杜正彩 郝二偉 ＃韋棪婷陳曉璐Jintanaporn WattanathornTang Pei LingJustin Jang Hann Chu白鋼劉昌孝侯小濤?鄧家剛?

（1.廣西中藥藥效研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 廣西農(nóng)作物廢棄物功能成分研究協(xié)同創(chuàng)新中心， 廣西 南寧530200；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)廣西中醫(yī)藥科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心， 廣西 南寧530200； 3.廣西中醫(yī)藥大學(xué)中國?東盟傳統(tǒng)藥物研究國際合作聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室， 廣西 南寧530200； 4.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院， 廣西 南寧530200； 5.孔敬大學(xué)人類高性能與健康促進(jìn)研究所， 泰國 孔敬40002； 6.馬來西亞拉曼大學(xué)學(xué)院應(yīng)用科學(xué)學(xué)院生物科學(xué)系，馬來西亞 吉隆坡53300； 7.新加坡國立大學(xué)微生物與免疫學(xué)系， 分子RNA 病毒學(xué)與抗病毒策略實(shí)驗(yàn)室，新加坡 肯特崗117597； 8.南開大學(xué)藥物化學(xué)生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 天津300000； 9.天津藥物研究院新藥評價研究中心， 現(xiàn)代中藥研究中心， 天津300193）

呼吸道病毒是指以呼吸道為侵入門戶，在呼吸道黏膜上皮細(xì)胞中增殖，引起呼吸道局部感染或呼吸道以外組織器官病變的一類病毒，主要包括正黏病毒科（流感病毒）、副黏病毒科（副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、亨德拉病毒、尼帕病毒、人偏肺病毒）、冠狀病毒科（SARS?CoV、MERS?CoV、2019?nCoV 冠狀病毒）、披膜病毒科（風(fēng)疹病毒）、小RNA 病毒科（鼻病毒）等不同病毒科的多種病毒。呼吸道病毒感染是全球范圍內(nèi)人類發(fā)病和死亡的主要原因之一，多數(shù)急性呼吸道感染是由病毒引起的［1］。全球季節(jié)性甲型和乙型流感病毒流行每年造成多達(dá)60 萬人死亡［2］。天然傳統(tǒng)藥物特別是中醫(yī)藥在我國抗擊新型冠狀病毒肺炎（COVID?19）疫情中發(fā)揮巨大作用，在減輕癥狀、控制病情進(jìn)展、減少激素用量、減輕并發(fā)癥等方面得到應(yīng)用［3］。

中國和東盟國家擁有豐富的藥用植物資源和類似的傳統(tǒng)醫(yī)藥應(yīng)用傳統(tǒng)，對傳染性病毒類疾病具有較豐富的傳統(tǒng)用藥經(jīng)驗(yàn)。本文以《中國?東盟傳統(tǒng)藥物志》為依據(jù)，根據(jù)抗病毒作用的類型對抗病毒藥用植物的數(shù)量和品種進(jìn)行歸納整理，對它們抗呼吸道病毒的作用機(jī)制和物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行論述和分析，以期發(fā)現(xiàn)一批目標(biāo)藥用植物及其活性成分。

1 中國?東盟傳統(tǒng)藥用植物抗呼吸道病毒感染情況

對《中國?東盟傳統(tǒng)藥物志》目錄收錄的350 種傳統(tǒng)藥用植物，以“中文名＋病毒”與“英文名＋virus”為主要關(guān)聯(lián)條件，在CNKI、PubMed 等國內(nèi)外數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，篩選出其中具有抗呼吸道病毒研究報道的藥物，并以抗病毒種類數(shù)、化學(xué)成分、作用機(jī)制等建立Excel 數(shù)據(jù)庫，進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì)分析。共有63 種藥用植物有抗呼吸道病毒作用研究的報道，涉及病毒種類達(dá)23種，詳見表1。

表1 63 種中國?東盟藥用植物抗病毒研究涉及的呼吸道病毒種類

1.1 抗流感病毒 流行性感冒病毒簡稱流感病毒，包括人流感病毒和動物流感病毒。人流感病毒屬正黏病毒科，系RNA 病毒，根據(jù)其抗原性的不同，分為甲（A）、乙（B）、丙（C）型，其中甲型流感病毒抗原性易發(fā)生變異，多次引起世界性大流行。人流感是一種季節(jié)性疾病，具有很高的發(fā)病率和死亡率，抗流感的傳統(tǒng)草藥在抗擊病毒大流行中發(fā)揮重要作用。中國?東盟藥用植物中用于抗流感病毒的研究最多，治療甲型流感病毒H1N1 的傳統(tǒng)藥用植物達(dá)34種，其中以人參研究頻次最高，詳見表2。

表2 中國?東盟藥用植物用于抗流感病毒的基本情況

1.2 抗冠狀病毒 冠狀病毒（CoVs）是人與脊椎動物的重要病原體，主要引起人和動物呼吸道、消化道和神經(jīng)系統(tǒng)等疾病。冠狀病毒包括4 個屬（α、β、γ、δ），不同的冠狀病毒表現(xiàn)出不同的宿主范圍和組織嗜性。目前已知可感染人類且致病的CoVs 共7種，其中4 種（HCoV?229E、HCoV?NL63、HCoV?HKU1、HCoV?OC43）在一般人群中可能引起輕癥呼吸道疾病，而另外3 種可引起重癥呼吸道綜合征，分別為2003 年在中國等地流行的傳染性非典型性肺炎病毒（SARS?CoV），2012 年至2014 年在約旦、卡塔爾、沙特和阿聯(lián)酋等國發(fā)現(xiàn)的中東呼吸綜合征冠狀病毒（MERS?CoV），2019 年末確定的新型冠狀病毒肺炎（2019?nCoV），可引起嚴(yán)重肺炎及呼吸道綜合征。中國?東盟藥用植物中用于抗冠狀病毒的植物共10種，詳見表3。此外，連翹、印度人參、柴胡兼具抗流感病毒及冠狀病毒的功效，對于防治新型冠狀病毒肺炎具備極大的潛在價值，詳見表4。

表3 中國?東盟藥用植物用于抗冠狀病毒的基本情況

表4 同時具有抗流感病毒與冠狀病毒的中國?東盟藥用植物

1.3 抗腺病毒 腺病毒（ADV）是兒童和成人急性呼吸道、胃腸道及泌尿道等部位感染的常見病原體，根據(jù)其生物學(xué)、理化和遺傳特性不同，目前已發(fā)現(xiàn)超過100 種Ad 血清型，這些血清型被進(jìn)一步劃分為從A～G 共7 個亞群，其中3 型和7 型腺病毒為腺病毒肺炎的主要病原。中國?東盟藥用植物中用于抗腺病毒的研究涉及植物共11種，其中以車前研究頻次最高，詳見表5。

表5 中國?東盟用植物用于腺病毒病毒的基本情況

1.4 抗其他病毒 除流感病毒、冠狀病毒、腺病毒外，中國?東盟用植物還被用于呼吸道合胞病毒、麻疹病毒及副流感病毒的治療。其中，人參、黃芩、梔子等25味傳統(tǒng)藥物對呼吸道合胞病毒具有較好療效，詳見表6。

表6 中國?東盟藥用植物用于抗其他呼吸道病毒的基本情況

2 中國?東盟傳統(tǒng)藥用植物抗呼吸道病毒感染藥理作用及其機(jī)制

中國?東盟傳統(tǒng)藥用植物主要通過間接和直接途徑發(fā)揮抗呼吸道病毒感染類疾病。間接作用是指通過免疫調(diào)節(jié)、抑制病毒誘導(dǎo)的炎癥應(yīng)答等作用起到抗病毒效果；直接作用是指直接將病毒滅活、抑制病毒的附著和融合或侵入細(xì)胞繼續(xù)繁殖，從而保護(hù)機(jī)體細(xì)胞不受損害。

2.1 免疫調(diào)節(jié) 機(jī)體的免疫應(yīng)答與病毒的致病性密切相關(guān)，對于控制和清除呼吸道病毒感染至關(guān)重要。病毒感染機(jī)體時，巨噬細(xì)胞是防御系統(tǒng)的第一道屏障，產(chǎn)生各種抗病毒因子如白細(xì)胞介素IL?1、IL?6、腫瘤壞死因子TNF?α等，介導(dǎo)機(jī)體發(fā)揮抗病毒免疫應(yīng)答，進(jìn)而抑制和清除體內(nèi)病毒細(xì)胞。Kallon 等［4］研究人參多糖對雞感染禽流感病毒（H9N2）的治療作用時發(fā)現(xiàn)，H9N2 感染前后，經(jīng)人參多糖（321.25、2 500 μg／mL）處理的雞胚胎成纖維細(xì)胞CEF 中MHCⅡ基因表達(dá)及細(xì)胞因子IL?2、IL?4、IL?10 水平升高，表明人參多糖可通過增強(qiáng)體液免疫應(yīng)答促進(jìn)機(jī)體抗病毒活性。鄭群等［5］研究發(fā)現(xiàn)，兒茶提取物可增強(qiáng)流感病毒感染小鼠的細(xì)胞免疫，還能促進(jìn)特異性中和抗體產(chǎn)生。干擾素是細(xì)胞相互交流以預(yù)防和根除病毒感染的一種手段，分為Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型。先天性免疫細(xì)胞分泌的以IFN?α 與IFN?β 為主的I 型干擾素（IFN）介導(dǎo)的天然免疫機(jī)制是宿主細(xì)胞抵抗冠狀病毒最重要的方式之一［6］。Kim 等［7］報道，黃檗水提物通過誘導(dǎo)I 型干擾素（IFN?β）或促炎性細(xì)胞因子（IL?6、TNF?α）和隨后刺激在宿主細(xì)胞中的抗病毒狀態(tài)，從而抑制病毒復(fù)制，提高小鼠對甲型流感病毒H1N1、H5N2、H7N3、H9N2 的感染存活率。IFN?γ 屬于Ⅲ型干擾素，主要由Ⅰ型輔助性T 細(xì)胞（Th1 細(xì)胞）及自然殺傷細(xì)胞產(chǎn)生。研究表明，紅參水提物（人參皂苷含量約為1.8%～2.3%）可通過抑制呼吸道合胞體病毒（RSV）誘導(dǎo)的小鼠樹突狀和巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞中炎性因子TNF?α、IL?6、IL?8 表達(dá)和人肺上皮細(xì)培養(yǎng)液中活性氧的形成，降低肺病毒載量，增強(qiáng)干擾素IFN?γ 分泌以及增加小鼠RSV 感染后CD8＋T 細(xì)胞和CD11c＋樹突狀細(xì)胞的數(shù)量等多種機(jī)制發(fā)揮抗RSV 作用［8?9］。此外，紅參水提取物（50 mg／kg）可誘導(dǎo)甲型流感病毒H5N1 感染的小鼠肺組織IFN?α、IFN?γ 產(chǎn)生，增強(qiáng)免疫從而減輕H5N1 流感病毒的感染［10］。H5N1 病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白1（NS1）包含1 個RNA 結(jié)合域（RBD），可通過結(jié)合病毒dsRNA 等方式抑制宿主的IFN 應(yīng)答。Klaywong 等［11］發(fā)現(xiàn)，當(dāng)卡薩蒙納姜己烷提取物質(zhì)量濃度為10 mg／mL時，能夠抑制NS1 RBD 與標(biāo)記的dsRNA 探針的結(jié)合，當(dāng)其質(zhì)量濃度為4 000 μg／mL時，在體外實(shí)驗(yàn)中可降低64.3%的H5N1 感染率。

視黃酸誘導(dǎo)基因1 樣受體（RLRs）信號通路在抗病毒免疫的過程中發(fā)揮著重要作用。Yu 等［12］發(fā)現(xiàn)，當(dāng)16HBE細(xì)胞被H1N1 病毒感染后，炎癥因子IL?4、IFN?γ、RLRs 通路相關(guān)因子RIG?I、IFN?β 啟動子刺激物?1（IPS?1）、IRF?7、IRF?3、NF?κB 水平均升高，穿心蓮內(nèi)酯（250 μg／mL）干預(yù)后上述因子水平均降低，提示穿心蓮內(nèi)酯可通過降低其信號因子來影響RLRs 信號通路。研究發(fā)現(xiàn)，連翹酯苷A（20 mg／kg）通過降低小鼠肺部免疫細(xì)胞的RLRs 信號通路相關(guān)蛋白RIG?I、MAVS、NF?κB p65 表達(dá)，降低Th1／Th2 和Th17／Treg 比例，從而減輕甲型流感病毒FM1 株在小鼠肺部引起的炎癥反應(yīng)［13］。

Toll 樣受體（TLRs）信號通路也是和呼吸道病毒相關(guān)的天然免疫主要信號通路之一，TLRs 可以激活NF?κB 等轉(zhuǎn)錄因子，促進(jìn)多種與免疫有關(guān)的細(xì)胞因子及趨化因子的分泌從而引起炎癥反應(yīng)。玉葉金花水提物（10、5、2.5 g／kg）能抑制感染流感病毒A／FM1／47（H1N1）小鼠血清TNF?α、IL?6、IL?1β 過表達(dá)及肺組織中TLR7、MyD88、NF?κB mRNA 及蛋白表達(dá)，提示玉葉金花通過降低TLR7 介導(dǎo)的MyD88 依賴的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路活化抑制NF?κB 活性，從而減輕炎癥風(fēng)暴，發(fā)揮抗流感病毒作用［14］。研究發(fā)現(xiàn)，梔子苷（10、20 mg／kg）通過影響TLR3／TRIF 信號通路，降低炎性細(xì)胞因子IL?6、TNF?α 表達(dá)，促進(jìn)抗病毒因子IFN?β 合成，保護(hù)A／FM／1／4（H1N1）建立的流感病毒性肺炎小鼠引起的病毒性肺損傷［15］。黃芩苷（156 μg／mL）可通過抑制TLR4／NF?κB 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，降低下游細(xì)胞因子IL?6 水平來發(fā)揮抑制RSV 感染的作用［16］。

2.2 細(xì)胞自噬 自噬作為一種溶酶體依賴性的降解途徑，同時作為一種機(jī)體的防御機(jī)制，激活后能直接吞噬、降解入侵的病毒，在抗病毒感染的過程中發(fā)揮著重要作用［17］。Choi 等［18］研究顯示，蘆薈乙醇提取物（250 μg／mL）可抑制IAV 基質(zhì)蛋白1（M1）、基質(zhì)蛋白2（M2）、血凝素（HA）的合成以及表達(dá)，其中槲皮素、兒茶素、山柰酚是蘆薈乙醇提取物抗病毒的活性成分，對接模擬結(jié)果表明，槲皮素、兒茶素、山柰酚對M2 蛋白的結(jié)合親和力可能高于已知的M2 蛋白抑制劑，他們通過抑制IAV M2 蛋白，從而抑制病毒誘導(dǎo)的自噬，抗病毒增殖。

2.3 細(xì)胞凋亡 病毒感染宿主細(xì)胞后，能夠引起細(xì)胞凋亡，含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（caspase）家族是引起細(xì)胞凋亡的一組關(guān)鍵酶。研究發(fā)現(xiàn)，肉桂醛除藥物預(yù)處理方式外，在有效濃度范圍內(nèi)（0.078 1～0.312 5 mg／mL）通過調(diào)控感染病毒細(xì)胞凋亡及相關(guān)蛋白caspase?3，凋亡抑制基因Bcl?2，促凋亡基因Bax 蛋白表達(dá)，對呼吸道合胞病毒（RSV）有殺滅作用［19］。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，肉桂醛（0.078 1～0.312 5 mg／mL）抗RSV 與降低caspase?9 表達(dá)、升高p?Akt 表達(dá)有關(guān)［20］。

2.4 降低炎性因子水平 RSV 病毒可以刺激A549 細(xì)胞產(chǎn)生RANTES、MCP?1，誘導(dǎo)大量炎性細(xì)胞生成，菊花總黃酮可抑制RSV 病毒活性，降低A549 細(xì)胞RANTES、MCP?1 水平（菊花總黃酮50%有效率優(yōu)于病毒唑組）［21］。銀葛雙解劑可抑制甲型H1N1 流感病毒誘導(dǎo)的MDCK 細(xì)胞凋亡，在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中銀葛雙解劑（45.9 g／kg）可通過降低甲型H1N1 流感病毒感染小鼠血清中炎性細(xì)胞因子TNF?α、IL?6水平，同時升高血液中CD3＋T、CD4＋T 細(xì)胞的表達(dá)百分比，降低CD8＋T 細(xì)胞表達(dá)，阻止炎癥細(xì)胞因子風(fēng)暴與調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，從而發(fā)揮抗甲型H1N1 流感病毒作用［22］。在體外對1 型副流感病毒HVJ、RSV 和腺病毒ADV?3、ADV?5有抑制作用，梔子提取物（400、200 mg／kg）可減輕流感病毒致小鼠肺部炎癥，其作用機(jī)制與降低血清NO 水平有關(guān)［23］。牛角瓜中木脂素苷（150 μmol／L）通過抑制NF?κB途徑和病毒核糖核蛋白的核輸出對甲型流感病毒H1N1 具有治療作用［24］。

2.5 抑制病毒的附著和融合 穿心蓮內(nèi)酯衍生物（250 μmol／L）可以有效抑制RSV 包膜表面糖基蛋白熒光肽的裂解，阻止病毒入侵細(xì)胞［25］。車前草醇提液（TC50值為4.57 g／L，IC50值為0.285 g／L）可能通過與RSV 競爭結(jié)合Hep?2 細(xì)胞表面的特異性受體抑制RSV 的吸附過程，同時可直接殺死病毒，發(fā)揮抗RSV 作用［26］。血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）是流感病毒包膜上的2 種糖蛋白，在流感病毒入侵宿主細(xì)胞及傳播的過程中扮演著重要的角色。HA 可識別并結(jié)合宿主細(xì)胞表面的唾液酸受體，使病毒粘附于宿主細(xì)胞表面、介導(dǎo)病毒包膜與胞內(nèi)體膜融合；NA 能夠水解宿主細(xì)胞表面的唾液酸釋放新病毒［27］。眾多中國?東盟傳統(tǒng)藥物通過抑制HA、NA 活性發(fā)揮抗流感病毒作用。發(fā)酵人參提取物通過抑制HA、NA 活性對H1N1、H3N2、H5N1、H7N9 病毒起到治療作用［28］。穿心蓮內(nèi)酯磺化物可能通過抑制HA 活性實(shí)現(xiàn)抗H1N1（EC50值為0.072 6 mg／mL）、H3N2（EC50值為0.152 7 mg／mL）、乙型流感病毒（IBV，EC50值為0.158 5 mg／mL）的作用［29］。Chavan 等［30］采用基因組學(xué)方法和對接技術(shù)發(fā)現(xiàn)，大蒜素可以用作H1N1 的NA、HA、M2 蛋白通道的有效多靶點(diǎn)抑制劑。從蘇木心中分離出的氧化蘇木素、巴西蘇木素、原蘇木素A、3?去氧蘇木查爾酮、蘇木查爾酮、鼠李素可作為NA 抑制活性成分，通過細(xì)胞病變抑制法研究這6 種NA 抑制因子在MDCK 細(xì)胞中對H3N2 的體外抗流感病毒活性，其中3?去氧蘇木查爾酮和蘇木查爾酮抑制活性最高，IC50值為1.06、2.06 μg／mL，強(qiáng)于陽性對照利巴韋林（IC50值為9.17 μg／mL）［31］。蘇木酮A、巴西蘇木素對H1N1、H3N2、H9N2 病毒的NA 具有抑制作用，而對蘇木酮A 飽和同型黃酮類化合物3?去氧蘇木酮B 則沒有明顯抑制作用，提示α，β?不飽和羰基是抑制病毒NAs 活性的關(guān)鍵［32］。蔓荊葉甲醇提取物可以通過抑制HA、NA 活性而抑制H5N1 病毒，IC50值為82.62 μg／mL［33］。黃芩苷可能通過抑制病毒的血凝素HA2 亞基活性而抑制H5N1 禽流感病毒的進(jìn)入，其IC50值為（35.86±3.09）μmol／L［34］。印度人參中活性成分withaferin A、蘆薈葉中蘆薈苷都可減弱NA 活性來治療甲型流感病毒H1N1 感染，IC50值分別為3.14、（91.83±18.97）μmol／L。其中，蘆薈苷除了抑制NA 活性外，還阻止NA 介導(dǎo)的TGF?β 活化，提高流感血凝素特異性T 細(xì)胞的免疫力，并升高效應(yīng)細(xì)胞因子IFN?γ、TNF?α 水平，從而發(fā)揮抗病 毒作用［35?36］。

COVID?19 通過血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）進(jìn)入宿主細(xì)胞從而致病，ACE2 是COVID?19 重要的治療靶點(diǎn)［37］。研究發(fā)現(xiàn)，印度人參中withanone 可通過其刺突蛋白受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域（RBD）與宿主細(xì)胞ACE2 結(jié)合，抑制ACE2?RBD復(fù)合物的結(jié)合自由能，控制COVID?19 進(jìn)入宿主細(xì)胞。

2.6 直接滅活和抑制病毒的復(fù)制和增殖 密花豆的干燥藤莖（雞血藤）提取物（EC50值小于10.0 μg／mL）通過直接滅活病毒和抑制病毒復(fù)制、增加免疫功能的方式治療A／PR／8（H1N1）流感病毒PR8，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，該提取物為黃酮類物質(zhì)［38］。麻瘋樹醇提取物對甲型流感病毒H3N2 具有直接殺滅和抑制增殖作用［39］。苦瓜提取液（IC50值為13.4 μg／mL）可通過直接滅活病毒和抑制病毒增殖起到抗ADV 作用，并表現(xiàn)出量效關(guān)系［40］。肉桂（IC50值為0.019 5 g／L）可通過抑制ADV 六鄰體蛋白表達(dá)，從而直接殺傷病毒、抑制病毒的生物合成和吸附作用［41］；兒茶素（IC50值為3.125～12.5 mg／mL）具有抑制甲型（IAV）和乙型（IBV）流感病毒增殖的作用，其機(jī)制可能為直接殺傷病毒或封閉病毒抗原阻止病毒吸附于機(jī)體細(xì)胞［42］。

部分藥物通過影響病毒復(fù)制階段，發(fā)揮抗病毒作用。薯蕷對SARS?CoV 復(fù)制具有抑制作用，是SARS?CoV 的有效抑制劑［43］。越南槐中的12α?羥基槐果堿、（－）?12β?羥基槐果堿、（＋）?槐胺堿對甲型流感病毒H3N2 的復(fù)制有抑制作用，其IC50值為63.07～242.46 μmol／L［44］。車前中的咖啡酸在體外對腺病毒ADV?3 的抑制作用發(fā)生在病毒復(fù)制的早期（0～2 h），對ADV?3 的EC50值為14.2 μg／mL、SI（CC50與EC50的比值）為727［45］。連翹水提醇沉部位對RSV的早中晚期復(fù)制階段都有治療作用，其IC50值為31.25～3.91 μg／mL［46］。車前中的麥角甾苷可減少RSV 在HEP2 細(xì)胞的復(fù)制，EC50值為（15.64±1.07）ng／mL，CC50值為（740.34 ± 8.23）ng／mL；在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，麥角甾苷（80 mg／kg）可降低感染RSV病毒BALB／c 小鼠肺組織RSV?GmRNA 表達(dá)，顯示出抗病毒活性［47］。龍膽水提醇沉部位對RSV 的直接滅活作用和預(yù)防作用的治療指數(shù)均高于利巴韋林，其EC50值分別為0.43、0.48 mg／mL，TI 分別為25.75、23.06，利巴韋林的 EC50值分別為 266.65、116.87 μg／mL，TI 分別為4.42、10.10，且龍膽水提醇沉部位能抑制RSV 在細(xì)胞內(nèi)增殖，通過多途徑發(fā)揮抗RSV 作用［48］。研究發(fā)現(xiàn)，桑葉水提醇沉部位對RSV 有直接滅活作用，對RSV 侵入HeLa 細(xì)胞及RSV 在HeLa 細(xì)胞內(nèi)增殖均有抑制作用；在體外采用預(yù)防給藥時，其效果優(yōu)于利巴韋林（相同質(zhì)量濃度下，桑葉病毒抑制率為45.6%，利巴韋林病毒抑制率為28.4%），提示桑葉中某些成分能與HeLa 細(xì)胞表面受體結(jié)合，阻止RSV 的攻擊，某些成分通過與RSV 的某個特征性部位相結(jié)合，使RSV 難以進(jìn)入細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制，也可能通過抑制RSV 核酸復(fù)制或阻止蛋白合成而抑制RSV增殖［49］。蘆薈葉中提取的蘆薈多糖（40 μg／mL）可以抑制H1N1 亞型流感病毒在MDCK 細(xì)胞中的復(fù)制，并且在病毒吸附期間表現(xiàn)出抑制作用。在小鼠感染H1N1 病毒的實(shí)驗(yàn)中，口服蘆薈多糖（20、40 mg）可改善感染小鼠的臨床癥狀和肺損傷，降低病毒載量和死亡率［50］。研究發(fā)現(xiàn)，95%乙醇提取制備苧麻葉醇提物浸膏，用水加熱溶解，分別用等體積的有機(jī)相萃取，并保留水相，其中水相萃取物能降低H1N1 感染的細(xì)胞中核蛋白（NP）表達(dá)，具有體外抗H1N1作用［51］。李家偉等［52］建立H9N2 AIV 小鼠感染模型 和MDCK 細(xì)胞感染模型，研究發(fā)現(xiàn)，半邊蓮醇提物及氯仿萃取物具有抗H9N2 活性，采用同時給藥（0.33 mg／mL，保護(hù)率 為40.6%）、預(yù)防給藥（0.66 mg／mL，保護(hù)率為56.3%）、治療給藥（0.17 mg／mL，保護(hù)率為31.1%）這3種方式，半邊蓮醇提物氯仿萃取物均發(fā)揮出抗H9N2 效果，推測氯仿萃取物對病毒感染的細(xì)胞吸附及病毒復(fù)制均有抑制作 用。梔子中環(huán)烯醚萜苷類成分（IC50值為3.15 mg／mL）、白千層油（EC50值為0.000 6%）及其主要活性成分松油醇?4（EC50值為0.002%）、松油烯（EC50值為0.001 25%）、α?松油醇（EC50值為0.025%）可干擾流感病毒A／FM1／47（H1N1）的復(fù)制階段，其中梔子中環(huán)烯醚萜苷類成分可能與抑制流感復(fù)制周期融合和脫膜過程中細(xì)胞內(nèi)酸化和Ca2＋流入有關(guān)，白千層油還可通過干擾溶酶體內(nèi)室的酸化來抑制病毒脫膜發(fā)揮抗病毒作用［53?54］。由重樓、貫葉連翹組成的重樓克感滴丸（含生藥量20、10、5 g／kg）對流感病毒FM1 感染小鼠具有保護(hù)作用，其機(jī)制與抑制病毒在體內(nèi)的增殖，減輕肺部炎性病變有關(guān)［55］。七葉一枝花中重樓皂苷I（6.25、12.5、25、50 μg／mL）對H1N1 在細(xì)胞上的吸附及病毒的復(fù)制有抑制作用，重樓皂苷I（5、10 mg／kg）能降低病毒性紅細(xì)胞凝集效價，改善感染小鼠肺部病理組織學(xué)特征，在體內(nèi)外均有抗甲型流感病毒（H1N1）活性［56］。密花豆的干燥藤莖（雞血藤）抗IAV 的靶點(diǎn)可能是抑制病毒的DNA 聚合酶和RNA 聚合酶［57］。

SARS 冠狀病毒基因組中木瓜樣蛋白酶（PLpro）及3C樣水解酶（3CL）在病毒基因組復(fù)制中發(fā)揮重要作用，是研發(fā)抗病毒藥物的重要靶標(biāo)。蒺藜果實(shí)甲醇提取物中的N?反式?對羥基苯乙基咖啡酰胺、N?反式?對羥基香豆酰酪胺、N?反式?對羥基苯乙基阿魏酰胺、蒺藜酰胺、N?反式?阿魏酰去甲辛弗林、terrestrimine 對SARS?CoV 木瓜樣蛋白酶具有抑制作用，IC50值分別為（44.4±0.6）、（38.8±0.4）、（70.1±0.7）、（21.5±0.5）、（26.6±0.5）、（15.8±0.6）μmol／L［58］。金毛狗根莖提取物可抑制SARS?CoV 3CL 蛋白酶活性［44］。構(gòu)樹中的構(gòu)樹查爾酮B、構(gòu)樹查爾酮A、補(bǔ)骨脂色烯查爾酮、紙莎草黃酮醇A、3′?（3?甲基丁?2?烯基）?3′，4，7?三羥基黃酮、小構(gòu)樹醇A、小構(gòu)樹醇B、brossoflavan A、小構(gòu)樹醇F、小構(gòu)樹醇J 可抑制SARS?CoV 的3CL 和PL CoV 蛋白酶，IC50值分別為（11.6±0.7）、（9.2±1.5）、（35.4±11.3）、（3.7±1.6）、（35.8±6.7）、（66.2±6.8）、（31.4±2.9）、（30.4±5.5）、（27.8±2.5）、（15.2±1.6）μmol／L［59］。

2.7 其他 柚皮素（30、100 μmol／L）可通過降低RSV 感染細(xì)胞MUC5ACmRNA 表達(dá)，抑制RSV 感染引起的氣道黏液高分泌，減輕RSV 下呼吸道感染［60］。半邊蓮醇提物（500 mg／kg）及其總生物堿（125 mg／kg）對感染H9N2 及H1N1 亞型流感病毒小鼠具有保護(hù)作用，在體外對感染H9N2、H1N1、H5N1 這3 種亞型流感病毒均有不同程度的抑制作用，其EC50值為208～664 μg／mL［61］。

綜上所述，中國?東盟傳統(tǒng)藥物用于防治呼吸道病毒感染類疾病具有多途徑、多靶點(diǎn)的作用機(jī)制。

3 中國?東盟傳統(tǒng)藥用植物抗呼吸道病毒感染的物質(zhì)基礎(chǔ)分析

對中國?東盟傳統(tǒng)藥用植物抗呼吸道病毒的藥理作用及其物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行總結(jié)分析，見表7。結(jié)果顯示，黃芩苷、槲皮素、山柰酚、人參多糖、蘆薈多糖等53 種化學(xué)成分是中國?東盟傳統(tǒng)藥用植物的活性成分，他們屬于黃酮類、生物堿類、多糖類、穿心蓮內(nèi)酯類、苯乙醇苷類、環(huán)烯醚萜苷類、木脂素苷類、酰胺類、揮發(fā)油、甾體類、皂苷類、酚酸類、蒽醌類、醛類、有機(jī)硫等化合物，可從免疫調(diào)節(jié)、抑制自噬體的形成、抵抗細(xì)胞凋亡、降低炎性因子分泌、抑制病毒的附著和融合、直接滅活和抑制病毒的復(fù)制和增殖等方面來發(fā)揮抗呼吸道病毒感染的作用。

表7 中國?東盟傳統(tǒng)藥用植物抗呼吸道病毒作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)分析

通過Cytoscape 3.7.2 軟件對已報道的中國?東盟傳統(tǒng)藥物抗呼吸道病毒的藥理機(jī)制和物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行“藥物?成分?成分類型?病毒?機(jī)制?靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建，見圖1。采用Network Analyzer 功能進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)特征分析，其中自由度越高則表明該節(jié)點(diǎn)越重要，表示預(yù)測出該靶點(diǎn)與作用靶點(diǎn)的關(guān)聯(lián)個數(shù)。該網(wǎng)絡(luò)包括181 個節(jié)點(diǎn)（35 種藥物、53 個化合物、16 種化學(xué)成分類型、16 種病毒、9 種機(jī)制、52 個靶點(diǎn)）和305 個相互關(guān)系組成。在網(wǎng)絡(luò)中，梅紅色節(jié)點(diǎn)代表藥物，紫色節(jié)點(diǎn)代表化合物，粉色節(jié)點(diǎn)代表化學(xué)成分類型，橙色節(jié)點(diǎn)代表病毒，藍(lán)色節(jié)點(diǎn)代表機(jī)制，綠色節(jié)點(diǎn)代表對應(yīng)靶點(diǎn)。依據(jù)目前中國?東盟傳統(tǒng)藥物抗呼吸道病毒相關(guān)治療機(jī)制的文獻(xiàn)，網(wǎng)絡(luò)中藥物抗病毒個數(shù)排名靠前的為人參、梔子、穿心蓮、黃檗；從度值可以看出，藥物抗病毒的主要化學(xué)成分類型為黃酮類（自由度值為23）、酰胺類（自由度值為6）、生物堿類（自由度值為4）；自由度值最高的靶點(diǎn)（與機(jī)制連線數(shù)目）為TNF?α（自由度值為3）、hexon（自由度值為3）。根據(jù)化合物與病毒的連線關(guān)系得出，連接病毒個數(shù)靠前的化合物（或組分）為穿心蓮內(nèi)酯磺化物（治療IBV、H3N2、H1N1）、巴西蘇木素（治療H9N2、H3N2、H1N1）、半邊蓮總生物堿（治療H9N2、H5N1、H1N1）、蘇木酮A（治療H9N2、H3N2、H1N1）、兒茶素（治療H1N1、IBV、IAV）；根據(jù)病毒與機(jī)制的連線關(guān)系得出，藥物主要通過抑制病毒的附著和融合、抑制病毒的復(fù)制和增殖的機(jī)制發(fā)揮抗病毒作用。

圖1 “藥物?成分?成分類型?病毒?機(jī)制?靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖

根據(jù)文獻(xiàn)獲得信息，53 種化合物（或組分）中人參多糖、連翹酯苷A、梔子苷、麥角甾苷、蘆薈多糖、半邊蓮總生物堿、重樓皂苷I 在動物模型中已證實(shí)其藥效作用，而在體外實(shí)驗(yàn)中具有抗病毒的化學(xué)成分需進(jìn)一步在生物體內(nèi)驗(yàn)證。一般認(rèn)為，藥物在生物體內(nèi)發(fā)揮藥理作用本質(zhì)在于藥物經(jīng)給藥部位進(jìn)入生物體血液循環(huán)（腸道直接作用與外用藥除外），一定濃度的藥物分子與靶點(diǎn)分子產(chǎn)生特異性或非特異性結(jié)合進(jìn)而引起相應(yīng)的生物效應(yīng)。統(tǒng)計(jì)表明，化學(xué)藥血藥濃度處于100～1 000 ng／mL 區(qū)間內(nèi)占總統(tǒng)計(jì)所得的34%；血藥濃度處于1 000～100 000 ng／mL 區(qū)間內(nèi)的化學(xué)藥占總統(tǒng)計(jì)所得的42%［62］。從藥物濃度的角度來看，文獻(xiàn)抗病毒研究中3?去氧蘇木查爾酮（IC50值為1.06 μg／mL）、蘇木查爾酮（IC50值為2.06 μg／mL）、蘇木酮A（IC50值為0.7 μmol／L ［H1N1］、1.1 μmol／L ［H3N2］、1.0 μmol／L［H9N2］ ）、肉桂醛（IC50值為0.019 5 g／L）、巴西蘇木素（IC50值為0.2 μmol／L ［H1N1］、0.3μmol／L ［H3N2］、0.4 μmol／L ［H9N2］ ）、withaferin A（IC50值為3.14 μmol／L）、構(gòu)樹查爾酮A ［IC50值為（9.2±1.5）μmol／L］、紙莎草黃酮醇A（IC50值為3.7 μmol／L）可能具有繼續(xù)研究的價值。

4 結(jié)語

本文通過篩選《中國?東盟傳統(tǒng)藥物志》中收載的具有抗呼吸道病毒作用的藥物，對其抗病毒種類、物質(zhì)基礎(chǔ)等條目進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì)，并對中國?東盟傳統(tǒng)藥物抗呼吸道病毒感染的作用機(jī)制進(jìn)行闡述和分析，為后續(xù)抗呼吸道病毒活性篩選、藥物開發(fā)及臨床應(yīng)用提供參考。在350 種中國和東盟國家常用傳統(tǒng)藥用植物中，共有63 種藥用植物具有抗病毒作用的研究報道，涉及病毒種類23種，從免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞自噬、細(xì)胞凋亡、降低炎性因子分泌、抑制病毒的附著和融合、直接滅活和抑制病毒的復(fù)制和增殖等方面來發(fā)揮抗呼吸道病毒感染的作用，進(jìn)一步分析其中的抗病毒活性化學(xué)成分為53種，主要化學(xué)成分類型為黃酮類、酰胺類和生物堿類。

致謝：本文前期的文獻(xiàn)查找及信息分類統(tǒng)計(jì)工作得到了劉婧曦、張紫涵、唐昀彤、陳章美、謝安然、俞春林、莫柳英、梁玲玲、李意春、趙芳惠的幫助，在此表示衷心的感謝！