李俠 史靜曉 李艷婷 郭偉偉 郭霄飛 徐莉娜***

1（山西省太原市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，山西太原 030030）

2（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)，山西太原 030031）

3（山西省晉中市綜合檢驗檢測中心，山西晉中 030600）

AD 鈣奶是在牛奶中添加了維生素A 和維生素D，能夠促進機體對鈣的吸收。鈣能夠維持神經(jīng)肌肉的正常興奮性，促進神經(jīng)末梢分泌乙酞膽堿，也能改善細胞膜的通透性，增加毛細血管的致密性；與體內(nèi)80多種酶的活性有關(guān)，具有促進器官發(fā)育和智力提高、改善味覺、促進傷口愈合以及提高免疫功能等作用。本試驗采用GB 5009.92—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中鈣的測定》中火焰原子吸收光譜法測定AD 鈣奶中鈣的含量，并通過線性考察、重復(fù)性、精密度、加標(biāo)回收等試驗進行方法學(xué)驗證。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

PinAAcle 900H 原子吸收光譜儀：PerkinElmer；AUW120D 分析天平,島津菲律賓工廠；SH-II-5B 電熱板,黃驊菲斯福實驗儀器有限公司。

1.2 試劑

鈣標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、硝酸、磷酸二氫氨、氧化鑭、76%高氯酸＋67%硝酸（1＋1），所用試劑均為分析純；實驗用水為去離子水。

1.3 方法

按照GB 5009.92—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中鈣的測定》第一法火焰原子吸收光譜法進行檢測。

1.3.1 鈣標(biāo)準(zhǔn)工作溶液制備

吸取1.00 mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液（10 g/L），置于100 mL量瓶中，用2%HNO3溶液定容至刻度，搖勻，得標(biāo)準(zhǔn)中間液（100 mg/L），再分別吸取標(biāo)準(zhǔn)液0.0 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.00 mL、6.00 mL置于100 mL 容量瓶中，另在各容量瓶里加入5 mL鑭溶液（20 g/L），用2% HNO3 溶液定容至刻度，混勻，得到質(zhì)量濃度分別為0.0 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、4.0 mg/L、6.0 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3.2 線性考察

將鈣標(biāo)準(zhǔn)系列溶液按照質(zhì)量濃度由低到高的順序分別導(dǎo)入火焰原子霧化器，測定其吸光度值，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.3 原子吸收儀工作條件

原子吸收儀工作條件見表1。

表1 原子吸收儀的工作條件

1.3.4 供試品、質(zhì)控樣品及空白溶液制備及檢測

1.3.4.1 試樣處理

準(zhǔn)確稱取已混合均勻的待測試樣0.5 mL，置于25 mL 燒杯中，加硝酸15 mL，樣品加蓋靜置過夜，置于電熱板按程序消解(100 ℃升溫,130 ℃消解)，消解完全后，180 ℃趕酸至1 mL 左右。取下放冷，用水轉(zhuǎn)移至25 mL 納氏比色管中，稀釋至刻度，并在稀釋液中加入一定體積的鑭溶液（20 g/L），使其在最終稀釋液中的質(zhì)量濃度為1 g/L，混勻，即得待測溶液，也可根據(jù)實際測定需要再稀釋。同樣條件作試劑空白試驗。

1.3.4.2 測定

在與測定標(biāo)準(zhǔn)溶液相同的試驗條件下，將試樣溶液導(dǎo)入火焰原子霧化器，測定吸光值，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較而定量。

2 方法學(xué)驗證

2.1 線性考察

鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

圖1 鈣標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

由圖1 可知，在鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度0.0 mg/L～6.0 mg/L 范圍內(nèi)，鈣溶液吸光度值與質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=0.060 21X+0.001 96（R2=0.999 81）。

2.2 重復(fù)性試驗

取樣品6 份平行處理，測定，計算樣品含量及RSD值，測定結(jié)果見表2。由表2可知，重復(fù)性試驗的RSD值為8.58%，符合方法精密度＜10%的要求。

表2 重復(fù)性試驗結(jié)果

2.3 精密度試驗

取樣品1 份，測定6 次，計算樣品含量及RSD值，測定結(jié)果見表3。由表3 可知，重復(fù)樣品間結(jié)果誤差小，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差0.36%，說明方法精密度較好。

表3 精密度試驗結(jié)果

2.4 回收率試驗

按照試驗設(shè)計進行加標(biāo)回收試驗，試驗按高、中、低3 水平進行，每個濃度水平平行制備3 份樣品，測定含量并計算回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，獲試驗結(jié)果見表4。由表4 可知，3 種水平加標(biāo)回收率范圍92.42%～111.74%，RSD 范圍1.55%～1.69%，符合GB/T 27417—2017《合格評定化學(xué)分析化學(xué)分析方法確認和驗證指南》中回收率和RSD的要求。

表4 樣品回收率試驗結(jié)果

2.5 檢出限

平行制備試樣空白20份，測定吸光度值，計算空白值標(biāo)準(zhǔn)偏差（Sb），檢出限公式為：

CL=3Sb/b，

式中：CL—方法檢出限；

Sb—空白值標(biāo)準(zhǔn)偏差；

b—方法校準(zhǔn)曲線的斜率。

測定結(jié)果表明，若取樣量為0.5 g，定容體積10 mL，則最小檢出限為0.45 mg/kg，方法定量限為1.42 mg/kg，符合GB 5009.92—2016 中檢出限0.5 mg/kg，定量限1.5 mg/kg的要求。

3 結(jié)論

經(jīng)驗證，在鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度0.0 mg/L～6.0 mg/L 范圍內(nèi)線性良好，線性方程為Y=0.060 21X+0.001 96（R2=0.999 81），重復(fù)性試驗RSD 為8.58%，精密度試驗RSD為0.36%，3 種水平加標(biāo)回收率范圍92.42%～111.74%，RSD范圍1.55%～1.69%，該方法線性和范圍、檢出限、定量限、回收率、精密度以及重復(fù)性的試驗結(jié)果均滿足GB/T 27417—2017 和GB 5009.92—2016 的相關(guān)要求。該方法線性良好、易操作、重現(xiàn)性良好、測量結(jié)果準(zhǔn)確，滿足實驗室檢測需求。