高 陽 鄭云楓 李新亮 彭國平? 劉延慶

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院， 江蘇 南京210023； 2.揚州大學(xué)醫(yī)學(xué)院， 江蘇 揚州225009）

南蛇藤是衛(wèi)矛科南蛇藤屬植物，有清熱、祛風(fēng)、除濕、活血、解毒、消腫等功效。其含有的化學(xué)成分主要有倍半萜、二萜、三萜、黃酮等?，F(xiàn)代藥理研究表明，南蛇藤具有抗腫瘤［1?3］、免疫調(diào)節(jié)［4］、抗風(fēng)濕［5］等活性。本研究對南蛇藤莖乙醇提取物進行了分離和結(jié)構(gòu)鑒定，得到8 個化合物，分別為7?hydroxy?3? ［（4?methoxyphenyl）methoxy］ ?4H?1?benzopyran?4?one（1）、樺木酸（2）、platanic acid（3）、金色酰胺醇酯（4）、3?去氧蘇木查爾酮（5）、異甘草素（6）、bonducelin（7）、7?羥基?3（4?羥基亞芐基）色滿?4?酮（8）。其中化合物1 為新化合物，結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 化合物1 的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structures of compound 1

1 材料

AB SCIEX Triple TOFTM5600 高分辨質(zhì)譜儀（美國AB 公司）；Bruker ASR?500 核磁共振儀（德國Bruker 公司）；Waters e2695 高效液相色譜儀（美國Waters 公司）；ELSD 6000 蒸發(fā)光散射檢測器（美國奧特公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士BUCHI公司）；SK8200H 型超聲清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；柱色譜硅膠（100～200目，青島海洋化工有限公司）；乙腈（色譜純，美國Tedia 公司）；甲醇（色譜純，江蘇漢邦科技有限公司）；Milli?Q 超純水機（德國默克公司）。

南蛇藤Celastrus orbiculatusThunb.莖于2018年5 月采購自廣州至信中藥飲片有限公司，由中國藥科大學(xué)秦民堅教授鑒定為正品，憑證標(biāo)本（20100881）保存于揚州大學(xué)醫(yī)學(xué)院。

2 提取與分離

10 kg 南蛇藤莖，粉碎成粗粉，無水乙醇滲漉提取，提取液40 ℃減壓回收，濃縮，得浸膏150 g，浸膏用硅膠（1 kg）柱色譜分離，用石油醚?乙酸乙酯（100∶0～50∶50）梯度洗脫。洗脫液40 ℃減壓濃縮，HPLC 檢測，合并相似流份，得到Fr.1～Fr.14，然后用正相半制備液相和反向半制備液相進行分離純化。正相半制備液相以Diol柱（10 mm×250 mm）為色譜柱，流動相石油醚?乙酸乙酯；反向半制備液相以CYANO 柱（10 mm×250 mm）為色譜柱，流動相甲醇?乙腈?水。Fr.13用正相半制備液相（石油醚∶乙酸乙酯＝63∶37，檢測波長254 nm）分離制備得到化合物1（15 mg，tR＝27.2 min）和Fr.13A（tR＝23.8 min）。Fr.6 以乙酸乙酯溶解，重結(jié)晶，得到化合物2（1 g）。Fr.10 用反相半制備液相（乙腈∶水＝40∶60）分離制備得到化合物3（20 mg，tR＝14.3 min）。Fr.11 用正相半制備液相（石油醚∶乙酸乙酯＝63∶37）分離制備得到化合物4（30 mg，tR＝13.9 min）和Fr.11A（tR＝16.5 min）。Fr.14 用正相半制備液相（石油醚∶乙酸乙酯＝65∶35，檢測波長254 nm）分離制備得到化合物5（14 mg，tR＝29.8 min）。Fr.11A 用反相半制備液相（甲醇∶水＝48∶52，檢測波長254 nm）分離制備得到化合物6（17 mg，tR＝16.8 min）。Fr.8 用正相半制備液相（石油醚∶乙酸乙酯＝70∶30，檢測波長254 nm），分離制備得到化合物7（27 mg，tR＝22.2 min）。Fr.13A 用反相半制備液相（甲醇∶水＝48∶52，檢測波長254 nm）分離制備得到化合物8（10 mg，tR＝12.2 min）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1：白色粉末，HR?ESI?MSm／z：297.077 2 ［M?H］－，其分子式為C17H14O5，不飽和度為11。1H?NMR 譜顯示有個1，2，4?三取代苯環(huán)質(zhì)子信號［δ：7.83（1H，d，J＝8.9 Hz，H?5），6.89（1H，dd，J＝8.9，2.0 Hz，H?6），6.85（1H，d，J＝2.0 Hz，H?8）］，在1H?1H COSY中，H?5 和H?6 有相關(guān)，進一步證實了這個結(jié)構(gòu)片段。7.32（2H，d，J＝8.5 Hz）和6.84（2H，d，J＝8.5 Hz）表明有個1，4?二取代苯環(huán)，在1H?1H COSY中，H?2′和H?3′有相關(guān)，進一步證實了這個結(jié)構(gòu)片段?；衔? 的13C?NMR中，顯示有1 個羰基碳（δC175.0），2 個連氧sp3碳（δC67.2、55.5），以及14 個sp2碳?；衔? 的1H?NMR 譜和13C?NMR 譜數(shù)據(jù)見表1。在HMBC（圖2）中，H?5 和C?4 有相關(guān)，表明C?4 連在4a 位上；H?2 和C?3、C?4、C?8a 相關(guān)，推測該化合物有色原酮結(jié)構(gòu)；H?2′和OCH2存在相關(guān)，OCH2的H 和C?3、C?1′相關(guān)，推測出化合物1 的結(jié)構(gòu)。

表1 化合物1 的1H 和13C?NMR 數(shù)據(jù)（500／125 MHz，氘代二甲亞砜）Tab.1 1H and 13C?NMR data of compound1（500／125 MHz，DMSO?d6）

圖2 化合物1 的關(guān)鍵HMBC（H→C）相關(guān)信號Fig.2 Key HMBC correlations（H→C）of compound 1

化合物 2：白色粉末，HR?ESI?MSm／z：455.344 1 ［M?H］－，分子式為C30H48O3。1H?NMR（C5D5N，500 MHz）δ：4.93（1H，brs，H?29），4.76（1H，brs，H?29），3.51（1H，m，H?18），3.44（1H，m，H?3），2.73（1H，t，H?13），2.62（1H，d，H?16），1.78，1.21，1.06，1.05，1.00，0.81（6×CH3）；13C?NMR（C5D5N，125 MHz）δ：178.6（C?28），151.1（C?20），109.7（C?29），77.9（C?3），56.4（C?17），55.7（C?5），50.7（C?9），49.5（C?19），47.5（C?18），42.6（C?14），40.9（C?8），39.3（C?1），39.0（C?4），38.3（C?13），37.4（C?10），37.3（C?22），34.6（C?7），32.6（C?16），30.9（C?15），30.0（C?21），28.4（C?23），28.1（C?2），25.9（C?12），21.0（C?11），19.2（C?30），18.5（C?6），16.2（C?24），16.2（C?25），16.1（C?26），14.7（C?27）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］ 報道基本一致，故鑒定化合物2 為樺木酸。

化合物 3：白色粉末，HR?ESI?MSm／z：457.329 6 ［M?H］－，分子式為C29H46O4。1H?NMR（C5D5N，500 MHz）δ：3.43（1H，t，H?3），3.67（1H，m，C?18），2.21，1.20，1.07，1.00，0.99，0.79（6×CH3）；13C?NMR（C5D5N，125 MHz）δ：211.4（C?20），178.5（C?28），77.8（C?3），56.3（C?17），55.6（C?5），50.6（C?9），51.8（C?18），49.5（C?19），42.4（C?14），40.8（C?8），39.3（C?4），39.0（C?1），37.5（C?13），37.3（C?10），37.2（C?22），34.5（C?7），32.1（C?16），30.0（C?15），28.5（C?21），29.4（C?29），28.4（C?23），28.1（C?2），27.5（C?12），21.0（C?11），18.5（C?6），16.2（C?24），16.1（C?25），16.1（C?26），14.7（C?27）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］ 報道基本一致，故鑒定化合物3 為platanic acid。

化合物4：白色針狀結(jié)晶，HR?ESI?MSm／z：443.193 1 ［M?H］－，分子式為C27H28N2O4。1H?NMR（CDCl3，500 MHz）δ：7.72（2H，d，J＝7.7 Hz，H?j，j′），7.53（1H，t，J＝7.7 Hz，H?l），7.45（2H，t，J＝7.7 Hz，H?k，k′），7.29（1H，m，H?h），7.27（2H，m，H?g，g′），7.24（2H，m，H?f，f′），7.17（H，m，H?d），7.15（2H，t，J＝8.2 Hz，H?c，c′），7.08（2H，d，J＝7.8 Hz，H?b，b′），6.83，6.10（2×NH），4.81（1H，dd，J＝14.8，7.5 Hz，H?2′），4.37（1H，m，H?2），3.95（1H，dd，J＝11.5，5.0 Hz，H?1），3.85（1H，dd，J＝11.5，5.0 Hz，H?1），3.24（1H，dd，J＝12.5，6.2 Hz，H?3′），3.09（1H，dd，J＝12.5，6.2 Hz，H?3），2.77（2H，m，H?3），2.04（3H，s，CH3）；13C?NMR（CDCl3，125 MHz）δ：170.8（C?1′），170.3（COCH3），167.1（C?m），136.7（C?a），136.6（C?e），133.7（C?i），131.9（C?l），129.3（C?g，g′），129.1（C?b，b′），128.7（C?f，f′），128.6（C?k，k′），128.6（C?c，c′），127.1（C?h），127.1（j，j′），126.7（C?d），64.5（C?1），55.0（C?2′），49.4（C?2），38.4（C?3′），37.4（C?3），20.8（CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］ 報道基本一致，故鑒定化合物4 為金色酰胺醇酯。

化合物 5：黃色粉末，HR?ESI?MSm／z：269.080 0 ［M?H］－，分子式為C16H14O4。1H?NMR（CD3COCD3，500 MHz）δ：7.63（1H，d，J＝8.0 Hz，H?6′），7.59（2H，d，J＝8.5 Hz，H?2，6），7.58（1H，d，J＝16.0 Hz，H?β），7.50（1H，d，J＝16.0 Hz，H?α），6.92（2H，d，J＝8.5 Hz，H?3，5），6.60（1H，d，J＝2.0 Hz，H?3′），6.54（1H，dd，J＝8.5，2.0 Hz，H?5′），3.93（3H，s，OCH3）；13C?NMR（CD3COCD3，125 MHz）δ：189.0（C ＝O），162.3（C?4′），160.8（C?2′），159.4（C?4），141.0（C?β），132.5（C?6′），130.1（C?2，6），127.2（C?1′），124.5（C?α），121.4（C?1），115.8（C?3，5），107.7（C?5′），99.1（C?3′），55.2（OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］ 報道基本一致，故鑒定化合物5 為3?去氧蘇木查爾酮。

化合物 6：黃色粉末，HR?ESI?MSm／z：255.064 5 ［M?H］－，分子式為C15H12O4。1H?NMR（CD3COCD3，500 MHz）δ：8.13（1H，d，J＝9.0 Hz，H?6′），7.85（1H，d，J＝15.3 Hz，H?β），7.77（1H，d，J＝15.3 Hz，H?α），7.75（2H，d，J＝8.5 Hz，H?2，6），6.95（2H，d，J＝8.5 Hz，H?3，5），6.49（1H，dd，J＝8.5，2.5 Hz，H?5′），6.39（1H，d，J＝2.5 Hz，H?3′）；13C?NMR（CD3COCD3，125 MHz）δ：192.0（C ＝O），166.7（C?2′），164.7（C?4′），160.1（C?4），144.3（C?β），132.4（C?6′），130.9（C?2，6），126.7（C?1），117.4（C?α），115.9（C?3，5），113.6（C?1′），107.8（C?5′），102.9（C?3′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］ 報道基本一致，故鑒定化合物6 為異甘草素。

化合物 7：黃色粉末，HR?ESI?MSm／z：281.079 8 ［M?H］－，分子式為C17H14O4。1H?NMR（DMSO?d6，500 MHz）δ：7.75（1H，d，J＝8.5 Hz，H?5），7.64（1H，s，H?9），7.40（2H，d，J＝8.5 Hz，C?2′，6′），7.04（2H，d，J＝8.5 Hz，C?3′，5′），6.56（1H，dd，J＝8.5，2.0 Hz，H?6），6.33（1H，d，J＝2.0 Hz，H?8），5.36（2H，d，J＝1.5 Hz，H?2），3.82（3H，s，OCH3）；13C?NMR（DMSO?d6，125 MHz）δ：180.0（C?4），165.1（C?7），162.9（C?8a），160.7（C?4′），135.7（C?9），132.7（C?2′，6′），129.9（C?5），129.3（C?3），126.9（C?1′），114.8（C?3′，5′），114.7（C?4a），111.6（C?6），102.9（C?8），68.0（C?2），55.8（OCH3）。NOESY 譜中，H?2 和H?6′相關(guān)，說明C?3／C?9 位的雙鍵為E構(gòu)型。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報道基本一致，故鑒定化合物7 為bonducelin。

化合物 8：黃色粉末，HR?ESI?MSm／z：269.081 4 ［M＋H］＋，分子式為C16H12O4。1H?NMR（CD3COCD3，500 MHz）δ：7.84（1H，d，J＝8.5 Hz，H?5），7.70（1H，s，H?9），7.34（2H，d，J＝8.5 Hz，C?2′，6′），6.98（2H，d，J＝8.5 Hz，C?3′，5′），6.62（1H，dd，J＝8.5，2.0 Hz，H?6），6.40（1H，d，J＝2.0 Hz，H?8），5.42（2H，d，J＝1.5 Hz，H?2）；13C?NMR（CD3COCD3，125 MHz）δ：179.7（C?4），164.2（C?7），163.0（C?8a），158.8（C?4′），135.7（C?9），132.3（C?2′，6′），129.5（C?5），128.7（C?3），126.1（C?1′），115.7（C?3′，5′），115.2（C?4a），110.8（C?6），102.6（C?8），67.9（C?2）。NOESY 譜中，H?2 和H?6′相關(guān)，說明C?3／C?9 位的雙鍵為E構(gòu)型。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］ 報道基本一致，故鑒定化合物8 為7?羥基?3（4?羥基亞芐基）色滿?4?酮。

4 討論

對南蛇藤莖化學(xué)成分進行研究，共分離得到8個化合物，包括2 個三萜類化合物（化合物2 和3），1 個酰胺類化合物（化合物4）及5 個黃酮類化合物（化合物1、5～8）。其中，化合物1 為新化合物，化合物2、3、5～8 均為首次從南蛇藤屬植物中分離得到，進一步豐富了南蛇藤的化學(xué)成分。