王婧婧 古詩(shī)琴蔡瑩 孫相如 楊艷紅 胡方林

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)， 湖南 長(zhǎng)沙410208）

潰瘍性結(jié)腸炎是一種主要累及直腸、結(jié)腸黏膜和黏膜下層的慢性非特異性炎癥，屬于炎癥性腸病范疇，臨床主要表現(xiàn)為腹瀉、腹痛、黏液膿血便及里急后重等［1］。中醫(yī)基于“病證結(jié)合”與“辨證論治”的診療體系及治療方式，在促進(jìn)潰瘍愈合、減輕患者癥狀、增強(qiáng)體質(zhì)等方面取得了顯著的療效。

潰瘍性結(jié)腸炎可歸屬于中醫(yī)學(xué)中“休息痢”“大瘕瀉”“大腸脹”等范疇，邪客于大腸，與氣血搏結(jié)，血絡(luò)損傷，肉腐成膿，如遷延不愈，進(jìn)展至疾病后期，多會(huì)出現(xiàn)脾腎陽(yáng)虛的表現(xiàn)［2］。明代醫(yī)家薛己首創(chuàng)朝夕互補(bǔ)法治療虛損病，朝用補(bǔ)中益氣湯，夕用腎氣丸治療脾腎虧損證［3］。脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎久泄傷陰，陰損及陽(yáng)，臨床朝用參苓白術(shù)散培補(bǔ)脾土，健脾止瀉，滋其化源；夕用腎氣丸溫補(bǔ)腎陽(yáng)，補(bǔ)火生土，脾腎并重治療脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎療效顯著［4］，但其作用機(jī)制尚不明確。

代謝組學(xué)因其具有高通量、高靈敏度、高精確性的優(yōu)勢(shì)，能定性或定量動(dòng)態(tài)檢測(cè)機(jī)體小分子代謝產(chǎn)物的變化，具有整體性和動(dòng)態(tài)性［5?6］。因此，本研究采用基于LC?QTOF?MS 的代謝組學(xué)方法，對(duì)脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織代謝物進(jìn)行分析鑒定，篩選差異代謝物，從內(nèi)源性代謝角度探討參苓白術(shù)散與腎氣丸“朝夕互補(bǔ)”干預(yù)脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎的作用機(jī)制。

1 材料

1.1 動(dòng)物 SPF 級(jí)雄性SD 大鼠32只，體質(zhì)量（200±20）g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（湘）2019?0009。大鼠分籠飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF 級(jí)動(dòng)物房，溫度22～26 ℃，相對(duì)濕度40%～65%。本研究方案經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（編號(hào)LL2020090901）。

1.2 藥物 參苓白術(shù)散（人參15 g、白術(shù)15 g、白茯苓15 g、炒甘草10 g、薏苡仁9 g、蓮子肉9 g、縮砂仁6 g、白扁豆12 g、炒桔梗6 g、山藥15 g、大棗3 枚）、腎氣丸（干地黃24 g、山藥12 g、山茱萸12 g、澤瀉9 g、茯苓9 g、牡丹皮9 g、炮附子3 g、桂枝3 g），藥材飲片均購(gòu)自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院門(mén)診中藥房，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)胡方林教授鑒定為正品。按原方比例稱取藥材［7］，常規(guī)煎法煎煮2次，第1 次加8 倍量水浸泡30 min，煎煮1 h，取煎液，第2 次加5 倍量水，煎煮30 min，取煎液，2 次煎液混合后濃縮，參苓白術(shù)散湯劑和腎氣丸湯劑分別濃縮至生藥量1 g／mL。大黃中藥材煎煮方法同前，濃縮至生藥量1.35 g／mL，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆茫?］。美沙拉嗪腸溶片研磨成粉劑備用。

1.3 試劑 三硝基苯磺酸（TNBS，批號(hào)SLCG2384），購(gòu)自美國(guó)Sigma 公司；氫化可的松注射液（批號(hào)2008201），購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)容生制藥有限公司；便隱血（OB）試劑（批號(hào)B200901），購(gòu)自珠海貝索生物技術(shù)有限公司；美沙拉嗪腸溶片（批號(hào)20200604），購(gòu)自黑龍江天宏藥業(yè)股份有限公司。乙腈、甲酸均為色譜純，購(gòu)自德國(guó)默克公司。

1.4 儀器 液相色譜?四級(jí)桿／飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用儀（型號(hào)Triple TOFTM5600，美國(guó)AB SCIEX 公司）；脫水機(jī)、包埋機(jī)（型號(hào)JJ?12J、JB?P5，武漢俊杰電子有限公司）；病理切片機(jī)（型號(hào)RM2016，上海徠卡儀器有限公司）；正置光學(xué)顯微鏡、成像系統(tǒng)（型號(hào)Nikon Eclipse E100、Nikon DS?U3，日本尼康公司）。

2 方法

2.1 造模 脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的建立采用病證結(jié)合法，參考文獻(xiàn)［8］ 報(bào)道，第一階段復(fù)制“脾虛”模型，正常組大鼠灌胃給予蒸餾水，每只2 mL，模型組大鼠上午灌胃給予大黃水煎液，每只2 mL，連續(xù)14 d；第二階段復(fù)制“脾腎陽(yáng)虛”模型，第15 天在模型組大鼠左右肢臀部交替處肌肉注射氫化可的松25 mg／kg，連續(xù)10 d，第25 天禁食不禁水，第26 天用100 mg／kg TNBS 加50%乙醇0.25 mL 混合試劑灌腸，正常組用等體積蒸餾水灌腸，進(jìn)而建立脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型。

2.2 模型評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) 造模后第3天，從正常組和模型組分別隨機(jī)選取2 只大鼠處死，鏡下觀察結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)、炎癥及潰瘍損傷等情況。參照《中醫(yī)虛證辨證參考標(biāo)準(zhǔn)》的“證候診斷”標(biāo)準(zhǔn)［9］進(jìn)行評(píng)價(jià)，①大便溏泄，甚則脫肛；②消瘦，食欲下降，體質(zhì)量減輕；③畏寒，弓背，蜷縮聚堆；④神態(tài)萎靡，毛色枯槁無(wú)光澤；⑤易疲勞乏力，嗜臥，第①～③項(xiàng)為脾腎陽(yáng)虛證主癥，第④⑤項(xiàng)為脾腎陽(yáng)虛證兼癥。具備2 項(xiàng)主癥及2 項(xiàng)兼癥即可認(rèn)為脾腎陽(yáng)虛證模型復(fù)制成功。在宏觀體征表現(xiàn)的基礎(chǔ)上，結(jié)合鏡下結(jié)腸黏膜病理變化判斷模型制備成功與否。

2.3 分組與給藥 脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎成模大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組、朝夕互補(bǔ)方組、美沙拉嗪組，每組7 只。從造模后第7 天開(kāi)始給藥，藥物劑量按成人臨床等效劑量換算為大鼠給藥劑量［10］，朝夕互補(bǔ)方組上午灌胃給予5.04 g／kg 參苓白術(shù)散湯劑，下午灌胃給予3.645 g／kg腎氣丸湯劑；美沙拉嗪組灌胃給予0.18 g／kg 美沙拉嗪混懸液；正常組和模型組灌胃給予1 mL／kg 0.9%生理鹽水，每天上午9 時(shí)～10 時(shí)灌胃，下午5 時(shí)～6 時(shí)灌胃，連續(xù)21 d。

2.4 大鼠一般情況觀察 觀察大鼠的精神狀態(tài)、毛發(fā)色澤、飲食量、大便性狀、死亡等情況。

2.5 大鼠疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）評(píng)分 從給藥第1 天起，每3 d 記錄大鼠體質(zhì)量變化、糞便性狀和隱血，采用匹拉米洞半定量檢測(cè)法檢測(cè)大鼠糞便隱血。參考Hamamoto［11］標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行DAI 評(píng)分，見(jiàn)表1，評(píng)估造模后潰瘍性結(jié)腸炎的活動(dòng)程度。DAI 評(píng)分＝（體質(zhì)量下降計(jì)分＋大便性狀計(jì)分＋大便隱血情況計(jì)分）／3。

表1 DAI 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

2.6 結(jié)腸組織病理形態(tài)評(píng)價(jià) 取出固定于4%多聚甲醛溶液中的病變結(jié)腸組織，石蠟包埋后制作病理切片，再進(jìn)行HE 染色。鏡下觀察結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)、炎癥及潰瘍損傷等情況。參照Morris［12］標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分，見(jiàn)表2，求和并取平均值。

表2 病理組織學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

2.7 結(jié)腸組織代謝組學(xué)檢測(cè)

2.7.1 色譜條件 Waters Acquity HSS T3 色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相0.1% 甲酸溶液（A）?乙腈（B），梯度洗脫（0～13 min，1%B；13～16.5 min，99%B；16.5～20 min，1%B）；體積流量0.3 mL／min；柱溫40 ℃；進(jìn)樣量3 μL。

2.7.2 質(zhì)譜條件 采用電噴霧離子化源（ESI），正負(fù)離子模式檢測(cè)；正離子噴霧電壓（ISVF）5 500 V，負(fù)離子ISVF－4 500 V；霧化氣溫（TEM）550 ℃；霧化氣（GS1）和輔助氣（GS2）均為55 psi；氣簾氣（CUR）35 psi；正離子碰撞能量（CE）10 V，負(fù)離子CE－10 V；正離子去簇電壓（DP）80 V，負(fù)離子DP－80 V；掃描范圍60～1 000m／z。

2.7.3 數(shù)據(jù)處理及多元統(tǒng)計(jì)分析 使用Proteo Wizard 軟件將質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)成mzXML 格式，使用XCMS 進(jìn)行保留時(shí)間矯正、峰識(shí)別、峰提取、峰積分、峰對(duì)齊等。利用R 語(yǔ)言中的StatTarget 包對(duì)信號(hào)進(jìn)行校正，各組積分峰面積值為代謝物的含量，以（）表示。將 數(shù)據(jù)導(dǎo)入Metabo Analyst4.0（www.metaboanalyst.ca）軟件進(jìn)行歸一化處理后，應(yīng)用主成分分析（principal component analysis，PCA）和偏最小二乘判別分析（partial least square discriminant analysis，PLS?DA）分別顯示不同組別在計(jì)分圖上的分布。PCA 在最大程度提取原始信息的同時(shí)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行降維處理，通過(guò)主成分來(lái)描述機(jī)體代謝的情況；PLS?DA 則可使組間差異最大化。為了尋找潛在的生物標(biāo)志物，通過(guò)組與組之間兩兩對(duì)比，從正交偏最小二乘判別分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis，OPLS?DA）負(fù)荷圖中篩選VIP ＞1.5（VIP 表示投影中可變重要性）的離子，并對(duì)這些離子進(jìn)行t檢驗(yàn)、變異倍數(shù)分析FC（fold change analysis）的單變量統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)。P＜0.05 并且FC＞1.5（或＜0.67）的離子最終被認(rèn)為是潛在的內(nèi)源性差異代謝物。利用鑒定出的差異代謝物KEGG ID 進(jìn)行代謝通路分析。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 通過(guò)SPSS 26.0 軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料以（）表示，單變量的計(jì)量資料樣本均數(shù)間比較，若符合正態(tài)分布，用單因素方差分析，多重比較用LSD 分析。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 朝夕互補(bǔ)方對(duì)脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠一般情況的影響 與正常組大鼠比較，模型組大鼠出現(xiàn)蜷臥少動(dòng)，行動(dòng)遲緩，喜扎堆，弓背，腹脹，毛發(fā)亂無(wú)光澤，耳及四肢爪甲色淡白，舌質(zhì)紫暗，尿液清，大便稀溏色黑，肛周污染，生物學(xué)表征符合脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎的臨床證候特點(diǎn)；美沙拉嗪組大鼠大便由稀溏轉(zhuǎn)為松散，顏色由黑轉(zhuǎn)為黃褐色，腹脹減輕，毛發(fā)逐漸光澤，行動(dòng)稍遲緩，喜扎推，無(wú)弓背，耳及四肢爪甲色淡紅；朝夕互補(bǔ)方組大鼠大便形狀逐步恢復(fù)正常，由稀溏轉(zhuǎn)為松散至顆粒狀，顏色由黑轉(zhuǎn)為黃褐色，尿液色淡黃，無(wú)腹脹，毛發(fā)逐漸光澤，行動(dòng)逐步靈活，耳及四肢爪甲色逐漸紅潤(rùn)。

3.2 朝夕互補(bǔ)方對(duì)脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠DAI 評(píng)分的影響 模型組大鼠DAI 評(píng)分隨時(shí)間延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)，且高于正常組；從治療第3 天開(kāi)始，美沙拉嗪組和朝夕互補(bǔ)方組大鼠DAI 評(píng)分呈下降趨勢(shì)，朝夕互補(bǔ)方組大鼠DAI 評(píng)分趨于正常組，且優(yōu)于美沙拉嗪組，見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠DAI 評(píng)分（n＝7）

3.3 朝夕互補(bǔ)方對(duì)脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織病理變化的影響 正常組大鼠結(jié)腸組織表面光滑良好，黏膜各層結(jié)構(gòu)完整，無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，黏膜無(wú)充血水腫及潰瘍形成；模型組大鼠結(jié)腸黏膜充血水腫、潰瘍形成，黏膜組織可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞（如中性粒細(xì)胞）浸潤(rùn)，病理評(píng)分高于正常組（P＜0.01）；與模型組比較，各給藥組大鼠結(jié)腸黏膜結(jié)構(gòu)有不同程度的改善，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少，組織病理評(píng)分均低于模型組（P＜0.01），其中朝夕互補(bǔ)方作用優(yōu)于美沙拉嗪，見(jiàn)圖2、表3。

表3 各組大鼠結(jié)腸組織病理評(píng)分比較（，n＝7）

表3 各組大鼠結(jié)腸組織病理評(píng)分比較（，n＝7）

注：與正常組比較，??P＜0.01 ；與模型組比較，＃＃P＜0.01。

圖2 各組大鼠結(jié)腸組織病理圖（HE，×200）

3.4 朝夕互補(bǔ)方對(duì)脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織代謝組學(xué)的影響

3.4.1 結(jié)腸組織PCA、PLS?DA 分析 點(diǎn)代表樣本，所有樣本點(diǎn)均分布在95% 置信區(qū)間。圖3A 為PCA 分析結(jié)果，正常組與模型組完全分離，其代謝輪廓相異；朝夕互補(bǔ)方組、美沙拉嗪組在正常組與模型組之間。圖3B 為PLS?DA分析結(jié)果，正常組、模型組、朝夕互補(bǔ)方組、美沙拉嗪組樣本分離，說(shuō)明其代謝輪廓相異。提示，朝夕互補(bǔ)方干預(yù)后，脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織代謝輪廓向正常組靠近，表明內(nèi)源性代謝紊亂有所改善。

圖3 各組大鼠結(jié)腸組織PCA（A）、PLS?DA（B）得分圖

3.4.2 PLS?DA 交叉驗(yàn)證 交叉驗(yàn)證用于評(píng)價(jià)模型的質(zhì)量，R2為模型建立的準(zhǔn)確率，R2越高，表示模型的質(zhì)量高。Q2為模型的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率，Q2越高，表示模型的預(yù)測(cè)能力越高。由圖4 可得，大鼠結(jié)腸組織樣本R2＝0.996，Q2＝0.749，說(shuō)明模型的質(zhì)量與預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率均較好，不存在“過(guò)擬合”現(xiàn)象。

圖4 大鼠結(jié)腸組織PLS?DA 交叉驗(yàn)證圖

3.4.3 差異代謝物的篩選 以VIP＞1.5、P＜0.05、FC＞1.5（或＜0.67）為篩選條件，最終得到26 個(gè)模型組與正常組間差異代謝物，對(duì)這些差異代物的定量信息進(jìn)行熱圖分析，見(jiàn)圖5。顏色深淺表示不同的強(qiáng)度，從紅色到藍(lán)色，表示強(qiáng)度從高到低。結(jié)果顯示，不同組別的個(gè)體均能很好地聚集在各自的組別中，說(shuō)明這26 個(gè)差異代謝物能夠?qū)? 組完全區(qū)分。

圖5 各組大鼠結(jié)腸組織差異代謝物熱圖

3.4.4 最終差異代謝物篩選及代謝通路分析 首先篩選出正常組與模型組之間的差異代謝物，在此基礎(chǔ)上觀察美沙拉嗪和朝夕互補(bǔ)方對(duì)這些代謝物的影響。朝夕互補(bǔ)方對(duì)脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)的17 個(gè)代謝物有改善作用（P＜0.05，P＜0.01），代謝物信息詳見(jiàn)表4。將17 個(gè)差異代謝標(biāo)志物進(jìn)行MetPA 分析，得到14 條代謝通路（P＜0.05），其中嘌呤代謝（0.200）、氨基糖和核苷酸糖代謝（0.121）2 條代謝通路的影響值大于0.1，可作為主要代謝通路，見(jiàn)圖6。

圖6 差異代謝物MetPA 通路分析

表4 各組大鼠結(jié)腸組織差異代謝物比較（，n＝7）

表4 各組大鼠結(jié)腸組織差異代謝物比較（，n＝7）

注：與模型組比較，?P＜0.05，??P＜0.01。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)采用基于LC?QTOF?MS 的代謝組學(xué)方法探討參苓白術(shù)散與腎氣丸“朝夕互補(bǔ)”對(duì)脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠的作用機(jī)制。朝夕互補(bǔ)方可使紊亂的代謝譜向正常的趨勢(shì)回歸，篩選出17 個(gè)與脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)的差異代謝物，涉及14 條代謝通路，可部分揭示朝夕互補(bǔ)方的作用機(jī)制。

4.1 氨基酸代謝 色氨酸是一種在免疫調(diào)節(jié)過(guò)程中起關(guān)鍵作用的氨基酸，在巨噬細(xì)胞內(nèi)通過(guò)犬尿氨酸途徑生成3?羥基鄰氨基苯甲酸［13］。模型組大鼠3?羥基鄰氨基苯甲酸含量升高，顯示機(jī)體色氨酸代謝紊亂；經(jīng)朝夕互補(bǔ)方干預(yù)后下調(diào)，提示其可能通過(guò)糾正色氨酸代謝紊亂以減輕潰瘍性結(jié)腸炎大鼠炎癥反應(yīng)。N6?乙酰?L?賴氨酸是賴氨酸降解的中間產(chǎn)物，N?α?乙酰賴氨酸是賴氨酸與乙酰輔酶A 進(jìn)行乙?；闹虚g代謝物［14］。賴氨酸作為一種

必須氨基酸，具有促進(jìn)機(jī)體發(fā)育，提高免疫功能的作用。賴氨酸乙酰化調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞中代謝酶的活性、穩(wěn)定性以及控制炎癥因子的產(chǎn)生從而調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)［15］。模型組N6?乙酰?L?賴氨酸、N?α?乙酰賴氨酸含量升高；經(jīng)朝夕互補(bǔ)方干預(yù)后下調(diào)，提示其可能通過(guò)調(diào)節(jié)賴氨酸代謝發(fā)揮抗炎作用。

4.2 嘌呤代謝 鳥(niǎo)苷是一種以鳥(niǎo)嘌呤為基礎(chǔ)的細(xì)胞外信號(hào)分子，可提高髓過(guò)氧化物酶活性以發(fā)揮抗炎和抗氧化作用［16］。肌苷酸是磷酸鳥(niǎo)苷的胞內(nèi)前體，通過(guò)代謝肌苷發(fā)揮作用［17］。研究表明，肌苷對(duì)TNBS 誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸炎可通過(guò)促進(jìn)尿酸生成發(fā)揮抗炎作用［18］。模型組鳥(niǎo)苷、肌苷酸和磷酸鳥(niǎo)苷含量升高；經(jīng)朝夕互補(bǔ)方干預(yù)后下調(diào)，提示其可能通過(guò)干預(yù)嘌呤代謝促進(jìn)尿酸生成發(fā)揮抗炎、抗氧化作用。

4.3 脂類代謝 胞磷膽堿是內(nèi)源性合成磷脂酰膽堿的中間體，參與細(xì)胞膜的形成和修復(fù)［19］。3?羥甲基戊二酸是膽固醇代謝的中間產(chǎn)物［20］。膽固醇參與維持細(xì)胞膜的通透性和流動(dòng)性以及跨膜信號(hào)通路的調(diào)節(jié)［21］。模型組胞磷膽堿、3?羥甲基戊二酸含量升高，可能由于潰瘍性結(jié)腸炎結(jié)腸組織抗氧化能力下降，細(xì)胞釋放活性氧與活性氮破壞細(xì)胞膜的穩(wěn)定性［18］；經(jīng)朝夕互補(bǔ)方干預(yù)后下調(diào)，提示其可能通過(guò)干預(yù)膽固醇代謝，修復(fù)細(xì)胞膜，維持細(xì)胞膜的穩(wěn)定性以改善結(jié)腸黏膜損傷。甘油酸是甘油氧化產(chǎn)物，能促進(jìn)內(nèi)源性前列腺素的合成，增加黏膜血流量，增強(qiáng)胃腸平滑肌收縮［22］。模型組甘油酸含量降低；經(jīng)朝夕互補(bǔ)方干預(yù)后上調(diào)，提示其可能通過(guò)促進(jìn)甘油氧化，增加黏膜血流量以促進(jìn)潰瘍愈合，增強(qiáng)胃腸平滑肌收縮，促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)以減輕大鼠腹脹。

4.4 能量代謝 尿苷二磷酸葡萄糖和尿苷二磷酸半乳糖是基于尿苷二磷酸的2 個(gè)己糖變體，可分解代謝ATP 為機(jī)體提供能量［23］。十二烷二酸是一種含12 個(gè)碳原子的飽和脂肪族二元酸，能為ATP 合成提供中間底物，且能量密度較高，可作為腸外營(yíng)養(yǎng)的替代燃料底物之一［24?26］。上述代謝物在模型組中含量升高，與潰瘍性結(jié)腸炎炎癥部位新陳代謝增加需要消耗大量能量相符；經(jīng)朝夕互補(bǔ)方干預(yù)后恢復(fù)至正常水平，提示其可能通過(guò)糾正能量代謝紊亂以改善結(jié)腸組織炎癥反應(yīng)。

4.5 維生素代謝及其他 泛酸（維生素B5）具有促進(jìn)代謝和抗氧化的作用，參與輔酶A 合成，高度依賴輔酶A 的結(jié)腸組織在泛酸缺乏時(shí)易造成細(xì)胞損傷［27］。β?胍基丙酸是肌酸類似物，能夠提高機(jī)體內(nèi)線粒體酶活性，改善線粒體功能，提高抗氧化能力［28］。本研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)朝夕互補(bǔ)方干預(yù)后，可上調(diào)泛酸和β?胍基丙酸，提示其可能通過(guò)干預(yù)維生素代謝，促進(jìn)輔酶A 合成，增強(qiáng)抗氧化能力以減輕炎癥。

綜上所述，參苓白術(shù)散與腎氣丸“朝夕互補(bǔ)”可改善脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠的宏觀體征，減輕結(jié)腸炎癥，促進(jìn)潰瘍愈合，聯(lián)合結(jié)腸組織代謝組學(xué)發(fā)現(xiàn)其差異代謝物主要參與氨基酸代謝、氧化應(yīng)激反應(yīng)及能量代謝等。