王儒帥 ，呼群 ，張影花 ，郭家毓 ，領(lǐng)兄 ，王悅

（1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010050；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010050）

1 EZH2通過表觀遺傳調(diào)控免疫

EZH2基因定位于7q35染色體，是包括20個(gè)編碼746個(gè)氨基酸殘基的外顯子，是PRC2的核心酶亞基。在多種癌癥中可觀察到 EZH2 的失調(diào)會(huì)改變許多抑癌基因的表達(dá)從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。此外，EZH2還可啟動(dòng)癌癥發(fā)生發(fā)展過程中的多種分子過程，例如 NF-κB激活、microRNA 沉默以及其他非經(jīng)典轉(zhuǎn)錄途徑調(diào)控。EZH2 通過甲基化組蛋白H3第27位賴氨酸（trimethylation on histone 3 lysine 27，H3K27me3）來抑制基因表達(dá)，因此被認(rèn)為是組織發(fā)育和干細(xì)胞生長方向的關(guān)鍵表觀遺傳物質(zhì)。同時(shí)EZH2可以調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程，控制細(xì)胞自噬和細(xì)胞凋亡，促進(jìn)DNA損傷修復(fù)并抑制細(xì)胞衰老，影響抗原呈遞。當(dāng)EZH2發(fā)生突變（包括過表達(dá)，表達(dá)下調(diào)和表達(dá)缺失）時(shí)可能會(huì)導(dǎo)致癌癥的發(fā)生、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移[6-8]。

表觀遺傳調(diào)控是指在不改變DNA序列的前提下，通過大規(guī)模更改基因表達(dá)實(shí)現(xiàn)細(xì)胞變化。最近的研究表明[9]，表觀遺傳修飾不僅可以改變癌細(xì)胞表型，還可以改變免疫細(xì)胞表型。通過修飾表觀遺傳物質(zhì)調(diào)控免疫細(xì)胞的功能和表型，從而殺死細(xì)胞并調(diào)節(jié)免疫功能。此外，表觀遺傳修飾因子可以激活許多沉默基因，其中一些是觸發(fā)免疫反應(yīng)的免疫檢查點(diǎn)調(diào)節(jié)劑，而另一些則會(huì)抑制免疫反應(yīng)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞逃避免疫。EZH2作為細(xì)胞表觀遺傳狀態(tài)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑，即EED，SUZ12和RbAp46/48的PRC2的核心酶亞基，EZH2通過甲基化H3K27me3會(huì)影響染色質(zhì)螺旋化，從而促進(jìn)靶基因轉(zhuǎn)錄沉默。在正常人體組織中，EZH2通過控制組織特異性干細(xì)胞中的基因表達(dá)程序來維持各種組織的體內(nèi)平衡。

2 EZH2和CD8+T細(xì)胞

CD8+T細(xì)胞，也稱為CTLs，是免疫應(yīng)答中抗原特異性細(xì)胞毒性的主要介質(zhì)，依賴于主要組織相容性復(fù)合體1（major histocompatibility complex-1, MHC-1）。在腫瘤中，癌細(xì)胞產(chǎn)生的抗原中的短肽會(huì)促進(jìn)CD8+T細(xì)胞增殖并分化為足夠數(shù)量的短壽命CD8+T效應(yīng)細(xì)胞，以減少表達(dá)抗原的腫瘤細(xì)胞的數(shù)量，同時(shí)會(huì)減少T細(xì)胞分化為長壽命記憶性CD8+T（Tm）細(xì)胞，以免當(dāng)抗原重復(fù)遞呈時(shí)快速對抗原作出反應(yīng)[10-11]。EZH2與非血液細(xì)胞的組蛋白修飾功能一致，它也修飾CD8+T細(xì)胞的組蛋白甲基化。研究證明，與外周血和非腫瘤組織相比，各種腫瘤組織中EZH2陽性表達(dá)的CD8+T細(xì)胞數(shù)量百分比均下降[12]。

2.1 EZH2影響CD8+T細(xì)胞呈遞抗原

向免疫細(xì)胞呈遞抗原是細(xì)胞免疫第一步，CD8+T細(xì)胞會(huì)識(shí)別并殺死與MHC-1結(jié)合的外源抗原的細(xì)胞，所以在抗腫瘤過程中腫瘤相關(guān)抗原作為特定靶點(diǎn)是免疫療法最重要的目標(biāo)之一。而癌細(xì)胞則通過破壞CD8+T細(xì)胞主導(dǎo)的抗原呈遞使免疫系統(tǒng)無法激活 并建立有效的抗腫瘤反應(yīng)。研究表明[13]大多數(shù)癌細(xì)胞抗原呈遞水平極低，甚至難以引發(fā)免疫反應(yīng)。EZH2調(diào)節(jié)異常引起的表觀遺傳變化已被確定為通過控制基因轉(zhuǎn)錄來抑制腫瘤細(xì)胞免疫原性呈遞的主要機(jī)制，即通過EZH2抑制基因轉(zhuǎn)錄達(dá)到阻斷癌細(xì)胞抗原呈遞途徑的作用。由于EZH2調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程，所以EZH2失調(diào)會(huì)加速細(xì)胞增殖，并延長細(xì)胞存活時(shí)間，這也可能導(dǎo)致癌變和癌癥發(fā)展。研究表明[14-15]，在乳腺上皮細(xì)胞中EZH2的過表達(dá)可以誘導(dǎo)定植的癌細(xì)胞生長及侵襲。在K562白血病細(xì)胞中EZH2通過抑制H3K27me3起到了維持腫瘤細(xì)胞MHC-1沉默的作用。同樣在小細(xì)胞肺癌和神經(jīng)母細(xì)胞瘤等神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中，EZH2也通過減少M(fèi)HC-1從而降低抗原呈遞獲得免疫特權(quán)，這些證據(jù)均證明了EZH2的促癌作用。鑒于對PD-L1 /PD-1抗體具有原發(fā)性耐藥的患者部分缺乏活化的免疫細(xì)胞，這激發(fā)了我們通過表觀遺傳藥物的治療來增強(qiáng)對免疫細(xì)胞的識(shí)別和激活，從而進(jìn)一步增加免疫細(xì)胞的浸潤和PD-L1 /PD-L1的活性。

2.2 EZH2影響CD8+T細(xì)胞增殖

CD8+T細(xì)胞的增殖發(fā)生在T細(xì)胞的免疫應(yīng)答過程中。EZH2通過抑制細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子（cyclin-dependent kinase inhibitor，CDKN）中CDKN2A和CDKN2C的表達(dá)促進(jìn)CD8+T細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)程。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，缺失EZH2的活化CD8+T細(xì)胞中CDKN2A和CDKN2C的表達(dá)水平會(huì)上升，同時(shí)H3K27me3水平降低[16]。

EZH2獨(dú)立控制CD8+T細(xì)胞的分裂周期和凋亡。探討EZH2對CD8+T細(xì)胞分裂和凋亡的調(diào)節(jié)作用時(shí)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示[16]，在EZH2低表達(dá)的小鼠身上原始的CD8+T細(xì)胞表現(xiàn)出增殖減少，G0/G1期細(xì)胞數(shù)增加，S期細(xì)胞數(shù)減少，但凋亡沒有增加，但被細(xì)菌感染后T細(xì)胞凋亡反應(yīng)增強(qiáng)。以上均強(qiáng)調(diào)了在細(xì)胞免疫應(yīng)答過程中維持CD8+T細(xì)胞EZH2的正常表達(dá)的重要性。

3 EZH2和CD4+T細(xì)胞

CD4+T細(xì)胞又稱Th細(xì)胞，分為2種主要亞型：1型（Th1）和2型（Th2）。它們對抗腫瘤的免疫作用依賴于細(xì)胞因子如干擾素，腫瘤壞死因子，白介素-2、白介素-4、白介素-5和白介素-6。盡管CD4+T細(xì)胞與抗腫瘤功能之間僅有間接關(guān)系，但仍可以間接預(yù)測腫瘤患者生存狀態(tài)。最近的研究表明，患者體內(nèi)CD4+T細(xì)胞的基本狀態(tài)是臨床PD-L1/PD-1阻斷治療的一個(gè)重要因素。

3.1 EZH2可負(fù)性調(diào)節(jié)Th細(xì)胞亞型的分化

EZH2的染色質(zhì)調(diào)節(jié)功能對于CD4+輔助性T細(xì)胞規(guī)范化為效應(yīng)細(xì)胞系（包括Th1，Th2和Th17）十分重要。EZH2通過H3K27ME3直接靶向作用并沉默部分基因來抑制Th細(xì)胞分化。Tumes等[17]通過染色質(zhì)免疫沉淀測序（ChIP-seq）圖譜發(fā)現(xiàn)EZH2可以通過控制TFS-T-Box TF（T-Bet），GATA3和eomes這3個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)表達(dá)抑制效果，從而證明在原始的CD4+T細(xì)胞中敲除EZH2基因與調(diào)節(jié)Th1和Th2細(xì)胞的分化偏移有關(guān)。T-Bet促進(jìn)Th1細(xì)胞分化，GATA3與Th2細(xì)胞分化有關(guān)，eomes會(huì)編碼與T-Bet密切相關(guān)的T-Box TF，同時(shí)還會(huì)誘導(dǎo)Th細(xì)胞產(chǎn)生干擾素。

EZH2作為CD4+T細(xì)胞中譜系特異性基因的轉(zhuǎn)錄抑制物發(fā)揮作用，并負(fù)向調(diào)節(jié)Th細(xì)胞亞型的分化。與EZH2在Th1和Th2細(xì)胞中的調(diào)節(jié)作用不同，EZH2在Th17和Th9等其他Th細(xì)胞分化中的調(diào)節(jié)作用仍存在爭議，值得進(jìn)一步研究。

3.2 EZH2參與T細(xì)胞遷移

腫瘤可大致分為熱（T細(xì)胞浸潤）和冷（非T細(xì)胞浸潤的）腫瘤兩種類型。熱腫瘤中會(huì)有大量淋巴細(xì)胞浸潤并且免疫反應(yīng)十分活躍。但在冷腫瘤中缺乏大量淋巴細(xì)胞浸潤，從而導(dǎo)致其不易被免疫系統(tǒng)識(shí)別，免疫反應(yīng)較差。免疫治療抗腫瘤的重要步驟就是使T細(xì)胞融入腫瘤微環(huán)境中，而EZH2會(huì)參與T細(xì)胞遷移入腫瘤微環(huán)境的過程。通過對免疫系統(tǒng)的研究[18]，總結(jié)出T細(xì)胞無法浸潤腫瘤的原因可能由腫瘤細(xì)胞，趨化因子和抑制性免疫細(xì)胞共同誘導(dǎo)血管通透性改變所致。同時(shí)也有證據(jù)表明[19]表觀遺傳改變可以影響T細(xì)胞向腫瘤微環(huán)境遷移及浸潤，EZH2介導(dǎo)的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1（DNA methyltransferase 1, DNMT1）和H3K27me3會(huì)通過DNA甲基化作用下調(diào)趨化因子配體9和10的表達(dá)來抑制效應(yīng)T細(xì)胞的表達(dá)，并抑制T細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)至腫瘤微環(huán)境中。在 研究和卵巢癌結(jié)腸癌的抗腫瘤免疫過程時(shí)發(fā)現(xiàn)，該過程中CXCR 3優(yōu)先通過活化的Teff細(xì)胞表達(dá)，Th1細(xì)胞分泌趨化因子配體（CXCL10）從而響應(yīng)干擾素的分泌，并誘導(dǎo)Teff細(xì)胞遷入到腫瘤微環(huán)境中[20,21]。研究發(fā)現(xiàn)，CXCL10-CXCR3軸可以調(diào)節(jié)白細(xì)胞運(yùn)輸并促進(jìn)T細(xì)胞遷移，從而實(shí)驗(yàn)抗腫瘤免疫。EZH2通過抑制Th1細(xì)胞分泌CXCL10來抑制CXCL10-CXCR3軸的活性，從而抑制Teff細(xì)胞向TME的遷移。因此，EZH2對T細(xì)胞遷移起抑制作用，從而可以抑制免疫系統(tǒng)抗腫瘤。

4 EZH2和TREGS

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs cell）是由FOXP3轉(zhuǎn)錄表達(dá)的CD4+T細(xì)胞的重要免疫抑制亞群，是維持機(jī)體免疫動(dòng)態(tài)平衡的關(guān)鍵，在免疫應(yīng)答過程中對Tregs細(xì)胞具有抑制功能。幾乎在所有類型的癌癥中，Tregs細(xì)胞出現(xiàn)的頻率都很高，在大多數(shù)實(shí)體腫瘤中，這些Tregs細(xì)胞會(huì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視[22-24]。研究表明[25-27]，與來自正常組織的Teff細(xì)胞和Tregs細(xì)胞相比，浸潤腫瘤中的Tregs細(xì)胞，其EZH2 的表達(dá)水平增高。使用ChIP-seq分析H3K27me3 全基因組顯示[34]，與來自外周血的初始 T 細(xì)胞相比，活化的Treg和Teff細(xì)胞中的 H3K27me3 水平增加。

4.1 EZH2維持Treg的穩(wěn)定性和免疫抑制功能

EZH2對Treg細(xì)胞的穩(wěn)定性起關(guān)鍵作用。無論是藥物或遺傳性EZH2缺乏不僅導(dǎo)致FoxP3表達(dá)減少，而且其他關(guān)鍵基因，如Neuropilin-1和BACH2表達(dá)減少，這都會(huì)使得Treg細(xì)胞保持良好的穩(wěn)定性。在小鼠模型中表明[28-30]，EZH2抑制劑CPI-1205會(huì)引起Tregs的表型和功能改變，所以使用抑制EZH2表達(dá)的藥物會(huì)損害Treg細(xì)胞的功能，但不影響其增殖。Goswami等人[31]將誘導(dǎo)的Treg細(xì)胞與Teff細(xì)胞共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)CPI-1205不影響Treg細(xì)胞增殖，但會(huì)抑制其功能，并使Treg細(xì)胞的表型偏向于促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生的效應(yīng)T細(xì)胞的表型。

EZH2基因缺失與EZH2藥物抑制會(huì)導(dǎo)致不同的特定表型。與Treg.EZH2Δ/+小鼠中的Tregs相比，Treg.EZH2Δ/Δ小鼠中的EZH2缺陷型Tregs細(xì)胞在淋巴結(jié)和胸腺中的比率會(huì)增加，而在血液和脾臟中沒有增加。此外，老年Treg.EZH2Δ/Δ小鼠的表面蛋白CTLA-4、PD-1、CD103和GITR的表達(dá)水平高于老年Treg.EZH2Δ/+小鼠。同時(shí)，在所有非淋巴組織中的Treg細(xì)胞比例都顯著降低，這些樹突狀細(xì)胞的抑制腫瘤的能力受到損害，不能維持免疫穩(wěn)態(tài)[22,33]。

Tregs細(xì)胞中 EZH2 的功能障礙也會(huì)改變腫瘤微環(huán)境，導(dǎo)致炎癥和活化的 T 細(xì)胞富集。在Treg.EZH2Δ/Δ小鼠中 EZH2 的穩(wěn)定或瞬時(shí)缺失均會(huì)導(dǎo)致 TIL 中激活的 CD4+和CD8+T細(xì)胞的比例增加，類似于用 EZH2 抑制劑CPI1205 治療的結(jié)果。然而，腫瘤往淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)果存在爭議，Wang 等人發(fā)現(xiàn)[32,34]，與對照小鼠相比，EZH2表達(dá)缺失的小鼠腫瘤生長速度顯著降低。EZH2缺失的小鼠表現(xiàn)出增強(qiáng)的TIL功能，其特征是 IFNγ、TNF-α和IL-2 的產(chǎn)生增加，但CD4+和CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生的IL-10 減少。

因此，單獨(dú)使用特異性靶向Tregs的EZH2抑制劑，或聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)抑制劑（如CTLA-4、PD-1和GITR）阻斷腫瘤生長，將是一種很有前途的抗腫瘤免疫治療方法。

4.2 免疫耐受需要EZH2

小鼠實(shí)驗(yàn)中所有Tregs細(xì)胞的EZH2位點(diǎn)被抑制或缺失的小鼠均未能維持免疫耐受，導(dǎo)致與大量T細(xì)胞活化，同時(shí)細(xì)胞因子產(chǎn)生系統(tǒng)性自身免疫毒性，這與EZH2缺乏的Tregs細(xì)胞表現(xiàn)出促炎癥表型的發(fā)現(xiàn)一致，并發(fā)展為多器官自身免疫[22,32,33]。相比之下，雌性 Foxp3YFP-cre/Foxp3WT；攜帶野生型和EZH2缺陷型Treg細(xì)胞的EZH2fl/fl小鼠沒有表現(xiàn)出自身免疫癥狀。Wang 等人發(fā)現(xiàn)一個(gè)有趣的結(jié)果[33]，相比于耗竭體內(nèi)Treg細(xì)胞， EZH2 缺陷型Treg細(xì)胞在小鼠模型中賦予腫瘤的保護(hù)作用更強(qiáng)，這表明破壞EZH2 的功能比單純減少Treg細(xì)胞更有效。Goswami等人報(bào)道[31]，在接受易普利姆瑪（一種抗CTLA-4 抗體）治療后，所有人類CD4+Teff細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和Tregs細(xì)胞中的EZH2表達(dá)均增加。這一發(fā)現(xiàn)再次引發(fā)了這樣一個(gè)假設(shè)，即靶向抑制Tregs細(xì)胞中的EZH2與免疫抑制治療藥物易普利姆瑪組合可能會(huì)增加抗CTLA-4治療的有效性，并且這一假設(shè)在鼠模型中得到證實(shí)。

5 EZH2和TFH/TFR細(xì)胞

在抗原呈遞期間，一些活化的CD4+T細(xì)胞分化為Tfh細(xì)胞[35]。Tfh細(xì)胞是一種依賴于B細(xì)胞淋巴瘤（BCL）6的細(xì)胞，主要作用為促進(jìn)細(xì)胞成熟、細(xì)胞類別轉(zhuǎn)換以及漿細(xì)胞分化來啟動(dòng)和維持生發(fā)中心反應(yīng)[36-38]。Tfr細(xì)胞和Tfh細(xì)胞的起源相似。Tfr細(xì)胞是一種調(diào)節(jié)性效應(yīng)T細(xì)胞的亞群，大部分與nTreg前體無關(guān)。在細(xì)胞微環(huán)境中，Tfr細(xì)胞的功能與Tfh細(xì)胞相反，Tfr細(xì)胞會(huì)抑制B細(xì)胞效應(yīng)，所以Tfh和Tfr細(xì)胞是免疫激活和免疫耐受平衡不可缺少的細(xì)胞。不受控制的Tfh或Tfr活性可導(dǎo)致免疫耐受的喪失和高水平的自身抗體，從而導(dǎo)致自身免疫。據(jù)報(bào)道，在非淋巴樣腫瘤中Tfh細(xì)胞浸潤與免疫抑制減少有關(guān)，數(shù)據(jù)表明Tfh細(xì)胞浸潤程度與患者生存率呈正相關(guān)，這意味著Tfh細(xì)胞存在一定的保護(hù)作用[39]。

5.1 EZH2在早期細(xì)胞承諾期促進(jìn)Tfh分化

EZH2在Tfh細(xì)胞中的表達(dá)在不同時(shí)期有所不同。Chen等人[40]觀察到，在急性淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒感染的小鼠模型中，早期病毒特異性Tfh細(xì)胞與Th1細(xì)胞相比，Tfh細(xì)胞中EZH2會(huì)高度表達(dá)且存在相關(guān)的H3K27me3修飾。然而，EZH2的表達(dá)會(huì)在Tfh細(xì)胞分化過程中下降到平均水平。

據(jù)報(bào)道，EZH2可抑制CDKN2A以促進(jìn)Tfh細(xì)胞存活和分化，抑制EZH2表達(dá)可損害Tfh細(xì)胞分化和Tfh轉(zhuǎn)錄程序的激活。在病毒特異性CD4+T細(xì)胞中通過基因沉默抑制EZH2表達(dá)，從而破壞了Tfh特異性染色質(zhì)狀態(tài)，顯著減少了早期定性的Tfh細(xì)胞群。然而，EZH2對晚期已分化的Tfh細(xì)胞和記憶性Tfh細(xì)胞沒有這種作用。所以，在早期Tfh細(xì)胞定型期間是否沉默EZH2 與Tfh譜系分化相關(guān)基因的表達(dá)有關(guān)。EZH2 位于Tfh譜系分化相關(guān)基因簇的啟動(dòng)子處，如 BCL6、誘導(dǎo)性T細(xì)胞共刺激物(ICOS)、Maf和 IL-21，或位于CXCR5的上游區(qū)域和內(nèi)含子區(qū)域的ICOS。Tfh細(xì)胞的產(chǎn)生依賴BCL6，EZH2作用于BCL6上游以促進(jìn)Tfh細(xì)胞分化。有趣的是，所有這些EZH2占據(jù)的基因位點(diǎn)都顯示出強(qiáng)烈的H3K27乙?；盘?hào)，對應(yīng)于較少基因位點(diǎn)中EZH2介導(dǎo)的H3K27me3修飾。因此，在通過EZH2靶向免疫療時(shí)，應(yīng)考慮額外補(bǔ)充Tfh細(xì)胞[40-41]。

5.2 EZH2是Tfr細(xì)胞抑制B細(xì)胞功能所必需的

FoxP3能促進(jìn)Tfh細(xì)胞向Tfr樣功能狀態(tài)轉(zhuǎn)化。喪失FoxP3表達(dá)的Tfr細(xì)胞會(huì)變?yōu)門fr細(xì)胞前體，并表現(xiàn)出抑制B細(xì)胞功能能力受損。Tfr細(xì)胞中EZH2 缺陷的基因子集與 FoxP3 下調(diào)或缺失的基因子集重疊，因此EZH2和FoxP3在調(diào)節(jié)Tfr細(xì)胞的分化和抑制功能方面存在部分功能重疊。[42]EZH2缺失促進(jìn)Tfr細(xì)胞的增殖，但削弱了Tfr細(xì)胞對B細(xì)胞的抑制功能。EZH2fl/flFoxp3Cre小鼠表現(xiàn)出Tfr細(xì)胞比例增加，但Tfr細(xì)胞向B細(xì)胞濾泡的遷移能力增強(qiáng)，增強(qiáng)了向IgG1的類別轉(zhuǎn)換重組和抗體分泌，結(jié)論表明通過靶向Tfr細(xì)胞中的EZH2可以進(jìn)行免疫治療的假設(shè)。

6 EZH2和HSCs

造血干細(xì)胞（HSCs）可以分化成各種血細(xì)胞亞型并維持自我更新的能力。在胚胎和成體HSC中，PcG蛋白，包括PRC1和PRC2，通過3種機(jī)制調(diào)節(jié)HSC的靜止、自我更新和分化：（Ⅰ）抑制細(xì)胞周期抑制劑P16INK4A防止細(xì)胞周期異常和p53介導(dǎo)的細(xì)胞死亡，（Ⅱ）維持對發(fā)育調(diào)節(jié)基因的抑制以阻止分化，以及（Ⅲ）當(dāng)細(xì)胞分化時(shí)抑制替代細(xì)胞譜系。

EZH2是HSCs的重要組成部分。PRC2被認(rèn)為是轉(zhuǎn)錄基因沉默的標(biāo)志物，PRC2是胚胎發(fā)育和胚胎體存活所必需的。在胚胎發(fā)生過程中，任何成分的丟失都是致命的，特別是在原腸胚形成階段。[43-45]PRC2復(fù)合體包括EZH1或EZH2，兩者都含有相似的SET結(jié)構(gòu)域。EZH2和EZH1是HSC的關(guān)鍵表觀遺傳調(diào)節(jié)因子，但表現(xiàn)出不同的抑制作用。[46-47]HSC中EZH2的表達(dá)水平隨著年齡的增長而降低，而其同源物EZH1的表達(dá)水平則隨年齡增加。EZH2表達(dá)的降低可以通過其同源物 EZH1得到部分補(bǔ)償，這對于防止成人HSC的衰老至關(guān)重要。由于EZH1補(bǔ)償，成人BM中的EZH2特異性缺失對 HSC 的影響很小[46,48-50]。在早期B細(xì)胞和T細(xì)胞發(fā)育的分化過程中對EZH2 的需求很大，當(dāng)EZH2表達(dá)不足且EZH1代償不足時(shí)，可能會(huì)導(dǎo)致B細(xì)胞和T細(xì)胞分化不足，造成免疫異常。

7 EZH2和NK細(xì)胞

NK 細(xì)胞對于不依賴主要免疫復(fù)合物的先天免疫系統(tǒng)至關(guān)重要，它可加速免疫反應(yīng)，包括先天抗腫瘤反應(yīng)[51-52]。NK細(xì)胞識(shí)別并清除目標(biāo)細(xì)胞的機(jī)制不同于T細(xì)胞，NK細(xì)胞通過選擇性殺傷和裂解靶細(xì)胞實(shí)現(xiàn)免疫清除作用，例如通過分泌穿孔素和顆粒酶直接殺死靶腫瘤細(xì)胞從而抑制腫瘤發(fā)生和腫瘤進(jìn)展，并通過產(chǎn)生大量不同的細(xì)胞因子間接抑制腫瘤發(fā)生和進(jìn)展。有腫瘤研究表明使用活化的NK細(xì)胞或帶有CAR結(jié)構(gòu)的NK細(xì)胞來增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤活性的過繼免疫療法有一定效果[53]。然而，NK細(xì)胞也在免疫系統(tǒng)中起調(diào)節(jié)細(xì)胞的作用。

EZH2是NK細(xì)胞表型變化、增殖、活化和細(xì)胞毒性活性的關(guān)鍵因素。與CD8+T細(xì)胞相反，EZH2負(fù)性調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的增殖和活化。Yin等人[54]報(bào)道，造血細(xì)胞中缺失EZH2的EZH2f/fl小鼠均表現(xiàn)出脾臟、肝臟中NK細(xì)胞數(shù)量的增加。Nagel等人的早期研究描述PRC2會(huì)通過調(diào)節(jié)HOXA9和HOXA10在NK細(xì)胞分化過程中產(chǎn)生影響。隨后的研究表明，EZH2失活或EZH2缺失都會(huì)通過促進(jìn)NK細(xì)胞前體的存活而增強(qiáng)NK細(xì)胞表達(dá)。進(jìn)一步的機(jī)理研究表明，EZH2增加NK細(xì)胞的增殖活化和細(xì)胞毒性的同時(shí)IL-15受體CD12和NK細(xì)胞活化受體NKG2D均會(huì)上調(diào)。

此外，EZH2 阻斷劑通過誘導(dǎo)NK組2D(NKG2D)、IL-2受體β（也稱為CD122）、TLRs和根除腫瘤細(xì)胞所需的顆粒酶的表達(dá)增加從而增加成熟 NK 細(xì)胞的活性。Bugide等人[55]證明在肝細(xì)胞癌的小鼠模型中，EZH2通過阻止NKG2D配體的轉(zhuǎn)錄會(huì)使腫瘤細(xì)胞逃脫NK細(xì)胞的免疫識(shí)別，從而使腫瘤細(xì)胞具有對NK細(xì)胞的抗性，這被認(rèn)為是逃避NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性的可能機(jī)制。EZH2是NKG2D配體的轉(zhuǎn)錄抑制因子。與這些觀察結(jié)果一致，EZH2抑制劑治療和EZH2基因缺失均以 NKG2D 配體（如ULBP1，MICA和MICB）依賴性表達(dá)增多的方式增強(qiáng)了NK細(xì)胞介導(dǎo)的殺腫瘤效果，而NKG2D缺陷降低了測試的小分子 EZH2抑制劑的抗腫瘤作用。同樣，在肌肉浸潤性膀胱癌模型中抑制EZH2不僅在KDM6A和SWI /SNF突變的情況下限制了腫瘤細(xì)胞的增殖，而且還促進(jìn)了NK細(xì)胞活性，上調(diào)包括MIP-1α，ICAM1，ICAM2和CD86在內(nèi)多種靶點(diǎn)，以及增加IFN-γ的表達(dá)。此外EZH2還參與了淋巴瘤細(xì)胞CD58的表觀遺傳沉默，該靶點(diǎn)丟失是淋巴惡性腫瘤中腫瘤免疫逃逸的常見機(jī)制。這意味著NK細(xì)胞中EZH2的破壞代表了一種潛在有效的免疫療法。

8 EZH2和B細(xì)胞

B細(xì)胞是體液免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞。它們可以通過與Tfh細(xì)胞的相互作用，滲入腫瘤組織并影響腫瘤的生長和進(jìn)展。體內(nèi)產(chǎn)生大量的T細(xì)胞和B細(xì)胞被認(rèn)為是良好臨床治療結(jié)果的標(biāo)志物[56]。B細(xì)胞通過以下幾種機(jī)制調(diào)控腫瘤：（i）與Tfh細(xì)胞相互作用，B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞，分泌免疫球蛋白并通過抗體依賴性細(xì)胞毒性或補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性抑制腫瘤進(jìn)展[57]；(ii）B細(xì)胞作為抗原呈遞細(xì)胞發(fā)揮作用，促進(jìn)腫瘤微環(huán)境中的T細(xì)胞應(yīng)答[58]；（iii）與CD8+T細(xì)胞類似，活化的B細(xì)胞可直接殺死腫瘤細(xì)胞，同時(shí)增強(qiáng)B細(xì)胞中GZMB和TNF相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體的表達(dá)。[59]然而，與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞一樣，調(diào)節(jié)性B細(xì)胞也被報(bào)道通過免疫抑制細(xì)胞因子（如IL-10和TGF-β）促進(jìn)腫瘤形成和進(jìn)展[60]。

在B細(xì)胞分化的不同階段會(huì)發(fā)生動(dòng)態(tài)的表觀遺傳修飾。EZH2參與淋巴細(xì)胞生成，在增殖的B細(xì)胞（如B細(xì)胞前體、生發(fā)中心B細(xì)胞和循環(huán)B淋巴細(xì)胞）中高表達(dá)，而在靜止的原始B細(xì)胞中表達(dá)水平較低。[61-63]在B細(xì)胞前體中，EZH2參與VDJ重組（T 細(xì)胞和 B 細(xì)胞隨機(jī)組裝不同基因片段的過程，稱為可變 (V)、多樣性 (D) 和連接 (J) 基因）并抑制Igβ轉(zhuǎn)錄[64]。EZH2通過抑制細(xì)胞周期CDKN1A和CDKN1B促進(jìn)生發(fā)中心B細(xì)胞的增殖，但會(huì)抑制生發(fā)中心B細(xì)胞終末分化為抗體分泌細(xì)胞(ASC)的過程[63,65-67]。B 細(xì)胞對免疫刺激的反應(yīng)需要充足的EZH2表達(dá)。Herviou等人[68]報(bào)告，EZH2抑制劑EPZ-6438減少了B細(xì)胞的增殖，加速了B細(xì)胞到漿細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，并誘導(dǎo)漿細(xì)胞增加免疫球蛋白的分泌。據(jù)報(bào)道，抑制B細(xì)胞中EZH2表達(dá)不僅會(huì)減少B淋巴細(xì)胞的發(fā)育和生發(fā)中心的形成，還會(huì)導(dǎo)致抗體分泌細(xì)胞的功能障礙。在炎癥的刺激下，EZH2缺陷的抗體分泌細(xì)胞增殖受損，免疫細(xì)胞的組織因子和炎癥因子持續(xù)表達(dá)，導(dǎo)致抗體分泌細(xì)胞的數(shù)量減少，這被認(rèn)為是由于線粒體呼吸減少，糖代謝受損，未折疊蛋白低表達(dá)所致。[63]然而，到目前為止，還沒有關(guān)于EZH2在特定B細(xì)胞亞群中的功能的報(bào)道。

9 EZH2聯(lián)合免疫抑制治療

隨著對腫瘤細(xì)胞免疫逃逸的研究，研究發(fā)現(xiàn)[69]T細(xì)胞表面的程序性死亡受體1（Programmed Cell Death 1, PD-1）與腫瘤細(xì)胞表面的程序性死亡配體1（Programmed Cell Death Ligand 1, PD-L1）結(jié)合后可使下游T細(xì)胞信號(hào)通路的多個(gè)關(guān)鍵分子發(fā)生去磷酸化，從而傳遞抑制性信號(hào)，阻礙T細(xì)胞的增殖和活化，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸，且PD-L1在5%-40%的肺癌細(xì)胞中呈陽性表達(dá)，因此基于阻斷PD-1/PD-L1信號(hào)通路的免疫檢查點(diǎn)抑制劑（Immune checkpoint inhibition, ICI）成為治療癌癥最熱門的研究方向，同時(shí)有研究表明[70]PD-L1在包括非小細(xì)胞肺癌、黑色素瘤、腎細(xì)胞瘤及前列腺癌等惡性腫瘤中高表達(dá)的同時(shí)，浸潤入腫瘤的樹突狀細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和Treg細(xì)胞中PD-1表達(dá)水平也會(huì)提高，這類免疫細(xì)胞會(huì)因?yàn)槊庖咦R(shí)別障礙抑制免疫細(xì)胞分裂，從而導(dǎo)致腫瘤微環(huán)境中T細(xì)胞功能異常，甚至造成晚期癌癥患者對ICI療法無效，有實(shí)驗(yàn)在肺癌組織中證實(shí)[71]，EZH2的表達(dá)與PD-1/PD-L1的表達(dá)水平呈正相關(guān)。抑制EZH2表達(dá)可以減少腫瘤細(xì)胞逃逸免疫檢測，還可以降低ICI藥物的耐藥性。有體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)[72,73]，表觀遺傳調(diào)控聯(lián)合ICI治療較單獨(dú)使用ICI治療有更明顯療效。在治療方案上，雙重抑制EZH1 / EZH2可能具有更大的抗腫瘤功效，因?yàn)楫?dāng)抑制EZH2時(shí)EZH1可以補(bǔ)償。因此，高選擇性靶向EZH1 / EZH2雙重抑制劑或?qū)⒏哌x擇性EZH1抑制劑與高選擇性EZH2抑制劑聯(lián)合使用均值得探討。

10 討論

上述內(nèi)容對EZH2在機(jī)體免疫過程的逐個(gè)步驟進(jìn)行了分析，表明在獲得性免疫過程中EZH2幾乎參與了整個(gè)過程，這也表明控制EZH2的表達(dá)可以有效影響機(jī)體的免疫環(huán)境。此外，EZH2還有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、增強(qiáng)化療藥物耐藥性等優(yōu)點(diǎn)。所以進(jìn)一步開發(fā)高效，低毒，高選擇性的EZH2抑制劑是未來的方向之一。同時(shí)，免疫療法已證明免疫系統(tǒng)有抵抗惡性腫瘤的重要能力，多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)成功使用PD-L1/ PD-1通過阻斷抗體識(shí)別來對抗腫瘤。盡管在臨床試驗(yàn)中已證明PD- L1 / PD-1阻斷療法具有顯著的效果，但許多晚期癌癥患者對抗PD-L1/抗PD-1單一療法仍無反應(yīng)。表觀遺傳藥物通過與ICI療法的組合在很大程度上改善了抗腫瘤效果，并為癌癥免疫療法提供了新的思路。這些表觀遺傳學(xué)組合療法可以進(jìn)行最佳整合，以提高PD-L1 / PD-1阻斷抗體的反應(yīng)率，這可以在不久的將來EZH2聯(lián)合ICI治療必然會(huì)造福于廣大患者。