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        生物活性炭使用過程中微生物群落變化規(guī)律及其對凈化效能的影響

        2022-12-15 08:34:06李聰聰許展鵬馮昌龍
        凈水技術(shù) 2022年12期
        關(guān)鍵詞:生物膜氨氮生物量

        李聰聰,劉 成,*,蘭 童,許展鵬,馮昌龍,陳 衛(wèi)

        (1.河海大學(xué)淺水湖泊綜合治理與資源開發(fā)教育部重點實驗室,江蘇南京 210098;2.河海大學(xué)環(huán)境學(xué)院,江蘇南京 210098)

        臭氧-生物活性炭技術(shù)是目前國內(nèi)應(yīng)用最廣泛的深度處理技術(shù)之一,對提升城市供水水質(zhì)具有重要的作用,其中,生物活性炭(BAC)工藝單元對工藝及水廠出水具有明顯的保障作用。一般認(rèn)為BAC工藝單元是通過活性炭吸附、微生物降解及其協(xié)同作用來去除水中污染物,且在不同階段各途徑的貢獻存在一定差異[1]。當(dāng)BAC使用時間較長時(尤其是使用3~5年之后),其吸附性能弱化,生物降解作用在水中污染物去除過程中發(fā)揮主導(dǎo)作用[2-3]。然而,在實際應(yīng)用中也發(fā)現(xiàn)使用時間超過3~5年后,其生物量基本維持穩(wěn)定的情況下,BAC的凈化效能隨使用時間整體呈現(xiàn)下降趨勢[4-6],微生物群落結(jié)構(gòu)及功能微生物比例的改變可能是關(guān)鍵因素。部分研究結(jié)果表明,BAC表面定殖的種類繁多,并明確不同炭池具體微生物組成種類,就豐度而言,變形桿菌門(Proteobacteria)、酸桿菌門(Acidobacteria)等是BAC生物膜的優(yōu)勢菌[7],但針對BAC整個使用時間范圍內(nèi)微生物種群結(jié)構(gòu)變化規(guī)律尚沒有系統(tǒng)的研究。因此,本文采用中試試驗裝置對0~10年BAC顆粒上附著微生物群落特征的演變過程進行解析,比較了不同使用年限BAC顆粒上微生物群落的分類和系統(tǒng)發(fā)育,結(jié)合進出水水質(zhì)的變化情況,明確BAC應(yīng)用過程中的微生物群落演替規(guī)律及其對BAC凈化性能的影響。論文研究結(jié)果將為水廠BAC工藝的應(yīng)用及失效節(jié)點判定提供一定的參考。

        1 材料和方法

        1.1 試驗裝置及運行條件

        BAC樣品采自以太湖水為原水的3個水廠(XL、ZQ、XD)的活性炭池,共收集了1、3、5、7年和9年5個使用時間的炭樣(BAC池表層以下300 mm處),分別填充到中試裝置的炭柱中(中試試驗裝置如圖1所示),炭柱直徑為200 mm、高度為3 500 mm,承托層高度為300 mm,炭層厚度為2 000 mm。進水為XL水廠臭氧接觸池出水(水質(zhì)參數(shù)如表1所示),采用下向流運行方式,運行參數(shù)參照XL水廠BAC池:空床接觸時間為15 min,濾速為8 m/h,反沖洗周期為7~10 d,氣沖為3 min,水沖為8 min。

        圖1 中試裝置示意圖Fig.1 Diagram of Pilot Plant

        在連續(xù)運行至第3 d和1年后,分別取表層下300 cm炭樣,并分別標(biāo)記為1年BAC(1-yr BAC)、2年BAC(2-yr BAC)、3年BAC(3-yr BAC)、4年BAC(4-yr BAC)、5年BAC(5-yr BAC)、6年BAC(6-yr BAC)、7年BAC(7-yr BAC)、8年BAC(8-yr BAC)、9年BAC(9-yr BAC)、10年BAC (10-yr BAC)。針對所采集樣品,測定其生物量、生物活性及種群結(jié)構(gòu)。裝置連續(xù)運行期間,定期取樣測定BAC柱進、出水的相關(guān)水質(zhì)指標(biāo)。

        在冬季水溫為7~10 ℃時,向進水桶投加氯化銨,使2年和10年BAC柱進水氨氮質(zhì)量濃度達到1.0~1.2 mg/L,裝置連續(xù)運行10 d,每天取BAC柱進出水測定氨氮濃度。

        表1 BAC池進水水質(zhì)參數(shù)Tab.1 Inflow Quality Parameters of BAC Filter

        1.2 分析項目及方法

        1.2.1 水質(zhì)指標(biāo)

        氨氮指標(biāo)按《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法 總則》(GB/T 5750.1—2006)檢測;DOC采用Aurora1 030W 總有機碳分析儀測定。

        1.2.2 生物指標(biāo)

        BAC的生物量和生物活性分別采用脂磷法和比好氧速率(SOUR)測定[3];微生物DNA提取采用EZNA?Soil DNA(Omega Bio-Tek,USA)試劑盒;微生物種群采用16S rRNA高通量測序分析,測序步驟及擴增子分析流程參考文獻[8]。

        1.3 數(shù)據(jù)分析方法

        微生物群落結(jié)構(gòu)主坐標(biāo)成分分析(PCoA),利用R語言的vegan的Package分析。冗余分析(RDA)利用CANOCO 5.0軟件進行分析。利用零模型探究BAC微生物群落的組裝方式。先計算獲得最近種間親緣關(guān)系指數(shù)(βNTI)和Raup-Crick 矩陣(RCbray)等參數(shù),當(dāng)βNTI值>2時,表示群落組裝過程為確定性過程;βNTI值<2時,表示群落組裝以隨機性過程為主。同時,當(dāng)RCbray值>0.95、RCbray值<-0.95及RCbray值<0.95時,分別表示隨機性過程為擴散限制、同質(zhì)擴散[9]。

        2 結(jié)果和討論

        2.1 BAC炭粒上生物量和生物活性變化趨勢

        生物量和生物活性直接反映了其生物降解效果的變化情況(圖2)。生物降解是BAC去除污染物的重要降解途徑,因此,進一步探究生物量和生物活性指標(biāo)隨使用時間的變化規(guī)律。

        圖2 BAC上(a)生物量及(b)生物活性變化Fig.2 Changes of (a)Biomass and (b) Bioactivity on BAC

        在BAC初始運行時(2年內(nèi)),生物量呈現(xiàn)線性增長,達到200 nmol P/(g BAC)。2年后生物量增長放緩,在5年后穩(wěn)定在250~350 nmol P/(g BAC)。由于微生物的附著點主要位于活性炭的大孔通道和表面,并且BAC顆粒的大孔體積和表面積是相對確定的值,因而活性炭容納的生物量勢必會存在最大限值。多數(shù)研究中,生物膜成熟穩(wěn)定后,BAC生物量穩(wěn)定在80~400 nmol P/(g BAC)[10-12],主要受進水水質(zhì)(水溫、水中有機物含量等)因素影響呈現(xiàn)一定的差異。

        BAC使用初期,生物活性隨著生物量的增加而逐漸增加,2~3年時達到最高值[0.04 mg O2/(g BAC)·h],后隨使用年限出現(xiàn)緩慢降低的趨勢。一般認(rèn)為,BAC表面微生物的生物降解活性在一定范圍內(nèi)是穩(wěn)定的[13],生物膜內(nèi)部生物活性會隨使用時間呈現(xiàn)一定的下降趨勢[14-15]。

        2.2 BAC顆粒上生物種群變化規(guī)律分析

        BAC附著微生物種群是影響其凈化效能的重要因素,因此,探究BAC微生物群落結(jié)構(gòu)隨使用年限的變化情況。

        圖3 不同使用年限BAC門水平的微生物種群組成Fig.3 Microbial Community Composition at Phylum Level of BAC under Service Lifes

        2.2.1 門水平上的變化情況

        圖4 不同使用年限BAC屬水平的生物種群組成Fig.4 Microbial Communities Composition at Genus Level of BAC under Service Lifes

        圖3為不同使用時間BAC微生物群落組成在門水平上的相對豐度。1~10年BAC的微生物群落在門水平上微生物分類組成表現(xiàn)出極大的相似性與穩(wěn)定性,但相對豐度存在明顯差異。微生物群落主要分布在以下門類中Proteobacteria、Acidobacteria和綠彎菌門(Chloroflexi),占總豐度的70%~90%,是BAC池中的主要微生物群落。在0~10年BAC中,Proteobacteria始終為門水平下的優(yōu)勢菌群,相對豐度超過40%,其碳源主要來自于有機物,故對污染物具有較強的去除作用,是維持BAC群落穩(wěn)定的主要貢獻者。此外,BAC在運行過程中,Actinobacteria和Bacteroidetes的相對豐度在1~10年分別從8.33%、6.16%下降到0.49%、1.23%。Actinobacteria能夠?qū)⒍喾N有機物作為碳源,對纖維素類物質(zhì)的降解發(fā)揮重要作用,而Bacteroidetes具有將蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和其他大分子分解為簡單化合物的功能。因此,這些微生物的減少一定程度上影響B(tài)AC生物降解功能。

        2.2.2 屬水平上的變化情況

        進一步分析不同使用年限BAC樣品屬水平上的主要微生物變化情況,結(jié)果如圖4所示。

        BAC顆粒上的微生物在屬水平上呈現(xiàn)較顯著的變化:1)根瘤菌屬(Rhizobium)、慢生根瘤菌屬(Bradyrhizobium)、阿菲波菌屬(Afipia)是常見的異養(yǎng)菌,攜帶芳香化合物降解基因并能降解不同種類的有機物,在2~4年BAC上富集,相對豐度達到7.85%、3.64%、3.63%,之后隨著使用時間延長豐度分別降至4.53%、1.76%、1.09%;2)硝化螺旋菌屬(Nitrospira)是水中脫氮過程的重要參與者,其相對豐度從3.51%下降到1.29%,會引起B(yǎng)AC氨氮凈化效能改變[16];3)博斯氏菌(Bosea)與生物膜的生物活性(SOUR)呈正相關(guān)[17],可保證微生物的降解活性和功能。在BAC微生物群落的演替中顯示Bosea出現(xiàn)明顯的下降趨勢,當(dāng)BAC使用時間超過8年時,其相對豐度降低至0.43%,故導(dǎo)致BAC生物活性減弱,影響微生物群落的功能特性;4)相比之下,一些厭氧菌屬,如紅假單胞菌屬(Rhodopseudomonas)、斯克爾曼氏菌(Skermanella)和紅游動菌屬(Rhodoplanes),在0~10年運行過程中其相對豐度分別從0.25%、0.63%、0.19%增加至2.96%、1.57%、2.04%,由此推測在運行過程中BAC生物膜逐漸形成明顯的厭氧分層結(jié)構(gòu)。此外,應(yīng)特別注意某些絲狀菌種,研究[18]報道,鮑曼不動桿菌(Acinetobacter)是典型絲狀微生物,可導(dǎo)致生物膜的老化以及BAC池堵塞,降低微生物的凈化效能。本研究發(fā)現(xiàn)Acinetobacter在使用時間較長的BAC出現(xiàn)明顯的積累,8~10年BAC中其相對豐度達到1%以上,分別為1.13%、2.05%和2.19%。

        2.2.3 生物多樣性

        表2為1~10年BAC微生物的Chao、Ace、Shannon指數(shù)。α多樣性指數(shù)結(jié)果顯示,微生物群落多樣性在1~10年呈先升高再下降趨勢,在運行2年達到最大值。群落多樣性可以確保微生物代謝能力并且可以提高微生物群落的穩(wěn)定性,故可提高污染物去除效能??紤]到β多樣性,PCoA分析探索了群落組成的總體變化,并深度解釋了約73.17%的方差(圖5)。PERMANOVA進一步證實了BAC樣品之間微生物群落組成差異的統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.001)。結(jié)果表明,不同使用時間的BAC微生物群落在第一、二維度上存在顯著差異,隨BAC使用時間的增加,各個時期不同微生物群落存在明顯分離,差異性擴大,說明微生物群落具有明顯的時間演變。

        表2 BAC微生物群落Alpha多樣性指數(shù)Tab.2 Alpha Diversity Index of BAC Microbial Communities

        圖5 對不同使用時間BAC微生物群落組成PCoAFig.5 PCoA of BAC Microbial Communities Composition under Different Service Lifes

        2.2.4 微生物群落組裝機制

        確定性和隨機性過程是被用于揭示群落構(gòu)建的兩種過程類型。確定性過程與生態(tài)選擇有關(guān),是指由非生物和生物因素決定物種的存在/缺失和相對豐度,主要包括同質(zhì)選擇和異質(zhì)選擇。隨機過程則包括物種概率分布以及物種相對豐度發(fā)生的隨機變化,包括生態(tài)漂移、均質(zhì)擴散和有限擴散。本文通過生態(tài)位寬度和零模型評估了組裝過程在微生物群落發(fā)展過程的作用。

        結(jié)果表明,不同使用時間BAC生態(tài)位寬度差異明顯,2~4年BAC生態(tài)位較寬,此后隨使用時間延長群落的生態(tài)位逐漸變窄[圖6(a)],與微生物多樣性呈相同變化趨勢。隨機過程和確定性過程對BAC微生物群落形成具有顯著影響,微生物群落結(jié)構(gòu)和功能之間的關(guān)系受群落組裝機制控制。由圖6(b)可知,有限擴散過程在1年和2年BAC群落組裝過程發(fā)揮關(guān)鍵作用(47.91%~51.63%),在3~7年BAC中,均質(zhì)擴散相對貢獻較高(39.20%~46.21%)。而同質(zhì)選擇控制了8~10年BAC中的微生物群落組裝過程(59.09%~75.63%),這可能導(dǎo)致微生物群落結(jié)構(gòu)更為相似[19]。因此,同質(zhì)選擇組裝過程降低了BAC群落多樣性,限制BAC工藝凈化性能。BAC工藝通常由人為控制,其在空間和時間上都處于被高度控制的狀態(tài),由此產(chǎn)生恒定選擇壓力,可能影響B(tài)AC生物膜群落結(jié)構(gòu)和組裝過程[20-21]。

        圖6 不同使用年限(a)BAC生態(tài)位和(b)微生物群落組裝過程Fig.6 (a) BAC Niche and (b) Microbial Community Assembly Process under Different Service Lifes

        2.3 不同使用年限BAC凈化效能變化情況

        本試驗比較了0~10年BAC運行過程中對水中污染物的去除特性和規(guī)律,針對氨氮、DOC和抗負荷沖擊能力3個方面,研究使用時間、微生物群落演替對BAC凈水效能產(chǎn)生的影響。

        2.3.1 氨氮

        BAC池進水的氨氮質(zhì)量濃度為0.07~0.11 mg/L,在運行期間波動不大[圖7(a)]。鑒于BAC對氨氮基本沒有吸附去除能力,在BAC池中,生物量和生物活性被視為氨氮去除的直接影響因素。0~2年BAC,隨著生物量和生物活性的增加,BAC對氨氮的去除性能逐漸提高。此階段的BAC對污染物的生物降解效率受生物量和生物活性影響較大。在生物膜成熟后,BAC生物量和生物活性基本保持穩(wěn)定,微生物群落是影響處理效能的關(guān)鍵因素。在2~5年對氨氮的去除效能最高,去除率為72.89%~78.30%,此階段微生物群落多樣性最高,且Nitrospira等功能微生物相對豐度較高。當(dāng)使用時間為5~8年時,BAC的氨氮去除效能出現(xiàn)下降趨勢,去除率為40%~70%,而此階段功能微生物的相對豐度呈現(xiàn)下降趨勢,且微生物多樣性降低。BAC使用時間為8~10年時,對氨氮的去除率為5.12%~40.36%。此階段功能微生物豐度和多樣性持續(xù)降低,因而對污染物去除呈現(xiàn)微弱的降解效能。在冬季時,不同使用時間的BAC對氨氮的去除率存在明顯差異,特別是10年BAC對氨氮的去除率低于10%。因此,不同使用時間的BAC對氨氮的去除效果受溫度影響程度不同,BAC可以通過調(diào)整微生物群落來影響其脫氮性能。

        圖7 不同使用年限BAC對(a)氨氮和(b)DOC去除效果變化Fig.7 Changes of (a)Ammonia Nitrogen and (b) DOC Removal Rate by BAC under Different Service Lifes

        2.3.2 有機物

        整體來看,在0~10年運行期間,BAC對DOC的去除隨運行時間呈現(xiàn)緩慢下降的趨勢,去除率從89%降至10%[圖7(b)]。一般將BAC對DOC的去除大致分為兩個階段,一個階段為活性炭初期運行(0~3個月),依靠活性炭的吸附作用對DOC的去除效果較好,去除率一般為60%以上。第二階段為生物膜成熟后直至BAC使用時間結(jié)束,主要依靠吸附作用和生物降解作用共同實現(xiàn)對DOC的去除。但在不同使用時間下,BAC的吸附作用與生物降解作用對污染物去除貢獻率不同,研究[22]認(rèn)為當(dāng)BAC使用時間超過6年,吸附作用弱化,生物降解為主導(dǎo)作用。從微生物群落結(jié)果可知,8~10年BAC的Rhizobium等功能微生物相對豐度較低以及Acinetobacter等絲狀微生物數(shù)量增加,削弱了BAC對DOC的凈化效能。

        2.3.3 不同使用年限BAC應(yīng)對氨氮負荷沖擊性能

        由2.3.1小節(jié)可知,水溫是影響B(tài)AC脫氮效能的重要因素。當(dāng)水溫降低于10 ℃時,微生物的硝化速率受到明顯抑制[23]。水溫為7~10 ℃,BAC對氨氮去除性能隨著氨氮負荷升高而變差(圖8)。相比之下,使用時間較長的BAC受負荷沖擊影響更顯著,需要更長時間來適應(yīng)低溫條件下氨氮負荷。結(jié)果顯示,當(dāng)氨氮質(zhì)量濃度大于1.0 mg/L,2年BAC和10年BAC,分別在運行2、7 d后氨氮的去除性能恢復(fù)正常。從微生物群落組裝過程結(jié)果發(fā)現(xiàn),由于同質(zhì)選擇過程為10年BAC微生物群落組裝的主導(dǎo)機制,可能導(dǎo)致微生物多樣性降低以及生態(tài)位變窄,進而對微生物代謝通路產(chǎn)生影響。因此,應(yīng)對污染物負荷沖擊時,較長使用時間的BAC微生物群落可能需要更長時間來恢復(fù)其凈化效能。

        2.4 BAC微生物種群與處理效能的RDA

        RDA(p<0.05)用于進一步評估不同使用時間BAC微生物屬水平上微生物群落結(jié)構(gòu)和凈化效能之間的關(guān)系(圖9)。結(jié)果表明,氨氮與Nitrospira、假單胞菌屬(Pseudomonas)和硝酸菌屬(Nitrobacter)數(shù)量呈正相關(guān),進一步證實了Nitrospira對BAC池氨氮去除效能的貢獻。Nitrospira可以進行完全的氨氧化,是典型的硝化細菌[16]。由2.3.1小節(jié)可知,2~5年BAC池對氨氮去除效能最高,這是由于Nitrospira豐度較高并增強了BAC池對氨氮的凈化效能。此外,Rhizobium、Bradyrhizobium和Afipia與DOC去除率呈正相關(guān),是BAC降解有機化合物的主要類群。此類功能微生物在2~5年BAC共同富集,之后,其相對豐度隨BAC使用時間呈明顯下降趨勢,故一定程度上導(dǎo)致使用時間較長的BAC對DOC凈化效能下降。由此可見,不同使用時間BAC微生物群落的功能結(jié)構(gòu)存在差異,微生物群落的演變是BAC凈化性能改變的重要原因。

        圖9 RDA揭示不同使用時間BAC污染物去除效率和微生物群落的相關(guān)性Fig.9 RDA Revealed the Correlation between Pollutants Removal Efficiency and Microbial Communities under BAC Different Service Lifes

        3 結(jié)論

        (1)本研究中BAC生物量到5年時穩(wěn)定在250~350 nmol P/(g BAC),之后在一定范圍內(nèi)波動。生物活性2年時達到最高值[0.04 mg O2/(g BAC)·h],后隨BAC的使用時間呈緩慢下降的趨勢。

        (2)Proteobacteria、Acidobacteria和Chloroflexi始終是BAC微生物群落的優(yōu)勢菌群,對維持BAC生物膜性能穩(wěn)定發(fā)揮重要的作用。隨著BAC使用時間延長微生物群落發(fā)生明顯演變,與凈水效能相關(guān)的微生物,如硝化Nitrospira、Rhizobium、Bradyrhizobium和Afipia,相對豐度隨時間延長逐漸降低,導(dǎo)致BAC池對氨氮和DOC的去除效果顯著降低。

        (3)確定過程和隨機過程驅(qū)動BAC微生物群落的聚集與發(fā)展,在BAC運行過程中,0~7年BAC群落組裝機制以隨機過程為主,7年后,組裝機制向確定過程轉(zhuǎn)變。同時,同質(zhì)選擇為8~10年BAC群落發(fā)展的主要驅(qū)動機制,占59.09%~75.63%,引起微生物群落多樣性下降。故此階段的BAC微生物群落穩(wěn)定性較差,應(yīng)對氨氮負荷沖擊能力減弱。

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