王紅娜，陳 偉

1.河南省寶豐縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 寶豐 467400；2.申聯(lián)生物醫(yī)藥（上海）股份有限公司，上海 200241

口蹄疫（foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，F(xiàn)MDV）引起的一種急性、烈性、高度接觸性的動(dòng)物傳染病，具有傳播速度快、傳播方式多樣、感染致病性強(qiáng)、潛伏期短、動(dòng)物機(jī)體對(duì)口蹄疫病毒的免疫應(yīng)答反應(yīng)低等特點(diǎn)。該病發(fā)病率可達(dá)100%，仔豬常不見癥狀而猝死，嚴(yán)重時(shí)死亡率可達(dá)100%，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)和國(guó)際畜產(chǎn)品貿(mào)易造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為必須法定報(bào)告的動(dòng)物傳染病，我國(guó)將其列在一類動(dòng)物傳染病的第1 位。目前，我國(guó)主要采取以疫苗免疫為主、撲殺為輔的綜合性防控措施，因此，口蹄疫疫苗免疫效果評(píng)估是防止口蹄疫發(fā)生和蔓延的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，快速準(zhǔn)確地檢測(cè)評(píng)估疫苗免疫抗體水平至關(guān)重要[1-2]。本試驗(yàn)旨在通過對(duì)比評(píng)估7 個(gè)企業(yè)生產(chǎn)的口蹄疫抗體檢測(cè)試劑盒的性能，為養(yǎng)殖場(chǎng)開展疫苗免疫效果評(píng)估提供科學(xué)的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 血清樣品

278 份臨床血清樣品來源于7 個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)，免疫疫苗為豬口蹄疫O 型、A 型二價(jià)滅活疫苗（Re-O/MYA98/JSCZ/2013 株+Re-A/WH/09 株），免疫劑量為2 mL/頭份，分別在一免及二免30 d 后按要求隨機(jī)采血，并制備血清，2～8 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 口蹄疫抗體檢測(cè)試劑盒

7 個(gè)口蹄疫抗體檢測(cè)試劑盒生產(chǎn)企業(yè)分別以企業(yè)A、企業(yè)B、企業(yè)C、企業(yè)D、企業(yè)E、企業(yè)F、企業(yè)G 代表，詳見表1。

表1 口蹄疫抗體檢測(cè)試劑盒

1.3 檢測(cè)方法及結(jié)果判定

按照各企業(yè)生產(chǎn)試劑盒中說明書的具體檢測(cè)步驟和注意事項(xiàng)進(jìn)行操作，并根據(jù)相應(yīng)的判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判定與分析。由于各企業(yè)生產(chǎn)的試劑盒對(duì)檢測(cè)結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)有所差異，因此，對(duì)于待檢樣品的抗體平均值不做對(duì)比分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 一免血清抗體檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)結(jié)果顯示（表2），企業(yè)A、企業(yè)B 與企業(yè)D生產(chǎn)的試劑盒檢測(cè)一免血清的O 型抗體陽性率分別為73.7%～100%、85%～100%、90%～100%，離散度分別為12.6～65.9、13.6～31.9、19.8～50.9；A 型抗體陽性率分別為73.7%～100%、94.7%～100%、100%，離散度分別為13.2～71.8、3.5～22.2、21.5～59.3。由此可見，企業(yè)A、企業(yè)B 與企業(yè)D 生產(chǎn)的試劑盒檢測(cè)的抗體陽性率和離散度等主要指標(biāo)均相對(duì)較好，而其他企業(yè)生產(chǎn)的試劑盒檢測(cè)的抗體陽性率和離散度等主要指標(biāo)均相對(duì)較差。

表2 各企業(yè)口蹄疫抗體檢測(cè)試劑盒一免血清抗體檢測(cè)結(jié)果

續(xù)表2

2.2 二免血清抗體檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)結(jié)果顯示（表3），企業(yè)A、企業(yè)B、與企業(yè)D 生產(chǎn)的試劑盒檢測(cè)二免血清O 型抗體陽性率分別為90%～100%、100%、100%，離散度分別為19.4～69.9、1.8～10.7、5.3～8.5；A 型抗體陽性率分別為80%～100%、100%、100%，離散度分別為21.3～77.3、1.3～2.7、6.6～8.2。由此可見，企業(yè)A、企業(yè)B 與企業(yè)D 生產(chǎn)的試劑盒檢測(cè)的抗體陽性率和離散度等主要指標(biāo)均相對(duì)較好，與一免血清抗體檢測(cè)結(jié)果保持一致，而其他企業(yè)生產(chǎn)的試劑盒檢測(cè)的抗體陽性率雖然都相對(duì)較好，但離散度都相對(duì)較差。

表3 各企業(yè)口蹄疫抗體檢測(cè)試劑盒二免血清抗體檢測(cè)結(jié)果

續(xù)表3

3 討 論

血清學(xué)檢測(cè)在口蹄疫檢疫及免疫群體疫苗效力評(píng)估中發(fā)揮重要作用，其中病毒中和試驗(yàn)（VNT）是口蹄疫血清學(xué)檢測(cè)的“黃金標(biāo)準(zhǔn)”，但該試驗(yàn)需要使用口蹄疫活病毒，按照國(guó)家規(guī)定必須在有相關(guān)研究資質(zhì)的生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行操作，這就限制了絕大多數(shù)普通實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)使用。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的快速發(fā)展，目前國(guó)內(nèi)外已成功研究出一些可替代的檢測(cè)方法進(jìn)行口蹄疫疫苗免疫抗體的評(píng)估，如液相阻斷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（LPB-ELISA），該方法不使用口蹄疫活病毒，具有敏感性高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，是國(guó)際貿(mào)易中認(rèn)可的一種標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)方法，該方法最大的優(yōu)點(diǎn)是采用滅活的病毒抗原，而抗原是在液相中與抗體發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)，與病毒中和試驗(yàn)原理基本一致，因此又被稱為體外病毒中和試驗(yàn)，這種方法就可以從要求較高的專業(yè)化生物安全實(shí)驗(yàn)室走向大眾化的普通實(shí)驗(yàn)室來推廣使用[3-4]。此外，固相競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（SPCELISA）也是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）指定的口蹄疫血清學(xué)檢測(cè)評(píng)估方法之一，也是我國(guó)口蹄疫診斷技術(shù)（GB T18935-2018）中推薦使用的檢測(cè)方法。這種方法除具備液相阻斷ELISA 的優(yōu)點(diǎn)以外，其檢測(cè)特異性更好、操作更簡(jiǎn)單、重復(fù)性更好，目前也在口蹄疫流行病學(xué)調(diào)查及疫苗免疫抗體監(jiān)測(cè)等方面廣泛使用[5-6]。

本試驗(yàn)旨在通過對(duì)278 份疫苗免疫臨床血清樣品進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)比評(píng)估7 個(gè)企業(yè)生產(chǎn)的口蹄疫抗體檢測(cè)試劑盒的性能，檢測(cè)結(jié)果顯示，企業(yè)A、企業(yè)B 及企業(yè)D 生產(chǎn)的試劑盒對(duì)臨床血清的檢測(cè)結(jié)果，無論是O 型抗體還是A 型抗體，其抗體陽性率和離散度等主要評(píng)估指標(biāo)均相對(duì)較好，而其他企業(yè)生產(chǎn)的試劑盒的檢測(cè)結(jié)果相對(duì)較差，尤其是一免血清抗體檢測(cè)結(jié)果，不同企業(yè)試劑盒的檢測(cè)結(jié)果差異比較大，這可能與試劑盒的特異性、敏感性、檢測(cè)反應(yīng)體系或者包被的口蹄疫抗原種類等諸多因素有關(guān)，這些試劑盒的檢測(cè)性能還有待進(jìn)一步優(yōu)化提升，從而確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性；而二免血清抗體檢測(cè)結(jié)果均相對(duì)較好，大多數(shù)企業(yè)生產(chǎn)的試劑盒都可以檢測(cè)評(píng)估。

目前，我國(guó)對(duì)于包括口蹄疫診斷試劑在內(nèi)的大多數(shù)獸用診斷生物制品還沒有制定統(tǒng)一明確的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。因此，現(xiàn)有口蹄疫診斷制品還存在諸多問題，如生產(chǎn)企業(yè)多且大多數(shù)資質(zhì)不健全；各企業(yè)試劑盒包被的口蹄疫病毒抗原不同、檢測(cè)反應(yīng)體系不同，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果差異較大，從而不能有效對(duì)口蹄疫疫苗免疫抗體進(jìn)行科學(xué)評(píng)價(jià)，導(dǎo)致豬場(chǎng)免疫程序制定困難，或者需要反復(fù)調(diào)整，甚至造成免疫失敗。因此，養(yǎng)殖場(chǎng)需要結(jié)合本場(chǎng)實(shí)際情況，通過對(duì)口蹄疫抗體檢測(cè)試劑盒比對(duì)篩選，同時(shí)還可以結(jié)合口蹄疫疫苗有效146S 抗原含量、總蛋白含量、內(nèi)毒素含量等關(guān)鍵技術(shù)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果形成一套相對(duì)可靠的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，以便制定科學(xué)合理的免疫程序，保障疫苗的免疫效果。