宋亞茹，田雪欽，趙雨欣，宋苗苗，姜 珊，婁運(yùn)偉，王 輝

(1.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院附屬人民醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科二病區(qū)，河南 新鄉(xiāng) 453000；2.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453003；3.河南省免疫與靶向藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南 新鄉(xiāng) 453003)

T淋巴細(xì)胞是一種重要的適應(yīng)性免疫細(xì)胞，在病原菌清除、病毒感染和抗腫瘤免疫過程中發(fā)揮重要作用[1-2]。T細(xì)胞的前體細(xì)胞來源于骨髓，遷入胸腺后啟動(dòng)分化、經(jīng)歷譜系定型和選擇并最終形成成熟的T細(xì)胞，中樞免疫器官胸腺組織中T細(xì)胞的發(fā)育狀態(tài)對(duì)于其在外周免疫器官的分布和功能的執(zhí)行至關(guān)重要。在胸腺的皮質(zhì)區(qū)，非成熟的CD4-CD8-雙陰性(double negative，DN)胸腺細(xì)胞發(fā)育成CD4+CD8+雙陽性(double positive，DP)胸腺細(xì)胞，繼而產(chǎn)生單陽性的CD4+T細(xì)胞或CD8+T細(xì)胞[3-4]。雖然調(diào)節(jié)T細(xì)胞受體(T cell receptor，TCR)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的一些分子被不斷地鑒定出來，但對(duì)TCR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)復(fù)合體如何調(diào)節(jié)T細(xì)胞發(fā)育的過程尚未完全闡明。腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8樣分子2 (tumor necrosis factor-α induced protein-8-like 2，TNFAIP8L2或TIPE2)是高表達(dá)于免疫細(xì)胞的腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8家族成員之一，在免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)過程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用[5]。TIPE2負(fù)性調(diào)節(jié)TCR介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和T細(xì)胞，包括CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的活化及其誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答過程[6]。此外，TIPE2作為第二信使磷酸肌醇的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白可調(diào)節(jié)磷酸肌醇依賴的信號(hào)和細(xì)胞骨架重構(gòu)，在免疫細(xì)胞極化和定向趨化過程中扮演重要角色[7]。研究發(fā)現(xiàn)，在腫瘤免疫微環(huán)境中，TIPE2也可調(diào)控髓系來源的抑制細(xì)胞功能，這與增加轉(zhuǎn)錄因子CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白β(CCAAT/enhancer binding protein beta，C/EBPβ)水平以及阻斷C/EBPβ的磷酸化過程有關(guān)[8-9]。此外，研究發(fā)現(xiàn)，TIPE2通過調(diào)節(jié)腸道菌群的生態(tài)失調(diào)影響結(jié)直腸癌的進(jìn)程[10]。目前，關(guān)于TIPE2在T細(xì)胞發(fā)育過程中的表達(dá)變化尚未見報(bào)道，TIPE2在T細(xì)胞發(fā)育過程中的作用尚不清楚。基于此，本研究選擇已經(jīng)構(gòu)建成功的攜帶綠色熒光蛋白(green fluorescent protein，GFP)基因敲入(Tipe2gfp/+)小鼠以及TIPE2基因敲除(Tipe2-/-)小鼠為研究對(duì)象，觀察在T細(xì)胞發(fā)育過程中TIPE2表達(dá)水平的變化及其作用，并初步探討TIPE2在卵清蛋白(ovalbumin，OVA)誘導(dǎo)的哮喘T細(xì)胞中的表達(dá)及其在哮喘發(fā)病過程中的潛在作用，以期為研究TIPE2在哮喘發(fā)病機(jī)制中的作用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物5只雌性C57BL/6J野生型小鼠(wild type，WT)購自上海南方模式生物科技股份有限公司，6只C57BL/6J背景雄性Tipe2-/-小鼠由淄博市中心醫(yī)院轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中心饋贈(zèng)。9只C57BL/6J背景雄性Tipe2gfp/+小鼠由上海南方模式生物科技股份有限公司構(gòu)建，此熒光報(bào)告小鼠的構(gòu)建策略是在Tipe2啟動(dòng)子下內(nèi)源性的Tipe2基因被編碼GFP的序列所取代[10]；所有小鼠8～12周齡，體質(zhì)量23～26 g。參考文獻(xiàn)[10]方法，將Tipe2gfp/+小鼠與WT小鼠雜交繁殖出Tipe2gfp/+小鼠；Tipe2-/-小鼠與WT小鼠雜交繁殖出Tipe2+/-小鼠，然后取12只Tipe2+/-自交繁殖出Tipe2-/-小鼠；WT自交繁殖出WT小鼠；取Tipe2gfp/+小鼠、Tipe2-/-小鼠和WT小鼠用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，WT小鼠和Tipe2-/-小鼠的性別和年齡均匹配。小鼠在河南省免疫與靶向藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室無特殊病原菌動(dòng)物房里飼養(yǎng)和繁殖，動(dòng)物操作遵循國(guó)際及國(guó)家頒布的有關(guān)生物醫(yī)學(xué)研究的倫理要求，獲新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 主要試劑與儀器磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer saline，PBS)和紅細(xì)胞裂解液購自武漢賽維爾生物科技有限公司，乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA)和二硫蘇糖醇(dithiothreitol，DTT)購自北京索萊寶科技有限公司，OVA、膠原酶八和分散酶購自美國(guó)Sigma公司，RPMI 1640培養(yǎng)基購自美國(guó)Corning公司，胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)購自以色列Biological Industries公司，流式細(xì)胞染色使用的封閉抗體CD16/CD32購自美國(guó)Biolegend公司，區(qū)分死細(xì)胞的染色試劑(Fixable Aqua Dead Cell Stain)購自美國(guó)Invitrogen公司，CD45(熒光素是Pacific Blue)、CD4(熒光素是PE-Cy7)和CD8(熒光素是APC-Cy7)流式抗體購自Biolegend公司，氫氧化鋁佐劑購自美國(guó)Thermo公司；細(xì)胞過濾器購自美國(guó)BD Biosciences公司，自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀購自上海睿鈺生物科技有限公司，流式細(xì)胞儀購自美國(guó)BD Biosciences公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 腸道固有層淋巴細(xì)胞(lamina propria lymphocytes，LPLs)分離分別取4只WT、Tipe2gfp/+小鼠，用二氧化碳(carbon dioxide，CO2)窒息使其安樂死后，剖開腹腔取出結(jié)腸組織置于冰上；先用預(yù)冷的PBS涮洗小鼠結(jié)腸組織去除腸道內(nèi)容物，清洗干凈后剪成1～2 cm長(zhǎng)的小塊，置于含 30 mmol·L-1EDTA和1 mmol·L-1DTT的Hank′s平衡鹽溶液(Hank′s balanced salt solution，HBSS)緩沖液中，于37 ℃恒溫?fù)u床180 r·min-1震蕩 15 min，室溫靜置1 min后，吸取上清，重復(fù)2次，以去除腸道上皮細(xì)胞和腸道上皮細(xì)胞間淋巴細(xì)胞；將剩余組織塊剪碎，置于含膠原酶八(0.5 g·L-1)和分散酶(100 000 U·L-1)的RPMI 1640培養(yǎng)基中，37 ℃恒溫消化90 min至組織塊基本消化完全，室溫靜置 1 min 后用70 μmol·L-1的濾器過濾除去殘?jiān)?，將收集的液體置于40%～80% Percoll分離液中，室溫 2 500 r·min-1離心20 min取中間白膜層，然后再室溫1 000 r·min-1離心5 min，收集的細(xì)胞沉淀即為L(zhǎng)PLs。

1.3.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)LPLs中TIPE2的表達(dá)

將LPLs細(xì)胞密度調(diào)整到1×1010L-1，每個(gè)樣品取100 μL即1×106個(gè)細(xì)胞置于流式管中，4 ℃下1 000 r·min-1離心5 min收集細(xì)胞，在離心過程中根據(jù)樣品總數(shù)先配置封閉抗體CD16/CD32(稀釋比例為1200)，每個(gè)樣品的反應(yīng)體積為30 μL，置于冰上15 min以充分封閉細(xì)胞表面的Fc受體。在封閉過程中根據(jù)樣品總數(shù)配置含有熒光素標(biāo)記的單克隆抗體的混合液，封閉結(jié)束后直接將預(yù)先準(zhǔn)備好的混合液加入反應(yīng)管中，每個(gè)樣品的反應(yīng)體積為50 μL，4 ℃避光孵育30 min。用前向角散射(forward scatter-A，F(xiàn)SC-A)和FSC-H去除粘連的細(xì)胞群體，用Fixable Aqua Dead Cell Stain試劑區(qū)分死細(xì)胞并將死細(xì)胞從后續(xù)的分析中排除出去；參考文獻(xiàn)[11]，細(xì)胞充分洗滌后，用抗體CD45(稀釋比例1200)4 ℃染色30 min，充分洗滌后，用FACSCanto Ⅱ流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD45+T細(xì)胞和CD45-基質(zhì)細(xì)胞中的TIPE2平均熒光強(qiáng)度(mean fluorescence intensity，MFI)，采用Flowjo軟件分析數(shù)據(jù)，以MFI代表TIPE2蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.3.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Tipe2gfp/+小鼠胸腺組織DN、DP、CD4+和CD8+T細(xì)胞中TIPE2表達(dá)水平取4只Tipe2gfp/+小鼠，用CO2窒息使其安樂死后，開腹、開胸，分離胸腺組織，置于預(yù)冷的RPMI 1640培養(yǎng)基中勻漿研磨，經(jīng)70 μm的細(xì)胞過濾器過濾獲取單細(xì)胞懸液，用預(yù)冷的PBS漂洗細(xì)胞2次，最后一次收集細(xì)胞沉淀后加入5 mL預(yù)冷的含體積分?jǐn)?shù)2% FBS的PBS溶液，細(xì)胞充分洗滌后，用抗體CD4(稀釋比例1400)和CD8(稀釋比例1400)混合液4 ℃染色30 min(標(biāo)記CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞)，將Tipe2gfp/+小鼠胸腺中的T細(xì)胞以CD4分子和CD8分子分成4個(gè)群體，即DN T細(xì)胞、DP T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞，用FACSCanto II流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DN T細(xì)胞、DP T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞中TIPE2的MFI，采用Flowjo軟件分析數(shù)據(jù)，以MFI代表TIPE2蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.3.4 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)WT和Tipe2-/-小鼠不同組織中CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞分別取5只性別和年齡匹配的8～12周WT、Tipe2-/-小鼠，從內(nèi)眥處抽取外周靜脈血100 μL，置于EDTA抗凝管中備用；然后，用CO2窒息使其安樂死后，開腹、開胸，分離胸腺、脾臟和腸系膜淋巴結(jié)，置于預(yù)冷的RPMI 1640培養(yǎng)基中勻漿研磨，經(jīng)70 μm的細(xì)胞過濾器過濾獲取單細(xì)胞懸液；在脾臟細(xì)胞中加入 5 mL 紅細(xì)胞裂解液，冰上裂解3 min后加入10 mL PBS終止裂解，于4 ℃下 1 000 r·min-1離心5 min收集細(xì)胞，再經(jīng)70 μm的細(xì)胞過濾器過濾掉因紅細(xì)胞碎片聚集形成的沉淀物；胸腺和腸系膜淋巴結(jié)單細(xì)胞懸液中不需要加入紅細(xì)胞裂解液。用預(yù)冷的PBS漂洗細(xì)胞2次，最后一次收集細(xì)胞沉淀后加入5 mL預(yù)冷的含體積分?jǐn)?shù)2% FBS的PBS溶液，細(xì)胞充分洗滌后，用抗體CD4(稀釋比例1400)和CD8(稀釋比例1400)混合液4 ℃染色 30 min(標(biāo)記CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞)，充分洗滌后，用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)算每個(gè)器官得到的細(xì)胞密度，根據(jù)所加溶液的體積計(jì)算出細(xì)胞總數(shù)，并計(jì)算CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞所占百分比。

1.3.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)對(duì)照組和哮喘組Tipe2gfp/+小鼠肺泡灌洗液細(xì)胞中TIPE2表達(dá)水平取10只8～12周齡Tipe2gfp/+雄性小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和哮喘組織，每組5只。哮喘組小鼠采用OVA誘導(dǎo)哮喘模型：將OVA(100 μg)與氫氧化鋁佐劑充分混合，分別在第0天和第7天將混合物注射入Tipe2gfp/+小鼠腹腔。從第14天開始，Tipe2gfp/+小鼠每天用OVA(50 μg)滴鼻，滴鼻的總體積是50 μL，滴鼻時(shí)采用異氟烷進(jìn)行瞬時(shí)麻醉直至液體全部滴完，持續(xù)到第17天。對(duì)照組小鼠用生理鹽水代替卵清蛋白誘導(dǎo)。最后一次滴鼻結(jié)束后次日，應(yīng)用CO2窒息法使2組小鼠安樂死，將18-G滯留針插入氣管，滯留針頭伸入約一半的長(zhǎng)度，注射器中吸入600 μL預(yù)冷的PBS后連接上滯留針頭，并將PBS全部注射入肺內(nèi)，吸出PBS置于1.5 mL離心管中，重復(fù)上述操作，將2次收集的液體合并在一起，4 ℃下 2 500 r·min-1離心5 min收集細(xì)胞，用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)算獲得細(xì)胞密度和細(xì)胞總數(shù)。將細(xì)胞密度調(diào)整到1×1010L-1，每個(gè)樣品取100 μL即1×106個(gè)細(xì)胞置于流式管中，4 ℃下1 000 r·min-1離心5 min收集細(xì)胞，在離心過程中根據(jù)樣品總數(shù)先配置封閉抗體CD16/CD32(稀釋比例為1200)，每個(gè)樣品的反應(yīng)體積為30 μL，置于冰上15 min以充分封閉細(xì)胞表面的Fc受體。在封閉過程中根據(jù)樣品總數(shù)配置含有熒光素標(biāo)記的單克隆抗體的混合液，封閉結(jié)束后直接將預(yù)先準(zhǔn)備好的混合液加入反應(yīng)管中，每個(gè)樣品的反應(yīng)體積為50 μL，4 ℃避光孵育30 min。用FSC-A和FSC-H去除粘連的細(xì)胞群體，用Fixable Aqua Dead Cell Stain試劑區(qū)分死細(xì)胞并將死細(xì)胞從后續(xù)的分析中排除出去，用抗體CD4(稀釋比例1400)和CD8(稀釋比例1400)混合液4 ℃染色30 min，充分洗滌后，用FACSCanto II流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞中的TIPE2的MFI，采用Flowjo軟件分析數(shù)據(jù)，以MFI代表TIPE2蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 TIPE2在WT和Tipe2gfp/+小鼠腸道組織LPLs中的表達(dá)結(jié)果見圖1。WT和Tipe2gfp/+小鼠結(jié)腸組織LPLs中，大部分TIPE2+細(xì)胞表達(dá)免疫細(xì)胞的標(biāo)志分子CD45，幾乎所有的CD45-基質(zhì)細(xì)胞不表達(dá)TIPE2。Tipe2gfp/+小鼠結(jié)腸組織中非免疫細(xì)胞基質(zhì)細(xì)胞以及WT小鼠免疫細(xì)胞中檢測(cè)不到TIPE2+細(xì)胞。

圖1 TIPE2在WT和Tipe2gfp/+小鼠LPLs CD45+ 細(xì)胞和CD45- 細(xì)胞中的表達(dá)

2.2Tipe2gfp/+小鼠胸腺組織DN T細(xì)胞、DP T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞中TIPE2相對(duì)表達(dá)量比較Tipe2gfp/+小鼠胸腺組織DN、DP、CD4+和CD8+T細(xì)胞中TIPE2相對(duì)表達(dá)量分別為24.30±0.71、55.53±4.04、153.75±2.32、177.25±18.57。DN T細(xì)胞中TIPE2相對(duì)表達(dá)量顯著低于CD4+和CD8+T細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=53.310、8.230，P<0.01)；DP T細(xì)胞中TIPE2相對(duì)表達(dá)量顯著低于CD4+和CD8+T細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=21.090、6.405，P<0.001)；DN T細(xì)胞中TIPE2相對(duì)表達(dá)量顯著低于DP T細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.619，P<0.01)；CD4+T細(xì)胞與CD8+T細(xì)胞中TIPE2相對(duì)表達(dá)量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.256，P>0.05)。

2.3 WT與Tipe2-/-小鼠不同組織中CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞比較結(jié)果見表1。WT與Tipe2-/-小鼠外周血、脾臟和淋巴結(jié)中CD4+和CD8+T細(xì)胞百分比比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 WT與Tipe2-/-小鼠不同組織中CD4+ T細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞百分比比較

2.4 對(duì)照組與哮喘組小鼠肺泡灌洗液CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞中TIPE2相對(duì)表達(dá)量比較結(jié)果見表2。哮喘組小鼠肺泡灌洗液CD4+T細(xì)胞中TIPE2水平顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；對(duì)照組與哮喘組小鼠肺泡灌洗液CD8+T細(xì)胞中TIPE2相對(duì)表達(dá)量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 對(duì)照組與哮喘組小鼠肺泡灌洗液CD4+ T細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞中TIPE2相對(duì)表達(dá)量比較

3 討論

自從2008年TIPE2被克隆和鑒定以來，世界上很多課題組圍繞其開展了深入而細(xì)致的系統(tǒng)性研究。早期研究發(fā)現(xiàn)，TIPE2選擇性地表達(dá)于炎癥組織、胸腺、脾臟、淋巴結(jié)、小腸黏膜等免疫器官和淋巴組織以及造血細(xì)胞中[6]；此外，通過免疫組織化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，TIPE2也表達(dá)于具有內(nèi)分泌功能的組織細(xì)胞和泌尿生殖細(xì)胞[12-14]。TIPE2屬于一種細(xì)胞質(zhì)蛋白，目前缺乏能夠用于流式檢測(cè)TIPE2的特異性抗體，盡管反復(fù)嘗試用間接標(biāo)記法進(jìn)行流式染色分析，但因非特異性染色的干擾，均以失敗而告終。為了能進(jìn)一步明確體內(nèi)表達(dá)TIPE2的細(xì)胞類群，采用基因敲入策略用表達(dá)GFP的序列取代內(nèi)源性TIPE2的編碼序列，通過基因型鑒定、蛋白印跡驗(yàn)證和流式分析，證實(shí)構(gòu)建成功[10]。本研究結(jié)果顯示，在WT和Tipe2gfp/+小鼠結(jié)腸組織LPLs中，大部分TIPE2+細(xì)胞表達(dá)免疫細(xì)胞的標(biāo)志分子CD45，幾乎所有的CD45-基質(zhì)細(xì)胞不表達(dá)TIPE2；Tipe2gfp/+小鼠結(jié)腸組織的基質(zhì)細(xì)胞(非免疫細(xì)胞)以及WT小鼠的免疫細(xì)胞中檢測(cè)不到TIPE2+細(xì)胞，排除了GFP信號(hào)是來自腸道自發(fā)熒光的可能性，為后續(xù)研究提供了基礎(chǔ)和保障。

功能試驗(yàn)證實(shí)，TIPE2通過負(fù)性調(diào)節(jié)TCR介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在適應(yīng)性免疫應(yīng)答過程中參與維持免疫穩(wěn)態(tài)[6]。研究報(bào)道，胸腺細(xì)胞在發(fā)育和選擇過程中依賴于TCR信號(hào)，其下游轉(zhuǎn)導(dǎo)過程缺陷或者被干擾均能影響胸腺細(xì)胞的發(fā)育和成熟[15-17]。雖然TIPE2在免疫細(xì)胞中的作用已經(jīng)被廣泛研究，但是其在T細(xì)胞發(fā)育中的作用未見報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，DN T細(xì)胞、DP T細(xì)胞中TIPE2相對(duì)表達(dá)量顯著低于CD4+和CD8+T細(xì)胞；DN T細(xì)胞中TIPE2相對(duì)表達(dá)量顯著低于DP T細(xì)胞；而CD4+T細(xì)胞與CD8+T細(xì)胞中TIPE2的相對(duì)表達(dá)量無明顯差異；這說明，在整個(gè)T細(xì)胞發(fā)育和成熟過程中，TIPE2的表達(dá)水平受到嚴(yán)格的動(dòng)態(tài)調(diào)控，TIPE2可能在T細(xì)胞發(fā)育過程中發(fā)揮一定的作用。另外，本研究結(jié)果顯示，WT和Tipe2-/-小鼠外周血、脾臟和淋巴結(jié)中CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示TIPE2可能在T細(xì)胞發(fā)育環(huán)節(jié)以外的生物學(xué)過程中發(fā)揮作用。

TIPE2不影響T細(xì)胞的發(fā)育，但可能會(huì)影響T細(xì)胞的功能。已有研究證實(shí)，TIPE2在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎、實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎、咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病和乙型肝炎病毒的清除中發(fā)揮一定的作用，參與調(diào)節(jié)這些疾病的進(jìn)程和病理的嚴(yán)重程度[7,18-21]，這與TIPE2調(diào)節(jié)輔助T細(xì)胞(T helper cells，Th)1、Th17、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞亞群的功能相關(guān)，但是還不清楚TIPE2是否影響Th2亞群的功能。本研究結(jié)果顯示，哮喘組小鼠肺泡灌洗液CD4+T細(xì)胞中TIPE2相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組，而2組小鼠肺泡灌洗液CD8+T細(xì)胞中TIPE2相對(duì)表達(dá)量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示TIPE2可能調(diào)節(jié)CD4+T細(xì)胞中Th2亞群的功能，而在哮喘發(fā)生發(fā)展過程中Th2細(xì)胞亞群的異?；罨蓪?dǎo)致白細(xì)胞介素-4、5、13等細(xì)胞因子的異常分泌，從而介導(dǎo)哮喘的進(jìn)程。

綜上所述，在T細(xì)胞的發(fā)育過程中TIPE2的表達(dá)水平受到嚴(yán)格的調(diào)節(jié)， TIPE2不影響T細(xì)胞的發(fā)育過程而影響發(fā)育成熟T細(xì)胞的功能，但其發(fā)揮作用的分子機(jī)制尤其是如何影響哮喘疾病進(jìn)程中Th2細(xì)胞的功能尚不清楚，在后續(xù)研究中將從Th2亞群的定向分化、活化和定向遷移等方面入手研究TIPE2的調(diào)節(jié)功能。