管瑛瑛 陳桓 魯華東

（復旦大學附屬中山醫(yī)院廈門醫(yī)院 福建廈門 361015）

胃癌是臨床發(fā)病率較高的一種起源于胃黏膜上皮細胞的惡性腫瘤，其發(fā)生率與死亡率分別位居我國所有惡性腫瘤的第二位與第三位。近年來，隨著醫(yī)療診斷與治療水平的不斷提高，胃癌患者的預后及生存時間均有所提高，但其發(fā)生率仍呈持續(xù)上升趨勢[1]。有研究發(fā)現(xiàn)，胃癌的發(fā)生、發(fā)展與環(huán)境、遺傳、幽門螺桿菌感染等因素密切相關(guān)，且多因素、多步驟的共同參與可導致胃癌患者的預后相對較差[2]。目前，臨床多認為胃癌的轉(zhuǎn)移是導致患者預后不良及病死的主要原因之一，其主要的機制是癌基因的突變激活，導致多條信號通路改變，從而致使細胞之間的黏附能力下降、接觸性抑制減弱，增加細胞侵襲能力。隨著臨床分子生物學研究水平的日益提高，越來越多的學者證實，蛋白基因的表達異常與胃癌患者的臨床病理特征及預后存在一定關(guān)系[3～4]。其中轉(zhuǎn)錄共激活因子相關(guān)蛋白（YAP）作為Hippo信號通路的核心效應因子，也是多功能細胞內(nèi)連接蛋白與轉(zhuǎn)錄共激活因子，在正常機體中可發(fā)揮信號轉(zhuǎn)導與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的作用[5]。轉(zhuǎn)錄輔助因子退變樣蛋白4（VGLL4）也是Hippo信號通路的成員之一，國外有學者研究發(fā)現(xiàn)，VGLL4可抑制YAP蛋白表達活性，從而控制腫瘤細胞的增殖[6]。本研究分析胃癌組織中YAP、VGLL4蛋白表達與臨床病理特征的相關(guān)性。現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析醫(yī)院2018年3月至2021年12月收治的胃癌患者103例的臨床資料。其中男66例，女37例；年齡47～78歲，平均（61.48±5.17）歲；腫瘤直徑2～8 cm，平均（4.43±0.87）cm；胃癌TNM分期，Ⅰ期14例，Ⅱ期21例，Ⅲ期48例，Ⅳ期20例；組織學分級，G1～G2級36例，G3級67例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例。本研究經(jīng)復旦大學附屬中山醫(yī)院廈門醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準（1）納入標準：符合《胃癌規(guī)范化診療指南（試行）》[7]中胃癌相關(guān)診斷標準，并經(jīng)胃組織活檢確診；癌旁組織為距離癌組織病變病灶＞5 cm的標本；臨床資料完整。（2）排除標準：合并凝血功能障礙者；檢查前已接受相關(guān)治療者；合并免疫系統(tǒng)疾病者；合并其他惡性腫瘤者；精神及認知功能障礙無法配合檢查者。

1.3 檢查方法 在取得患者癌組織及癌旁組織的標本后，重新制備切片并進行蘇木精-伊紅（HE）染色，厚度為4μm，由2位經(jīng)驗豐富的病理科醫(yī)師對病理診斷報告及切片組織學分型進行審核，以最大程度減少研究結(jié)果的偏差。VGLL4抗體購自上海梵態(tài)生物科技有限公司，兔抗人YAP多克隆抗體購自艾美捷科技有限公司。行免疫組織化學（SP）法檢測，所有流程嚴格按照說明書完成。YAP稀釋濃度為1:100（一抗），VGLL4稀釋濃度為1:200（一抗），將已知的陽性組織切片作為陽性對照組，使用磷酸緩沖鹽溶液（PBS）代替一抗做陰性對照組，每例取一張切片做HE染色觀察形態(tài)。

1.4 判定標準 YAP、VGLL4蛋白的著色部位主要為細胞核，部分可見著色部位為胞漿。使用陽性細胞比例與著色強度兩項計分法對陽性結(jié)果進行評估。染色強度評分，其中0分表示無色，1分表示淡黃色，2分表示棕黃色，3分表示棕褐色。陽性細胞百分比按照5級進行劃分，0分表示無陽性細胞，1分表示陽性細胞＜25%，2分表示26%≤陽性細胞≤50%，3分表示51%≤陽性細胞≤75%，4分表示陽性細胞＞75%。將兩種蛋白著色強度積分相加為最終判定結(jié)果，即0分為“-”，2～3分為“±”，4～5分為“+”，6～7分為“++”，將結(jié)果為“+”及“++”判定為陽性。將結(jié)果＜4分納入低表達組，將結(jié)果≥4分納入高表達組。

1.5 觀察指標 收集所有患者性別、年齡、組織學分級、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵襲性及腫瘤大小等臨床病理特征，采用Spearman相關(guān)性分析胃癌患者中YAP與VGLL4蛋白表達的相關(guān)性，分析胃癌組織中YAP、VGLL4蛋白表達水平與臨床病理特征的相關(guān)性。

1.6 統(tǒng)計學方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理。計數(shù)資料用%表示，比較采用χ2檢驗；采用Spearman直線相關(guān)性檢驗胃癌患者中YAP與VGLL4蛋白表達的相關(guān)性。以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 YAP、VGLL4蛋白在胃癌組織與癌旁組織的表達情況 癌組織中YAP蛋白陽性表達率高于癌旁組織，而VGLL4蛋白陽性表達率低于癌旁組織（P＜0.05）。見表1。

表1 胃癌患者不同組織YAP、VGLL4蛋白表達情況[例（%）]

2.2 胃癌YAP、VGLL4蛋白表達與臨床病理特征的相關(guān)性 不同性別、年齡、腫瘤大小的胃癌患者YAP、VGLL4蛋白表達相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），不同組織學分級、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者YAP、VGLL4蛋白表達相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2、表3。

表2 胃癌YAP蛋白表達與臨床病理特征的相關(guān)性[例（%）]

表3 胃癌VGLL4蛋白表達與臨床病理特征的相關(guān)性[例（%）]

2.3 胃癌組織YAP、VGLL4蛋白表達的相關(guān)性分析 經(jīng)Spearman直線相關(guān)性檢驗，胃癌YAP、VGLL4蛋白表達呈負相關(guān)性（r＜0，P＜0.05）。見表4。

表4 胃癌組織YAP、VGLL4蛋白表達的相關(guān)性分析（例）

3 討論

相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，早期胃癌的術(shù)后5年生存率高達90.9%。但晚期患者仍缺乏有效的治療手段，即使采用綜合治療進行干預，其5年的生存率仍低于30%。大部分的胃癌患者早期多無明顯癥狀，或僅出現(xiàn)上腹不適、噯氣等非特異性癥狀，常與胃部其他疾病混淆，故早期胃癌的診斷率相對較低[7]。近年來，臨床研究發(fā)現(xiàn)，胃癌的發(fā)生機制涉及癌基因及抑癌基因的表達，可通過觀察與胃癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)的基因蛋白表達，從而明確其發(fā)生的機制，有利于診療方案的制定，從而改善患者的預后[8]。

胃癌的發(fā)生與發(fā)展主要機制與癌基因的突變激活密切相關(guān)，其機制可能是癌基因的信號通路改變抑制了細胞之間的黏附能力。YAP被認為在肝癌、結(jié)腸癌等多種癌癥疾病中呈高表達，且蛋白活性增強，并參與了腫瘤的侵襲、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等過程[9]。VGLL4是臨床發(fā)現(xiàn)的原癌蛋白YAP拮抗因子，其可通過與YAP綁定轉(zhuǎn)錄增強相關(guān)結(jié)構(gòu)域蛋白（TEADs），對過度激活的YAP-TEAD信號胃癌細胞增殖與侵襲起到抑制作用，從而控制腫瘤的發(fā)展[10～12]。本研究結(jié)果顯示，癌組織中YAP蛋白陽性表達率高于癌旁組織，VGLL4蛋白陽性表達率低于癌旁組織，YAP、VGLL4蛋白表達與胃癌患者性別、年齡及腫瘤大小無關(guān)，與組織學分級、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，結(jié)果提示胃癌組織中YAP蛋白呈高表達、VGLL4蛋白呈低表達，且二者表達均與組織學分級、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征存在一定相關(guān)性。分析原因可能為：（1）YAP可通過控制細胞的增殖與凋亡之間的平衡，從而調(diào)控腫瘤的發(fā)展。在一般情況下YAP多以低表達甚至不表達出現(xiàn)在正常組織中，而當機體組織器官發(fā)生異常變化后，則會激活之前不表達的YAP蛋白，經(jīng)轉(zhuǎn)錄共激活因子與TEAD受體相結(jié)合后誘導靶基因的表達，發(fā)揮調(diào)控細胞增殖與凋亡的功能，從而進一步促進腫瘤的發(fā)生。Pearson JD等[13]研究發(fā)現(xiàn)YAP參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，在機體的組織器官中扮演致癌基因角色，其表達活性提高、活性增強可促進細胞轉(zhuǎn)化為惡性。另外，根據(jù)YAP蛋白的是否存在可將臨床所有癌癥分為兩類，為臨床治療最具侵襲性與無法治愈的類型提供了重要參考。（2）VGLL4是近年來臨床發(fā)現(xiàn)的原癌蛋白YAP的競爭對手，其可與TEAD4結(jié)合從而控制YAP的活性開關(guān)，而下調(diào)YAP蛋白的活性可抑制腫瘤細胞的增殖。

相關(guān)研究[14]發(fā)現(xiàn)，通過解析VGLL4與TEAD4形成的復合物三維結(jié)構(gòu)可發(fā)展為YAP蛋白的針對性抑制劑，抑制劑可阻滯胃癌細胞的增殖及生長，均提示VGLL4在胃癌組織中表達較低。經(jīng)Spearman直線相關(guān)性檢驗發(fā)現(xiàn)，YAP、VGLL4蛋白在胃癌患者中呈負相關(guān)表達，結(jié)果提示YAP、VGLL4蛋白在胃癌組織中存在負相關(guān)關(guān)系，臨床可對兩者蛋白表達進行監(jiān)測，從而了解胃癌患者的臨床病理特征，以制定診治方案。韓新影等[15]采用免疫組織化學SP法對46例胃癌患者的癌組織及癌旁組織進行檢測發(fā)現(xiàn)，VGLL4、YAP蛋白表達均與胃癌患者的腫瘤惡性程度存在一定關(guān)系，且可影響患者的中位生存時間，這與本次部分研究結(jié)果近似。

綜上所述，胃癌組織中YAP、VGLL4蛋白表達與臨床病理特征存在一定相關(guān)性，其中YAP蛋白表達與腫瘤的發(fā)展及惡性程度呈正相關(guān)，而VGLL4蛋白表達與腫瘤的惡性程度呈負相關(guān)。但本研究仍存在一定不足：如研究屬于回顧性分類，故統(tǒng)計分析結(jié)果可能存在一定偏倚；未對YAP、VGLL4分子表達水平與胃癌患者預后相關(guān)性進行分析，兩者之間的相互作用機制仍無法明確。故未來期待大樣本量、多中心的前瞻性隨機對照研究，以證實本研究的結(jié)論。