郭紫欣，劉蕓君，劉翼翔,*，王彥波,2

（1.集美大學(xué)海洋食品與生物工程學(xué)院，福建 廈門(mén) 361021；2.浙江工商大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，浙江 杭州 310018）

隨著電腦、寬屏手機(jī)等電子產(chǎn)品的廣泛使用，近年來(lái)視網(wǎng)膜相關(guān)眼科疾病人群快速增加。過(guò)量光輻射會(huì)導(dǎo)致視網(wǎng)膜組織的損傷，是高原地區(qū)生活人群及強(qiáng)光下工作人群易發(fā)老年性黃斑病變的主要原因[1]。因此，長(zhǎng)時(shí)間注視電腦、手機(jī)、電視等電子設(shè)備屏幕會(huì)讓人產(chǎn)生眼睛干澀、刺痛、疲勞、視覺(jué)模糊等不適癥狀[2]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，美國(guó)約20%的電腦使用者患有計(jì)算機(jī)視覺(jué)綜合癥[3]，每年由電腦引起的眼科疾病治療費(fèi)用高達(dá)20億 美元[4]；在日本、印度和挪威，這一數(shù)據(jù)分別達(dá)到了19.6%、46.3%和62.5%[4-6]。此外，近視的發(fā)生也與視網(wǎng)膜光損傷密切相關(guān)。近視的流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，亞洲6～19 歲學(xué)生近視患病率達(dá)60%，比歐洲高出20%[7]。2001—2015年，中國(guó)浙江奉化高中生整體近視人群比例從79.5%上升到87.7%[8]。因此，研究開(kāi)發(fā)具有抑制視網(wǎng)膜光損傷活性的膳食營(yíng)養(yǎng)因子具有重要的科學(xué)意義與社會(huì)價(jià)值。

巖藻黃素是海洋中存量最豐富的類(lèi)胡蘿卜素，占到自然界總類(lèi)胡蘿卜素存量的10%[9]。巖藻黃素主要存在于褐藻、硅藻、金藻及黃綠藻中，是可食性褐藻，也是海帶、裙帶菜、羊棲菜等中的重要活性物質(zhì)[10]。與其他類(lèi)胡蘿卜素（包括葉黃素、玉米黃質(zhì)）不同的是，巖藻黃素具有獨(dú)特的丙二烯、環(huán)氧烷、乙?；忍厥饨Y(jié)構(gòu)。研究表明，巖藻黃素具有抗氧化、調(diào)節(jié)糖脂代謝、抗炎、減肥、神經(jīng)保護(hù)等多種生物活性[11-14]。事實(shí)上，在結(jié)構(gòu)方面，巖藻黃素具有與葉黃素、玉米黃質(zhì)相似的共軛結(jié)構(gòu)，顯示其突出的抗氧化作用[6]；在物化特性方面，作為褐藻適應(yīng)海洋極端光環(huán)境的次生代謝產(chǎn)物，巖藻黃素還具有與葉黃素、玉米黃質(zhì)相同的特征吸收光譜（光譜范圍350～550 nm；最大吸收波長(zhǎng)450 nm），能有效猝滅過(guò)量光能對(duì)生物體的危害[12]。因此，巖藻黃素具有潛在的預(yù)防視網(wǎng)膜光損傷功能。

本課題組前期研究結(jié)果表明，口服灌胃巖藻黃素能有效抑制可見(jiàn)光誘導(dǎo)的青紫藍(lán)兔視網(wǎng)膜光損傷[2]；在細(xì)胞水平上，巖藻黃素能夠通過(guò)抗氧化途徑改善視網(wǎng)膜色素上皮（retinal pigment epithelium，RPE）細(xì)胞的吞噬功能[15]。值得注意的是，與葉黃素、玉米黃質(zhì)以及花色苷等抗氧化成分相比，巖藻黃素在抑制RPE細(xì)胞活性氧（reactive oxide species，ROS）自由基方面并無(wú)明顯優(yōu)勢(shì)，但卻具有更加顯著的改善RPE細(xì)胞吞噬功能的功效[2]。因此，本研究在前期研究基礎(chǔ)上，進(jìn)一步從非抗氧化途徑探究巖藻黃素改善可見(jiàn)光誘導(dǎo)RPE細(xì)胞吞噬功能紊亂的作用機(jī)制，以期為利用巖藻黃素開(kāi)發(fā)視力保護(hù)產(chǎn)品提供支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

人RPE細(xì)胞株ARPE-19（ATCC CRL-2302） 美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心；巖藻黃素標(biāo)準(zhǔn)品、葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品、二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid，DHA）、F12細(xì)胞培養(yǎng)液、熒光乳膠顆粒（直徑0.05 μm）西格瑪奧德里奇貿(mào)易有限公司；Mer酪氨酸激酶（Mer tyrosine kinase，MerTK）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（BMS2285） 北京諾為生物技術(shù)有限公司；αV整合素蛋白酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（ZY-ITGaV-Hu） 上海澤葉生物科技有限公司；β5整合素蛋白酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（YZ-E989582） 上海研尊生物科技有限公司；CD36酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（EH88RBX5）賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；單克隆抗體兔抗MerTK（ab238516）、兔抗αV（ab179475）、兔抗β5（ab184312）、兔抗CD36（ab252922） 艾博抗（上海）貿(mào)易有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Millicell ERS-2電壓電阻表 西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司；Infinite M200 Pro酶標(biāo)儀 德國(guó)Tecan公司；MCO-15AC二氧化碳培養(yǎng)箱、MLS2420/2420U全自動(dòng)殺菌釜 日本Sanyo公司；XDOS-1B倒置生物顯微鏡 重慶光電有限公司；Thermo ScientificTM生物安全柜 賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司。

1.3 方法

1.3.1 RPE分化細(xì)胞單層培養(yǎng)

將第4代ARPE-19細(xì)胞用于TransWell培養(yǎng)。TransWell小室（0.4 μm孔徑、6.5 mm直徑）加入F12不完全培養(yǎng)基在CO2培養(yǎng)箱中孵育2 h后，移棄培養(yǎng)基，細(xì)胞按5×104個(gè)/mL接種到TransWell上層。為了確保細(xì)胞貼壁，開(kāi)始時(shí)使用含質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%胎牛血清的F12完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h后為避免細(xì)胞過(guò)快生長(zhǎng)，完全培養(yǎng)基更換為含2%胎牛血清的F12完全培養(yǎng)基。每周換液3 次。接種48 h后，用電壓電阻表檢測(cè)TransWell膜上下兩層的跨膜電阻。當(dāng)ARPE-19細(xì)胞單層跨膜電阻值≥25 Ω·cm2時(shí)，表明ARPE-19細(xì)胞分化完全，然后用于可見(jiàn)光暴露實(shí)驗(yàn)[16-17]。

1.3.2 脂環(huán)境下可見(jiàn)光誘導(dǎo)RPE細(xì)胞損傷體外模型建立

在構(gòu)建分化RPE細(xì)胞單層的基礎(chǔ)上，構(gòu)建脂環(huán)境下可見(jiàn)光誘導(dǎo)RPE細(xì)胞損傷的體外模型[15,18]。將TransWell小室上層培養(yǎng)液替換為含有25.0 μmol/L DHA的無(wú)血清F12培養(yǎng)基，模擬RPE細(xì)胞處于高多不飽和脂肪酸的生理環(huán)境；然后在CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行可見(jiàn)光輻照實(shí)驗(yàn)?？梢?jiàn)光強(qiáng)度設(shè)置為3 500 lx，光照時(shí)間分別為6、12 h和 24 h，空白組不進(jìn)行光照處理。

1.3.3 巖藻黃素的干預(yù)實(shí)驗(yàn)

以葉黃素為對(duì)照，配制含巖藻黃素的無(wú)血清F12培養(yǎng)基，終質(zhì)量濃度均分別為5.0、10.0 μg/mL和20.0 μg/mL。在RPE細(xì)胞單層進(jìn)行光照處理前，在TransWell小室上層中加入含巖藻黃素或葉黃素的F12培養(yǎng)基，在CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h。然后按照1.3.2節(jié)實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行光照實(shí)驗(yàn)。模型組中不添加葉黃素和巖藻黃素，其余條件保持一致。

1.3.4 RPE細(xì)胞吞噬功能測(cè)定

RPE細(xì)胞吞噬功能評(píng)價(jià)方法參考文獻(xiàn)[2,19]方法。將直徑0.05 μm的熒光微粒水懸液用F12不完全培養(yǎng)基稀釋到1×107個(gè)/mL，并于培養(yǎng)箱37 ℃下孵育10～20 min。然后將含有熒光微粒的培養(yǎng)基加入到TransWell小室上層。RPE細(xì)胞經(jīng)光照處理后，孵育24 h后將含有熒光微粒的培養(yǎng)基吸出。進(jìn)行熒光檢測(cè)前，先加入pH 7.2 0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液洗兩次，再加入100 μL胰酶進(jìn)行消化，然后用磷酸鹽緩沖液補(bǔ)足到1 mL，并將細(xì)胞吹打下來(lái)，最后轉(zhuǎn)入到96 孔黑板中進(jìn)行熒光檢測(cè)（激發(fā)波長(zhǎng)360 nm、發(fā)射波長(zhǎng)420 nm）。以不加熒光微粒的細(xì)胞為空白組，平行實(shí)驗(yàn)5 次。

光照結(jié)束后，繼續(xù)在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。以吞噬指數(shù)表征RPE細(xì)胞吞噬功能。吞噬指數(shù)計(jì)算公式如下。

式中：N0為光照前RPE細(xì)胞數(shù)量；Nt為光照t小時(shí)后RPE細(xì)胞數(shù)量。

1.3.5 RPE細(xì)胞吞噬受體相對(duì)表達(dá)量測(cè)定

采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒，測(cè)定1.3.3節(jié)光照實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞內(nèi)MerTK受體、αV整合素蛋白受體、β5整合素蛋白受體及CD36受體表達(dá)量，具體實(shí)驗(yàn)步驟按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。計(jì)算相對(duì)空白組（不進(jìn)行光照處理）蛋白的表達(dá)量。

1.3.6 不同吞噬受體對(duì)RPE細(xì)胞吞噬功能影響的測(cè)定

為明確不同吞噬受體對(duì)RPE細(xì)胞吞噬功能的影響，采用吞噬受體的特異性抗體進(jìn)行結(jié)合分析。在1.3.3節(jié)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中（葉黃素和巖藻黃素質(zhì)量濃度均為20 μg/mL），同時(shí)分別加入MerTK、αV、β5及CD36受體的抗體進(jìn)行共同孵育，然后分析比較吞噬受體與抗體結(jié)合后對(duì)RPE細(xì)胞吞噬功能的影響。

1.3.7 RPE細(xì)胞吞噬作用的L-型Ca2+通道途徑分析測(cè)定

RPE細(xì)胞L-型Ca2+通道可通過(guò)硝苯地平（nifedipine，NIF）進(jìn)行抑制[20]。在1.3.3節(jié)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中（葉黃素和巖藻黃素質(zhì)量濃度均為20 μg/mL），同時(shí)在巖藻黃素和葉黃素中分別加入NIF進(jìn)行共同孵育，使NIF終濃度為5.0 μmol/L，然后分析比較RPE細(xì)胞吞噬功能的變化。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

數(shù)據(jù)均用Origin 8.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，用單因素方差分析和Duncans多重比較檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 可見(jiàn)光暴露對(duì)RPE細(xì)胞吞噬功能的影響

RPE細(xì)胞經(jīng)4 周的TransWell培養(yǎng)，細(xì)胞單層跨膜電阻達(dá)到35.2 Ω·cm2，表明其已分化完全，具備體內(nèi)RPE的組織結(jié)構(gòu)特性。經(jīng)光強(qiáng)度為3 500 lx的可見(jiàn)光輻照后，RPE細(xì)胞的吞噬功能變化如圖1所示。結(jié)果表明，在24 h光照時(shí)間內(nèi)，隨著光照時(shí)間的延長(zhǎng)，RPE細(xì)胞的吞噬指數(shù)逐漸降低。與空白組相比，當(dāng)可見(jiàn)光暴露時(shí)間為6 h時(shí)，RPE細(xì)胞的吞噬功能并沒(méi)有出現(xiàn)顯著降低（P＞0.05），當(dāng)可見(jiàn)光暴露時(shí)間達(dá)到12 h和24 h時(shí)，RPE細(xì)胞的吞噬指數(shù)分別較空白組降低了（18.51±4.36）%和（31.64±3.25）%，說(shuō)明RPE細(xì)胞的吞噬功能已發(fā)生明顯紊亂。

圖1 可見(jiàn)光暴露時(shí)間對(duì)RPE細(xì)胞吞噬指數(shù)的影響Fig. 1 Effect of visible light exposure time on phagocytic index of RPE cells

2.2 可見(jiàn)光暴露對(duì)RPE細(xì)胞吞噬受體表達(dá)的影響

如圖2所示，隨著可見(jiàn)光暴露時(shí)間的延長(zhǎng)，MerTK受體、αV整合素蛋白受體、β5整合素蛋白受體及CD36受體的表達(dá)均出現(xiàn)不同程度的下降，該趨勢(shì)與RPE細(xì)胞吞噬功能的變化相一致。其中，可見(jiàn)光對(duì)αV與β5整合素蛋白受體表達(dá)的影響最大。光暴露時(shí)間為6 h時(shí)，與空白組相比，αV與β5整合素蛋白受體相對(duì)表達(dá)量均極顯著下降（P＜0.01），分別降低了10.72%和12.25%；經(jīng)過(guò)24 h光暴露后，兩者的表達(dá)量降幅分別達(dá)到31.46%和28.74%。其次是MerTK受體，經(jīng)24 h光照處理后其表達(dá)量降低了23.64%。然而，CD36受體經(jīng)24 h光照后表達(dá)量?jī)H降低了14.51%。

圖2 可見(jiàn)光暴露時(shí)間對(duì)RPE細(xì)胞吞噬受體相對(duì)表達(dá)量的影響Fig. 2 Effect of visible light exposure time on phagocytic receptor expression in RPE cells

2.3 巖藻黃素對(duì)RPE細(xì)胞吞噬功能的改善作用

根據(jù)本課題組前期研究報(bào)道，巖藻黃素和葉黃素在質(zhì)量濃度≤20.0 μg/mL時(shí)對(duì)RPE細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞毒性[15]。如圖3所示，與空白組相比，RPE細(xì)胞經(jīng)3 500 lx可見(jiàn)光輻照24 h后，模型組RPE細(xì)胞的吞噬指數(shù)僅為（62.36±4.15）%。經(jīng)質(zhì)量濃度10.0 μg/mL和20.0 μg/mL巖藻黃素預(yù)處理后，RPE細(xì)胞的吞噬指數(shù)分別提高到（78.34±4.21）%和（89.56±6.36）%。葉黃素的效果較巖藻黃素略差，在質(zhì)量濃度20.0 μg/mL時(shí)，RPE細(xì)胞的吞噬指數(shù)提高到（80.36±4.69）%。

圖3 巖藻黃素及葉黃素對(duì)RPE細(xì)胞吞噬指數(shù)的影響Fig. 3 Effects of fucoxanthin and lutein on phagocytic index of RPE cells

2.4 巖藻黃素對(duì)RPE細(xì)胞吞噬受體表達(dá)的影響

如圖4所示，巖藻黃素及葉黃素對(duì)RPE細(xì)胞4種吞噬受體表達(dá)的影響均呈劑量依賴(lài)性。圖4A的結(jié)果表明，當(dāng)巖藻黃素質(zhì)量濃度為5.0 μg/mL時(shí)，與模型組相比，αV與β5整合素蛋白受體表達(dá)并未出現(xiàn)顯著增加（P＜0.05）；當(dāng)質(zhì)量濃度提高到10.0 μg/mL時(shí)，αV與β5整合素蛋白受體相對(duì)表達(dá)量分別增加了15.80%和15.08%。當(dāng)質(zhì)量濃度進(jìn)一步提高到20.0 μg/mL，αV與β5整合素蛋白受體相對(duì)表達(dá)量較模型組分別增加了24.6%和25.0%。對(duì)于MerTK受體和CD36受體，經(jīng)質(zhì)量濃度20.0 μg/mL巖藻黃素處理后，其表達(dá)量均與空白組沒(méi)有顯著差異（P＞0.05）。與吞噬功能結(jié)果類(lèi)似，葉黃素的效果較巖藻黃素略差。圖4B顯示，當(dāng)葉黃素質(zhì)量濃度為20.0 μg/mL時(shí)，MerTK受體、αV整合素蛋白受體、β5整合素蛋白受體及CD36受體的表達(dá)量分別為空白組的（89.34±3.48）%、（86.16±3.89）%、（90.26±2.37）%和（92.38±2.68）%。

圖4 巖藻黃素及葉黃素對(duì)RPE細(xì)胞吞噬受體表達(dá)的影響Fig. 4 Effect of fucoxanthin and lutein on phagocytic receptor expression in RPE cells

2.5 巖藻黃素通過(guò)調(diào)節(jié)吞噬受體表達(dá)改善RPE細(xì)胞吞噬功能的驗(yàn)證

為進(jìn)一步驗(yàn)證巖藻黃素通過(guò)影響吞噬受體表達(dá)改善RPE細(xì)胞吞噬功能，本研究比較了不同吞噬受體特異性抗體的抑制作用，結(jié)果如圖5所示。MerTK抗體對(duì)RPE細(xì)胞吞噬功能的影響最明顯。巖藻黃素在質(zhì)量濃度20 μg/mL下，RPE細(xì)胞的吞噬指數(shù)恢復(fù)到了89.56%。當(dāng)加入MerTK抗體后，RPE細(xì)胞的吞噬指數(shù)僅恢復(fù)到70.36%。當(dāng)分別加入αV整合素蛋白抗體、β5整合素蛋白抗體和CD36抗體，RPE細(xì)胞的吞噬指數(shù)分別恢復(fù)到76.25%、80.34%和87.18%。在質(zhì)量濃度20 μg/mL葉黃素作用下，加入各抗體后RPE細(xì)胞的吞噬指數(shù)低于巖藻黃素。結(jié)果表明巖藻黃素主要是通過(guò)調(diào)節(jié)MerTK、αV、β5受體表達(dá)改善RPE吞噬功能。

圖5 不同吞噬受體抗體對(duì)RPE細(xì)胞吞噬功能影響的比較Fig. 5 Effects of different phagocytic receptor antibodies on phagocytic function of RPE cells

2.6 巖藻黃素通過(guò)L-型Ca2+通道途徑改善RPE細(xì)胞吞噬功能

研究表明，L-型Ca2+通道在RPE細(xì)胞吞噬過(guò)程中同樣扮演了重要角色[20]。本研究通過(guò)L-型Ca2+通道抑制劑NIF處理RPE細(xì)胞后，觀察巖藻黃素改善其吞噬功能效果的變化，結(jié)果如圖6所示。在沒(méi)有NIF的情況下，質(zhì)量濃度20.0 μg/mL的巖藻黃素和葉黃素可將RPE細(xì)胞的吞噬指數(shù)從模型組的62.36%分別提高到89.56%和80.36%；然而當(dāng)加入NIF后，巖藻黃素+NIF處理組和葉黃素+NIF處理組的吞噬指數(shù)分別僅恢復(fù)到72.52%和67.65%；表明L-型Ca2+通道是巖藻黃素及葉黃素改善RPE細(xì)胞吞噬功能的重要途徑。

圖6 巖藻黃素及葉黃素通過(guò)L-型Ca2＋通道途徑改善RPE細(xì)胞的吞噬功能Fig. 6 Fucoxanthin and lutein improved the phagocytic function of RPE cells through the L-type Ca2+-channel

3 討 論

視網(wǎng)膜是外界可見(jiàn)光聚焦與視覺(jué)信號(hào)轉(zhuǎn)換的場(chǎng)所，是視覺(jué)形成的重要組織。由于新陳代謝及視覺(jué)信號(hào)傳導(dǎo)的生理需要，視網(wǎng)膜不僅處于高氧壓環(huán)境，其感光細(xì)胞外節(jié)多不飽和脂肪酸含量高達(dá)50%以上[21]。如此生理結(jié)構(gòu)特點(diǎn)導(dǎo)致視網(wǎng)膜極易受到光脂氧化的雙重脅迫[22-23]。其中，RPE細(xì)胞是視網(wǎng)膜損傷的主要靶細(xì)胞，承擔(dān)著吞噬感光細(xì)胞脫落膜盤(pán)（photoreceptor outer segments，POS）、維持視網(wǎng)膜正常生理功能的關(guān)鍵作用。當(dāng)RPE細(xì)胞的吞噬作用發(fā)生紊亂，POS會(huì)在視網(wǎng)膜下腔堆積，造成感光細(xì)胞凋亡，從而導(dǎo)致視覺(jué)障礙[24]。因此，調(diào)節(jié)RPE細(xì)胞吞噬作用是維持視網(wǎng)膜正常生理功能的重要措施。

自然界中的多種生理活性物質(zhì)已被證實(shí)具有視力保護(hù)作用，如葉黃素、玉米黃質(zhì)、β-胡蘿卜素、花色苷、VC、VE以及多不飽和脂肪酸等。但在電腦等視頻終端設(shè)備高度普及的今天，光應(yīng)激導(dǎo)致的視網(wǎng)膜生理功能紊亂對(duì)視力保護(hù)因子的生理調(diào)節(jié)作用提出了新的要求。研究表明，槲皮素能有效抑制過(guò)量光輻照引起的大鼠視網(wǎng)膜損傷[25]；青蒿素也被證實(shí)對(duì)可見(jiàn)光誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡及氧化損傷有良好的抑制功能[26]。本課題組也發(fā)現(xiàn)，膳食中的葉黃素、玉米黃質(zhì)、花色苷等天然抗氧成分對(duì)光應(yīng)激下的視網(wǎng)膜生理功能紊亂具有明顯的調(diào)節(jié)作用[1,27]，但β-胡蘿卜素、VC、VE等抗氧化成分的效果較差，多不飽和脂肪酸甚至具有加劇視網(wǎng)膜光損傷的風(fēng)險(xiǎn)[18,28]。

本課題組前期研究表明，巖藻黃素能通過(guò)抑制光-脂聯(lián)合誘導(dǎo)RPE細(xì)胞氧化損傷改善其吞噬功能[15]。與葉黃素相比，巖藻黃素在抑制RPE細(xì)胞ROS產(chǎn)生方面無(wú)明顯優(yōu)勢(shì)可言[2]。然而，本研究發(fā)現(xiàn)，巖藻黃素在質(zhì)量濃度20.0 μg/mL下將RPE細(xì)胞的吞噬指數(shù)從模型組的62.36%提高到了89.56%，明顯高于葉黃素的80.36%。巖藻黃素在調(diào)節(jié)RPE細(xì)胞吞噬作用與抑制RPE細(xì)胞產(chǎn)生ROS方面形成了巨大反差，說(shuō)明巖藻黃素可能對(duì)RPE細(xì)胞的吞噬作用還存在其他調(diào)控途徑。

事實(shí)上，RPE細(xì)胞吞噬作用存在復(fù)雜的調(diào)控機(jī)制。研究表明，在RPE細(xì)胞膜上存在與吞噬作用密切相關(guān)的多個(gè)受體，包括甘露糖受體、毒蕈堿能受體、CD36、αV、β5整合素蛋白受體和MerTK酪氨酸蛋白激酶受體[29]。其中，αV、β5整合素蛋白受體負(fù)責(zé)吞噬作用的識(shí)別與結(jié)合；而CD36和MerTK受體負(fù)責(zé)內(nèi)吞作用[29]。此外，最新研究發(fā)現(xiàn)，RPE細(xì)胞的吞噬作用還受L-型Ca2+通道及大電導(dǎo)鉀通道激活的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑調(diào)控[30]。然而，現(xiàn)有研究很少涉及膳食營(yíng)養(yǎng)因子對(duì)上述吞噬受體、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的影響。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在光-脂聯(lián)合誘導(dǎo)RPE細(xì)胞氧化損傷的情況下，巖藻黃素對(duì)αV、β5整合素蛋白受體、MerTK受體表達(dá)以及L-型Ca2+通道信號(hào)途徑具有明顯的促進(jìn)與調(diào)節(jié)作用，從而有效改善RPE細(xì)胞的吞噬功能。這有可能是膳食營(yíng)養(yǎng)成分保護(hù)視力的重要作用途徑。然而，L-型Ca2+通道信號(hào)與吞噬受體表達(dá)之間是否存在關(guān)聯(lián)性還值得進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

過(guò)量的可見(jiàn)光暴露會(huì)導(dǎo)致處于多不飽和脂肪酸環(huán)境下的RPE細(xì)胞發(fā)生明顯的吞噬功能紊亂，參與細(xì)胞吞噬作用的MerTK受體、αV整合素蛋白受體、β5整合素蛋白受體及CD36受體的表達(dá)也受到了不同程度的抑制。巖藻黃素預(yù)處理主要通過(guò)上調(diào)MerTK、αV整合素蛋白和β5整合素蛋白受體表達(dá)顯著改善了RPE細(xì)胞的吞噬功能。此外，L-型Ca2+通道也被證實(shí)是巖藻黃素改善RPE細(xì)胞吞噬功能的重要途徑。由此可見(jiàn)，非抗氧化途徑在巖藻黃素改善RPE細(xì)胞生理功能方面扮演了重要角色。然而，該途徑與傳統(tǒng)抗氧化機(jī)制之間的關(guān)系還有待進(jìn)一步研究。