劉 飛 張名遠(yuǎn) 王 凡 牛藝霖 閆文慧 伊瑞雅 霍建一

（洛陽(yáng)師范學(xué)院，河南洛陽(yáng) 471934）

錦鯉是由鯉（Cyprinus carpio）經(jīng)人工選擇與雜交等而形成的一類觀賞魚(yú)，素有“水中活寶石”之美稱，已成為目前主要的名貴觀賞魚(yú)之一。為保證錦鯉品系純正，長(zhǎng)期進(jìn)行近親繁殖，導(dǎo)致其免疫力不斷下降，疾病常發(fā)生，降低了觀賞價(jià)值。因此，開(kāi)發(fā)適宜于錦鯉養(yǎng)殖的飼料免疫增強(qiáng)添加劑很有必要。已有研究表明，紅棗不僅味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富，而且具有保護(hù)肝臟、抗氧化、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗腫瘤等多種保健功能[1]。目前有關(guān)紅棗及其提取物添加對(duì)魚(yú)類生長(zhǎng)和免疫影響的研究報(bào)道較少[2-4]，而對(duì)觀賞魚(yú)類相關(guān)報(bào)道更為鮮見(jiàn)。本試驗(yàn)以紅棗提取物添加飼料飼喂錦鯉，初步研究其對(duì)錦鯉生長(zhǎng)和內(nèi)臟器官（肝胰臟和脾臟）非特異免疫指標(biāo)的影響，從而探討紅棗作為錦鯉飼料促生長(zhǎng)和免疫增強(qiáng)添加劑的可能性。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用錦鯉幼魚(yú)為洛陽(yáng)師范學(xué)院水產(chǎn)研究所繁殖、體形正常、無(wú)病、無(wú)畸形的金黃色錦鯉。暫養(yǎng)于直徑1 m、高1 m的圓柱形飼養(yǎng)缸中備用，養(yǎng)殖用水為自來(lái)水（充氣泵曝氣48 h）。紅棗提取物為陜西森弗天然制品有限公司提供的20∶1提取物。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)共設(shè)4個(gè)飼料配方處理組，即按錦鯉基礎(chǔ)飼料配方（表1）中分別添加 0（CK）、0.25%、0.50%、1.00%的紅棗提取物配制成4種試驗(yàn)飼料。飼料原料按比例配備后使用ZL-600制粒機(jī)制得顆粒飼料，風(fēng)干密封后置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 錦鯉基礎(chǔ)飼料配方

1.3 試驗(yàn)方法

供試魚(yú)苗暫養(yǎng)7 d后，試驗(yàn)分組前停食24 h，選取大小基本一致、體質(zhì)量（1.52±0.07）g、生長(zhǎng)狀態(tài)良好的錦鯉隨機(jī)分成4個(gè)試驗(yàn)組，每組設(shè)置2個(gè)平行缸，每缸30尾。每組分別投喂上述已制備的4種試驗(yàn)飼料，試驗(yàn)養(yǎng)殖期為56 d。每天分早、中、晚3次進(jìn)行定時(shí)、定點(diǎn)飽食投喂，以30 min吃完為宜，及時(shí)清理剩余餌料，日總投喂量為總體質(zhì)量的2%～5%。全天用三合一多功能潛水泵和充氣泵進(jìn)行增氧、過(guò)濾和水體循環(huán)；及時(shí)清理糞便、清洗濾材并適量換掉底層水，以保持良好水質(zhì)。飼養(yǎng)期間水溫為20～28℃，pH 值為 7.2±0.2。

魚(yú)體用酒精棉消毒后在冰上進(jìn)行解剖，取出肝胰臟和脾臟放入離心管中，置于-80℃超低溫冰箱中備用。

1.4 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.4.1 生長(zhǎng)指標(biāo)。養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后停食24 h，各缸稱量總重。每個(gè)試驗(yàn)組隨機(jī)取36尾，測(cè)量體長(zhǎng)、體質(zhì)量。計(jì)算肥滿度、增重率和特定生長(zhǎng)率，公式如下：肥滿度（g/cm3）=100×終末魚(yú)體質(zhì)量/終末魚(yú)體長(zhǎng)；增重率（%）=100×（終末魚(yú)平均體質(zhì)量-初始魚(yú)平均體質(zhì)量）/初始魚(yú)平均體質(zhì)量；

特定生長(zhǎng)率（%）=100×（ln終末魚(yú)平均體質(zhì)量-ln初始魚(yú)平均體質(zhì)量）/試驗(yàn)天數(shù)。

1.4.2 生化指標(biāo)。每試驗(yàn)組隨機(jī)分別選5個(gè)肝胰臟和脾臟樣品進(jìn)行生化指標(biāo)測(cè)定?？偟鞍缀?、酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）活性、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP）活性、過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT）活性、丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量、總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）等指標(biāo)均采用碧云天試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用Excel 2010進(jìn)行試驗(yàn)數(shù)據(jù)整理，采用SPSS 13.0來(lái)進(jìn)行單因素方差分析，采用LSD法進(jìn)行平均數(shù)的多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 添加紅棗提取物對(duì)錦鯉生長(zhǎng)相關(guān)指標(biāo)的影響

不同試驗(yàn)組錦鯉肥滿度、增重率、特定生長(zhǎng)率等生長(zhǎng)相關(guān)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2?？梢钥闯?，相比CK，在3個(gè)添加紅棗提取物處理組中，0.25%組和1.00%組的肥滿度、增重率和特定生長(zhǎng)率均略有減少，但在0.50%組中均略有增加。單因素方差分析及其多重比較結(jié)果均表明，此3個(gè)指標(biāo)在各紅棗提取物添加組與對(duì)照組之間無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表2 飼料添加紅棗提取物對(duì)錦鯉生長(zhǎng)相關(guān)指標(biāo)的影響

2.2 添加紅棗提取物對(duì)錦鯉內(nèi)臟器官非特異性免疫指標(biāo)的影響

2.2.1 對(duì)錦鯉肝胰臟的影響。不同試驗(yàn)組錦鯉肝胰臟的 ACP、AKP、CAT、T-AOC、MDA 等非特異性免疫相關(guān)生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 飼料添加紅棗提取物對(duì)錦鯉肝胰臟生化指標(biāo)的影響

從表3可以看出，3個(gè)紅棗提取物添加組的錦鯉肝胰臟除MDA含量相對(duì)于CK減少外，其他4個(gè)指標(biāo)均較CK增加。多重比較結(jié)果表明：與CK相比，ACP活性在紅棗提取物添加量為0.25%和0.50%時(shí)顯著增加（P＜0.05）；T-AOC在紅棗提取物添加量為0.25%和1.00%時(shí)顯著增加（P＜0.05）；MDA含量在紅棗提取物添加量為0.50%時(shí)顯著降低（P＜0.05）。其他處理組的這些指標(biāo)均與CK之間沒(méi)有顯著差異（P＞0.05）。

2.2.2 對(duì)錦鯉脾臟的影響。不同試驗(yàn)組錦鯉脾臟的ACP、AKP、CAT、T-AOC、MDA 等非特異性免疫相關(guān)生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4?？梢钥闯?，總體上各生化指標(biāo)在各試驗(yàn)組間情況有所不同。與CK相比，3個(gè)紅棗提取物添加組脾臟AKP活性、CAT活性均增加，MDA含量減少；ACP活性和T-AOC方面，均表現(xiàn)為2個(gè)紅棗提取物添加組增加、1個(gè)添加組基本持平。多重比較結(jié)果表明，脾臟的5個(gè)指標(biāo)中，除紅棗提取物添加量為0.50%時(shí)MDA含量顯著低于CK（P＜0.05）外，其他各紅棗提取物添加組均與CK之間無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

3 結(jié)論與討論

3.1 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加紅棗提取物對(duì)錦鯉肥滿度、增重率、特定生長(zhǎng)率等生長(zhǎng)指標(biāo)沒(méi)有顯著影響，但添加適量的紅棗提取物能顯著提高肝胰臟ACP活性與總抗氧化能力，顯著降低肝胰臟和脾臟的MDA含量，從而增強(qiáng)機(jī)體的非特異性免疫功能。

3.2 討論

3.2.1 飼料添加紅棗提取物對(duì)錦鯉生長(zhǎng)的影響。本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，添加紅棗提取物的3個(gè)試驗(yàn)組錦鯉在肥滿度、增重率、特定生長(zhǎng)率等3個(gè)生長(zhǎng)相關(guān)指標(biāo)上均無(wú)顯著變化。這說(shuō)明飼料中添加紅棗提取物對(duì)錦鯉生長(zhǎng)幾乎無(wú)影響。這一結(jié)果與添加紅棗提取物對(duì)虹鱒的生長(zhǎng)速度幾乎無(wú)影響[2]基本一致，但與添加棗粉可顯著提高豬、肉牛、綿羊的增重[5-7]等結(jié)果不一致。其原因很可能是這些試驗(yàn)動(dòng)物都是陸生動(dòng)物，而錦鯉是水生動(dòng)物；此外，使用的紅棗成分、添加形式及添加量不一致。已有研究表明，紅棗提取物添加能提高鯉魚(yú)[起始體質(zhì)量為（10.79±0.05）g]的生長(zhǎng)性能[3]，這與本研究不一致。這可能有以下2個(gè)原因：一是本試驗(yàn)使用的錦鯉個(gè)體較小，起始體質(zhì)量為（1.52±0.07）g，難以很好地消化吸收紅棗提取物；二是錦鯉相對(duì)于一般鯉魚(yú)，其核心考量性狀并非生長(zhǎng)速度而是體色與體型，可能其生長(zhǎng)性能與一般鯉魚(yú)存在一定差異。

3.2.2 飼料添加紅棗提取物對(duì)錦鯉非特異性免疫功能的影響。動(dòng)物體內(nèi)的磷酸酶根據(jù)其催化最適pH值可以分為ACP和AKP這2種，均參與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收和運(yùn)轉(zhuǎn)[8]。其中：ACP被認(rèn)為是高等動(dòng)物體內(nèi)巨噬細(xì)胞溶酶體的標(biāo)志酶，參與能量的轉(zhuǎn)化和信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)，進(jìn)而提高機(jī)體的非特異性免疫水平和營(yíng)養(yǎng)代謝水平[9]；AKP是一種重要的代謝調(diào)控酶，其活性高低與動(dòng)物生長(zhǎng)性能關(guān)系密切[10]。在本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，3個(gè)紅棗提取物組錦鯉脾臟和肝胰臟的ACP和AKP活性均提高，且肝胰臟ACP活性在0.25%組和0.50%組顯著提高。這很可能說(shuō)明飼料添加一定濃度的紅棗提取物能夠通過(guò)提高機(jī)體組織，特別是肝胰臟ACP的活性，從而增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫功能。

抗氧化系統(tǒng)是魚(yú)類非特異性免疫系統(tǒng)的重要組成部分之一，它由抗氧化酶（如CAT）和其他非酶類抗氧化物質(zhì)等構(gòu)成，可消減魚(yú)類機(jī)體的自由基和活性氧，避免機(jī)體受到氧化損傷；MDA是機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的主要代謝產(chǎn)物，能在一定程度上代表機(jī)體氧化的損傷結(jié)果；細(xì)胞內(nèi)存在非酶促和酶促防御體系以清除自由基，非酶促體系主要通過(guò)T-AOC來(lái)檢測(cè)，其大小反映了機(jī)體對(duì)外來(lái)刺激的代償能力以及機(jī)體自由基代謝狀態(tài)[11-12]。已有不少研究表明，紅棗多糖能提高小鼠血清和肝臟中CAT等酶活力、降低其MDA含量[13-15]；馬可為等[16]研究發(fā)現(xiàn)，適量的棗粉添加飼料能顯著降低血清MDA含量；馮鑫歡等[17]研究發(fā)現(xiàn)，紅棗水提物能降低糖尿病小鼠肝臟的MDA含量；Yu等[18]以西洋參和紅棗提取物為原料制成復(fù)方制對(duì)小鼠連續(xù)灌胃能顯著提高其肝、脾臟和血清中的CAT活性，顯著降低其MDA含量；劉 飛等[2]研究表明，飼料添加紅棗提取物能顯著提高虹鱒肝CAT活性，顯著降低其腎臟MDA含量。這些結(jié)果與本研究結(jié)果基本一致。本研究結(jié)果表明，飼料添加一定濃度的紅棗提取物能在一定程度上提高肝胰臟和脾臟的CAT活性、T-AOC，以及降低其MDA含量，且肝胰臟T-AOC在0.25%組和1.00%組顯著提高，肝胰臟和脾臟MDA在0.50%組均顯著下降。這很可能說(shuō)明一定濃度的紅棗（及其提取物）能提高動(dòng)物機(jī)體抗氧化能力。已有研究結(jié)果表明，添加紅棗提取物能提高鯉魚(yú)的非特異性免疫能力[3-4]。這與本研究結(jié)果具有一致性。本試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)于錦鯉，其飼料中添加適量紅棗提取物能夠通過(guò)提高機(jī)體組織，特別是肝胰臟和脾臟的抗氧化能力，增強(qiáng)機(jī)體的非特異性免疫功能。