萬 娟，吳亞姍，楊力強

廣西中醫(yī)藥大學，廣西 南寧 530200

方劑是中醫(yī)學醫(yī)療體系中理、法、方、藥的重要組成部分，是維系中醫(yī)基礎醫(yī)學和臨床診治的關鍵。方劑組方以臨床辨證審因、明確具體治法為構成依據(jù)，且藥物配伍的合理性與方劑的整體療效息息相關[1］。對方劑進行配伍研究是方劑學的重點課題，而實驗研究可為方劑配伍的科學性及有效性提供有力證據(jù)，同時促進方劑在臨床上的應用。本文將從藥效物質基礎研究、中藥復方藥代動力學研究、作用機制研究、拆方研究和方劑有效組分配伍研究等方面逐一論述。

1 藥效物質基礎研究

與單味中藥相比較，復方中所含的化學成分更為復雜。方劑配伍具有增效減毒的作用，可在配伍過程中產(chǎn)生物理或化學反應，影響方中有效、有毒成分的溶出率，或催生新的化合物，亦或無任何明顯的影響[2］。方藥中化學成分的性質及其量比，決定了該方的臨床治療效果，故對復方中藥效物質進行分析是方劑配伍研究的基本內容。

1.1 水煎液中所含化學成分研究淫羊藿首載于《神農本草經(jīng)》，具有補肝腎、強筋骨、祛風濕之功。淫羊藿水煎液中主要活性成分提取率較低，但在配伍甘草后有利于其主要化學成分的溶出，且當淫羊藿與甘草的比例為5∶1 時，淫羊藿苷等成分含量最高[3-4］。黃連解毒湯由黃連、黃芩、黃柏、梔子組成，為清熱解毒的基礎方，選取黃連解毒湯中的黃連堿、小檗堿、藥根堿、巴馬汀、黃芩苷、梔子苷為指標進行研究，結果發(fā)現(xiàn)這些成分在全方共煎時比單味藥煎煮時要低[5-6］。而在藥效學研究中，黃連解毒湯作用卻明顯優(yōu)于各單藥組[7］。因此推斷出當方中有效成分的相對含量達到特定比例時方可發(fā)揮最大藥效，而并非各味藥物有效成分含量均達到最佳。此外，若發(fā)生藥味增減或相對含量變化則影響整體藥效[5］。

1.2 血清中移行成分研究雖然方劑中所含化學成分復雜，但部分學者提出只有入血并成為有效成分的物質才能用于方劑配伍規(guī)律研究。“血清藥化學”是20 世紀80 年代末，田代真一初步提出的概念，隨后王喜軍在此基礎上進一步提出了“中藥血清藥物化學”理論及研究方法[8］。該方法是以口服中藥后的血清為研究對象，分離、鑒定出血清中的移行成分，并將其與藥物療效進行相關性分析[9］。

郭司群等[10］將空白血清樣品與地黃飲子灌藥后血清樣品進行比較，從中發(fā)現(xiàn)了9 個血中移行成分。楊波等[11］在對酸棗仁湯不同配伍下的體內樣品進行分析時，發(fā)現(xiàn)9 個血中移行成分，且只有在全方配伍時才能被機體選擇性吸收，認定這些成分是在體內直接發(fā)揮作用的主要物質。李先娜等[12］發(fā)現(xiàn)關黃柏在知柏地黃丸等類方配伍環(huán)境下的血中移行成分在體內吸收情況各不相同，并借助實驗闡明了關黃柏在復方中的配伍規(guī)律及其發(fā)揮不同功效的體內潛在藥效物質基礎。

2 中藥復方藥物代謝動力學研究

藥物代謝動力學（簡稱藥代動力學或藥動學）即研究藥物在進入機體環(huán)境后發(fā)生的變化及其規(guī)律，主要內容包括：藥物在體內被吸收、散布、代謝及排泄的過程。而中藥復方藥代動力學則是應用藥代動力學原理來研究中藥復方在體內的運動過程及動力學規(guī)律[13］，常用研究方法有血藥濃度法、生物效應法[14］。

四逆散始見于《傷寒論》，為調和肝脾之基礎方。研究表明，四逆散水煎液中主要成分為柴胡皂苷a、芍藥苷、柚皮苷、橙皮苷、甘草酸等[15］。馬裔美等[16］選取四逆散中有效成分柴胡皂苷a 為指標，測定其在不同配伍下大鼠體內的藥代動力學參數(shù)時，發(fā)現(xiàn)白芍與柴胡配伍后可明顯提高柴胡皂苷a 在大鼠體內的最大濃度；炙甘草與柴胡配伍不僅可提高柴胡皂苷a 在大鼠體內的最大濃度，還可延長其在體內的半衰期；枳實單獨與柴胡配伍對柴胡皂苷a 在大鼠體內環(huán)境變化無明顯影響，但與芍藥、甘草合用后可明顯延長柴胡皂苷a的半衰期；全方組中柴胡皂苷a 的吸收率及血藥濃度維持最佳。李惠楊等[17］從藥動學角度探討四逆散藥物配伍間的協(xié)同作用，測定大鼠血漿中芍藥苷在四逆散不同配伍組中的藥動學參數(shù)變化，發(fā)現(xiàn)當四逆散中四味藥共同配伍時，可明顯延長芍藥苷的半衰期，使藥效更加穩(wěn)定持久，并通過各配伍組的藥動力學參數(shù)證明了其君、臣、佐、使結構配伍的合理性。

3 方藥作用機制研究

方劑作用機制的研究逐漸從分子生物學水平上升到系統(tǒng)生物學層次。系統(tǒng)生物學是在整體水平上研究機體內形態(tài)結構和功能各異的生物分子，探索其相互作用，并運用計算生物學進行建模，來闡明和預測生物功能、表型及其行為。這與以往的分子生物學相比，更具有整體性、動態(tài)性，與方劑“多成分、多靶點、多環(huán)節(jié)”整合調節(jié)效應的特點相吻合[18］。其組學技術平臺主要有基因組學、轉錄組學、蛋白質組學和代謝組學等[19］，多組學技術交叉運用，從多層次探究方劑配伍作用機制及其規(guī)律。

3.1 基因組學研究基因組學的研究對象是生物體內基因組的全部基因，其目的是在整體水平上探索全基因組在生命活動中的作用及其內在規(guī)律和內外環(huán)境影響機制[19］。復方基因組學是將中醫(yī)藥理論與現(xiàn)代分子生物學結合起來，運用現(xiàn)代生物技術，在微觀基因組上研究中醫(yī)證型，并探求復方在基因組上的作用靶點及規(guī)律[20］。如耿姍等[21］探討雷公藤復方配伍減輕雷公藤肝臟毒性的作用及分子機制時，采用基因芯片檢測大鼠肝臟基因表達譜，將雷公藤組與正常組間的基因表達譜進行比較，篩選出22 932個差異基因，并發(fā)現(xiàn)這些基因主要涉及細胞色素酶P450代謝、脂質代謝、PPAR 信號通路、細胞凋亡等方面。胡晶晶等[22］應用基因表達譜芯片研究麝香保心丸、雙龍方對心肌梗死的藥效機制，從9 張芯片中篩選出差異表達基因224 個，依據(jù)基因的生物學功能，發(fā)現(xiàn)其主要涉及能量代謝相關的酶活性、糖酵解/糖質新生等通路。

3.2 轉錄組學研究轉錄組學是在整體水平上研究細胞中基因轉錄情況及調控規(guī)律，以mRNA 表達為指標，研究復方對基因轉錄的調控作用。羅新新等[23］在研究葛根芩連湯對糖尿病大鼠模型的藥效機制時，提取大鼠脂肪組織總RNA，將葛根芩連湯組與模型組進行比較，發(fā)現(xiàn)可明顯上調PPARγ、ADPN、GLUT4 等基因的mRNA 水平。朱原等[24］建立腦缺血再灌注大鼠模型研究補陽還五湯的作用機制，提取海馬組織中的總RNA 進行純度分析，并檢測海馬組織中PTEN mRNA表達情況，通過與模型組進行比較，發(fā)現(xiàn)補陽還五湯可下調其病理性過度表達。

3.3 蛋白組學研究蛋白質組學是以生物體內不同時間、環(huán)境的所有蛋白質為研究對象，從整體上研究蛋白質的種類、相互作用及功能結構，其側重于蛋白質類型與數(shù)量在不同種類、不同時間和條件下的動態(tài)本質，從而在整體水平上闡明生命現(xiàn)象的本質和活動規(guī)律[25］。復方蛋白組學是以蛋白表達為指標，研究復方對蛋白的調控改變和功能修飾作用。王艷等[26］研究有效組分配伍的四逆湯對甲減SD 大鼠的治療作用及蛋白組學研究時，運用雙向凝膠電泳技術測定血清蛋白質組學差異，發(fā)現(xiàn)：模型組有34個表達上調的蛋白、67個表達下調的蛋白，而9.6 g/kg 劑量組可將其中14 個表達上調的蛋白水平下調，7 個表達下調的蛋白水平上調。周昕等[27］考察黃連吳茱萸組分配伍對高脂血癥大鼠JAK2/STAT3 通路的影響時，采用Western blot 法檢測各組大鼠肝臟中Ob-Rb、JAK2、及STAT3 蛋白表達，與模型對照組比較，發(fā)現(xiàn)高脂血癥模型大鼠在黃連吳茱萸組分配伍干預后，肝臟中Ob-Rb、JAK2和STAT3蛋白表達升高。

3.4 復方代謝組學研究復方代謝組學是分析機體在不同配伍下中藥復方所產(chǎn)生的內源性代謝物變化情況，通過分析其中的原因，找尋相關的生物標志物，從而闡明方劑配伍規(guī)律[28］。黃張杰等[29］研究補中益氣湯原方、去“升麻-柴胡”和倍“升麻-柴胡”的配比組方對脾虛證大鼠模型尿液代謝各型變化的影響，采用核磁共振氫譜分析大鼠尿液的代謝譜，發(fā)現(xiàn)模型組的代謝譜發(fā)生了明顯的變化，從中篩選出了與脾虛證相關的代謝產(chǎn)物8種，而補中益氣湯對其中6種代謝物水平變化有較大的逆轉作用，且作用趨勢優(yōu)于各配比組。補中益氣湯原方對脾虛證大鼠的代謝恢復調節(jié)作用效果最佳，證實了原方中“升麻-柴胡”劑量配比的合理性。楊波等[30］基于尿液代謝組學對附子毒性及附子配伍甘草后的減毒作用進行系統(tǒng)研究。他比較了附子與甘草配伍前后大鼠體內的毒性生物標記物表達水平，確定了與附子毒性相關的12個生物標記物及與之相關的6 條代謝通路，發(fā)現(xiàn)附子配伍甘草后可對其中10 個毒性生物標記物進行回調，從代謝產(chǎn)物角度揭示了中藥配伍減毒的科學性。

4 拆方研究

拆方研究是方劑學現(xiàn)代化實驗研究的主要方法之一，該研究能夠對復方組方配伍結構的科學性進行有效闡明，尋找方中藥物的最佳配伍比例，因此對方劑配伍規(guī)律研究具有較高的適應性[31］。目前，拆方研究主要分為兩類，一類是在中醫(yī)理論指導下，根據(jù)方劑配伍的組方原則或中藥性味功效拆方；另一類是在數(shù)學設計模式指導下拆方[32-33］。

4.1 中醫(yī)藥理論指導下的拆方研究

4.1.1 按君臣佐使組方原則分組拆方 君臣佐使是方劑組成的基本結構，按君、臣、佐、使對復方進行拆方研究，有助于闡明方劑配伍結構的合理性，進而論證君臣佐使理論的科學性。縮泉丸具有溫腎、縮尿、止遺之效。方中以益智仁為君，烏藥為臣，山藥為佐。研究者[34］將縮泉丸分為縮泉丸組、益智仁組、烏藥組、山藥組、去益智仁組、去烏藥組、去山藥組，同時建立D-半乳糖誘導的亞急性衰老大鼠模型，以探討縮泉丸中各位藥物的地位及其作用機制。結果表明縮泉丸全方組療效明顯優(yōu)于各藥物干預組。方中益智仁具有顯著的調節(jié)尿液生成、儲存和排泄異常等作用，為君藥；烏藥在尿液生成過程中起重要的調節(jié)作用，配伍益智仁后可增強功效，然其在改善衰老膀胱功能上效果稍差，為臣藥；山藥可明顯改善衰老膀胱的功能，但不影響尿液生成，與烏藥配伍后可增強整體藥效，且其所含山藥多糖具有一定的抗衰老作用，為佐藥。

4.1.2 根據(jù)中藥性味分組拆方 寒者熱之，熱者寒之，中藥的性味為方劑配伍過程中考量的重要因素之一。因此，按中藥性味對復方進行拆方，對于剖析復方配伍的嚴謹性具有重要意義。時丹丹等[35］將半夏瀉心湯拆分為寒熱并用組、辛溫組、甘調組及苦降組，研究半夏瀉心湯與各拆方組對潰瘍性結腸炎模型大鼠結腸組織中腫瘤壞死因子α、白細胞介素1、髓過氧化物酶、前列腺素E2等炎癥相關性細胞因子的影響。發(fā)現(xiàn)半夏瀉心湯可有效降低炎癥因子，優(yōu)于各拆方組，突出了該方的嚴謹性、科學性。

4.1.3 根據(jù)中藥功效分組拆方《醫(yī)學源流論》云：“藥有個性之專長，方有合群之妙用”，藥物經(jīng)過有序配伍后可調其偏勝，從而發(fā)揮出更好的療效。富曉旭等[36］在研究參芪復方及其拆方組對KK-Ay 小鼠糖尿病大血管病變組織的影響時，將其依據(jù)組方功效拆分為益氣養(yǎng)陰組與活血組，以分析參芪復方配伍的合理性和科學性，結果發(fā)現(xiàn)參芪復方全方組對機體的調節(jié)作用優(yōu)于兩拆方組作用之和。

4.1.4 根據(jù)藥對分組拆方 藥對是方劑配伍中的最簡組合，陶偉偉等[37］以藥對研究為切入點，將越鞠丸依次拆分為不同中藥藥對組合，以研究其抗抑郁作用機制及配伍規(guī)律，發(fā)現(xiàn)越鞠丸中發(fā)揮抗抑郁作用的關鍵藥對為梔子-川芎。

4.2 數(shù)學設計模式指導下的拆方研究

4.2.1 正交設計法 寧黎麗等[38］借助正交試驗法在吳茱萸湯原方的基礎上組成9 個藥量配比不同的處方，并采用高效液相色譜法對其水煎醇沉液進行分析，確定吳茱萸湯藥效的物質基礎。結果發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)生X4、X9、X10、X12 號色譜峰的化學成分為主要藥效物質基礎，且這些成分的含量與鎮(zhèn)痛、止嘔作用呈正相關。通過進一步分析吳茱萸在諸回歸方程中的回歸系數(shù)，確證了吳茱萸在方中作為君藥的地位。

4.2.2 正交t值法 楊鑫等[39］采用正交t值法從抗炎鎮(zhèn)痛兩方面藥理作用初步篩選出桂枝芍藥知母湯中起主要作用的藥物，結果表明方中白芍、麻黃、制附子、炙甘草為治療類風濕關節(jié)炎的主要藥物。

4.2.3 均勻設計法 汪世靖等[40］采用均勻設計法對中藥復方肝豆湯保護TX 小鼠神經(jīng)細胞的效應中藥進行篩選，結果發(fā)現(xiàn)方中大黃、姜黃、黃連、澤瀉、金錢草的配伍組合可通過多靶點保護TX 小鼠神經(jīng)細胞，而三七未發(fā)揮明顯效應。

4.2.4 析因設計法 劉燁等[41］基于析因設計研究黃芪葛根湯在糖尿病大鼠模型中的作用機制，并分析黃芪、葛根在調節(jié)糖尿病過程中的交互關系，結果發(fā)現(xiàn)：在下調血糖方面，葛根效果佳，與黃芪無交互作用，二藥配伍未呈現(xiàn)藥效疊加效應；在綜合調節(jié)血清膽固醇、總膽固醇及肝組織白細胞介素12、白細胞介素15 水平方面，黃芪葛根湯優(yōu)于單味藥。

5 有效組分配伍研究

有效組分配伍是傳統(tǒng)方劑配伍理論與現(xiàn)代化科學技術相結合的產(chǎn)物，是在明確有效成分、作用機制和靶點的基礎上，按照中醫(yī)藥基礎理論的指導選取有效成分組方，既堅持了中醫(yī)藥整體觀，又保留了中藥復方多靶點、多環(huán)節(jié)、多渠道的綜合療效優(yōu)勢[42］。有效組分配伍雖然不能取代傳統(tǒng)方劑配伍，但對于闡釋方劑配伍的合理性仍具有重大意義。中藥復方有效組分配伍實現(xiàn)的基本方法包括單味藥標準組分配伍、中藥復方有效組分配伍、構成復方的有效組分配伍、針對病理環(huán)節(jié)的有效組分配伍[43］。

王虎平等[44］通過實驗研究發(fā)現(xiàn)當歸有效組分配伍對于阿爾茨海默?。╝lzheimer disease，AD）模型大鼠的學習記憶能力有改善作用，推斷其可能對AD 有防治作用。通過配伍優(yōu)選結果，發(fā)現(xiàn)當1 mL當歸有效組分配伍藥液中含當歸多糖0.0176 g、當歸揮發(fā)油0.004 4 mL、阿魏酸0.001 2 g 時，可最大程度上改善AD 模型大鼠學習記憶能力。李靜嫻等[45］發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷和三七總皂苷單用或配伍均可縮小腦缺血再灌注損傷模型大鼠的腦梗死面積，降低神經(jīng)功能缺失行為學評分，改善腦缺血后病理形態(tài)變化，但配伍后的效應強于二者單用。在藥動學實驗中，發(fā)現(xiàn)將兩者配伍后，可延長藥物在腦缺血狀態(tài)下的體內滯留時間，增加生物利用度。陳少麗等[46］通過實驗驗證下瘀血湯組分配伍對免疫性肝纖維化模型大鼠的肝細胞具有保護作用。

6 思考與展望

方劑配伍是中醫(yī)藥理論體系指導下的特色所在，挖掘其配伍規(guī)律的研究不僅有助于闡明中醫(yī)藥基礎理論的科學性，同時也是中醫(yī)藥走上現(xiàn)代化、走向世界的必經(jīng)之路。方劑配伍實驗研究從20 世紀50 年代開始，其思維模式已基本固定，從中藥復方本身到實驗對象，從整體療效到分子水平上的作用靶點，已取得一定的進展，但仍有一些問題值得關注。

筆者在此提出如下看法：首先，可借助現(xiàn)代化的技術、西醫(yī)藥的研究思路和方法，但不能完全照搬，脫離了中醫(yī)藥理論的指導，應靈活運用，逐步形成有特色的現(xiàn)代化中醫(yī)藥研究體系；其次，不能忽視實驗過程中動物中醫(yī)證候模型的建立問題，應盡量做到病證結合、方證相應；第三，方劑配伍實驗研究仍須以指導臨床合理組方為主要目的，挖掘其中配伍規(guī)律與潛在作用機制，擴大臨床上的適用病證；第四，“網(wǎng)絡藥理學”理念的提出為構建一個系統(tǒng)性的中醫(yī)藥平臺提供了思路，各中醫(yī)藥研究者可將前期所得成果錄入該平臺，從而篩選出新指標進行研究，再將研究所得錄入，如此反復。這不僅能將節(jié)省研究者的工作量，還能集大家之所成，從整體層面探討出方劑配伍的嚴謹性，并挖掘其中的配伍規(guī)律。