陳武瑛, 陳 昂, 李凱龍, 羅香文, 熊 浩,劉志邦, 宋增收, 劉 勇

(湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護(hù)研究所，長沙 410125)

苯醚甲環(huán)唑是一種三唑類殺菌劑，具有高效、廣譜和內(nèi)吸傳性強(qiáng)的特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于水果和蔬菜等作物上。研究表明，苯醚甲環(huán)唑在田間施用會(huì)對蚯蚓和土壤微生物等產(chǎn)生影響，例如，可抑制蚯蚓體內(nèi)谷胱甘肽過氧化物酶活性[1]，改變土壤中微生物群落組成[2]，對土壤中的真菌產(chǎn)生毒害作用[3]等，進(jìn)而影響農(nóng)田的可持續(xù)利用。因此，評估苯醚甲環(huán)唑?qū)ν寥郎锏娘L(fēng)險(xiǎn)對于其安全使用具有重要的指導(dǎo)作用。目前，在對土壤生物的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)表征時(shí)，多使用通過保守假設(shè)模型計(jì)算獲得的預(yù)測暴露濃度(PEC)與預(yù)測無效濃度(PNEC)進(jìn)行比較[4]。近年來有研究者采用土壤中農(nóng)藥殘留的實(shí)測值結(jié)合 PNEC 計(jì)算風(fēng)險(xiǎn)商值，用于表征農(nóng)藥對蚯蚓的風(fēng)險(xiǎn)[5-6]。實(shí)測田間土壤中農(nóng)藥殘留濃度對土壤生物風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評價(jià)，更接近于田間真實(shí)情況。

目前，在芹菜上有43 個(gè)殺菌劑登記產(chǎn)品，其中苯醚甲環(huán)唑23 個(gè)，占?xì)⒕鷦┑?3.5%[7-8]。芹菜生長周期短，可食用部分均為農(nóng)藥噴施部位，且采收間隔期短，殘留風(fēng)險(xiǎn)高[9]，因此芹菜成為了蔬菜中農(nóng)藥殘留監(jiān)測的代表性品種之一[10]。焦曉偉等[11]對山西省芹菜調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，農(nóng)藥殘留的檢出率為93.3%，其中苯醚甲環(huán)唑的檢出率為16.7%；湯晗等[10]對浙江省芹菜調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，苯醚甲環(huán)唑檢出58 次，其中4 次超過最大殘留限量MRL 值(3 mg/kg，中國)，最高殘留值為4.79 mg/kg。因此，芹菜中苯醚甲環(huán)唑的殘留行為和膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)格外值得關(guān)注。

關(guān)于農(nóng)藥在芹菜中的殘留行為和膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評估方面已有不少報(bào)道[12～14]，但關(guān)于苯醚甲環(huán)唑在芹菜中殘留的研究僅有少量報(bào)道。苯醚甲環(huán)唑最終殘留量隨著施藥劑量和施藥次數(shù)的增加而增加，隨著采樣間隔期的延長而減小[15]。李艷杰等[6]報(bào)道苯醚甲環(huán)唑在設(shè)施芹菜葉中的半衰期小于11.4 d，芹菜葉和莖中的最終殘留量分別為3.14～10.5 和0.14～0.73 mg/kg，目前尚未見有關(guān)其環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評估和膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)方面的研究報(bào)道。本研究開展了10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑在露地芹菜中的殘留試驗(yàn)，并在室內(nèi)進(jìn)行了土壤生物的急性毒性試驗(yàn)。根據(jù)土壤中的殘留數(shù)據(jù)，結(jié)合毒性端點(diǎn)值評估了其對土壤生物的暴露風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)芹菜中的殘留數(shù)據(jù)，結(jié)合居民膳食數(shù)據(jù)資料，對苯醚甲環(huán)唑的膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了評估。旨在為苯醚甲環(huán)唑在農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境中的安全使用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試材

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀系統(tǒng)：LC1290液相色譜儀，安捷倫科技有限公司；SCIEX 4500質(zhì)譜儀，AB 公司；CPA225D 電子天平，德國賽多利斯股份公司；Centrifuge 5424 離心機(jī)，Eppendorf；TD5.5 離心機(jī)，長沙平凡儀器儀表有限公司；VS-2500T 多管旋渦混合器，無錫沃信儀器有限公司。

試劑：99.5%苯醚甲環(huán)唑 (difenoconazole) 標(biāo)準(zhǔn)品，Xstandard；水，超純水；甲酸(色譜純)，美國ROE；乙腈(色譜純)，默克化工技術(shù)(上海)有限公司；乙腈和NaCl，均為分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；C18、PSA 和GCB (分析純)，天津博納艾杰爾科技有限公司。

供試農(nóng)藥：10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑 (WG)，PD20152176，先正達(dá)南通作物保護(hù)有限公司。登記在芹菜上防治芹菜葉斑病，芹菜生長中期進(jìn)行噴霧施藥，推薦劑量為有效成分90～120 g/hm2，施藥次數(shù)為3 次，采收間隔期為5 d。

供試生物：赤子愛勝蚓Eisenia foetida從岳陽岳峰蚯蚓養(yǎng)殖基地引進(jìn)成蚓，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)馴養(yǎng)和飼養(yǎng)。選擇體重在300～600 mg 之間、有明顯生殖帶、體色較深、蠕動(dòng)能力強(qiáng)的成蚓供試。

1.2 室內(nèi)毒性測定試驗(yàn)

參照《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》[16]，在室內(nèi)條件下，采用人工土壤法開展蚯蚓的急性毒性測定試驗(yàn)，采用氮轉(zhuǎn)化法開展土壤微生物毒性測定試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果采用SPSS 統(tǒng)計(jì)軟件處理，獲得10% 苯醚甲環(huán)唑WG 土壤生物的毒性端點(diǎn)值。

1.3 田間試驗(yàn)

在湖南長沙和山東齊河兩地采用當(dāng)?shù)爻Ｒ?guī)品種 (長沙：柳興雪白芹菜；齊河： 四喜芹菜) 進(jìn)行露地栽培。于芹菜生長中期施藥，小區(qū)面積20 m2，每個(gè)處理3 個(gè)重復(fù)；選一塊20 m2的地塊，單獨(dú)用于土壤施藥。按最高推薦劑量有效成分120 g/hm2噴霧施藥3 次，施藥間隔期5 d。每次施藥均于藥后2 h 采樣，于最后一次施藥后2 h和1、2、3、5、7、14、21、28 d 以5 點(diǎn)法采集芹菜和土壤樣品，同時(shí)設(shè)不噴施農(nóng)藥的對照小區(qū)。

1.4 分析方法

1.4.1 樣品前處理 稱取10.0 g 均質(zhì)樣品于50 mL具塞離心管中，加入50 mL 乙腈，渦旋提取5 min，加入5.0 g 氯化鈉，渦旋30 s 后于4 000 r/min 下離心5 min。取1.5 mL 上清液，加入裝有C1850 mg和PSA 50 mg 的EP 管(葉和莖處理時(shí)再加入GCB 20 mg) 中，渦旋1 min，于12 000 r/min 下離心5 min。取上清液，過0.22 μm 有機(jī)濾膜，待測定。

1.4.2 色譜和質(zhì)譜檢測條件 20RBAY RRHD Eclipse plus C18色譜柱(3.0 mm × 100 mm，1.8 μm)；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量1 μL；流動(dòng)相A 相為乙腈，B 相為0.1%甲酸水溶液；流速0.40 mL/min；柱溫40 ℃。

離子源類型：ESI+；離子源溫度500 ℃；氣簾氣壓力241 kPa ；噴霧氣壓力310 kPa ；輔助加熱氣壓力310 kPa ；離子化電壓5 500 V；多重反應(yīng)監(jiān)測模式 (MRM) 檢測；定量離子406/250.9，碰撞電壓31 V，射入電壓12 V；定性離子406/188.0，碰撞電壓61V，射入電壓14 V；保留時(shí)間2.25 min。

1.4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線和添加回收試驗(yàn) 稱取苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品10.0 mg，用甲醇溶解并定容至10 mL，配制成1 000 mg/L 的母液。用乙腈逐級稀釋成1、0.5、0.1、0.05、0.01 和0.001 mg/L 的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液?？瞻讟悠贩謩e經(jīng)1.4.1 節(jié)中的提取凈化過程得到空白基質(zhì)溶液。用空白基質(zhì)溶液逐級稀釋母液，配制成系列質(zhì)量濃度的空白基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液。按1.4.2 節(jié)的條件測定，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度 (x)為橫坐標(biāo)，以其對應(yīng)的峰面積 (y) 為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

稱取10.0 g 空白樣品(葉、莖和土壤)于50 mL離心管中，加入標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，添加水平分別為0.01、0.1、1 和20 mg/kg，按照1.4.1 和1.4.2 節(jié)中條件進(jìn)行前處理及檢測。每處理重復(fù)5 次，計(jì)算添加平均回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。

1.5 膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評估

短期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)采用 JMPR 推薦的方法，按公式 (1) 計(jì)算國家估算短期攝入量(NESTI)[17-20]。

式中：NESTI 為短期攝入量的估計(jì)值，mg/kg bw·d；HR 為最大殘留值，mg/kg；LP 為大份餐，即食品的最大消費(fèi)量，kg/d；? 為個(gè)體之間變異因子；bw 為體重，kg。

根據(jù) WHO GEMS/FOOD (全球環(huán)境監(jiān)測系統(tǒng)/食品污染監(jiān)測與評估規(guī)劃) 公布的數(shù)據(jù)[19]：芹菜的平均單份質(zhì)量為0.86 kg，芹菜在普通人群和1～6 歲兒童大份餐LP 分別為0.305 9 和0.180 3 kg，普通人群體重按53.23 kg 計(jì)，1～6 歲兒童體重按16.14 kg 計(jì)，其中芹菜變異因子取3。

短期風(fēng)險(xiǎn)商按公式(2)計(jì)算[17-20]。

式中： RQa為短期風(fēng)險(xiǎn)商；ARfD 為急性參考劑量，mg/kg bw。

當(dāng) RQa≤ 1 時(shí)，認(rèn)為其短期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)處于可接受水平；當(dāng)RQa＞ 1 時(shí)，則認(rèn)為其短期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)不可接受。

依據(jù)WHO GEMS/FOOD 中公布的我國居民膳食結(jié)構(gòu)和消費(fèi)數(shù)據(jù)，結(jié)合本研究獲得的殘留中值，按公式(3) 和(4) 計(jì)算長期膳食攝入暴露風(fēng)險(xiǎn)[17-20]。

式中：NEDI 為每日攝入量估計(jì)值，mg/kg bw·d；STMRi第i類初級食用農(nóng)產(chǎn)品的規(guī)范試驗(yàn)殘留中值，mg/kg；Fi為第i類食品的攝入量，kg/d；bw 為體重，kg；RQc為長期風(fēng)險(xiǎn)商；ADI 為每日允許攝入量，mg/kg bw。

當(dāng)RQc≤ 1 時(shí)，表示風(fēng)險(xiǎn)可以接受，數(shù)值越小，風(fēng)險(xiǎn)越??；當(dāng)RQc＞ 1 時(shí)，表示有不可接受的長期風(fēng)險(xiǎn)，數(shù)值越大，風(fēng)險(xiǎn)越大。

鑒于目前僅獲得了苯醚甲環(huán)唑在芹菜一種食用農(nóng)產(chǎn)品上的殘留試驗(yàn)數(shù)據(jù)，并無在其他登記作物上的 STMR 值，因此不能計(jì)算其包含所有登記作物在內(nèi)的膳食暴露NEDI 值，故只計(jì)算芹菜中苯醚甲環(huán)唑殘留膳食暴露占NEDI 的份額以及對RQc的貢獻(xiàn)率(RQc%)。

1.6 土壤生物環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評估

依據(jù)NY/T 2882.8—2017《農(nóng)藥登記環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評估指南 第8 部分:土壤生物》[21]對土壤生物進(jìn)行環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評估。根據(jù)毒性端點(diǎn)值、預(yù)測土壤環(huán)境濃度，按公式(5)和(6)計(jì)算環(huán)境暴露風(fēng)險(xiǎn)：

式中：PNEC 為預(yù)測無效應(yīng)值，mg/kg；Enp 為試驗(yàn)毒性端點(diǎn)值，如LC50值和EC25值等，mg/kg；UF 為不確定性因子；PEC 為農(nóng)藥的預(yù)測土壤最大值，本次評估采用實(shí)測暴露量(MEC)，mg/kg；RQe為環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)商。

當(dāng)RQe≤ 1 時(shí)，表示風(fēng)險(xiǎn)可以接受，數(shù)值越小，風(fēng)險(xiǎn)越小；RQe＞ 1 表示風(fēng)險(xiǎn)不可接受；當(dāng)初級急性風(fēng)險(xiǎn)評估中RQe＞ 1，或受試農(nóng)藥在土壤中累積風(fēng)險(xiǎn)消解半衰期DT50＞ 180 d，需要進(jìn)行土壤生物的慢性效應(yīng)評估。

2 結(jié)果與分析

2.1 分析方法有效性評價(jià)

結(jié)果 (表1) 表明：苯醚甲環(huán)唑的溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線在0.001～1 mg/L 范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系 (R2≥0.99)。本研究采用基質(zhì)效應(yīng)(Me)＝(基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率/溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率-1) × 100% 的方式評價(jià)基質(zhì)效應(yīng)。當(dāng)Me大于0時(shí)，為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；當(dāng)Me小于0 時(shí)，為基質(zhì)抑制效應(yīng)[22-23]。結(jié)果表明：苯醚甲環(huán)唑在3 種基質(zhì)中的基質(zhì)效應(yīng)為-5.4%～-0.9%，均為弱抑制效應(yīng)。盡管基質(zhì)效應(yīng)較弱，為保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，本研究仍采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行校正。

表1 方法的線性方程、決定系數(shù)和基質(zhì)效應(yīng)(線性范圍：0.001～1 mg/L)Table 1 Linear equations, determination coefficients and matrix effects of the established method(linear range: 0.001-1 mg/L)

添加回收試驗(yàn)結(jié)果(表2) 表明：在0.01～20 mg/kg 添加水平下，苯醚甲環(huán)唑在芹菜葉中的平均回收率為93%～108%，RSD 為4.6%～9.8%；在莖中的平均回收率為84%～99%，RSD 為2.2%～9.5%；在土壤中的平均回收率為92%～98%，RSD為5.6%～8.6%。苯醚甲環(huán)唑的方法檢出限(LOD)為0.001 mg/L，根據(jù)SANTE/11312/2021[24]以最低添加水平作為分析方法的定量限(LOQ)，其在3 種基質(zhì)中的LOQ 均為 0.01 mg/kg。分析方法的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性均能滿足農(nóng)藥殘留分析要求[25]。

表2 苯醚甲環(huán)唑在芹菜葉、莖和土壤中的添加平均回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差Table 2 The recoveries and RSD of difenoconazole in celery leaf, stem and soil

2.2 苯醚甲環(huán)唑在芹菜中的沉積、消解與殘留

在露地栽培條件下施藥3 次，每次施藥2 h 后采集樣品檢測，發(fā)現(xiàn)苯醚甲環(huán)唑在芹菜葉、莖和土壤中的原始沉積量分別為14.5～17.9、2.9～4.4和1.5～3.0 mg/kg (圖1)，3 者之間無明顯的疊加效應(yīng)。苯醚甲環(huán)唑在芹菜中2 h 的沉積結(jié)果與胡家萌等[9]報(bào)道的苯醚甲環(huán)唑在生菜上的原始沉積量為8.9～11.87 mg/kg 的結(jié)果接近。芹菜葉的表面積大于莖，農(nóng)藥更易沉積在葉上[26]，這可能是芹菜葉相較于莖成為農(nóng)藥主要沉積部位的原因。

圖1 苯醚甲環(huán)唑在芹菜葉、莖和土中的原始沉積量Fig.1 The original sedimentation of difenoconazole in celery leaf, stem and soil

苯醚甲環(huán)唑隨時(shí)間推移逐漸消解，且呈現(xiàn)先快后慢的趨勢，其消解動(dòng)態(tài)均符合一級反應(yīng)動(dòng)力學(xué)方程，在芹菜葉、莖和土壤中的消解半衰期分別為5.2～8.8 d、8.0～8.2 d 和13.6～15.0 d，均為易降解農(nóng)藥[27-28](表3)。究其原因：隨著采樣時(shí)間間隔的增長，芹菜生長較快，對農(nóng)藥產(chǎn)生了稀釋作用，導(dǎo)致單位質(zhì)量的芹菜中農(nóng)藥的量減少；芹菜生長過程中陽光的照射對苯醚甲環(huán)唑消解也是主要影響因素[15]。李艷杰等[7]報(bào)道，苯醚甲環(huán)唑在設(shè)施芹菜葉片中的消解半衰期為10.1～11.4 d，略慢于本研究露地條件下的消解。這可能是由于在露地條件下，黏附在芹菜葉中的農(nóng)藥受陽光、雨水等氣候因子的影響較大；而在設(shè)施條件下，處在相對封閉的環(huán)境中，受外部自然條件的影響較小，因此消解較慢[29]。

表3 苯醚甲環(huán)唑在芹菜葉、莖和土壤中的殘留量及消解參數(shù)(n=3)Table 3 The residues and dissipation parameters of difenoconazole in celery leaf, stem and soil (n=3)

10%苯醚甲環(huán)唑WG 在露地芹菜中以有效成分120 g/hm2劑量噴施3 次，施藥間隔期5 d。結(jié)果表明：距最后一次施藥5 d 收獲時(shí)苯醚甲環(huán)唑在芹菜葉中的殘留量為2.9～9.7 mg/kg，莖中為0.58～1.5 mg/kg，土壤中為1.1～2.0 mg/kg。按照芹菜葉片和莖質(zhì)量比3 : 63[7]計(jì)算，則在芹菜整株中的殘留量為0.88～1.5 mg/kg。由于芹菜自身的蠟狀表面、葉片氣孔分布以及特殊的維管結(jié)構(gòu)，使得其較容易吸附農(nóng)藥，不利于農(nóng)藥的降解，從而導(dǎo)致了芹菜中農(nóng)藥殘留量較高[9,30]。苯醚甲環(huán)唑在芹菜葉片中的殘留量高于MRL (3 mg/kg，中國)，在莖和整株芹菜中的殘留量則均低于MRL。

2.3 膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評估

苯醚甲環(huán)唑的急性參考劑量 (ARfD) 值為0.3 mg/kg bw[31]。采用采收間隔期5 d 時(shí)苯醚甲環(huán)唑在芹菜中的殘留試驗(yàn)最大殘留量 (HR) 值，計(jì)算得出普通人群的國家估算短期攝入量 (NESTI) 值為0.026 mg/kg bw·d，短期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)商 (RQa)值為0.09； 1～6 歲兒童的NESTI 值為0.030 mg/kg bw·d，RQa值為0.10。通過攝入芹菜中的苯醚甲環(huán)唑?qū)ζ胀ㄈ巳汉?～6 歲兒童均不會(huì)產(chǎn)生短期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)。兩者食物構(gòu)成及體重等因素不同而造成其短期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)存在差異。

苯醚甲環(huán)唑的每日允許攝入量 (ADI) 值為0.01 mg/kg bw[32]。根據(jù)WTO 關(guān)于中國不同年齡段人群對芹菜的消費(fèi)量調(diào)查數(shù)據(jù)[19]，結(jié)合本研究獲得采收間隔期5 d 時(shí)苯醚甲環(huán)唑在芹菜整株中的殘留試驗(yàn)中值(STMR)為1.2 mg/kg，計(jì)算每日攝入量和風(fēng)險(xiǎn)商值。由表4 中數(shù)據(jù)可得出：對于不同人群，芹菜中苯醚甲環(huán)唑?qū)﹂L期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)商的貢獻(xiàn)率RQc%值為9.4%～19.8%。其中3～5 歲兒童的貢獻(xiàn)率高于其他年齡段人群。

表4 中國不同人群對芹菜的平均消費(fèi)量和長期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)商貢獻(xiàn)率Table 4 Mean consumption and RQc% of difenoconazole for different populations in China

膳食風(fēng)險(xiǎn)評估的不確定性分析：1) 清洗、脫皮和烹調(diào)等加工過程可以顯著降低食品中農(nóng)藥殘留量[33]，本次評估未考慮加工過程中的殘留損失，這也會(huì)相應(yīng)增加風(fēng)險(xiǎn)不確定性，提高風(fēng)險(xiǎn)評估的保守性程度。2) 本研究僅進(jìn)行了兩地的規(guī)范殘留試驗(yàn)，因此所得評估結(jié)果還較為初級，尚需結(jié)合更多試驗(yàn)點(diǎn)的殘留數(shù)據(jù)，以使得風(fēng)險(xiǎn)評估結(jié)果更完善、合理。3) 本次評估基于殘留試驗(yàn)數(shù)據(jù)，但是農(nóng)藥施用在實(shí)際操作中可能與標(biāo)簽規(guī)定不一致[34]。因此還需要食品安全監(jiān)測數(shù)據(jù)進(jìn)一步評估其膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)。

2.4 土壤生物環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評估

蚯蚓急性毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示，空白對照組未觀察到中毒癥狀，處理組出現(xiàn)蚯蚓蠕動(dòng)能力減弱、尸體腐爛等癥狀。10%苯醚甲環(huán)唑WG 對蚯蚓的急性毒性7 d-LC50值為有效成分 (下同) 42.9 mg/kg，其95% 置信限為33.4～57.8 mg/kg，回歸方程為y= -2.981 08 + 1.826 37x，回歸系數(shù)R2=0.984；急性毒性14 d-LC50值為33.7 mg/kg，其95%置信限為26.7～42.6 mg/kg，回歸方程為y= -3.168 24 + 2.074 66x，R2= 0.995。通過計(jì)算硝酸鹽形成速率得出10%苯醚甲環(huán)唑WG 對土壤微生物的毒性。結(jié)果表明：28 d-EC25值為8.16 mg/kg，其95%置信限為3.67～45.5 mg/kg，回歸方程為y= -1.174 62 + 0.548 66x，R2= 0.908。EFSA[35]報(bào)道，苯醚甲環(huán)唑?qū)︱球镜募毙远拘?4 d-LC50＞610 mg/kg，采用氮轉(zhuǎn)化法測得對微生物的28 d-EC25值為1.67～16.7 mg/kg，本研究中蚯蚓的急性毒性高于該報(bào)道，而微生物的毒性與該報(bào)道接近。張國福等[36]的研究表明，不同劑型苯醚甲環(huán)唑及原藥對斑馬魚的急性毒性存在差異。即使是同一有效成分、相同劑型、相同含量的不同制劑，由于不同生產(chǎn)廠家加工工藝的不同，也會(huì)出現(xiàn)毒性級別的差異[37]。采用毒性端點(diǎn)、不確定因子和土壤中的殘留量計(jì)算10%苯醚甲環(huán)唑WG 對土壤生物的暴露風(fēng)險(xiǎn)。初級風(fēng)險(xiǎn)評估結(jié)果表明：苯醚甲環(huán)唑?qū)ν寥郎锏某跫壖毙燥L(fēng)險(xiǎn)商值 (RQe)在0.368～0.890 之間，均小于1 (表5)，即苯醚甲環(huán)唑?qū)︱球竞屯寥牢⑸锏某跫壖毙燥L(fēng)險(xiǎn)可接受。EFSA[35]評價(jià)苯醚甲環(huán)唑?qū)︱球竞臀⑸锏募毙燥L(fēng)險(xiǎn)均為低風(fēng)險(xiǎn)，本研究的結(jié)果與之相似。10%苯醚甲環(huán)唑WG 對土壤生物的環(huán)境暴露風(fēng)險(xiǎn)小于1，且苯醚甲環(huán)唑在土壤中的消解半衰期為13.6～15.0 d，小于180 d，根據(jù)該指南可認(rèn)為苯醚甲環(huán)唑在土壤中無慢性積累風(fēng)險(xiǎn)。

表5 10%苯醚甲環(huán)唑WG 的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評估Table 5 The environmental risk assessment of 10% difenoconazole WG

3 結(jié)論

本研究采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 (LC-MS/MS)法，在多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)下，對芹菜葉、莖和土壤中苯醚甲環(huán)唑殘留進(jìn)行了定性和定量分析。結(jié)果顯示，所用方法穩(wěn)定性好、靈敏度高、高效快捷，適合于芹菜葉、莖和土壤中苯醚甲環(huán)唑的定量分析。

采用10%苯醚甲環(huán)唑WG 在露地芹菜栽培模式下以有效成分120 g/hm2劑量噴霧施藥3 次，施藥間隔期5 d。結(jié)果表明：苯醚甲環(huán)唑在芹菜葉、莖和土中的原始沉積量分別為14.5～17.9 mg/kg、2.9～4.4 mg/kg 和1.5～3.0 mg/kg。苯醚甲環(huán)唑在芹菜葉、莖和土壤中的消解半衰期分別為5.2～8.8 d、8.0～8.2 d 和13.6～15.0 d，均為易降解。距最后一次施藥5 d 收獲時(shí)醚甲環(huán)唑在芹菜葉片中的殘留量高于MRL (3 mg/kg，中國)，在莖和整株芹菜中的殘留量則均低于MRL。建議消費(fèi)者只食用芹菜莖，不食用或減少芹菜葉片的食用量。

根據(jù)所得殘留試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行了長期和短期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評估。計(jì)算得出食用芹菜中苯醚甲環(huán)唑?qū)ζ胀ㄈ巳汉?～6 歲兒童的短期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)商 (RQa) 值分別為0.09 和0.10；對于不同人群，芹菜中苯醚甲環(huán)唑?qū)﹂L期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)商的貢獻(xiàn)率 (RQc%) 值為9.4%～19.8%。采用毒性端點(diǎn)、不確定因子和土壤中的殘留量計(jì)算10%苯醚甲環(huán)唑WG 對土壤生物的暴露風(fēng)險(xiǎn)。初級風(fēng)險(xiǎn)評估結(jié)果表明：苯醚甲環(huán)唑?qū)ν寥郎锏某跫壖毙燥L(fēng)險(xiǎn)商值 (RQe) 為0.368～0.890，均小于1。即苯醚甲環(huán)唑?qū)︱球竞屯寥牢⑸锍跫壖毙燥L(fēng)險(xiǎn)可接受。10%苯醚甲環(huán)唑按推薦的施藥時(shí)期、劑量和方法在露地芹菜上施藥，嚴(yán)格依照安全間隔期進(jìn)行采收，膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)和對土壤生物的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)均為可接受。