郭淑紅,田洪嶺,張麗君,王秋寶,左憲強
(1.山西農(nóng)業(yè)大學 經(jīng)濟作物研究所,山西 太原 030031;2.山西農(nóng)業(yè)大學 農(nóng)業(yè)基因資源研究中心,山西 太原 030031)
黃芩為唇形科黃芩屬植物黃芩(Scutellaria baicalensisGeorgi)的干燥根,在我國已經(jīng)有超過2 000 a的藥用歷史,是常用的傳統(tǒng)大宗藥材之一[1-2]。近年來,隨著對黃芩開發(fā)利用的不斷深入,黃芩的需求量不斷增加。在經(jīng)濟誘惑下,我國野生黃芩資源急劇減少。相關(guān)部門為保護黃芩資源的可持續(xù)利用,將黃芩列為國家三級保護野生藥材。由于野生資源日益匱乏,栽培黃芩成為人們關(guān)注的重點。山西、河北、甘肅、山東、內(nèi)蒙古等地人工栽培面積較大[3-4]。作為山西省道地藥材之一,黃芩野生資源廣泛分布于全省各地,人工種植面積亦居全國前列[5-7],其中,晉南、晉東南地區(qū)生產(chǎn)的黃芩產(chǎn)量高、品質(zhì)佳,是全省的主產(chǎn)區(qū)[8-9]。
黃芩在我國種植區(qū)域廣泛,由于黃芩種子存在種源混亂、種質(zhì)退化、優(yōu)種覆蓋率低等問題[10-13],導致黃芩藥材的質(zhì)量參差不齊,不同產(chǎn)地黃芩品質(zhì)差異顯著,藥材品質(zhì)的優(yōu)劣直接影響到藥材的功效[14]。針對不同栽培方式、不同產(chǎn)地及不同生長年限黃芩品質(zhì)的研究已有大量報道。宮福雨等[15]為探究黃芩化學成分與生態(tài)因子之間的相關(guān)性,選取1年生栽培黃芩為研究對象,通過測量黃酮類成分的含量發(fā)現(xiàn),在1年生黃芩中,4種主要黃酮類藥效成分的含量隨著氣溫的升高而升高;衛(wèi)昊等[16]研究發(fā)現(xiàn),黃芩中黃酮類有效成分的積累與不同產(chǎn)地的光照和海拔有關(guān),隨著海拔的增高,黃酮類成分含量呈上升趨勢并有顯著性差異。徐丹洋等[17]、馬嘉等[18]、趙巍[19]研究認為,不同產(chǎn)地和群體的黃芩產(chǎn)量和化學成分含量之間都存在著差異。山西省黃芩生產(chǎn)無良種,品種混雜問題突出,因此,加強栽培黃芩的良種選育研究非常迫切。
本研究從山西黃芩產(chǎn)區(qū)收集8份黃芩種質(zhì)資源(農(nóng)家種6份和野生種2份),進行種植與觀察,通過生物性狀鑒定、品質(zhì)和產(chǎn)量比較,并通過系統(tǒng)選育篩選得到黃芩優(yōu)良品系,命名為汾選1號,研究有利于解決制約山西省黃芩種業(yè)發(fā)展的瓶頸問題,為生產(chǎn)提供良種,對整個產(chǎn)業(yè)鏈健康持續(xù)發(fā)展有著積極的促進作用,具有十分重要的生產(chǎn)意義。
試驗材料為山西省全省境內(nèi)征集的黃芩種質(zhì)資源,由6份農(nóng)家種和2份野生種組成。種質(zhì)資源保存在山西農(nóng)業(yè)大學經(jīng)濟作物研究所(簡稱經(jīng)作所)(表1),所有資源種植于經(jīng)作所藥用植物試驗田的資源圃。
表1 種質(zhì)資源來源情況Tab.1 Sources of germplasm resources
1.2.1 選育進程2006年4月,將征集的2份野生資源進行鮮根扦插,株行距為30 cm×40 cm,每個種源20株,農(nóng)家種資源按3次重復播種于100 cm×100 cm小區(qū)中。將所有資源進行單獨隔離,種植于經(jīng)作所藥用植物試驗田的資源圃。
2007年生育期內(nèi)觀察資源圃中植株生長及病蟲害情況。2007年10月,于冬季地凍前選擇性狀一致的單株,按株收獲,進行基本形態(tài)性狀指標的測定。
2008年4月將單株收獲后的種子種植于經(jīng)作所藥用植物試驗田株行試驗圃,小區(qū)面積為6.6 m2(2.0 m×3.3 m),分株系播種,隔離種植。2009年考察植株地上性狀,于冬季地凍前在每株行中選擇明顯有別于原品種的優(yōu)良單株,按株收獲,篩選優(yōu)異單株種子。依次重復循環(huán)選擇直到2013年冬季,選擇每株行材料性狀一致,比較單株的植株莖粗、主枝個數(shù),篩選優(yōu)異單株種子,將篩選的優(yōu)異單株種子混合成品系。
2014—2015年進行品系試驗,小區(qū)面積6.6 m2,2次重復,以市場上種植面積最大的甘肅黃芩為對照,觀察5個品系的植株生長及病蟲害情況,每個品系挑選20株進行基本形態(tài)性狀及病蟲害情況調(diào)查。
2016—2018年進行品比試驗,小區(qū)面積6.6 m2,3次重復,以市場上種植面積最大的甘肅黃芩為對照,每個品系挑選20株進行基本形態(tài)性狀指標的測定以及黃芩苷含量的測定。
1.2.2 基本形態(tài)性狀指標的測定
1.2.2.1 田間考種考察黃芩株高、莖粗、主枝個數(shù)等性狀。
1.2.2.2 室內(nèi)考種考察鮮根質(zhì)量、根干質(zhì)量、折干率(根干質(zhì)量/根鮮質(zhì)量)、主根根長與根粗(距蘆頭10 cm段)等性狀。
1.2.2.3 黃芩苷含量的測定按《中華人民共和國藥典》規(guī)定,采用高效液相色譜法(通則0512)測定[20]。
試驗采用SPSS 22.0軟件結(jié)合Excel對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。
通過對征集的8份黃芩資源田間觀察和室內(nèi)考種發(fā)現(xiàn),黃芩不同株系的株高和莖生長高峰期相差約15 d,與地下根生長高峰交錯進行。最早進入株高快速生長的株系是HQWX-02,最晚進入快速生長期的株系是HQQY-07,二者相差30~40 d。最早進入莖快速生長期的株系是HQHM-04,最晚進入莖生長期的株系是HQHT-06,二者相差20 d。黃芩株高和莖粗是反映植株生長狀況的重要指標,從圖1可以看出,HQHM-04的平均莖粗最大,為0.58 cm;HQWX-02的平均莖粗最細,為0.32 cm,二者之間相差0.26 cm。綜合比較得出,HQHM-04比較好。
圖1 不同黃芩材料的平均莖粗比較Fig.1 Comparison of average stem diameter of different Scutellaria baicalensis Georgi materials
從表2可以看出,8份黃芩資源的鮮根均為圓錐形,鮮根長度和直徑呈正相關(guān),隨著長度的增加直徑加粗,野生資源根直徑較農(nóng)家種粗。由圖2可知,黃芩鮮根表皮顏色總體呈現(xiàn)黃色,野生資源表皮顏色偏黃棕色,有較深裂紋,斷面不齊;農(nóng)家種資源表皮較光滑,顏色黃色、黃白色,有細微縱紋,斷面整齊。
圖2 野生、農(nóng)家種黃芩資源性狀Fig.2 Resource traits of wild and home-grown Scutellaria baicalensis Georgi
表2 黃芩種質(zhì)資源的性狀特征Tab.2 Traits characteristics of the germplasm resources of Scutellaria baicalensis Georgi
通過對8份材料地上部及根部性狀的觀察和篩選,從HQXJ-01、HQWX-02、HQHM-04、HQQY-07材料中篩選得到的優(yōu)異單株種子分別混合成品系,編號為P1、P2、P3、P4、P5,共計5個品系。品系P1來 源于HQXJ-01,品 系P2來源于HQWX-02,品系P3和P5均來源于HQQY-07,品系P4來源于HQHM-04。
HQFY-03與HQPY-05在株高上無明顯差別,但在物候期上區(qū)別明顯。HQFY-03花期在6月初,HQPY-05花期較HQFY-03晚15~20 d,盛花期也相應差約15 d。
2014—2015年進行品系試驗,以市場上種植面積最大的甘肅黃芩為對照。各品系幼苗期在莖光滑度、葉型、葉色、莖粗等指標上有明顯區(qū)別,隨著黃芩植株長大,葉型、葉色的區(qū)別逐漸減小,但莖光滑度、莖粗仍有較大區(qū)別。
按對角線9點取樣,調(diào)查從生長點向下數(shù)12片葉間蚜蟲情況,共180枝;除品系P3有3.2%的蚜蟲感染率,其他品系均無感染。按對角線9點法取樣,挖取180株黃芩植株樣品,對每株黃芩根腐病情況進行調(diào)查,結(jié)果表明,P1、P2、P3、P4、P5和CK的 平 均 病情指數(shù)分別為13.27、14.02、11.11、8.42、9.85、12.76;品系P4病情指數(shù)最低,與其他品系間差異顯著(P<0.05)(圖3)。
圖3 黃芩種質(zhì)資源抗病性調(diào)查Fig.3 Investigation on disease resistance of Scutellaria baicalensis Georgi germplasm resources
2016—2018年進行了品比試驗,以市場上種植面積最大的甘肅黃芩為對照。各品比材料的田間考種結(jié)果顯示(表3),品系P4的株高與其他品系間差異顯著;平均莖粗與P1、P2、P3和CK間差異顯著,與P5間差異不顯著;在主枝數(shù)上,除與P3間差異不顯著外,與其他品系及CK均差異顯著。
表3 黃芩品比試驗田間考種結(jié)果Tab.3 Field test results of Scutellaria baicalensis Georgi product comparison test
品比材料地下部分考種結(jié)果如表4所示。從表4可以看出,各品系鮮根質(zhì)量由高到低依次為P5>P4>P1>P2>P3>CK,藥材根干質(zhì)量由高到低依次為P4>P1>P5>P2>CK>P3,可以看出,以鮮根質(zhì)量判斷藥材公頃產(chǎn)量不夠準確,不同的品系具有不同的折干率。黃芩主根長以品系P5最高,其次為P4和P1,主根粗以品系P4最粗,其次為P5、CK;各品系在近蘆頭10 cm段根粗由大到小依次為P4>P5>CK>P2>P3>P1,以品系P4黃芩根外觀最優(yōu),性狀最好,但品系P1、P2、P3間黃芩根粗差別不大。
表4 黃芩品比試驗室內(nèi)考種結(jié)果Tab.4 Laboratory test results of Scutellaria baicalensis Georgi product comparison test
在品比試驗中,通過對比5個品系間的產(chǎn)量及黃芩苷含量可以看出(表5),品系間產(chǎn)量從高到低排序為P4>P5>P1>P2>P3>CK,品系P4的產(chǎn)量最高,比對照增產(chǎn)17.5%;品系間黃芩苷含量從高到低排序為P4>P1>P3>P5>CK>P2,品系P4的黃芩苷含量最高,各品系與對照均高于藥典規(guī)定的9%。方差分析表明,品系間產(chǎn)量差異達極顯著(表6)。
表5 品比材料產(chǎn)量及品質(zhì)比較Tab.5 Comparison of yield and quality of product comparison materials
表6 品種間產(chǎn)量方差分析Tab.6 Variance analysis of yield among varieties
隨著國際市場對中藥材原料需求的迅速增加,中藥材栽培面積不斷擴大,種質(zhì)資源和良種選育成為中藥農(nóng)業(yè)工作的重點[21],良種選育是保證藥材質(zhì)量和提高藥材產(chǎn)量的重要措施。培育優(yōu)良品種可以通過自然變異選擇育種、多倍體誘變育種、雜交育種、組織培養(yǎng)等途徑實現(xiàn)。藥農(nóng)們在長期的實踐中積累了豐富的生產(chǎn)經(jīng)驗,發(fā)現(xiàn)了許多優(yōu)良的變異類型,但經(jīng)選育而成的藥用植物優(yōu)良品種數(shù)量極少。王蘭霞等[22]研究發(fā)現(xiàn),甘肅省栽培和野生黃芩在外觀性狀和組織結(jié)構(gòu)方面略有差異,但化學組分基本一致,黃芩苷含量無明顯差異。丁少純等[23]通過試驗驗證了王蘭霞等[22]的研究結(jié)果,并表明在主要化學成分含量上,生長年限不同、栽培種與野生種含量有區(qū)別;楊冬野等[24]研究表明,可通過橫切面上導管排列方式區(qū)別野生和栽培黃芩,并判斷其生長年限。蘇淑欣等[25]通過比較栽培黃芩與野生黃芩的黃芩苷含量發(fā)現(xiàn),栽培種黃芩苷含量顯著或極顯著高于野生種。SU等[26]對我國不同產(chǎn)地栽培種和野生種黃芩進行了遺傳和化學物質(zhì)研究,結(jié)果表明,影響黃芩質(zhì)量的主要因素是環(huán)境或農(nóng)業(yè)措施,而非基因的差異。以上研究結(jié)果數(shù)據(jù)均支持黃芩野生種和栽培種在質(zhì)量上基本一致,栽培種可代野生資源藥用,同時全國多地適宜栽培黃芩。通過育種手段選育優(yōu)質(zhì)的黃芩新品種有很大的潛力。
通過對山西省境內(nèi)收集的8份黃芩種質(zhì)資源田間觀察和室內(nèi)考種,從農(nóng)家種HQXJ-01、HQWX-02和HQHM-04以及野生資源HQQY-07材料中篩選得到5個品系。綜合品比試驗中各品系的地上部分與地下部分發(fā)現(xiàn),品系P4、P5大田生長旺盛,在株高、平均莖粗、主枝個數(shù)方面均優(yōu)于其他品系,其單根干質(zhì)量、黃芩根直徑亦高于其他品系,生產(chǎn)能力強。各品系產(chǎn)量的方差分析顯示,品系P4比其他品系(品系P5除外)顯著增產(chǎn)。P4來源于農(nóng)家種資源,P5來源于野生資源,表明農(nóng)家種資源黃芩苷含量高于野生資源,與蘇淑欣等[25]研究結(jié)果相一致。因而,將品系P4暫命名為汾選1號,準備參加全省生產(chǎn)試驗。汾選1號主根粗壯,略呈圓錐形,直徑1.7~2.5 cm,長15~28 cm,外皮黃褐色,斷面鮮黃色,側(cè)根少;整齊度高,適應性強,抗性好,綜合經(jīng)濟效益高,是理想的黃芩栽培品種。