游華芳，徐彥軍，劉 萍，陳 松，許 娟，胡有朋

(1.貴州大學(xué)農(nóng)學(xué)院食用菌研究院，貴陽 550025；2.貴陽金黔農(nóng)業(yè)科技有限公司，貴州 貴陽 550081)

微營養(yǎng)能誘導(dǎo)食用菌與產(chǎn)量、品質(zhì)形成相關(guān)酶的活性[1]，鋅離子作為酶的輔助因子，對(duì)漆酶有激活作用[2]。VB1在菌絲體內(nèi)轉(zhuǎn)化成硫胺素焦磷酸，它是丙酮酸脫氫酶復(fù)合體系的輔助因子，能促使菌體迅速生長[3]。隨著杏鮑菇市場需求量逐年增加，工廠化生產(chǎn)規(guī)模逐漸擴(kuò)大，微量元素和維生素的應(yīng)用，越發(fā)受到工廠化食用菌企業(yè)的重視。本研究探索不同微營養(yǎng)對(duì)杏鮑菇菌種質(zhì)量、出菇產(chǎn)量品質(zhì)及相關(guān)酶活性的影響，使微營養(yǎng)在杏鮑菇生長和品質(zhì)形成階段發(fā)揮積極作用，以期為微營養(yǎng)在工廠化杏鮑菇栽培應(yīng)用方面提供理論依據(jù)和實(shí)踐參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌種

杏鮑6號(hào)菌株由貴州貴旺生物科技有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)地點(diǎn)

貴州大學(xué)食用菌研究院。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1母種培養(yǎng)基

1) 配方

ck：土豆200 g，瓊脂20 g，葡萄糖20 g，蛋白胨2 g，KH2PO40.5 g；

配方1：土豆200 g，瓊脂20 g，葡萄糖20 g，蛋白胨2 g，KH2PO40.5 g、VB110 mg；

配方2：土豆200 g，瓊脂20 g，葡萄糖20 g，蛋白胨2 g，KH2PO40.5 g、VB210 mg；

配方3：土豆200 g，瓊脂20 g，葡萄糖20 g，蛋白胨2 g，KH2PO40.5 g、硫酸銅1 g；

配方4：土豆200 g，瓊脂20 g，葡萄糖20 g，蛋白胨2 g，KH2PO40.5 g、硫酸鋅1 g；

配方5：土豆200 g，瓊脂20 g，葡萄糖20 g，蛋白胨2 g，KH2PO40.5 g、赤霉素5 mg。

2) 母種培養(yǎng)基制作

用18 mm×18 mm的試管分裝制作好的培養(yǎng)基，每個(gè)配方設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)各分裝10支試管，共180支，滅菌擺斜面，接入杏鮑6號(hào)菌種，于恒溫箱內(nèi)25 ℃暗光培養(yǎng)。

1.3.2原種培養(yǎng)基

1) 配方

ck：小麥45%，玉米芯30%，麩皮22%，石灰1%，石膏1%；

配方1：小麥45%，玉米芯30%，麩皮22%，石灰1%，石膏1%，VB120 mg/L；

配方2：小麥45%，玉米芯30%，麩皮22%，石灰1%，石膏1%，VB220 mg/L；

配方3：小麥45%，玉米芯30%，麩皮22%，石灰1%，石膏1%，硫酸銅0.01%；

配方4：小麥45%，玉米芯30%，麩皮22%，石灰1%，石膏1%，硫酸鋅0.01%；

配方5：小麥45%，玉米芯30%，麩皮22%，石灰1%，石膏1%，赤霉素10 mg/L。

2) 原種培養(yǎng)基制作

按上述配方稱取培養(yǎng)料，并將培養(yǎng)料攪拌均勻，含水量為60%，pH值自然，采用17 mm×35 mm×0.05 mm聚丙烯塑料袋裝料，每袋裝干料0.22 kg，每個(gè)配方設(shè)3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5袋，共90袋。裝袋后放入機(jī)械免鍋爐滅菌鍋LGB- 500×4500滅菌2 h，冷卻至室溫時(shí)，將食用菌發(fā)酵罐(BIOTECH-10 JS-100 JS)里預(yù)先制好的杏鮑6號(hào)液體菌種取30 mL轉(zhuǎn)接到菌包中，置于22～26 ℃恒溫培養(yǎng)室中培養(yǎng)。

1.4 項(xiàng)目測定

1) 各母種培養(yǎng)基配方中菌絲生長情況測定

菌絲長勢(shì)：根據(jù)菌絲的密度和質(zhì)量進(jìn)行比較分出等級(jí)[4]；

菌絲生長速率(mm/d)=PDA斜面高度(mm)/滿管天數(shù)(d)；

菌絲生長指數(shù)(I)=菌落長勢(shì)評(píng)分(N)×菌絲生長速率(V)[4]。

2) 生物轉(zhuǎn)化率(BE)=[鮮菇重(FMW)/培養(yǎng)料干重(DWM)]×100%。

3) 漆酶活性的測定使用北京索萊寶科技有限公司的漆酶試劑盒；乳酸脫氫酶活性的測定使用北京索萊寶科技有限公司的乳酸脫氫酶試劑盒。

1.5 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 2010軟件和SPSS 25.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 各培養(yǎng)基中杏鮑6號(hào)母種質(zhì)量分析

由表1可知，在配方1、配方2、配方4中杏鮑6號(hào)母種菌絲長勢(shì)好，菌絲潔白、濃密粗壯，菌絲生長指數(shù)和菌絲長勢(shì)評(píng)分高，菌種質(zhì)量好。在配方3、配方5、ck組中菌絲長勢(shì)較差，表現(xiàn)為菌絲潔白、密、較粗；菌絲生長指數(shù)和菌絲長勢(shì)評(píng)分稍低，菌種質(zhì)量稍差。ck菌絲滿管時(shí)間最長，相比其他5個(gè)配方組推遲2 d長滿。杏鮑6號(hào)菌絲生長速率，由快到慢依次為：配方4(5.310 0 mm/d)、配方3(5.243 3 mm/d)、配方2(5.193 3 mm/d)、配方1(5.016 7 mm/d)、配方5(4.990 0 mm/d)、ck(4.886 7 mm/d)，母種配方4菌絲生長速率最大，ck菌絲生長速率最小，通過多重比較，配方4和ck達(dá)顯著性差異。

表1 各培養(yǎng)基中杏鮑6號(hào)母種質(zhì)量表現(xiàn)Table 1 Quality performance of Pleurotus eryngii No.6 hyphae in each mother seed culture medium

表2 各培養(yǎng)基中杏鮑6號(hào)原種質(zhì)量表現(xiàn)Table 2 Quality performance of Pleurotus eryngii No.6 in each stock culture medium

表3 各配方杏鮑6號(hào)子實(shí)體農(nóng)藝性狀及產(chǎn)量情況Table 3 Agronomic traits and yield of of Pleurotus eryngii No.6 in each stock culture medium

綜合比較菌絲長勢(shì)、評(píng)分、滿管時(shí)間、生長速率及生長指數(shù)可得出，配方4為杏鮑6號(hào)母種最佳配方。

2.2 各培養(yǎng)基中杏鮑6號(hào)原種質(zhì)量分析

由表2可知，杏鮑6號(hào)原種菌絲在配方1和配方4菌絲長勢(shì)最好，表現(xiàn)為菌絲潔白、濃密、粗壯，菌種質(zhì)量好，菌絲生長速度快，并與ck和配方5達(dá)顯著性差異。

菌絲滿袋時(shí)間依次為：ck>配方4>配方2=配方5>配方1=配方3，其中ck組滿袋時(shí)間最長(52 d)，配方1和配方3滿袋時(shí)間最短(48 d)。

各配方中杏鮑6號(hào)菌絲生長速率，由大到小依次為：配方1、配方4、配方3、配方2、配方5、ck，通過F檢驗(yàn)和多重比較后可知，配方2、配方3、配方5和ck的原種菌絲生長速率差異不顯著。

2.3 各配方原種培養(yǎng)基出菇情況分析

各配方原種培養(yǎng)基出菇試驗(yàn)結(jié)果見表3。

菌蓋直徑從大到小依次為：配方1、配方4、配方3、配方2、配方5、ck，經(jīng)多重比較，配方1的菌蓋直徑與ck組達(dá)顯著差異。

菌柄長度從大到小依次為：配方3、配方4、配方1、配方5、配方2、ck，配方3和配方4的菌柄長度分別與ck組達(dá)顯著差異。

菌柄直徑從大到小依次為：配方4、配方2、配方3、配方1、ck、配方5，配方4與配方5及ck的菌柄直徑分別達(dá)顯著差異。

各配方子實(shí)體產(chǎn)量與生物轉(zhuǎn)化率從大到小的順序一致，配方3、配方4、配方2、配方1、ck、配方5，配方3子實(shí)體產(chǎn)量最大，配方5子實(shí)體產(chǎn)量最小。子實(shí)體產(chǎn)量與生物轉(zhuǎn)化率最高的是配方3，其次是配方4。配方3、配方4的子實(shí)體產(chǎn)量分別與ck、配方5之間達(dá)顯著性差異。

綜合分析各配方杏鮑6號(hào)子實(shí)體農(nóng)藝性狀及產(chǎn)量情況，配方3與配方4是杏鮑6號(hào)原種培養(yǎng)基出菇最好的配方。

2.4 微營養(yǎng)誘導(dǎo)菌絲體相關(guān)酶活性比較

在添加微營養(yǎng)后培養(yǎng)，杏鮑6號(hào)原種菌絲培養(yǎng)中期各處理相關(guān)酶活性如表4。除了配方2原種菌絲的漆酶活性低于ck外(未達(dá)顯著性差異)，其他配方的原種菌絲漆酶活性都顯著高于ck。表明在原種配方里添加VB1(20 mg/L)、硫酸銅(0.01%)、硫酸鋅(0.01%)或赤霉素(10 mg/L)，都對(duì)杏鮑6號(hào)原種菌絲漆酶活性有顯著的促進(jìn)作用；而在配方里添加VB2(20 mg/L)對(duì)杏鮑6號(hào)原種菌絲漆酶活性沒有促進(jìn)作用。配方4與配方5杏鮑6號(hào)原種菌絲丙酮酸脫氫酶活性最強(qiáng)，分別為8.591 1 U/mL和9.870 5 U/mL，二者都顯著高于ck(6.788 7 U/mL)；而配方1和配方3的原種菌絲丙酮酸脫氫酶活性均低于ck，且與ck未達(dá)顯著性差異。結(jié)果表明，配方里添加VB2(20 mg/L)、硫酸鋅(0.01%)或赤霉素(10 mg/L)能激發(fā)杏鮑6號(hào)原種菌絲丙酮酸脫氫酶活性。

表4 相關(guān)酶活性平均數(shù)差異顯著性檢驗(yàn)Table 4 Test of significance in mean difference of associated enzyme activity

3 討論與結(jié)論

本試驗(yàn)在母種和原種培養(yǎng)基配方中添加硫酸銅、硫酸鋅能明顯提高菌種質(zhì)量，改善杏鮑菇子實(shí)體外觀品質(zhì)。其原因在于銅、鋅元素是某些酶的必要因子，可提高菌絲孢外酶的活性，促進(jìn)菌絲體和子實(shí)體的生長發(fā)育[5]。

本試驗(yàn)原種配方5添加赤霉素的產(chǎn)量最低，可能與氣生菌絲生長過旺及C/N失調(diào)有關(guān)。

本試驗(yàn)在配方里添加硫酸鋅，對(duì)杏鮑6號(hào)原種菌絲漆酶活性有顯著的促進(jìn)作用。胡開輝等[2]研究不同微量元素斑玉蕈酶活的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，添加鋅元素后，活性顯著低于ck組；本試驗(yàn)結(jié)果與之不一致，可能是供試杏鮑菇與斑玉蕈生物學(xué)特性不同而有所差異。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在配方中添加VB1及硫酸銅誘導(dǎo)杏鮑6號(hào)原種菌絲丙酮酸脫氫酶活性效果較差，這與劉祺[6]研究的結(jié)果相近。也與韋文添[7]研究結(jié)果相近，可能是VB1與硫酸銅濃度的不適宜而對(duì)杏鮑菇的生長不起作用。

綜合比較發(fā)現(xiàn)，在本試驗(yàn)中添加微營養(yǎng)均對(duì)杏鮑6號(hào)菌種質(zhì)量及相關(guān)酶活性有一定的促進(jìn)作用，并篩選出添加硫酸鋅(1 g)的配方4為杏鮑6號(hào)母種最佳配方，同時(shí)添加硫酸鋅(0.01%)的配方4也是原種培養(yǎng)基出菇最好的配方。