姜 文王俊 王鳳嬋 陸學(xué)超 胡海波 趙國靜?

（1.青島市中醫(yī)醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科， 山東 青島266033； 2.青島市中醫(yī)醫(yī)院急診科， 山東 青島266033）

特發(fā)性肺纖維化是以尋常間質(zhì)性肺炎為病理特征的一種間質(zhì)性肺疾病，死亡率高，通常發(fā)生于中老年人群［1］，由于其發(fā)病機(jī)制不明，診斷困難，缺乏有效的干預(yù)方法［2］。因此，積極探討特發(fā)性肺纖維化的病因，尋找有效的治療手段是目前研究的重點(diǎn)。扶正化纖方由三七粉、地龍、紅景天、黃芪、麥冬、五味子等多種中藥組成，具有通補(bǔ)肺絡(luò)的功效，能明顯改善特發(fā)性肺纖維化患者的癥狀，提高生存質(zhì)量，延緩病情的進(jìn)展［3］，但其機(jī)制并不明確。

研究報(bào)道，環(huán)磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）在心、肺、肝等纖維化模型中的表達(dá)均降低，其表達(dá)上調(diào)能夠抑制炎癥反應(yīng)，減輕細(xì)胞外基質(zhì)的沉積，具有抗纖維化的作用［4］。囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子（cystic fibrosis transmembrane conductance regulator，CFTR）是一種cAMP 依賴的氯離子通道蛋白，廣泛表達(dá)在與分泌和吸收有關(guān)的上皮組織（如小腸、氣道、胰腺等）中，與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［5?6］。研究發(fā)現(xiàn)，CFTR 在氣道黏液細(xì)胞中有表達(dá)，其缺乏會(huì)影響?zhàn)ひ杭?xì)胞的液體分泌及氣道表層液體的水化，導(dǎo)致腺體內(nèi)黏液嚴(yán)重堵塞［7?8］。因此，CFTR 對保持肺部的無菌環(huán)境，防止病原體和有害物質(zhì)進(jìn)入血液循環(huán)有重要作用，且以CFTR 為靶點(diǎn)的調(diào)節(jié)劑被證明可顯著改善肺功能，減少肺部病變［9］，而CFTR 在特發(fā)性肺纖維化中所起到的作用少有報(bào)道。因此，本研究對CFTR 在特發(fā)性肺纖維化中的表達(dá)及扶正化纖方對其調(diào)控作用進(jìn)行了探討。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 SPF 級(jí)C57BL／6 雄性小鼠84只，體質(zhì)量（20～22）g，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（京）2019?0009。小鼠飼養(yǎng)環(huán)境為12 h／12 h 明暗交替，溫度（20±2）℃，相對濕度為45%～60%，自由獲取食物和水。本實(shí)驗(yàn)均經(jīng)青島市中醫(yī)醫(yī)院動(dòng)物倫理委員會(huì)審核并批準(zhǔn)，并按3R 原則給予人道關(guān)懷。

1.2 藥物 扶正化纖方由三七粉6 g、地龍24 g、紅景天30 g、黃芪30 g、麥冬24 g、補(bǔ)骨脂12 g、五味子15 g、山萸肉15 g、太子參18 g、茯苓24 g、炒杏仁9 g、薏苡仁30 g、冬瓜仁30 g、款冬花12 g、炙甘草9 g 組成，由青島市中醫(yī)醫(yī)院制劑科加工煎制。將上述藥材加水充分浸泡后，煎煮2次，每次40 min，過濾，合并2 次藥液，濃縮至生藥量14.96 g／mL，于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?，此為高劑量組藥物，灌胃給藥時(shí)，將藥液分別稀釋為3.74、7.48 g／mL 作為低、中劑量。

1.3 試劑 硫酸博來霉素（批號(hào)15361）購自美國Sigma 公司；吡非尼酮膠囊（批號(hào)150603）購自北京康蒂尼藥業(yè)股份有限公司；H?89（PKA 抑制劑）、HE 染色液、RIPA 裂解液、二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）試劑盒（貨號(hào)S1643、C0105、P0013B、P0010）均購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；羥脯氨酸（hydroxyproline，HYP）檢測試劑盒（貨號(hào)A030?3）購自南京建成生物工程研究所有限公司；Masson 染色試劑盒（貨號(hào)G1340）購自北京索萊寶科技有限公司；cAMP ELISA 試劑盒、白介素17B（interleukin 17B，IL?17B）、蛋白激酶A（protein kinase A，PKA）、p?PKA、環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件結(jié)合蛋白（cAMP?response element binding protein，CREB）、p?CREB（phospho S133）、β?actin、山羊抗兔 IgG H＆L（HRP）（貨號(hào)ab76238、ab106272、ab75991、ab32390、ab32515、ab32096、ab8227、ab205718）均購自英國Abcam 公司。

1.4 儀器 iMark680 型多功能酶標(biāo)儀、蛋白轉(zhuǎn)膜裝置購自美國Bio?Rad 公司；ABI Prism ?7300 型熒光定量PCR 系統(tǒng)購自美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司；顯微鏡購自日本Olympus 公司。

1.5 模型建立 采用氣管插管注入博來霉素（5 mg／kg，PBS 溶解）構(gòu)建肺纖維化模型［10］，小鼠腹腔注射2%水合氯醛（0.4 mL／20 g）麻醉后，將小鼠垂直懸掛于鼠板上，清理口腔異物后，術(shù)者手執(zhí)靜脈置管 ［管內(nèi)已注入50 μL 博來霉素（2 μg／μL）］ 通過聲門裂插入氣管內(nèi)，后用1 mL針將0.8 mL 氣體推入氣管，約2 s 內(nèi)完成，小鼠懸掛10 s 左右，使藥物更加均勻地分布于肺內(nèi)，注藥后的小鼠右側(cè)臥位置于鼠籠中等待自然蘇醒。另設(shè)空白組，經(jīng)氣管注入等量生理鹽水，其余操作同上。

1.6 分組及給藥 造模完成后，將小鼠隨機(jī)分為模型組，吡非尼酮組（6 mg／kg）［10］，扶正化纖方低、中、高劑量組（37.4、74.8、149.6 g／kg），扶正化纖方＋H?89 組（扶正化纖方149.6 g／kg＋cAMP／PKA 抑制劑H?89 1 mg／kg），每組12只，另設(shè)空白組12 只。吡非尼酮組和扶正化纖方各劑量組灌胃相應(yīng)劑量藥液，給藥容量為10 mL／kg，扶正化纖方＋H?89 組在灌胃扶正化纖方的同時(shí)腹腔注射H?89 1 mg／kg，模型組和空白組灌胃等量無菌用水，每天1次，連續(xù)28 d。

1.7 取材及指標(biāo)檢測

1.7.1 肺指數(shù) 給藥后，取小鼠肺組織，生理鹽水沖洗后，濾紙吸干表面水分，分別稱定小鼠體質(zhì)量和肺質(zhì)量，計(jì)算各組小鼠的肺指數(shù)。

1.7.2 肺組織病理學(xué)變化 取小鼠左側(cè)肺組織一部分于－20 ℃冰箱保存；另一部分于4%多聚甲醛固定。固定的肺組織經(jīng)石蠟包埋、切片后，進(jìn)行HE 染色觀察肺組織氣道周圍炎癥細(xì)胞浸潤情況；Masson 染色觀察膠原沉積情況，評估肺纖維化程度，并對各組病理學(xué)進(jìn)行分級(jí)評分，每只小鼠肺組織切片任取5 個(gè)獨(dú)立區(qū)域進(jìn)行評分，取平均值。評分標(biāo)準(zhǔn)參考［11］ 報(bào)道，見表1。

表1 肺組織病理學(xué)評分標(biāo)準(zhǔn)Tab.1 Scoring criteria for lung histopathology

1.7.3 肺組織羥脯氨酸（HYP）水平 取適量于－20 ℃冰箱中保存的部分肺組織，加入組織裂解液，振蕩混勻，于沸水中水解20 min，取4 mL 反應(yīng)試劑，混勻，水浴鍋中靜置20 min 后取出，冷卻至室溫后離心15 min，取上清液，按照試劑盒說明書操作，在550 nm 波長處測定其吸光度值，計(jì)算HYP 水平。

1.7.4 RT?qPCR 法檢測小鼠肺組織CFTRmRNA表達(dá) 將小鼠右側(cè)肺組織一部分液氮速凍后，于－80 ℃冰箱保存，用于Western blot 實(shí)驗(yàn)；另一部分用TRIzol 試劑盒提取組織中的總RNA，紫外分光光度法檢測總RNA 的濃度和純度。按照試劑盒說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄制備cDNA，收集cDNA 用于PCR 擴(kuò)增。擴(kuò)增體系（20 μL）為cDNA 1 μL，正、向引物各0.5 μL，SYBR ?Premix Ex TaqTM（2×）10 μL，加入ddH2O 使最終體積為20 μL。擴(kuò)增條件為95 ℃10 min；95 ℃變性15 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸20 s，共40 個(gè)循環(huán)。以GAPDH為內(nèi)參，采用2－ΔΔCT法計(jì)算CFTRmRNA 相對表達(dá)。引物序列見表2。

表2 引物序列Tab.2 Primer sequences

1.7.5 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測肺組織cAMP 水平 取適量于－20 ℃冰箱保存的肺組織，制備成10%組織勻漿，按照ELISA 試劑盒說明書檢測肺組織勻漿中cAMP 水平。

1.7.6 免疫組化法檢測肺組織CFTR、IL?17B 蛋白表達(dá) 取肺組織石蠟切片，脫蠟水化、抗原修復(fù)后，加3%過氧化氫封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性，山羊血清封閉，加入一抗（CFTR、IL?17B，1∶100）4 ℃孵育過夜，洗去一抗，加HRP 標(biāo)記的山羊抗兔lgG（1∶200）37 ℃孵育30 min，DAB 顯色，封片。光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)呈棕黃色顆粒為陽性表達(dá)，拍照并用Image?Pro Plus 6.0 軟件計(jì)算陽性表達(dá)的積分光密度（integrated optical density，IOD）。

1.7.7 Western blot 法檢測肺組織CFTR、IL?17B、PKA、CREB 蛋白表達(dá) 取于－80 ℃冰箱保存的肺組織，按照試劑盒說明書提取組織中總蛋白，BCA法測定蛋白濃度，取30 μg 蛋白質(zhì)樣品上樣，SDS?PAGE 凝膠電泳，濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉封閉，加入一抗（CFTR、IL?17B、PKA、p?PKA、CREB、p?CREB，1∶1 000；β?actin，1∶2 000）4 ℃孵育過夜，洗去一抗，加入羊抗兔二抗（1∶5 000）室溫孵育1 h，ECL 法顯色，通過計(jì)算與內(nèi)參β?actin的灰度值比，得出目的蛋白的相對表達(dá)。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 通過SPSS 22.0 和Image pro plus 6.0 軟件進(jìn)行處理，數(shù)據(jù)以（）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，組間有差異進(jìn)一步采用SNK?q檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 扶正化纖方對小鼠肺指數(shù)和肺組織HYP 水平的影響 與空白組比較，模型組小鼠肺指數(shù)、肺組織HYP 水平均升高（P＜0.05）；與模型組比較，吡非尼酮組和扶正化纖方各劑量組小鼠肺指數(shù)、HYP 水平降低（P＜0.05），并呈劑量依賴性（P＜0.05）；與吡非尼酮組比較，扶正化纖方高劑量組上述指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與扶正化纖方高劑量組比較，扶正化纖方＋H?89 組小鼠肺指數(shù)、HYP 水平升高（P＜0.05），見表3。

表3 各組小鼠肺指數(shù)比較（，n＝12）Tab.3 Comparison of mouse pulmonary indices levels of each group（，n＝12）

表3 各組小鼠肺指數(shù)比較（，n＝12）Tab.3 Comparison of mouse pulmonary indices levels of each group（，n＝12）

注：與空白組比較，＃P＜0.05；與模型組比較，?P＜0.05；與吡非尼酮組比較，△P＜0.05；與扶正化纖方高劑量組比較，▲P＜0.05。

2.2 扶正化纖方對小鼠肺組織病理學(xué)變化的影響 空白組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)完整，肺泡璧無增厚，無明顯炎性細(xì)胞浸潤和藍(lán)色膠原纖維沉積；與空白組比較，模型組小鼠氣道璧增厚明顯，管腔狹窄，有大量炎性細(xì)胞浸潤，藍(lán)色膠原纖維沉積增多，病理損傷評分均升高（P＜0.05）；與模型組比較，吡非尼酮組和扶正化纖方各劑量組小鼠肺組織炎性細(xì)胞浸潤和膠原纖維沉積減少，病理損傷評分降低（P＜0.05），并呈劑量依賴性（P＜0.05）；與吡非尼酮組比較，扶正化纖方高劑量組炎性細(xì)胞浸潤和膠原纖維沉積差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與扶正化纖方高劑量組比較，扶正化纖方＋H?89 組小鼠肺組織炎性細(xì)胞浸潤和膠原纖維沉積增多，病理損傷評分升高（P＜0.05），見表4、圖1～2。

圖1 各組小鼠肺組織HE 染色（×400）Fig.1 HE staining of mouse lung tissue of each group（×400）

表4 各組小鼠肺組織病理損傷評分比較（分，，n ＝12）Tab.4 Comparison of mouse pulmonary pathological damage scores of each group（score，，n ＝12）

表4 各組小鼠肺組織病理損傷評分比較（分，，n ＝12）Tab.4 Comparison of mouse pulmonary pathological damage scores of each group（score，，n ＝12）

注：與空白組比較，＃P＜0.05；與模型組比較，?P＜0.05；與吡非尼酮組比較，△P＜0.05；與扶正化纖方高劑量組比較，▲P＜0.05。

圖2 各組小鼠肺組織Masson 染色（×400）Fig.2 Masson staining of mouse lung tissue of each group（×400）

2.3 扶正化纖方對小鼠肺組織CFTRmRNA 表達(dá)的影響 與空白組比較，模型組小鼠肺組織CFTRmRNA 表達(dá)降低（P＜0.05）；與模型組比較，吡非尼酮組和扶正化纖方各劑量組小鼠肺組織CFTRmRNA 表達(dá)升高（P＜0.05），并呈劑量依賴性（P＜0.05）；與吡非尼酮組比較，扶正化纖方高劑量組CFTRmRNA 表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與扶正化纖方高劑量組比較，扶正化纖方＋H?89 組小鼠肺組織CFTRmRNA 表達(dá)降低（P＜0.05），見表5。

表5 各組小鼠肺組織CFTR mRNA 表達(dá)和cAMP 水平比較（，n＝12）Tab.5 Comparison of mouse pulmonary CFTR mRNA expression and cAMP level of each group（，n＝12）

表5 各組小鼠肺組織CFTR mRNA 表達(dá)和cAMP 水平比較（，n＝12）Tab.5 Comparison of mouse pulmonary CFTR mRNA expression and cAMP level of each group（，n＝12）

注：與空白組比較，＃P＜0.05；與模型組比較，?P＜0.05；與吡非尼酮組比較，△P＜0.05；與扶正化纖方高劑量組比較，▲P＜0.05。

2.4 扶正化纖方對小鼠肺組織cAMP 水平的影響 與空白組比較，模型組小鼠肺組織cAMP 水平降低（P＜0.05）；與模型組比較，吡非尼酮組和扶正化纖方各劑量組小鼠肺組織cAMP 水平升高（P＜0.05），并呈劑量依賴性（P＜0.05）；與吡非尼酮組比較，扶正化纖方高劑量組cAMP 水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與扶正化纖方高劑量組比較，扶正化纖方＋H?89 組小鼠肺組織cAMP 水平降低（P＜0.05），見表5。

2.5 扶正化纖方對小鼠肺組織CFTR、IL?17B 陽性表達(dá)的影響 與空白組比較，模型組小鼠肺組織CFTR 陽性表達(dá)減少（P＜0.05），IL?17B 陽性表達(dá)增加（P＜0.05）；與模型組比較，吡非尼酮組和扶正化纖方各劑量組小鼠肺組織CFTR 陽性表達(dá)增加（P＜0.05），IL?17B 陽性表達(dá)減少（P＜0.05），并呈劑量依賴性（P＜0.05）；與吡非尼酮組比較，扶正化纖方高劑量組CFTR、IL?17B 陽性表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與扶正化纖方高劑量組比較，扶正化纖方＋H?89 組小鼠肺組織CFTR 陽性表達(dá)減少（P＜0.05），IL?17B 陽性表達(dá)增加（P＜0.05），見圖3～4、表6。

表6 各組小鼠肺組織CFTR、IL?17B 表達(dá)比較（IOD，，n＝12）Tab.6 Comparison of mouse pulmonary CFTR and IL?17B expressions of each group（IOD，，n＝12）

表6 各組小鼠肺組織CFTR、IL?17B 表達(dá)比較（IOD，，n＝12）Tab.6 Comparison of mouse pulmonary CFTR and IL?17B expressions of each group（IOD，，n＝12）

注：與空白組比較，＃P＜0.05；與模型組比較，?P＜0.05；與吡非尼酮組比較，△P＜0.05；與扶正化纖方高劑量組比較，▲P＜0.05。

圖3 各組小鼠肺組織CFTR 免疫組化染色（×400）Fig.3 Immunohistochemical staining of mouse pulmonary CFTR of each group（×400）

圖4 各組小鼠肺組織IL?17B 免疫組化染色（×400）Fig.4 Immunohistochemical staining of mouse pulmonary IL?17B of each group（×400）

2.6 扶正化纖方對小鼠肺組織CFTR、IL?17B、PKA 蛋白表達(dá)的影響 與空白組比較，模型組小鼠肺組織CFTR、p?PKA／PKA、p?CREB／CREB 蛋白表達(dá)降低（P＜0.05），IL?17B 蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）；與模型組比較，吡非尼酮組和扶正化纖方各劑量組小鼠肺組織CFTR、p?PKA／PKA、p?CREB／CREB 蛋白表達(dá)升高（P＜0.05），IL?17B 蛋白表達(dá)降低（P＜0.05），并呈劑量依賴性（P＜0.05）；與吡非尼酮組比較，扶正化纖方高劑量組上述指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與扶正化纖方高劑量組比較，扶正化纖方＋H?89 組小鼠肺組織CFTR、p?PKA／PKA、p?CREB／CREB 蛋白表達(dá)降低（P＜0.05），IL?17B 蛋白表達(dá)升高（P＜0.05），見圖5、表7。

表7 各組小鼠肺組織CFTR、IL?17B、PKA 蛋白表達(dá)比較（，n＝12）Tab.7 Comparison of CFTR，IL?17B and PKA protein expressions in the lung tissue of mice in each group（，n＝12）

表7 各組小鼠肺組織CFTR、IL?17B、PKA 蛋白表達(dá)比較（，n＝12）Tab.7 Comparison of CFTR，IL?17B and PKA protein expressions in the lung tissue of mice in each group（，n＝12）

注：與空白組比較，＃P＜0.05；與模型組比較，?P＜0.05；與吡非尼酮組比較，△P＜0.05；與扶正化纖方高劑量組比較，▲P＜0.05。

圖5 各組小鼠肺組織CFTR、IL?17B、PKA 蛋白電泳圖Fig.5 Electrophoresis of mouse pulmonary CFTR，IL?17B and PKA proteins of each group

3 討論

抗纖維化藥物吡非尼酮和尼達(dá)尼布可以延緩疾病的進(jìn)展，但不能治愈，且與藥物耐受性問題相關(guān)［12］，目前特發(fā)性肺纖維化的發(fā)生率和患病率一直在上升，因此，急需尋找新的療法［13］。中醫(yī)藥在改善特發(fā)性肺纖維化方面有著良好的療效［14］。中醫(yī)認(rèn)為特發(fā)性肺纖維化基本病機(jī)為肺絡(luò)失養(yǎng)、肺絡(luò)不通、痰瘀等邪毒瘀滯，日久可累及腎臟，導(dǎo)致腎虛［15］，當(dāng)以通肺絡(luò)、補(bǔ)腎臟為主要治則，兼以滲濕化瘀。扶正化纖方是用于氣陰兩虛、痰瘀阻證特發(fā)性肺纖維化的有效方劑，方中地龍、紅景天、三七，能通達(dá)肺絡(luò)；薏苡仁、茯苓、冬瓜仁，可祛除痰之所由生“濕邪”，以通肺絡(luò)，均為君藥。黃芪、太子參可使肺絡(luò)中血運(yùn)暢通，間接通肺絡(luò)；麥冬、五味子，使肺絡(luò)得養(yǎng)，共為臣藥。佐以杏仁、款冬花，潤肺；補(bǔ)骨脂、山萸肉，補(bǔ)腎精。炙甘草調(diào)和諸藥。諸藥合用可有效改善特發(fā)性肺纖維化［3］。趙國靜等［16］發(fā)現(xiàn)，該方可能通過下調(diào)TGF?β1、IL?17A 表達(dá)減輕博來霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化。本研究結(jié)果顯示，扶正化纖方可降低模型小鼠肺指數(shù)和HYP 水平，有效減輕肺部炎性細(xì)胞浸潤和膠原纖維沉積。提示，扶正化纖方可有效改善肺纖維化。

博來霉素引起肺纖維化小鼠模型的肺部菌群失調(diào)，并觸發(fā)IL?17B 的產(chǎn)生，促進(jìn)肺纖維化，去除肺部菌群或IL?17B 的缺失可緩解博來霉素引起的肺纖維化［17］。本研究發(fā)現(xiàn)，模型小鼠肺組織中CFTR 表達(dá)低于正常小鼠，而IL?17B 表達(dá)升高，與文獻(xiàn)報(bào)道一致［18］。CFTR 是一種由cAMP 調(diào)節(jié)的離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，可調(diào)節(jié)黏液的水合作用、氣道上皮表面的黏度和酸度。在囊性纖維化中，CFTR 的喪失可破壞黏液纖毛清除和先天防御機(jī)制，導(dǎo)致黏液積聚和細(xì)菌定植，進(jìn)而引起肺損傷［19?20］。CFTR 缺乏會(huì)導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞持續(xù)的促炎狀態(tài)，使用CFTR 調(diào)節(jié)劑（增強(qiáng)CFTR 或恢復(fù)細(xì)胞表面蛋白質(zhì)水平降低的小分子藥物）可抑制氣道炎癥，減輕肺損傷［21］。屈飛等［22］報(bào)道，增加大鼠肺CFTR 表達(dá)，可抑制氣道黏液高分泌，改善慢性阻塞性肺疾病。本研究發(fā)現(xiàn)，扶正化纖方能上調(diào)模型小鼠肺中CFTR 表達(dá)，降低IL?17B 表達(dá)，并且表現(xiàn)出量效關(guān)系。

CFTR 的激活依賴于細(xì)胞內(nèi)cAMP 水平的提升，cAMP 具有抗纖維化特性［4］，可抑制T 細(xì)胞活化，降低IL?17A 水平，而這種作用可被PKA 抑制劑H?89 阻斷［23］。PKA 為cAMP 的主要效應(yīng)蛋白，CREB 是PKA 的直接下游轉(zhuǎn)錄因子，cAMP 刺激的基因轉(zhuǎn)錄是通過PKA 在Ser133 上將CREB 磷酸化來介導(dǎo)的［24］。本研究結(jié)果顯示，扶正化纖方可升高肺纖維化小鼠肺中cAMP 水平，增加p?PKA／PKA 比值，而給予PKA 抑制劑H?89 干預(yù)后，扶正化纖方對cAMP／PKA 信號(hào)通路的激活作用被減弱，CFTR 表達(dá)降低，IL?17B 表達(dá)增加。提示，扶正化纖方可能激活cAMP／PKA 通路，上調(diào)CFTR表達(dá)。