龐 博 徐英莉 劉曉峰 陳夢(mèng)蘋 王雅欣 姚榮妹 周利潤(rùn) 曹 姍 崔曉蘭

(1 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所生物安全實(shí)驗(yàn)室，北京，100700； 2 遼寧醫(yī)藥職業(yè)學(xué)院，沈陽(yáng)，110101； 3 天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，天津，301617)

慢性蕁麻疹(Chronic Urticaria,CU)是由于皮膚黏膜小血管暫時(shí)擴(kuò)張和通透性增加而引發(fā)的一種局限性血管反應(yīng)，臨床表現(xiàn)為風(fēng)團(tuán)，常伴有劇烈瘙癢。發(fā)病原因有外源性、內(nèi)源性及特發(fā)性3種因素,外源性因素主要有食物、藥物、感染、吸入物及物理刺激；內(nèi)源性主要有精神因素、全身性疾病及免疫異常；特發(fā)性多被認(rèn)為是多因素誘發(fā)?，F(xiàn)代對(duì)慢性蕁麻疹的研究認(rèn)為是體內(nèi)可能存在組胺釋放因子或肥大細(xì)胞呈高反應(yīng)性現(xiàn)象，在多因素刺激下使肥大細(xì)胞活化、脫顆粒、釋放組胺等介質(zhì)，導(dǎo)致蕁麻疹[1]。蕁麻疹發(fā)病中主要效應(yīng)細(xì)胞為肥大細(xì)胞，其發(fā)病的中心環(huán)節(jié)為肥大細(xì)胞活化以及活化后發(fā)生的事件。引起肥大細(xì)胞活化的機(jī)制有免疫機(jī)制及非免疫機(jī)制，免疫機(jī)制中Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)作用機(jī)制最為明確，在急性蕁麻疹發(fā)病中起重要作用，但與慢性蕁麻疹發(fā)生的關(guān)系不大。體內(nèi)的抗IgE分子及抗IgE受體的自身抗體可以通過(guò)Ⅱ型變態(tài)反應(yīng)活化肥大細(xì)胞，這一機(jī)制在慢性自發(fā)性蕁麻疹發(fā)生中占重要地位。非免疫機(jī)制在蕁麻疹尤其是慢性蕁麻疹發(fā)生中起重要作用，物理因素、微生物感染可不經(jīng)過(guò)免疫途徑激活肥大細(xì)胞。

本研究選用臨床常用治療蕁麻疹的西藥代表藥氯雷他定和中藥代表藥消風(fēng)止癢顆粒為研究對(duì)象，對(duì)3種蕁麻疹動(dòng)物模型進(jìn)行給藥治療，探究2種臨床常用藥對(duì)不同因素引發(fā)的慢性蕁麻疹在藥效學(xué)是否存在不同，為氯雷他定和消風(fēng)止癢顆粒臨床合理用藥提供藥效學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 無(wú)特定病原體(Specific Pathogen Free，SPF)級(jí)6周齡BALB/c小鼠，體質(zhì)量(20±2)g，雌雄各半；SPF級(jí)7周齡SD大鼠，體質(zhì)量(200±20)g，雌雄各半，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(京)2016-0011。普通級(jí)7周齡豚鼠，體質(zhì)量(260±10)g，雌雄各半，由北京金牧陽(yáng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖有限責(zé)任公司提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(京)2020-0002。所有動(dòng)物均飼養(yǎng)在(23±1)℃，濕度(50±2)%的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，自由飲食飲水。實(shí)驗(yàn)中所有操作均遵循美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院(National Institutes of Health，NIH)及北京市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)的規(guī)定，并經(jīng)過(guò)中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(倫理審批號(hào)：小鼠為2021D021；大鼠為2021D025；豚鼠為2021D026)。

1.1.2 藥物 氯雷他定片(拜爾醫(yī)藥保健有限公司啟東分公司，生產(chǎn)批號(hào)：JS13160)；消風(fēng)止癢顆粒(陜西華西制藥股份有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：210731)。

1.1.3 試劑與儀器 二硝基苯基(Dinitrophenyl，DNP)-IgE單克隆抗體(SIGMA公司，美國(guó)，批號(hào)：22181012)；2,4-二硝基氟苯(2，4-Dinitrofluorobenzene，DNFB)(SIGMA公司，美國(guó)，批號(hào)：BCCD3869)；伊文思藍(lán)(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20200730)；卵白蛋白(SIGMA公司，美國(guó)，批號(hào)：SLCH2414)；氫氧化鋁(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20201119)；甲苯胺藍(lán)染色液(北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)：20210427)；臺(tái)氏液(北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)：20210426)；二甲基亞砜(Dimethyl Sulfoxide，DMSO)(北京拜爾迪生物科技有限公司，批號(hào)：12029032)；無(wú)水乙醇(天津大茂化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20210415)；小鼠血清IgE試劑盒(武漢云克隆科技股份有限公司，批號(hào)：L210304289)；小鼠血清組胺試劑盒(上海酶聯(lián)生物科技有限公司，批號(hào)：05/2021)；小鼠血清5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)試劑盒(上海酶聯(lián)生物科技有限公司，批號(hào)：05/2021)；大鼠血清IgE試劑盒(武漢云克隆科技股份有限公司，批號(hào)：L210513363)；大鼠血清P物質(zhì)試劑盒(武漢云克隆科技股份有限公司，批號(hào)：L210513361)。電子分析天平(OhausCorp.Brock.WJ.，美國(guó)，型號(hào)：AR1140)，電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)：YP1002)，電子天平[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司，型號(hào)：AL204]，低溫高速離心機(jī)(Eppendorf，德國(guó)，型號(hào)：5810R)，多功能酶標(biāo)儀(PerkinElmer公司，美國(guó)，型號(hào)：En-spire)，倒置顯微鏡(OPYMPUS公司，日本，型號(hào)：CKX41)。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備

1.2.1.1 小鼠免疫性接觸性慢性蕁麻疹模型 BALB/c小鼠40只，按體質(zhì)量隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、氯雷他定組、消風(fēng)止癢顆粒組，每組10只，雌雄各半。每組小鼠預(yù)先背部去毛2 cm×2 cm，除正常對(duì)照組外，其余各組小鼠尾靜脈注射1∶5 000抗DNP-IgE單克隆抗體進(jìn)行致敏造模，0.5 mL/只。24 h后，各致敏造模組小鼠雙耳背面涂0.15% DNFB 50 μL進(jìn)行激發(fā)，正常對(duì)照組在同等條件下注射及涂抹生理鹽水[2-3]。

1.2.1.2 大鼠免疫性非接觸性慢性蕁麻疹模型 40只SD大鼠，按體質(zhì)量隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、氯雷他定對(duì)照組、消風(fēng)止癢顆粒組，每組10只，雌雄各半。致敏造模：實(shí)驗(yàn)第1天除正常對(duì)照組外，其余各組大鼠腹腔注射1 mg卵白蛋白致敏，注射體積為1 mL，氫氧化鋁作為佐劑(卵白蛋白：氫氧化鋁為1∶1)，并在第5、10天各重復(fù)致敏1次，共致敏3次，正常對(duì)照組在同等條件下腹腔注射生理鹽水[4-5]。

1.2.1.3 豚鼠非免疫性接觸性蕁麻疹模型 豚鼠30只，按體質(zhì)量隨機(jī)分為模型對(duì)照組、氯雷他定組、消風(fēng)止癢顆粒組，每組8只，雌雄各半。末次給藥30 min后，用80%DMSO無(wú)水乙醇溶液均勻涂抹豚鼠右耳郭兩面，100 μL/只，左耳在同等條件下涂抹生理鹽水[6-7]。

1.2.2 給藥方法

1.2.2.1 劑量設(shè)定 對(duì)照藥氯雷他定片對(duì)小鼠、大鼠、豚鼠的臨床等效劑量換算分別為1.84 mg/kg、0.93 mg/kg、0.72 mg/kg；消風(fēng)止癢顆粒對(duì)小鼠、大鼠、豚鼠的臨床等效劑量換算分別為16.50 g/kg、8.40 g/kg、6.45 g/kg。

1.2.2.2 小鼠免疫性接觸性慢性蕁麻疹模型給藥方法 氯雷他定組和消風(fēng)止癢顆粒組小鼠在致敏當(dāng)天開(kāi)始按照0.2 mL/10 g的劑量灌胃給藥，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組同等條件下給蒸餾水，1次/d，連續(xù)7 d。

1.2.2.3 大鼠免疫性非接觸性慢性蕁麻疹模型給藥方法 氯雷他定組和消風(fēng)止癢顆粒組大鼠從初次致敏后第6天開(kāi)始按1 mL/100 g灌胃給予相應(yīng)藥物，連續(xù)給藥9 d，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組在同等條件下給予蒸餾水。

1.2.2.4 豚鼠非免疫性接觸性蕁麻疹模型給藥方法 氯雷他定組和消風(fēng)止癢顆粒組豚鼠按照1 mL/100 g灌胃給藥，1次/d，連續(xù)7 d，模型對(duì)照組在同等條件下灌胃蒸餾水。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.3.1 小鼠免疫性接觸性慢性蕁麻疹模型檢測(cè)指標(biāo)與方法 1)各組小鼠分別于激發(fā)后1 h、6 h、24 h觀察搔抓次數(shù)，每次連續(xù)記錄10 min內(nèi)搔抓次數(shù)。2)激發(fā)后24 h尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)，觀察注射后第1 h、6 h、24 h、48 h及72 h內(nèi)背部暴露皮膚處風(fēng)團(tuán)出現(xiàn)的數(shù)量、消退時(shí)間，每次連續(xù)記錄1 h。3)激發(fā)24 h后測(cè)雙耳厚度(每側(cè)3個(gè)點(diǎn))；第7天雙耳打孔各取3個(gè)耳片，稱重。4)第7天各組小鼠摘眼球采血0.5 mL，靜置2 h后，4 ℃下1 200×g離心10 min，吸取上清液，-80 ℃保存，分析待測(cè)。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測(cè)定血清中IgE、組胺、5-HT含量。5)采血后的小鼠脫頸椎處死，剪開(kāi)腹部皮膚，沿腹白線剪開(kāi)腹壁約0.5 cm，向腹腔內(nèi)注入臺(tái)氏液，輕揉腹部3 min，剖開(kāi)腹腔，吸出全部液體，置于離心管中[3]。低溫超速離心機(jī)在4 ℃，1 000×g的條件下離心10 min，棄上清得肥大細(xì)胞沉淀物，加入臺(tái)氏液混懸，滴加甲苯胺藍(lán)染色液，混勻，染色30 min。吸取1滴染色后肥大細(xì)胞懸液于載玻片上，蓋上蓋玻片，待液體晾干后，置于倒置熒光顯微鏡下觀察。先用10×物鏡找到清晰視野下的細(xì)胞，再用20×物鏡下進(jìn)行肥大細(xì)胞觀察與計(jì)數(shù)，按“弓”字形順序依次計(jì)數(shù)100個(gè)肥大細(xì)胞，并計(jì)數(shù)其中脫顆粒的肥大細(xì)胞，計(jì)算脫顆粒百分率和抑制率[8]。肥大細(xì)胞脫顆粒率(%)=脫顆粒細(xì)胞數(shù)/肥大細(xì)胞總數(shù)×100%；肥大細(xì)胞脫顆粒抑制率(%)=(1-給藥組的脫顆粒率/模型組的脫顆粒率)×100%。

1.2.3.2 大鼠免疫性非接觸性慢性蕁麻疹模型檢測(cè)指標(biāo)與方法 1)末次給藥24 h后，各組大鼠經(jīng)眼內(nèi)眥采集血液2 mL于干凈的EP管(微量離心管)中，4 ℃過(guò)夜，在4 ℃條件下1 200×g離心10 min，吸取上清液，-80 ℃保存，分析待測(cè)。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測(cè)定血清中IgE、P物質(zhì)的水平。2)大鼠經(jīng)異弗烷麻醉后，剪開(kāi)腹部皮膚，沿腹白線剪開(kāi)腹壁約1 cm，向腹腔內(nèi)注入臺(tái)氏液，輕揉腹部3 min，剖開(kāi)腹腔，吸出全部液體，置于離心管中。低溫超速離心機(jī)在4 ℃，1 000×g的條件下離心10 min，棄上清得肥大細(xì)胞沉淀物，加入臺(tái)氏液混懸，甲苯胺藍(lán)染色，混勻，染色30 min。吸取1滴染色肥大細(xì)胞懸液于載玻片上，蓋上蓋玻片，待液體晾干后，置于倒置熒光顯微鏡下觀察。先用10×物鏡找到清晰視野下的細(xì)胞，再用20×物鏡下進(jìn)行肥大細(xì)胞觀察與計(jì)數(shù)，按“弓”字順序依次計(jì)數(shù)100個(gè)肥大細(xì)胞，并計(jì)數(shù)其中脫顆粒的肥大細(xì)胞，計(jì)算脫顆粒百分率和抑制率[9]。肥大細(xì)胞脫顆粒率(%)=脫顆粒細(xì)胞數(shù)/肥大細(xì)胞總數(shù)×100%；肥大細(xì)胞脫顆粒抑制率(%)=(1-給藥組的脫顆粒率/模型組的脫顆粒率)×100%。3)摘取大鼠脾臟和胸腺，使用電子天平精密稱定，按照公式計(jì)算各組大鼠脾指數(shù)和胸腺指數(shù)[10]。脾指數(shù)=脾臟重量(mg)/大鼠體質(zhì)量(g)，胸腺指數(shù)=胸腺重量(mg)/大鼠體質(zhì)量(g)。

1.2.3.3 豚鼠非免疫性接觸性蕁麻疹模型檢測(cè)指標(biāo)與方法 分別于涂抹DMSO后30 min、45 min、60 min、120 min、180 min用游標(biāo)卡尺測(cè)量豚鼠左右耳郭外緣5 mm處3個(gè)固定點(diǎn)的厚度，測(cè)量結(jié)束后將3個(gè)點(diǎn)打耳片稱重，求平均值，計(jì)算耳腫脹度。耳腫脹度(%)=(右耳重量均值-左耳重量均值)/左耳重量均值×100%。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)小鼠免疫性接觸性慢性蕁麻疹模型的作用 小鼠在激發(fā)后出現(xiàn)前爪抓撓頭面部，后爪抓撓耳朵，舔舐后肢與腹部等現(xiàn)象；模型對(duì)照組小鼠抓撓次數(shù)顯著增加，與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；氯雷他定和消風(fēng)止癢顆粒均可不同程度減少小鼠抓撓次數(shù)，24 h后氯雷他定組，消風(fēng)止癢顆粒組與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)圖1。各組小鼠在尾靜脈注射伊文思藍(lán)1 h后均出現(xiàn)藍(lán)染風(fēng)團(tuán)，24 h后明顯減少，48 h后基本消退，72 h背部藍(lán)斑完全消退。模型對(duì)照組在1 h、6 h風(fēng)團(tuán)數(shù)明顯增多，與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；氯雷他定組和消風(fēng)止癢顆粒組在1 h、6 h風(fēng)團(tuán)數(shù)明顯減少，與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)；且消風(fēng)止癢顆粒組小鼠背部藍(lán)斑數(shù)量少于氯雷他定組。見(jiàn)表1。模型對(duì)照組小鼠雙耳腫脹度與耳片重量顯著升高，與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；氯雷他定和消風(fēng)止癢顆粒均能緩解小鼠耳腫脹，降低耳片重量，消風(fēng)止癢顆組優(yōu)于氯雷他定組，與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表2。

圖1 不同時(shí)間各組小鼠抓撓行為的數(shù)量(n=10)

表1 不同時(shí)間小鼠背部藍(lán)斑的數(shù)量變化

表2 對(duì)小鼠免疫性接觸性慢性蕁麻疹模型耳厚度及重量的影響

模型對(duì)照組小鼠血清中IgE、組胺及5-HT水平均明顯升高，與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)；氯雷他定可明顯降低血清IgE、組胺和5-HT的水平，與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)；消風(fēng)止癢顆粒組僅降低了血清中5-HT的水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖2。

圖2 各組小鼠血清IgE、組胺及5-HT水平比較(n=10)

小鼠腹腔肥大細(xì)胞正常形態(tài)為圓形、邊緣光滑，甲苯胺藍(lán)將肥大細(xì)胞胞質(zhì)中的顆粒被染成紫紅色，細(xì)胞核為淺藍(lán)色；脫顆粒肥大細(xì)胞腫脹變形、邊緣不整齊或顆粒自細(xì)胞膜內(nèi)向外流出、顆粒顏色加深和出現(xiàn)空泡，則判斷為脫顆粒陽(yáng)性。

正常對(duì)照組小鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆?，F(xiàn)象不明顯，脫顆粒細(xì)胞的百分率為12.70%；模型對(duì)照組小鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆?，F(xiàn)象明顯，脫顆粒細(xì)胞百分率顯著增加，為30.10%，與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；氯雷他定和消風(fēng)止癢顆粒均對(duì)小鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒現(xiàn)象有明顯的抑制作用，脫顆粒細(xì)胞百分率顯著降低，氯雷他定對(duì)肥大細(xì)胞的脫顆粒抑制率優(yōu)于消風(fēng)止癢顆粒，與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表3。

表3 氯雷他定與消風(fēng)止癢顆粒對(duì)小鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒的影響

2.2 對(duì)大鼠免疫性非接觸性慢性蕁麻疹模型的作用 模型對(duì)照組大鼠血清IgE、P物質(zhì)水平升高，與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)；氯雷他定可不同程度降低大鼠血清中IgE，P物質(zhì)的水平，與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；消風(fēng)止癢顆粒對(duì)大鼠血清中IgE，P物質(zhì)的水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖3。

圖3 各組大鼠血清IgE和P物質(zhì)水平的測(cè)定(n=10)

大鼠腹腔肥大細(xì)胞正常形態(tài)為圓形、邊緣光滑，甲苯胺藍(lán)將肥大細(xì)胞胞質(zhì)中的顆粒被染成紫紅色，細(xì)胞核為淺藍(lán)色；脫顆粒肥大細(xì)胞腫脹變形、邊緣不整齊，顆粒顏色加深且向膜外流出，則判斷為脫顆粒陽(yáng)性。正常對(duì)照組大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒現(xiàn)象不明顯，脫顆粒細(xì)胞的百分率為12.30%；模型對(duì)照組大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒現(xiàn)象明顯，且脫顆粒細(xì)胞的百分率顯著增加為34.10%，與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；氯雷他定組和消風(fēng)止癢顆粒組大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆?，F(xiàn)象均有明顯減輕，脫顆粒細(xì)胞的百分率顯著降低分別為23.20%、24.10%，肥大細(xì)胞脫顆粒抑制率分別為31.96%、29.33%與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表4。

表4 氯雷他定與消風(fēng)止癢顆粒對(duì)大鼠腹腔 肥大細(xì)胞的影響

本實(shí)驗(yàn)中，與正常對(duì)照組大鼠比較，模型對(duì)照組大鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)均有所增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與模型對(duì)照組比較，氯雷他定組和消風(fēng)止癢顆粒組大鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)均有趨于正常水平的趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖4。

圖4 各組大鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)測(cè)定結(jié)果(n=10)

2.3 對(duì)豚鼠非免疫性接觸性蕁麻疹模型的作用 模型對(duì)照組豚鼠右耳在涂抹DMSO后各時(shí)間點(diǎn)耳腫脹明顯，與其左耳比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；氯雷他定在造模后30 min、45 min右耳的腫脹明顯減輕，與模型對(duì)照組豚鼠右耳比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。但60 min后，氯雷他定組豚鼠右耳與模型對(duì)照組豚鼠右耳相比之間無(wú)差異，凸顯了氯雷他定可以快速發(fā)揮的藥物特點(diǎn)；消風(fēng)止癢顆粒在造模后45 min、60 min、120 min、180 min均可明顯減輕右耳腫脹，與模型對(duì)照組豚鼠右耳比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)，凸顯出中藥藥效起效慢但藥效維持作用時(shí)間久的藥物特點(diǎn)。見(jiàn)表5。

表5 氯雷他定與消風(fēng)止癢顆粒對(duì)豚鼠左右耳厚度的影響

模型對(duì)照組、氯雷他定組和消風(fēng)止癢顆粒組豚鼠左耳涂抹生理鹽水后，重量無(wú)差異；涂抹DMSO 180 min后，模型對(duì)照組豚鼠右耳重量顯著增加，與模型對(duì)照組左耳比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；氯雷他定組豚鼠右耳重量與模型對(duì)照組右耳比較有降低趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；消風(fēng)止癢顆粒組豚鼠右耳重量與模型對(duì)照組右耳比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；且消風(fēng)止癢顆粒組豚鼠的耳腫脹度低于氯雷他定組。見(jiàn)表6。

表6 氯雷他定與消風(fēng)止癢顆粒對(duì)豚鼠左、右耳重量的影響

3 討論

蕁麻疹屬中醫(yī)學(xué)“癮疹”范疇，古籍中即提出風(fēng)邪與蕁麻疹發(fā)病密切相關(guān)?！吨T病源候論·風(fēng)瘙身體癮疹候》云：“人皮膚虛，為風(fēng)邪所折，則起癮軫?！薄肚Ы鹨健ふ撾s風(fēng)狀》云：“風(fēng)邪客于肌膚，虛癢成風(fēng)疹瘙瘡?！被颊咝l(wèi)氣不固復(fù)又外感風(fēng)邪，正氣無(wú)力鼓邪外出，致急性期風(fēng)邪留于肌表，短期則閉郁肺氣，致肺氣失宣，總屬氣分；長(zhǎng)期則由肌表入經(jīng)絡(luò)，致?tīng)I(yíng)衛(wèi)不和、氣滯血瘀，歸于血分。因風(fēng)性開(kāi)泄，易襲陽(yáng)位，故蕁麻疹常發(fā)于頭面部、背部等部位，且風(fēng)邪“善行而數(shù)變”，故蕁麻疹常突發(fā)突止，發(fā)無(wú)定處，反復(fù)發(fā)作，此起彼伏，伴瘙癢難耐[11]。

目前臨床治療慢性蕁麻疹多以抗組胺藥為主，第1代抗組胺藥對(duì)中樞神經(jīng)有明顯的抑制作用，而止癢效果維持時(shí)間短，易引起不良反應(yīng)，目前已不再使用。第2代抗組胺藥鎮(zhèn)靜作用弱，無(wú)抗膽堿與心臟毒性，且不良反應(yīng)小，已成為治療慢性蕁麻疹的一線用藥[12]，如西替利嗪、氯雷他定、阿伐斯汀等。本研究所用氯雷他定片為長(zhǎng)效三環(huán)類抗組胺藥，是一種選擇性外周H1受體拮抗劑。通過(guò)抑制組胺、多種白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子-α等炎癥介質(zhì)的釋放，從而減緩過(guò)敏反應(yīng)引起的各種癥狀，短期內(nèi)有一定療效[13-14]。

消風(fēng)止癢顆粒由防風(fēng)、蟬蛻、地骨皮、蒼術(shù)(炒)、亞麻子、當(dāng)歸、地黃、木通、荊芥、石膏、甘草共11味中藥相互協(xié)同共達(dá)消風(fēng)清熱，除濕止癢之功，主治丘疹樣蕁麻疹，也用于濕疹、皮膚瘙癢癥。方中防風(fēng)、荊芥二者均味辛性微溫，溫而不燥，長(zhǎng)于發(fā)表散風(fēng)，都可用于風(fēng)疹瘙癢；地黃、地骨皮清熱涼血、除蒸，當(dāng)歸、亞麻子補(bǔ)血活血、養(yǎng)血祛風(fēng)、潤(rùn)燥通便；蒼術(shù)燥濕健脾，祛風(fēng)散寒；蟬蛻疏散風(fēng)熱，透疹止癢；木通善清心火，利尿通淋，石膏善清肺熱，除煩止渴；甘草清熱解毒，調(diào)和諸藥。據(jù)現(xiàn)代藥理分析，方中多味藥物具有免疫調(diào)節(jié)作用，對(duì)變態(tài)反應(yīng)有良好的治療作用[15-16]。

血清IgE作為介導(dǎo)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的主要抗體，在變態(tài)反應(yīng)性疾病中起關(guān)鍵作用。當(dāng)變應(yīng)原首次侵入機(jī)體，誘導(dǎo)特異性B細(xì)胞產(chǎn)生IgE，抗體中的Fc段會(huì)與嗜酸性粒細(xì)胞或肥大細(xì)胞表面的FcεRI的α亞基結(jié)合，使機(jī)體處于致敏狀態(tài)[17]。當(dāng)相同抗原再次入侵機(jī)體時(shí)，便與已經(jīng)結(jié)合在致敏靶細(xì)胞上的IgE特異性結(jié)合，導(dǎo)致細(xì)胞脫顆粒和血管活性介質(zhì)釋放，引起毛細(xì)血管擴(kuò)張、通透性增強(qiáng)，血管內(nèi)組織液進(jìn)入真皮形成真皮水腫，進(jìn)而形成風(fēng)團(tuán)[18-19]。此外，已有研究證實(shí)P物質(zhì)可引發(fā)皮膚瘙癢和風(fēng)團(tuán)反應(yīng)，誘導(dǎo)肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞脫顆粒，以及增強(qiáng)肥大細(xì)胞對(duì)各種刺激的反應(yīng)性，提示P物質(zhì)參與了慢性蕁麻疹的發(fā)病。肥大細(xì)胞自身就能分泌P物質(zhì)，P物質(zhì)又反過(guò)來(lái)作用于肥大細(xì)胞和血管，從而促使P物質(zhì)不斷釋放，形成病癥的持續(xù)狀態(tài)[20]。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在免疫性接觸性/非接觸性慢性蕁麻疹模型實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在造模后明顯出現(xiàn)腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒，皮膚出現(xiàn)風(fēng)團(tuán)，抓撓、舔舐、耳腫脹等現(xiàn)象。氯雷他定和消風(fēng)止癢顆粒均可明顯抑制致敏動(dòng)物模型肥大細(xì)胞活化，脫顆?，F(xiàn)象。氯雷他定能有效地減少組胺、IgE、P物質(zhì)、5-HT等炎癥介質(zhì)的釋放，進(jìn)而緩解由慢性蕁麻疹造成皮損血管擴(kuò)張引起的皮膚瘙癢、風(fēng)團(tuán)、水腫性斑塊等癥狀。在非免疫性接觸性蕁麻疹模型試驗(yàn)中，消風(fēng)止癢顆粒無(wú)論在耳腫脹度還是耳厚度的測(cè)量結(jié)果均優(yōu)于氯雷他定，藥效明顯且緩解變態(tài)反應(yīng)腫脹癥狀的作用持久。由此推斷，氯雷他定對(duì)免疫性慢性蕁麻疹有良好的治療效果，可迅速發(fā)揮藥效，快速抑制炎癥介質(zhì)的釋放，緩解瘙癢癥狀。消風(fēng)止癢顆粒則對(duì)接觸性蕁麻疹有明顯的治療作用，該方可解表、祛風(fēng)止癢兼能清熱、透疹、利水，達(dá)到緩解皮膚紅腫，抑制風(fēng)團(tuán)之效。本實(shí)驗(yàn)為氯雷他定和消風(fēng)止癢顆粒的臨床合理用藥提供藥效學(xué)依據(jù)。