周小楠 綜述 師永紅 審校

EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV），又稱人類皰疹病毒4型，屬γ皰疹病毒科。1964年Epstein與Barr首次在Burkitt淋巴瘤（Burkitt’s Lymphoma，BL）中發(fā)現(xiàn)該病毒，并命名為EBV。全世界約有95%以上的人口曾感染EBV，絕大多是隱性感染，部分形成傳染性單核細(xì)胞增多癥、咽炎等急性感染[1-3]。此外，因在NK/T細(xì)胞淋巴瘤、BL、霍奇金淋巴瘤（Hodgkin's lymphoma，HL）、彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL）等腫瘤及移植后淋巴組織增殖性疾?。╬ost-transplant lymphoproliferative disorders，PTLD）患者的組織中檢測出大量EBV，從而認(rèn)為EBV與這些類型的淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展緊密相關(guān)，其可能通過抑制免疫系統(tǒng)或誘導(dǎo)不受控制的增殖導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。

1 EBV的分子生物學(xué)特性及其感染模式

EBV是線性雙鏈DNA病毒，呈球形，基因組長172 kb，主要編碼產(chǎn)物包括EBV增殖感染相關(guān)抗原：衣殼抗原（viral capsid antigen，VCA）、早期抗原（early antigen，EA）、膜抗原（membrance antigen，MA），以及EBV潛伏感染時表達(dá)的抗原[潛伏膜蛋白（latent membrane protein，LMP），包括LMP1，LMP2A和LMP-2B。EBV核抗原（Epstein-Barr virus antibody，EBNA），包括EBNA1、EBNA2、EBNA3A、EBNA3B、EBNA-3C和LP]。EBV還表達(dá)兩種小核酸RNA（EBV encoded RNAs，EBER），包括EBER1和EBER2，以及微小核糖核酸（microRNAs，miRNAs）。

EBV的生命周期分為裂解和潛伏兩個階段[2]。其在上皮細(xì)胞中進(jìn)行裂解復(fù)制，并在循環(huán)記憶B淋巴細(xì)胞中建立終生潛伏期，從潛伏期開始周期性地重新激活。依據(jù)EBV表達(dá)潛伏基因種類的不同，可以將其潛伏感染模式分為0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型4種類型。0型潛伏感染即被EBV感染，處于休眠期的記憶B細(xì)胞，僅表達(dá)EBV編碼潛伏的RNA即EBERs；Ⅰ型潛伏感染，EBV除表達(dá)EBERs外，還表達(dá)EBV核抗原EBNA1和BamHIA右側(cè)片段（BamHI-A rightward transcripts，BARTs），如BL；Ⅱ型潛伏感染，EBV表達(dá)產(chǎn)物包括EBNA1、LMP1、LMP2、EBERs和Bam-HIA片段的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物等，鼻咽癌、DLBCL、NK/T細(xì)胞淋巴瘤和HL等屬于Ⅱ型感染；Ⅲ型潛伏感染，多發(fā)生在急性EBV感染或嚴(yán)重免疫缺陷個體中，如艾滋病相關(guān)非霍奇金淋巴瘤、傳染性單核細(xì)胞增多癥、器官移植、使用免疫抑制劑等，涉及6種EBNA、3種LMP和2種EBER[1，4]。

2 EBV相關(guān)淋巴瘤

2.1 BL

BL是一種高度惡性的B細(xì)胞腫瘤。幾乎全部地方性BL均為EBV陽性。轉(zhuǎn)錄因子MYC調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、DNA損傷修復(fù)、蛋白質(zhì)合成等相關(guān)基因的表達(dá)，并且促進(jìn)細(xì)胞的增殖[5]。BL的一個重要特征是MYC的移位和激活：MYC和免疫球蛋白基因位點之間的易位導(dǎo)致MYC的過度表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞惡變，最后導(dǎo)致BL的發(fā)生[6]。p53是重要的腫瘤抑制基因，參與細(xì)胞生長調(diào)控，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。研究認(rèn)為MYC不僅促進(jìn)細(xì)胞增殖，也參與細(xì)胞凋亡的調(diào)控，如通過多種途徑包括生長素響應(yīng)因子（auxin response factor，ARF）/E3泛素連接酶（E3 ubiquitin-protein ligase Mdm2，MDM2）/p53途徑、核糖體蛋白（ribosomal protein，RP）/MDM2/p53途徑和DNA損傷應(yīng)答途徑等激活p53，引起細(xì)胞凋亡[5]。抑制p53依賴的長非編碼RNA（long non-coding RNA，LncRNA）漿細(xì)胞瘤多樣異位基因1（plasmacytoma variant translocation 1，Pvt1）亞型Pvt1b，可增加MYC水平和轉(zhuǎn)錄活性，促進(jìn)細(xì)胞增殖。p53激活Pvt1b來抑制MYC，進(jìn)而抑制腫瘤發(fā)生[7]。EBV編碼的LMP1也通過刺激促進(jìn)細(xì)胞增殖、調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)的鋅指蛋白（zinc finger protein A20，A20）基因的表達(dá)來阻斷p53介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[8]。有研究表明，核轉(zhuǎn)錄因子TCF3的激活和EBV編碼的LMP2A，激活B細(xì)胞受體（B cell receptor，BCR）調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖和活化，導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，進(jìn)一步與失控的MYC協(xié)同，促進(jìn)細(xì)胞存活和BL的發(fā)生[9]。此外，EBNA1、EBNA3在BL腫瘤的形成過程中也是不可缺少的。EBV在增殖的宿主細(xì)胞中以染色體外遺傳物質(zhì)附加體的形式存在，EBNA1在DNA復(fù)制過程中使單鏈DNA發(fā)生交聯(lián)，在宿主細(xì)胞的分裂過程中介導(dǎo)了附加體的復(fù)制和分配，并促進(jìn)細(xì)胞遷移和可能的轉(zhuǎn)移擴(kuò)散[10-11]。由此可見，EBNA1對病毒DNA在感染細(xì)胞中的持續(xù)存在至關(guān)重要[11]。研究表明，EBNA1還可以發(fā)揮抗凋亡作用，增強(qiáng)腫瘤的致瘤性[6]。證明EBNA1與影響B(tài)細(xì)胞生長和功能的基因及細(xì)胞增強(qiáng)因子、白介素6受體、早期B細(xì)胞因子1等相結(jié)合，提高EBV潛伏感染細(xì)胞的存活率[12]。EBNA3A和EBNA3C介導(dǎo)各種細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑的抑制，同時還通過抑制病毒感染和轉(zhuǎn)化的凋亡反應(yīng)，如抑制促凋亡的B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（BCL-2）家族成員BIM基因，加強(qiáng)EBV介導(dǎo)的B細(xì)胞轉(zhuǎn)化和隨后的病毒持久性，進(jìn)一步促進(jìn)病毒誘導(dǎo)的增殖和腫瘤發(fā)生。而腫瘤抑制因子EBNA3B與EBNA3A和EBNA3C作用相反，其失活則促進(jìn)免疫逃逸和EBV驅(qū)動的淋巴瘤發(fā)生[13-14]。有研究表明，缺失EBNA2的基因組可表達(dá)細(xì)胞BCL-2的病毒類似物BHRF1，賦予BL細(xì)胞抗凋亡活性和促生長優(yōu)勢，EBNA2缺失的EBV基因組可以在人源化小鼠中引起類似人類BL淋巴瘤的發(fā)生[15]。

2.2 HL

HL的特征是存在霍奇金-李-斯（Hodgkin-Reed-Steinberg，HRS）細(xì)胞。利用EBV特異性原位雜交技術(shù)檢測到EBER在HRS細(xì)胞中的表達(dá)，證實了EBV與HL的直接聯(lián)系[6]。HL中的EBV基因組也表達(dá)LMP1、LMP2A和EBNA1。端粒重復(fù)序列結(jié)合因子2（telomeric repeat binding factor，TRF2）可通過結(jié)合染色體末端并確?；蚪M完整性來介導(dǎo)端粒保護(hù)。研究表明，LMP1可以下調(diào)TRF2，導(dǎo)致端粒功能障礙、復(fù)雜染色體重排和多核性，從而誘導(dǎo)RS細(xì)胞的形成[16]。LMP1還可模擬活化的腫瘤壞死因子受體超家族成員CD40的受體，募集細(xì)胞內(nèi)重要的接頭分子腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子（TNF receptor-associated factor，TRAF）家族成員TRAF1、TRAF2和TRAF3，激活核因子κB（nuclear factor- kappa B，NF-κB）誘導(dǎo)激酶/抑制劑激活酶，使NF-κB抑制蛋白α磷酸化。進(jìn)一步激活其下游NF-κB信號通路，通過抑制細(xì)胞凋亡來促進(jìn)細(xì)胞存活[1,17]。此外，LMP1還可誘導(dǎo)HRS細(xì)胞中異常激活的細(xì)胞信號通路，如改變細(xì)胞中DNA轉(zhuǎn)錄與活性水平的Janus激酶/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活子（the Janus kinase/signal transducer and activator of transcription，JAK/STAT）通路、激活多種與腫瘤有關(guān)的基因如細(xì)胞周期素、膠原酶、溶基質(zhì)素等表達(dá)的激活蛋白-1通路和可誘導(dǎo)強(qiáng)效共刺激分子CD137表達(dá)的磷酸肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）通路[18]，有助于HRS細(xì)胞的異常轉(zhuǎn)錄。而LMP2A通過激活脾酪氨酸激酶，不僅導(dǎo)致甲基受體蛋白和PI3K激酶等功能都與B細(xì)胞受體相似的分子的激活，促進(jìn)HRS細(xì)胞的生存，還增加NF-κB蛋白核易位，從而增加趨化因子巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1α的表達(dá)，以維持腫瘤微環(huán)境，間接促進(jìn)了HL腫瘤的生存[9,19]。白介素-2受體CD25、趨化因子配體20（CC chemokine ligand 20，CCL20）在調(diào)控免疫細(xì)胞分化、發(fā)育及定向遷移過程中起重要作用，EBNA1已被證明可誘導(dǎo)HL細(xì)胞中CD25和CCL20的表達(dá)增強(qiáng)，并通過降低Smad2蛋白的半衰期，下調(diào)Smad2的表達(dá)，抑制轉(zhuǎn)化生長因子-β靶基因腫瘤抑制因子蛋白酪氨酸磷酸酶受體K的轉(zhuǎn)錄，從而促進(jìn)HL的生成[20]。

2.3 DLBCL

DLBCL是最常見的非霍奇金淋巴瘤[4]。研究表明，在EBV陽性DLBCL的絕大多數(shù)病例中均檢測到克隆性重排和體細(xì)胞高度突變[21]。進(jìn)一步研究顯示，EBV陽性DLBCL的形成與NF-κB和JAK/STAT信號通路的激活有關(guān)[6,22]。Kato等[23]對EBV感染的DLBCL細(xì)胞系進(jìn)行體外研究和免疫組織化學(xué)染色也證實，EBV感染可促進(jìn)由LMP1C-端胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域觸發(fā)的NF-κB的激活和信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白（signal transducer and activator of transcription，STAT）3的磷酸化信號，促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測顯示60%EBV陽性DLBCL的病例存在T細(xì)胞受體基因重排“受限”或寡克隆[1]，并且在EBV感染下的T細(xì)胞衰老、減少或異常也促進(jìn)淋巴瘤的發(fā)生。研究表明，EBV陽性DLBCL的Ⅱ類主要組織相容性復(fù)合體蛋白及其轉(zhuǎn)錄共激活因子被破壞，BCR信號的完整性及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)受影響，導(dǎo)致EBV陽性DLBCL的抗原捕獲和提呈系統(tǒng)受損，同時T細(xì)胞過度表達(dá)細(xì)胞程序性死亡受體-配體1（programmed cell death-ligand 1，PDL1），從而誘導(dǎo)T細(xì)胞抑制，導(dǎo)致免疫逃避[24]。此外，EBV還可以誘導(dǎo)DLBCL的腫瘤微環(huán)境成分的改變，如LMP1通過誘導(dǎo)STAT1依賴的干擾素-γ分泌，促進(jìn)B細(xì)胞增殖；而LMP2A和EBERs潛伏抗原以及EBV基因組的即刻早期基因（EBV-BZLF1）裂解抗原均促進(jìn)白介素-10（interleukin-10，IL-10）的產(chǎn)生；由病毒抗原如EBER2和BZLF1觸發(fā)的白介素-6（interleukin-6，IL-6）和白介素-13（interleukin-13，IL-13）的上調(diào)也可能誘導(dǎo)利于EBV感染的腫瘤細(xì)胞生長和存活環(huán)境的形成[4]。此外，EBV轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞下調(diào)主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類分子的表達(dá)、EBNA3B中免疫優(yōu)勢T細(xì)胞表位發(fā)生突變，有助于腫瘤細(xì)胞逃避宿主細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的殺傷，逃脫宿主的免疫監(jiān)視[22]。

2.4 PTLD

PTLD主要來源于移植患者的B細(xì)胞，通常與EBV感染有關(guān)。有文獻(xiàn)報道[25]，約80%的移植后淋巴組織增生性疾病顯示EBV陽性。EBV感染不僅使PTLD表達(dá)所有潛伏抗原，也改變了miRNA的表達(dá)。Felal等[25]研究表明，miRNA-194過表達(dá)可增加EBV陽性B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株的凋亡，并抑制IL-10的產(chǎn)生，PTLD患者的基因陣列顯示miRNA-194表達(dá)被抑制。EBV通過抑制miRNA-194來增加IL-10的表達(dá)，IL-10過表達(dá)會引起免疫抑制，促進(jìn)PTLD的生成。PTLD的發(fā)病機(jī)制不僅涉及病毒的感染的作用，還有一些細(xì)胞基因的遺傳或表觀遺傳改變。部分PTLD病例的特征是DNA錯配修復(fù)機(jī)制缺陷導(dǎo)致的微衛(wèi)星不穩(wěn)定。此外，PTLD中細(xì)胞基因改變還包括細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因如MYC、B淋巴細(xì)胞瘤-6基因（BCL-6）、p53的改變、DNA的高甲基化和原癌基因異常體細(xì)胞高突變。此外，免疫抑制藥物的使用也促進(jìn)PTLD的發(fā)生。器官移植后免疫抑制藥物的使用雖然提高了移植的成功率，但會導(dǎo)致EBV特異性T細(xì)胞耗盡，降低T細(xì)胞的數(shù)量和功能，破壞免疫系統(tǒng)和潛伏病毒之間的平衡，從而使EBV從潛伏期重新被激活[26]。除此之外，EBV特異性T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫監(jiān)視功能受損導(dǎo)致淋巴母細(xì)胞增殖失控，最終導(dǎo)致移植受者出現(xiàn)PTLD[27]。

2.5 NK/T細(xì)胞淋巴瘤

雖然EBV感染B細(xì)胞更常見，但也可感染上皮細(xì)胞以及T淋巴細(xì)胞或自然殺傷細(xì)胞（natural killer cell，NK細(xì)胞）[2]。EBV感染NK和T細(xì)胞，可導(dǎo)致結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤（extranodal NK/T-cell lymphoma，nasal type，ENKTL）。ENKTL是一種以結(jié)外優(yōu)先受累、EBV相關(guān)性和發(fā)病地域多樣性為特征的淋巴瘤[28]。EBV在ENKTL發(fā)生中的重要性于1990年首次被認(rèn)識[28]。盡管NK細(xì)胞不表達(dá)EBV的主要受體蛋白CD21，但由EBV感染的B細(xì)胞通過突觸轉(zhuǎn)移激活的NK細(xì)胞，使其獲得CD21分子，這些異位受體允許EBV與NK細(xì)胞結(jié)合，從而引發(fā)病毒感染[29]；Smith等[30]通過中和抗體試驗，也證明EBV利用病毒糖蛋白gp350和CD21進(jìn)入成熟的外周T細(xì)胞。ENKTL細(xì)胞屬于Ⅱ型潛伏感染，表達(dá)EBV基因EBNA1、LMP1和LMP2[1]。上述基因的表達(dá)已經(jīng)被證明能夠結(jié)構(gòu)性地激活JAK/STAT、NF-κB等信號通路，從而促進(jìn)細(xì)胞的生長和存活。有研究認(rèn)為，LMP1在ENKTL中的表達(dá)可通過NF-κB途徑上調(diào)腫瘤細(xì)胞PDL1，來促進(jìn)腫瘤免疫逃逸[31]；此外，LMP1還通過誘導(dǎo)細(xì)胞表面黏附分子CD23、CD40、細(xì)胞間黏附分子-1和淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-3的表達(dá)，上調(diào)抗凋亡蛋白如BCL-2、髓樣細(xì)胞白血病蛋白-1、BCL2A1同源體、A20，來抑制細(xì)胞凋亡并促進(jìn)腫瘤的發(fā)生[3]。

雖然EBV感染被認(rèn)為是ENKTL發(fā)病機(jī)制中的早期因素，但附加的基因改變對于淋巴瘤的形成也是必不可少的。最近的研究中，利用二代測序技術(shù)在ENKTL患者中發(fā)現(xiàn)了頻繁的JAK3激活突變[32]。ENKTL的基因組分析也顯示，最常見的突變 JAK/STAT信號通路家族的成員，主要是STAT3，其次是腫瘤抑制基因BCL-6輔抑制因子、TP53、RNA解旋酶基因等[28，33]。EBV是激活STAT3的外部因素之一：EBV潛伏蛋白LMP1被認(rèn)為是STAT激活劑、EBNA2是STAT3轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子的輔助激活因子以及JAK/STAT級聯(lián)反應(yīng)的下游元件PI3K調(diào)節(jié)亞基在所有ENKTL樣本中都表達(dá)上調(diào)，導(dǎo)致細(xì)胞增殖和存活。Li等[34]研究證明，鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白q多肽（guanine nucleotide binding protein q polypeptide，GNAQ）基因通過抑制AKT和絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPK）信號通路，來抑制ENKTL的生長，體細(xì)胞GNAQ T96S突變促進(jìn)了ENKTL的發(fā)病。還有研究認(rèn)為，ENKTL存在染色體異常，如6q21的缺失，導(dǎo)致許多抑癌基因如自噬相關(guān)蛋白5、正性調(diào)節(jié)區(qū)鋅指蛋白1、叉頭轉(zhuǎn)錄因子O3、黑素瘤缺乏因子1和E3泛素蛋白連接酶的表達(dá)缺失，抑制腫瘤壞死因子驅(qū)動的NF-κB激活而導(dǎo)致凋亡抵抗，促進(jìn)ENKTL的發(fā)生[28，32]。

進(jìn)一步表觀遺傳學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)，ENKTL存在細(xì)胞周期蛋白的甲基化、組蛋白修飾以及去調(diào)控的miRNAs。啟動子甲基化異常是ENKTL常見的致癌機(jī)制，可導(dǎo)致BIM、凋亡相關(guān)蛋白激酶1、蛋白酪氨酸磷酸酶6、甲基胞嘧啶雙加氧酶2、細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑6和天冬酰胺合成酶等多種抑癌基因的沉默，以及多重腫瘤抑制基因如細(xì)胞周期素依賴性激酶抑制劑2A、2B和1A等細(xì)胞周期調(diào)控基因的沉默，導(dǎo)致細(xì)胞正負(fù)調(diào)節(jié)信號不穩(wěn)定，引起細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，發(fā)生腫瘤[28]。通過負(fù)性MYC調(diào)控Zeste基因增強(qiáng)子同源物2（enhancer of zeste homolog 2，EZH2）miRNA介導(dǎo)EZH2的上調(diào)，使其在ENKTL中發(fā)揮致癌特性，促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白D1的轉(zhuǎn)錄，并通過NF-κB信號通路促進(jìn)腫瘤的浸潤性生長和不良預(yù)后[29，32]。表觀遺傳的另一類調(diào)節(jié)因子是EBV miRNAs，作為癌基因或腫瘤抑制基因發(fā)揮作用，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄后的基因調(diào)控。有研究發(fā)現(xiàn)ENKTL存在大量對腫瘤生長有抑制作用的miRNAs，包括miR-146a、miR-26a、miR-26b、miR-28-5、miR-101和miR-363的下調(diào)[28]，進(jìn)而抑制細(xì)胞NF-κB通路，抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其下調(diào)則促進(jìn)腫瘤的發(fā)生[32]。

EBV誘導(dǎo)ENKTL細(xì)胞分泌IL-9[29]，進(jìn)而刺激腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲。ENKTL還可分泌IL-2，通過誘導(dǎo)IL-10和干擾素-γ的產(chǎn)生，活化T細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞因子產(chǎn)生，刺激NK細(xì)胞增殖，并通過JAK/STAT通路間接上調(diào)LMP1的表達(dá)，促進(jìn)ENKTL細(xì)胞生長。腫瘤壞死因子CD70與其受體CD27的連接（CD70/CD27）通路，導(dǎo)致T細(xì)胞的活化和增殖。EBV陽性的ENKTL細(xì)胞株特異性表達(dá)可以調(diào)控T細(xì)胞活化、增殖的CD70，其可通過與可溶性CD27結(jié)合，以劑量依賴的方式在淋巴瘤增殖中發(fā)揮作用。另外，CD27/CD70信號可能被LMP1上調(diào)[35]，加速ENKTL的進(jìn)展。

3 結(jié)語與展望

EBV廣泛存在于世界各地的人群中[1]。盡管EBV與多種惡性腫瘤的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，但其發(fā)病機(jī)制尚未闡明；雖然EBV體外感染模型已建立多年，但相關(guān)潛伏感染和裂解感染的EBV感染的具體策略，尚未明確。未來的研究應(yīng)集中在復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)與眾多轉(zhuǎn)錄因子、病毒裂解/潛伏抗原及其相關(guān)關(guān)系方面。隨著對EBV與控制細(xì)胞生長和存活的關(guān)鍵細(xì)胞通路更多且更深的了解，將逐步解決上述問題，并探索其與癌癥的密切聯(lián)系。