王 雷 劉 暉 景雪梅 茍登科 淡媛媛 劉 亮 陶 軍

（天水眾興菌業(yè)科技股份有限公司，甘肅 天水 741000）

金針菇（Flammulina velutipes）又名構(gòu)菌、冬菇、毛柄金錢菌等[1,2]，屬木腐菌類，是我國重要的栽培食用菌之一，工廠化栽培規(guī)模已穩(wěn)居世界首位[3]。金針菇在工廠化栽培過程中，常出現(xiàn)菌絲老化、出菇不整齊、出菇延遲、產(chǎn)量嚴(yán)重下降等現(xiàn)象，這些現(xiàn)象大多是由菌種種性退化造成的[4]。造成菌種退化的原因較多，包括核型改變、基因突變、菌株無性繁殖體感染病毒、細(xì)胞內(nèi)酶合成能力下降等；還有受菌種自身遺傳多樣性、營養(yǎng)不良、無限傳代、長期低溫保藏等因素的影響[5,6]。為保持菌種的穩(wěn)定性，生產(chǎn)上多采用蒸餾水、液氮等保藏技術(shù)來抑制菌絲的無性生長；如果保存操作不當(dāng)，也會對菌種造成損傷，導(dǎo)致種性退化[7-9]。

目前，金針菇菌種一般采用PDA 培養(yǎng)基進(jìn)行傳代培養(yǎng)，雖然方便省時(shí)，成活率高，但成本較高。與PDA 培養(yǎng)基相比，木屑培養(yǎng)基含有木腐菌所必需的纖維素、半纖維素和木質(zhì)素等營養(yǎng)物質(zhì)，對菌絲各種酶的活性有保持和促進(jìn)作用，能減緩菌絲老化，有利于保持菌株原有的特性和活力[10]。木屑培養(yǎng)基還具有較強(qiáng)的保水能力，使得菌絲在保藏過程中不會因失水而降低活性。食用菌菌種復(fù)壯的方法主要有傳統(tǒng)的組織分離法、菌絲尖端分離法、原生質(zhì)體再生法等[4]。關(guān)于木屑培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)保持金針菇菌種穩(wěn)定性的方法研究較為少見。本研究以選取的11 個(gè)白色金針菇菌株為對象，采用木屑培養(yǎng)基對其菌種進(jìn)行復(fù)壯培養(yǎng)，通過測定其菌絲生長速度、子實(shí)體農(nóng)藝性狀及子實(shí)體品質(zhì)等指標(biāo)，探究木屑培養(yǎng)基對傳代金針菇菌種的復(fù)壯效果。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試白色金針菇菌株共11 個(gè)（表1），均由天水眾興菌業(yè)科技股份有限公司研發(fā)中心提供。

1.2 培養(yǎng)基配方

木屑培養(yǎng)基：木屑48 g，葡萄糖5 g，麩皮45 g，米糠5 g，蛋白胨 5 g，KH2PO40.5 g，MgSO40.5 g，豆粕8 g，維生素B10.067 g，水130 mL。每試管（20 mL）裝7 g。母種培養(yǎng)基：PDA 培養(yǎng)基（來源于日本）39 g，水1 000 mL。液體培養(yǎng)基：白砂糖12.8 g，豆粕2.11 g，MgSO40.42 g，KH2PO40.42 g，水640 mL，pH 6.3～7.3。每三角瓶（1 L）裝640 mL。栽培料（干料）配比：玉米芯34.5%，麩皮8.1%，米糠36.1%，大豆皮5.1%，棉籽殼5.1%，啤酒糟5.1%，貝殼粉1.7%，甜菜渣3.6%，碳酸鈣0.7%，含水量為66%～67%。

1.3 液體菌種的制作

從長滿菌絲的PDA 培養(yǎng)基上切取6 塊邊長為4 mm 的菌種塊，接入三角瓶液體培養(yǎng)基中，在黑暗、19 ℃、150 r/min 條件下振蕩培養(yǎng)7 天。

1.4 測定指標(biāo)及方法

（1）菌絲生長速度。參考楊慧等[11]的方法，稍作修改。從母種試管中切取邊長為2 mm 的菌種塊轉(zhuǎn)接至木屑培養(yǎng)基（試驗(yàn)組）和PDA 培養(yǎng)基（對照組）上，在19～20 ℃、空氣相對濕度60%～70%下避光培養(yǎng)10 天，定時(shí)觀察試驗(yàn)組與對照組的菌絲生長情況并測量菌落半徑。每個(gè)菌株設(shè)3 次重復(fù)，每重復(fù)4 個(gè)平板。計(jì)算菌絲日平均生長速度。

（2）子實(shí)體農(nóng)藝性狀。將試驗(yàn)組和對照組的11 個(gè)菌株按照工廠化瓶栽模式栽培，栽培瓶容積為1 500 mL，每瓶裝培養(yǎng)料1 120～1 190 g（以濕料計(jì)）。經(jīng)121 ℃高壓滅菌，待瓶體冷卻至低于20 ℃后，采用液體菌種發(fā)酵罐培養(yǎng)8 天后進(jìn)行接種，接種量為40 mL，每個(gè)菌株接種3 筐，每筐16瓶。于14～18 ℃、空氣相對濕度70%～80%條件下避光培養(yǎng)23 天后搔菌，移入育菇房。按照常規(guī)工廠化調(diào)控方法進(jìn)行培育，經(jīng)過菌絲恢復(fù)期、出芽期、抑制期、生長期，共27 天左右采收。分別測定試驗(yàn)組與對照組的單瓶產(chǎn)量、菌蓋直徑、干爽度、切根面白度、根部緊實(shí)度和菌柄硬度等。

1.5 數(shù)據(jù)分析

利用SPSS 26 進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 木屑培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌株菌絲生長特性

11 個(gè)供試菌株在木屑培養(yǎng)基復(fù)壯培養(yǎng)下的菌絲生長速度測定結(jié)果見表1。1225③、816-1S、CF-2、Q10、Q19-1D、Q2004-1S、Q2004-2S、T-0415②等8 個(gè)菌株的菌絲生長速度均有不同程度的提高，Q30、ZY-10、ZY-14 在處理前后無明顯變化。其中，菌株1225③和T-0415②經(jīng)木屑培養(yǎng)基復(fù)壯的3 次重復(fù)的菌絲生長速度均顯著高于對照；CF-2、Q19-1D、Q2004-1S 等3 個(gè)菌株有2 次重復(fù)顯著高于對照；菌株816-1S、Q10、Q2004-2S 僅有1 次重復(fù)顯著高于對照。

表1 不同處理11 個(gè)白色金針菇菌株的菌絲生長情況

從菌絲長勢方面看，經(jīng)木屑培養(yǎng)基復(fù)壯后，菌株Q10 和Q30 的各重復(fù)菌絲長勢均優(yōu)于對照；菌株816-1S 和Q2004-2S 有2 次重復(fù)優(yōu)于對照；而菌株Q19D 有2 次重復(fù)的長勢比對照差；其余6 個(gè)菌株在培養(yǎng)前后菌絲長勢差異不明顯。

綜上，木屑培養(yǎng)基復(fù)壯培養(yǎng)能顯著提高大部分菌株的菌絲生長速度，但對菌絲長勢的促進(jìn)作用不明顯，僅對個(gè)別菌株有效果。

2.2 木屑培養(yǎng)基處理的子實(shí)體農(nóng)藝性狀表現(xiàn)

11 個(gè)菌株的單瓶產(chǎn)量和菌蓋直徑測定結(jié)果見表2。其中，1225③、Q2004-1S 和Q2004-2S 等3個(gè)菌株經(jīng)木屑培養(yǎng)基復(fù)壯后，3 次重復(fù)的單瓶產(chǎn)量均顯著高于對照，菌蓋直徑為4.0～10.0 mm，與對照比差異不明顯；CF-2、Q19-1D、Q30 和ZY-10等4 個(gè)菌株的平均單瓶產(chǎn)量有2次重復(fù)顯著高于對照，菌蓋直徑為4.0～12.0 mm，與對照相比也無明顯差異；其余的菌株816-1S、Q10、T-0415②和ZY-14 僅有1 個(gè)重復(fù)的平均單瓶產(chǎn)量顯著高于對照。

表2 11 個(gè)白色金針菇菌株經(jīng)木屑培養(yǎng)基復(fù)壯后的子實(shí)體農(nóng)藝性狀

綜上，木屑培養(yǎng)基復(fù)壯處理能夠顯著提高大部分菌株的子實(shí)體產(chǎn)量，但對菌蓋直徑的影響不明顯。

一般認(rèn)為，白色金針菇子實(shí)體的菌蓋越小，菇體越干爽，切根面越白，根部越緊實(shí)，菌柄越硬，則農(nóng)藝性狀越佳。由表3 可知，11 個(gè)白色金針菇菌株經(jīng)木屑培養(yǎng)基復(fù)壯后，以菌株T-0415②的菌蓋較大，切根面白度稍差，為較白凈，其總體栽培農(nóng)藝性狀較差，但也能達(dá)到采收標(biāo)準(zhǔn)；其余菌株的子實(shí)體菌蓋大小、干爽度、切根面白度、根部緊實(shí)度及菌柄硬度均表現(xiàn)較好。表明木屑培養(yǎng)基復(fù)壯處理對絕大多數(shù)菌株的子實(shí)體品質(zhì)有明顯的改善作用。

表3 11 個(gè)金針菇菌株經(jīng)木屑培養(yǎng)基復(fù)壯后的子實(shí)體品質(zhì)

3 結(jié)論與討論

在金針菇工廠化生產(chǎn)中，一個(gè)菌株需要多次的傳代培養(yǎng)才能滿足生產(chǎn)需求，現(xiàn)有菌種培養(yǎng)工藝多采用PDA 培養(yǎng)基進(jìn)行傳代培養(yǎng)。雖然PDA 培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富，但長期單一營養(yǎng)配方不利于促進(jìn)菌絲胞外酶的分解。此外，繼代培養(yǎng)時(shí)菌種一直處于活躍的細(xì)胞生長和復(fù)制狀態(tài)，菌絲細(xì)胞需要經(jīng)歷染色體復(fù)制、細(xì)胞核遷移、粉孢子形成、體細(xì)胞單核化等一系列生理活動(dòng)，這些生理活動(dòng)均會影響金針菇菌種的種性[12]。而金針菇母種的穩(wěn)定性直接影響其品質(zhì)和單產(chǎn)，因此，如何減緩菌種種性退化是金針菇產(chǎn)業(yè)發(fā)展中急需解決的問題。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)過木屑培養(yǎng)基復(fù)壯后，菌株1225③和T-0415②的菌絲生長速度顯著高于對照，且大多數(shù)菌株的菌絲生長速度均能提高，但僅對個(gè)別菌株的菌絲長勢有促進(jìn)作用；菌株1225③、Q2004-1S 和Q2004-2S 的平均產(chǎn)量顯著高于對照，大部分菌株的單產(chǎn)都得到提升，但對菌蓋直徑?jīng)]有明顯的作用；大部分菌株的子實(shí)體農(nóng)藝性狀表現(xiàn)較好，表明復(fù)壯效果明顯。

試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，個(gè)別菌株經(jīng)過木屑培養(yǎng)基復(fù)壯后，與對照相比，出菇的畸形菇數(shù)量較少，說明在同一栽培瓶內(nèi)的菌種一致性較好。因此，木屑培養(yǎng)基可使金針菇菌種達(dá)到一定的復(fù)壯效果，且能使大多數(shù)菌株保持較好的穩(wěn)定性，可在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。