徐炫宗

（廣東阿格蕾雅光電材料有限公司，廣東 佛山 528333）

4-(2-萘)苯硼酸頻那醇酯，英文名4-(Naphthalene-2-yl)phenylboronic acid pinacol ester，CAS：1092390-02-7，分子量 330.23，分子式 C22H23BO2。硼酸頻那醇酯類化合物是Suzuki、Miyaura偶聯(lián)反應(yīng)的重要中間體[1-10]，在藥物、有機(jī)光電材料[11]等的合成中被廣泛應(yīng)用。高效液相色譜法（HPLC）適合分析沸點(diǎn)高、分子量大、強(qiáng)極性和熱穩(wěn)定性差的化合物，是應(yīng)用范圍最廣的一種分析方法。目前，有關(guān)硼酸酯類物質(zhì)的檢測(cè)方法主要是高效液相色譜法[12-13]，但硼原子的空P軌道導(dǎo)致硼酸酯類樣品在酸堿中都不太穩(wěn)定[14]，因此對(duì)這類產(chǎn)品的純度進(jìn)行色譜分析時(shí)，往往出現(xiàn)主物質(zhì)分解、在色譜柱中的保留弱、峰形差、方法穩(wěn)定性差等問題，想得到準(zhǔn)確可靠的分析結(jié)果難度很大。

1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器

試劑：4-(2-萘)苯硼酸頻那醇酯（99%）、色譜級(jí)乙腈、四氫呋喃、甲醇。

2 實(shí)驗(yàn)過程

2.1 樣品配制

四氫呋喃在HPLC中與其他常見溶劑的兼容性良好，因此選擇四氫呋喃為溶劑。稱取4-(2-萘)苯硼酸頻那醇酯25mg于燒杯中，加入適量四氫呋喃溶解后，轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，用四氫呋喃定容后搖勻。取適量至2mL棕色樣品瓶中作為備測(cè)溶液，同時(shí)配制空白樣品。

2.2 樣品檢測(cè)

2.2.1 色譜參數(shù)一

流動(dòng)相為甲醇，色譜柱為Inertsustain C18 4.6mm×250mm×5μm，流速為 1.0mL?min-1，柱溫為40℃，進(jìn)樣量5μL。檢測(cè)儀器為帶DAD檢測(cè)器的安捷倫HPLC-1260，檢測(cè)器（DAD）波長(zhǎng)采集范圍為190~450nm，總分析時(shí)長(zhǎng)為20min。

2.2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

按2.1的方法配制樣品溶液，參照色譜參數(shù)一進(jìn)行測(cè)定，主峰保留時(shí)間為8.2min，得到主峰的光譜圖（圖1）。樣品在260.25nm處有吸收峰，因此確定260nm為4-(2-萘)苯硼酸頻那醇酯的檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖1 4-(2-萘)苯硼酸頻那醇酯的紫外吸收光譜圖

2.2.3 方法的可行性驗(yàn)證

按2.1的方法配制樣品溶液，按色譜參數(shù)一，在帶UV檢測(cè)器的賽默飛HPLC-U3000上進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)置為260nm，連續(xù)進(jìn)樣2針。主峰保留時(shí)間為8.2min，發(fā)現(xiàn)從溶劑峰到主峰之間的基線明顯有階梯狀的上抬（圖2），很大可能是因?yàn)榱鲃?dòng)相中的甲醇為極性分子，導(dǎo)致4-(2-萘)苯硼酸頻那醇酯在流動(dòng)相中不斷分解為硼酸產(chǎn)物，而硼酸產(chǎn)物雖然在色譜柱中的保留較硼酸酯弱，但也存在紫外吸收，導(dǎo)致主峰的前基線上抬。由此可以看出，在這種色譜條件下，主物質(zhì)不能保持單一分子狀態(tài)，檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性必然受到影響。

圖2 4-(2-萘)苯硼酸頻那醇酯在色譜參數(shù)一下的色譜圖

2.2.4 色譜參數(shù)二

且說文華齋的這恐怖一幕。伴隨著“奉”的一聲，峋四爺成了火人，裴主事，兩名護(hù)衛(wèi)，連同店門外的一個(gè)路人，都被眼前的景象嚇得半死，面無人色。

流動(dòng)相為乙腈，色譜柱為Inertsustain C18 4.6mm×250mm×5μm，流速為 1.0mL?min-1，柱溫為40℃，進(jìn)樣量為5μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm，總分析時(shí)長(zhǎng)為20min。

按2.1的方法配制樣品溶液，按色譜參數(shù)二連續(xù)進(jìn)樣2針，主峰保留時(shí)間為5.2min，沒有出現(xiàn)溶劑峰與主峰之間的基線上抬現(xiàn)象，但2針主峰的對(duì)稱因子均為2.3，主峰有明顯的拖尾現(xiàn)象。這是因?yàn)橐译娴臉O性比甲醇小，對(duì)4-(2-萘)苯硼酸頻那醇酯的作用沒有甲醇強(qiáng)，使得目標(biāo)物在分析過程中能保持原分子狀態(tài)，因而改善了主峰前基線上抬的情況。主峰峰形拖尾可能是色譜柱里的硅羥基跟主物質(zhì)發(fā)生作用而導(dǎo)致。

2.2.5 色譜參數(shù)三

流動(dòng)相為乙腈，色譜柱為Venusil XBP C18 4.6mm×250mm×5μm，流速為 1.0mL?min-1，柱溫為40℃，進(jìn)樣量為5μL，檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)置為260nm，總分析時(shí)長(zhǎng)為30min。

將色譜柱改為二次封端的Venusil XBP C18 4.6mm×250mm×5μm柱，其他條件和2.2.4一致，按2.1的方法配制樣品溶液，連續(xù)進(jìn)樣2針，結(jié)果顯示主峰保留時(shí)間為5.7min，基線無上抬現(xiàn)象，主峰對(duì)稱因子為1.1，峰形有明顯改善。可見二次封端色譜柱降低了色譜柱填料中未鍵合的硅羥基數(shù)量，減輕了目標(biāo)物在色譜柱中與硅羥基的作用，改善了峰形。但本方法的主峰保留時(shí)間不長(zhǎng)，存在雜質(zhì)分離度差、主峰里可能包裹有未分離的雜質(zhì)等問題。

2.2.6 色譜參數(shù)四

流動(dòng)相為乙腈∶水=9∶1（V∶V），色譜柱為 Venusil XBP 4.6mm×250mm×5μm，流 速 為1.0mL?min-1，柱溫為 40℃，進(jìn)樣量為 5μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm，總分析時(shí)長(zhǎng)為30min。

按2.1的方法配制樣品溶液，按色譜參數(shù)四連續(xù)進(jìn)樣2針。調(diào)整流動(dòng)相的極性后，主峰保留時(shí)間增加到10.9min，但溶劑峰與主峰之間重新出現(xiàn)了基線上抬現(xiàn)象，主峰峰形變差（圖3）。這是因?yàn)榱鲃?dòng)相中的極性水分子導(dǎo)致4-(2-萘)苯硼酸頻那醇酯發(fā)生了分解，出現(xiàn)了與2.2.1同樣的現(xiàn)象。

圖3 4-(2-萘)苯硼酸頻那醇酯在色譜參數(shù)四下的色譜圖

2.2.7 色譜參數(shù)五

流動(dòng)相為乙腈∶水（1%甲酸）=9∶1（V∶V），色譜柱為Venusil XBP 4.6mm×250mm×5μm，流速為1.0mL?min-1，柱溫為 40℃，進(jìn)樣量為 5μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm，總分析時(shí)長(zhǎng)為30min。

據(jù)報(bào)道，用高效液相色譜法檢測(cè)硼酸酯類物質(zhì)時(shí)，在流動(dòng)相中添加緩沖液能改善峰形，減少分解。在流動(dòng)相的水相中添加1%甲酸后，按2.1的方法配制樣品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6針后發(fā)現(xiàn)，前面2針基線無上抬現(xiàn)象，主峰峰形也正常，第3針之后，溶劑峰與主峰之間的基線慢慢上抬，主峰拖尾因子逐漸變大?？梢娫诹鲃?dòng)相中添加緩沖液的分析方法，穩(wěn)定性較差，且緩沖液對(duì)儀器、色譜柱或多或少會(huì)造成一定損害，在開發(fā)新的檢測(cè)方法時(shí)盡量避免使用。

2.2.8 色譜參數(shù)六

流動(dòng)相為乙腈，色譜柱為3根Venusil XBP 4.6mm×250mm×5μm串聯(lián)，流速為1.0mL?min-1，柱溫為40℃，進(jìn)樣量為5μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm，總分析時(shí)長(zhǎng)為30min。

按2.1的方法配制樣品溶液，按色譜參數(shù)六連續(xù)進(jìn)樣6針，主峰保留時(shí)間為12.8min，6針樣品的重現(xiàn)性良好，均無基線上抬現(xiàn)象，主峰峰形良好，雜質(zhì)分離度高。用本色譜參數(shù)分3次，對(duì)同一個(gè)4-(2-萘)苯硼酸頻那醇酯樣品進(jìn)行了6次平行檢測(cè)，結(jié)果見表1。

由表1的數(shù)據(jù)可知，將3根二次封端的Venusil XBP 4.6mm×250mm×5μm色譜柱串聯(lián)后，方法的重現(xiàn)性很好，無基線上抬、峰形差等現(xiàn)象。另外，選用純乙腈為流動(dòng)相，因乙腈的黏度小，在本色譜條件下的柱壓力為12MPa左右，在普通的HPLC上就能使用本方法，無需配備超高效液相色譜儀。

表1 4-(2-萘)苯硼酸頻那醇酯的穩(wěn)定性驗(yàn)證結(jié)果

3 結(jié)論

在用色譜對(duì)具有硼酸酯結(jié)構(gòu)的化合物進(jìn)行純度分析時(shí)，色譜條件的設(shè)置不合理，可能會(huì)出現(xiàn)主物質(zhì)分解、主峰拖尾、方法的穩(wěn)定性差等情況，直接影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。本文驗(yàn)證了4-(2-萘)苯硼酸頻那醇酯在各種高效液相色譜條件下的分析結(jié)果，得到結(jié)論：用純乙腈為流動(dòng)相，可降低產(chǎn)物的分解；用二次封端色譜柱可降低柱效應(yīng)；將3根色譜柱串聯(lián)，可提高雜質(zhì)的分離效果，由此確定了既能保證峰形、又能實(shí)現(xiàn)雜質(zhì)分離，且長(zhǎng)期穩(wěn)定性良好的4-(2-萘)苯硼酸頻那醇酯高效液相色譜分析方法。本方法沒有使用緩沖液，對(duì)色譜柱和儀器友好，可為其他硼脂類化合物的液相分析方法提供參考。