸取上層有機(jī)相6.0 mL于15 mL離心管中，并向其中加入360 mg PSA、360 mg C18和100 mg GCB，2000 r/min渦旋震蕩1 min，4000 r/min離心5 min，取3.0 mL凈化液于試管中，40 ℃下加氮?dú)饩従彺抵两?，?zhǔn)確加入1.0 mL丙酮復(fù)溶，過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜，上機(jī)分析。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 未凈化的空白基質(zhì)溶液：空白小麥胚片樣品經(jīng)1.2.2中第一種前處理方法得到的樣品溶液，于4 ℃冰箱保存。

凈化后的空白基質(zhì)溶液：空白小麥胚樣品經(jīng)1.2.2中第二種前處理方法得到的樣品溶液，于4 ℃冰箱保存。

混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別取敵敵畏、滅線磷、硫線磷等26種有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液0.20 mL于10 mL容量瓶中，用丙酮稀釋至刻度，得到濃度為2.0 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，于-18 ℃冰箱中避光保存。

標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別吸取0.025、0.125、0.25、1.25、2.50 mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于5 mL容量瓶中，用丙酮定容，配制成質(zhì)量濃度分別為0.010、0.050、0.10、0.50、1.0 μg/mL的混標(biāo)系列工作液（試劑標(biāo)液），臨用現(xiàn)配。

基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液：吸取0.025、0.25和2.50 mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于5 mL容量瓶中，分別用未凈化的空白基質(zhì)溶液和凈化后的空白基質(zhì)溶液定容，配制成質(zhì)量濃度分別為0.010、0.10和1.0 μg/mL的未凈化的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液和凈化后的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液（基質(zhì)標(biāo)液），臨用現(xiàn)配。

1.2.4 基質(zhì)效應(yīng)試驗(yàn) 在基質(zhì)效應(yīng)試驗(yàn)開(kāi)始前，先用未凈化的空白基質(zhì)溶液連續(xù)進(jìn)樣5次以飽和襯管上的活性位點(diǎn)，待出峰高度正常后依次進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)工作液、未凈化的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液和凈化后的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液。在最優(yōu)的色譜條件下進(jìn)行測(cè)試，記錄每種目標(biāo)物的峰面積，采用峰面積的相對(duì)比值來(lái)評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)（Matrix Effect，ME）。

式中：ME未凈化：配制基質(zhì)標(biāo)液的溶劑為未凈化的空白基質(zhì)溶液；ME凈化：配制基質(zhì)標(biāo)液的溶劑為凈化后的空白基質(zhì)溶液。一般認(rèn)為：當(dāng)ME大于100%，為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；當(dāng)ME小于100%，為基質(zhì)減弱效應(yīng)；當(dāng)ME位于80%～120%的范圍內(nèi)，為弱基質(zhì)效應(yīng)，即基質(zhì)效應(yīng)不顯著；當(dāng)ME位于70%～80%或120%～130%的范圍內(nèi)，為較強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)，即基質(zhì)效應(yīng)顯著；當(dāng)ME大于130%或小于70%時(shí)，為強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)，即基質(zhì)效應(yīng)非常顯著[23]。

1.2.5 加標(biāo)回收試驗(yàn) 選取空白小麥胚片作為測(cè)試樣品，分別進(jìn)行0.02、0.10和0.50 mg/kg三個(gè)含量水平的加標(biāo)回收試驗(yàn)。樣品和加標(biāo)樣品中目標(biāo)物的含量均通過(guò)下式計(jì)算：

式中：X：待測(cè)物含量，mg/kg；C：樣品測(cè)試溶液中待測(cè)物濃度，μg/mL；V1：提取溶劑體積，mL，V1=15.0 mL；V2：用于氮吹的凈化液體積，mL，V2=3.0 mL；V3：樣品測(cè)試溶液定容體積，mL，V3=1.0 mL；m：稱(chēng)樣質(zhì)量，g；f：稀釋倍數(shù)；1000：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù)。

重復(fù)性限通過(guò)如下公式[24]計(jì)算：

式中：r：重復(fù)性限；Sr：重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.2.6 色譜條件 色譜柱：DB-17（30 m×0.32 mm×0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度：230 ℃；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣體積：1.0 μL；柱流量：1.5 mL/min；檢測(cè)器溫度：260 ℃；空氣流量為100 mL/min，氫氣流量為75 mL/min，尾吹氣流量為60 mL/min；柱溫箱升溫程序見(jiàn)表1。

表 1 柱溫箱升溫程序Table 1 The temperature-rising program of column oven

1.3 數(shù)據(jù)處理

使用Microsoft excel 2010軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 柱溫箱升溫程序的選擇

由于氣相色譜法對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的定性主要依賴(lài)于保留時(shí)間，有效分離待測(cè)物中性質(zhì)相似、沸點(diǎn)相近的物質(zhì)是準(zhǔn)確定量的關(guān)鍵因素之一。設(shè)置三個(gè)程序升溫梯度，并依次優(yōu)化3個(gè)梯度的升溫速率和改變保持時(shí)間，優(yōu)化得到的柱溫箱升溫程序在表1中給出，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的氣相色譜圖如圖1。較NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》[25]中給出升溫程序而言，可在不分組測(cè)試的前提下實(shí)現(xiàn)26種有機(jī)磷農(nóng)藥的有效分離。在實(shí)際樣品測(cè)定時(shí)，目標(biāo)物組分的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間相差在±0.05 min之內(nèi)，可認(rèn)定為該農(nóng)藥[20,25]。

圖 1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的氣相色譜圖Fig.1 The gas chromatogram diagram of standard substances

2.2 前處理方法比較及基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià)

2.2.1 前處理方法比較 較NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》[25]和GB 23200.116-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中90種有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定》[20]兩個(gè)在前處理過(guò)程中均未采取凈化措施的標(biāo)準(zhǔn)方法而言，本實(shí)驗(yàn)所設(shè)計(jì)的前處理方法具有以下優(yōu)勢(shì)：a.將稱(chēng)樣量分別從50.00[25]和10.00 g[20]減小至5.00 g，將提取溶劑乙腈的用量從50 mL降低至15 mL，較大程度節(jié)約了有機(jī)試劑的用量；b.在溶劑置換時(shí)，將水浴溫度從80 ℃降低至40 ℃，使得熱敏感性待測(cè)目標(biāo)物得到最大程度的保留，同時(shí)將待凈化溶液體積從10.0 mL變?yōu)?.0 mL，相應(yīng)將復(fù)溶溶劑體積從5.0 mL降低為1.0 mL，使得待測(cè)物富集倍數(shù)從2倍增加至3倍；c.采用QuEChERS技術(shù)凈化樣品提取溶液，有望降低基質(zhì)效應(yīng)對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，同時(shí)為減少樣品基體對(duì)襯管和色譜柱的污染做出較為積極的貢獻(xiàn)。

較普通谷物而言，小麥胚產(chǎn)品中蛋白質(zhì)和脂肪含量相對(duì)較高，且樣品提取液為較深的黃色。本實(shí)驗(yàn)在GB 23200.113-2018《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中208種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定》中給出的谷物樣品Q(chēng)uEChERS凈化方法的基礎(chǔ)上，將每毫升凈化液所需PSA和C18的用量增加為原來(lái)的1.2倍，同時(shí)向6.0 mL待凈化提取液中加入100 mg GCB去除色素對(duì)測(cè)定結(jié)果的干擾。分別使用濃度為0.05和0.5 μg/mL的未凈化基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液代替樣品提取溶液經(jīng)凈化步驟和溶劑置換步驟后進(jìn)行測(cè)定，在0.05 μg/mL的濃度水平下，26種目標(biāo)農(nóng)藥的回收率在93.80%～103.80%之間；在0.5 μg/mL的濃度水平下，26種目標(biāo)農(nóng)藥的回收率在93.98%～106.02%之間，說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)改進(jìn)的樣品前處理方法適用于以小麥胚為主要原料的食品。因此，選取1.2.2中第二種前處理方法作為本實(shí)驗(yàn)的前處理方法。

2.2.2 基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià) 待測(cè)目標(biāo)物均為有機(jī)磷農(nóng)藥，因含有P=O或P=S基團(tuán)而易被進(jìn)樣口活性位點(diǎn)吸附[26]，其中氧樂(lè)果、馬拉硫磷等多種待測(cè)物屬于基質(zhì)效應(yīng)敏感的典型農(nóng)藥，且基質(zhì)效應(yīng)與基質(zhì)類(lèi)型之間存在密切聯(lián)系[27-28]。除此之外，基質(zhì)效應(yīng)還與農(nóng)藥的極性有關(guān)。有研究表明，農(nóng)藥的極性越大，基質(zhì)效應(yīng)越明顯[29]。因此，明確基質(zhì)效應(yīng)對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響十分必要。選取待測(cè)目標(biāo)物質(zhì)量濃度均為0.010、0.10和1.0 μg/mL的試劑標(biāo)準(zhǔn)溶液、未凈化的空白基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和凈化后的空白基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液考察基質(zhì)效應(yīng)在低、中、高三個(gè)質(zhì)量濃度水平下對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，并計(jì)算基質(zhì)效應(yīng)ME值，結(jié)果見(jiàn)表2。a.本實(shí)驗(yàn)所涉及的26種有機(jī)磷農(nóng)藥的ME值均大于100%，表現(xiàn)出基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。b.在三個(gè)濃度水平下，治螟磷、特丁硫磷、二嗪磷、氯唑磷、毒死蜱和甲基異柳磷等6種有機(jī)磷農(nóng)藥的ME凈化值和ME未凈化值均在100.08%～119.76%之間，表現(xiàn)出的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)不顯著。c.敵敵畏的ME凈化值和ME未凈化值均在119.63%～241.65%之間，相同濃度下的ME凈化值均大于ME未凈化值。d.滅線磷、硫線磷、甲基對(duì)硫磷、殺螟硫磷、馬拉硫磷、殺撲磷、伏殺硫磷、亞胺硫磷、谷硫磷等9種有機(jī)磷農(nóng)藥在中、高濃度水平下的ME凈化值位于100.87%～118.44%之間，表現(xiàn)出的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)較弱；在低濃度水平下，滅線磷表現(xiàn)出較強(qiáng)的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，其余農(nóng)藥均表現(xiàn)出非常顯著的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。e.甲拌磷、甲基毒死蜱和倍硫磷在低、中濃度水平下的ME凈化值均小于ME未凈化值；在高濃度下的ME凈化值在105.26%～106.77%之間，表現(xiàn)出較弱的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。f.樂(lè)果僅在高濃度下的ME凈化值位于120%～130%之間，表現(xiàn)為較強(qiáng)的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；低、中濃度水平下的ME凈化值和三個(gè)濃度水平下的ME未凈化值均大于130%，表現(xiàn)出的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)非常顯著。g.三唑磷在三個(gè)濃度水平下的ME未凈化值和在低濃度水平下的ME凈化值均大于130%，表現(xiàn)出的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)非常顯著；在中、高兩個(gè)濃度水平下的ME凈化值分別為122.12%和128.11%，表現(xiàn)出較強(qiáng)的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。h.氧樂(lè)果、水胺硫磷、丙溴磷、甲基硫環(huán)磷和硫環(huán)磷等5種有機(jī)磷農(nóng)藥在低、中、高三個(gè)濃度水平下的ME值均大于130%，表現(xiàn)出的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)非常顯著。由此可見(jiàn)，當(dāng)樣品經(jīng)過(guò)QuEChERS技術(shù)凈化，在中、高濃度水平下降低基質(zhì)效應(yīng)的影響有較為明顯的作用。對(duì)于QuEChERS技術(shù)凈化后基質(zhì)效應(yīng)降低不明顯的目標(biāo)農(nóng)藥而言，在繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)采用凈化后的空白基質(zhì)溶液配制混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，可進(jìn)一步消除基質(zhì)效應(yīng)對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。圖2比較了濃度為0.10 μg/mL的待測(cè)目標(biāo)物在3種標(biāo)準(zhǔn)溶液中的峰面積。

圖 2 基質(zhì)效應(yīng)對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響Fig.2 The effect of matrix effects on determination results

表 2 目標(biāo)物在不同濃度水平下的基質(zhì)效應(yīng)Table 2 The matrix effects of the target organophosphorus pesticides at different concentration levels

2.3 方法的分析特性

在最佳測(cè)試條件下，26種有機(jī)磷農(nóng)藥均在0.010～1.0 μg/mL的線性范圍內(nèi)與對(duì)應(yīng)的峰面積呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.9991。除馬拉硫磷、甲基毒死蜱和谷硫磷外，其余目標(biāo)農(nóng)藥的線性范圍均包含了GB 2763-2021《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中最大殘留限量》[16]中相應(yīng)有機(jī)磷農(nóng)藥的最大殘留限量值對(duì)應(yīng)的樣品溶液濃度。當(dāng)樣品溶液濃度超出線性范圍后，可進(jìn)行稀釋?zhuān)蛊湮挥诰€性范圍之內(nèi)，并將稀釋倍數(shù)一并帶入1.2.5中含量公式計(jì)算。以10倍的信噪比確定儀器定量限，并與稱(chēng)樣量、提取溶劑體積及定容體積一起代入1.2.5中給出的含量公式，計(jì)算方法定量限。26種目標(biāo)物的方法定量限均在0.005～0.010 mg/kg之間，低于NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》中給出的方法檢出限，且低于GB 23200.116-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)植物源性食品中90種有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定》給出的方法定量限。表3給出了26種有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間、線性范圍、線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)和方法定量限。

2.4 加標(biāo)回收試驗(yàn)

為考察該方法的準(zhǔn)確性和精密度，選取空白小麥胚片作為測(cè)試樣品，進(jìn)行3個(gè)不同水平的加標(biāo)回收試驗(yàn)，每個(gè)加標(biāo)水平平行測(cè)定5次，結(jié)果見(jiàn)表4。三個(gè)加標(biāo)水平下，所有待測(cè)物的加標(biāo)回收率均在80.61%～116.19%的范圍內(nèi)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均在0.62%～6.83%之間，符合GB/T 27404-2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè)》[30]的要求，說(shuō)明該方法可應(yīng)用于小麥胚片及以其為主要原料的深加工產(chǎn)品中26種有機(jī)磷農(nóng)藥的陽(yáng)性篩查和定量測(cè)定。用1.2.5中給出的公式，計(jì)算每個(gè)加標(biāo)水平下的重復(fù)性限，結(jié)果一并在表4中給出。從表4中重復(fù)性限數(shù)據(jù)可知，在0.10 mg/kg加標(biāo)水平下，所有待測(cè)物的重復(fù)線性位于0.0047～0.0097之間，均小于GB 23200.116-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)植物源性食品中90種有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定》[20]給出的相同濃度下的重復(fù)性限。

表 3 有機(jī)磷農(nóng)藥的保留時(shí)間、線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)及方法定量限Table 3 Retention time, liner ranges, regression equations, correlation coefficients and limit of quantitation for the target organophosphorus pesticides

表 4 樣品中26種有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥殘留量的加標(biāo)回收測(cè)定結(jié)果（n=5）Table 4 Results for recovery determination of the target organophosphorus pesticides in samples (n=5)

2.5 實(shí)際樣品測(cè)定

隨機(jī)選取10份小麥胚片產(chǎn)品作為實(shí)際樣品，采用本實(shí)驗(yàn)所描述的方法進(jìn)行檢測(cè)，其中 2份樣品中檢出了本實(shí)驗(yàn)涉及的目標(biāo)農(nóng)藥，其余8份樣品中均未檢出本實(shí)驗(yàn)涉及的目標(biāo)農(nóng)藥。在2份陽(yáng)性樣品中，1份檢出馬拉硫磷，含量為0.074±0.005 mg/kg，一份檢出甲基毒死蜱和殺螟硫磷，含量分別為0.062±0.004和0.043±0.002 mg/kg，均小于GB 2763-2021《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中最大殘留限量》中規(guī)定的小麥胚產(chǎn)品中相關(guān)農(nóng)藥的最大殘留限量。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了一種QuEChERS凈化技術(shù)聯(lián)用氣相色譜法同時(shí)測(cè)定小麥胚片產(chǎn)品中多種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的方法，并采用低、中、高三個(gè)濃度水平的加標(biāo)回收試驗(yàn)驗(yàn)證了方法的準(zhǔn)確性和可靠性，得到較好結(jié)果。同時(shí)，評(píng)價(jià)了基質(zhì)效應(yīng)對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，結(jié)果表明所有的待測(cè)目標(biāo)物均表現(xiàn)出不同程度的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，其增強(qiáng)程度因農(nóng)藥的自身性質(zhì)和濃度水平而異，同時(shí)與樣品中基體含量的高低有一定關(guān)聯(lián)。該方法前處理簡(jiǎn)便且操作簡(jiǎn)單、靈敏度好、準(zhǔn)確度高，可滿(mǎn)足以小麥胚為主要原料的食品中26種有機(jī)磷農(nóng)藥的同時(shí)測(cè)定，有望為小麥胚片及其深加工產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的陽(yáng)性初篩和定量檢測(cè)提供幫助。